劉小凡,謝曉磊,吳詠梅,陸應(yīng)林,虞德兵*

(1.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院,江蘇 南京 210095;2.山東省萊陽(yáng)市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局,山東 萊陽(yáng) 265200)

卵泡是雌性動(dòng)物正常繁殖的重要組織。發(fā)育成熟的雌性家禽只有左側(cè)的卵巢和輸卵管,其卵泡發(fā)育有很嚴(yán)格的等級(jí)制度,分為原始卵泡、初級(jí)卵泡、等級(jí)前卵泡[包括小白卵泡(SWF,<2 mm)、大白卵泡(LWF,3～5 mm)、小黃卵泡(SYF,6～8 mm)]和等級(jí)卵泡(F1—F6)[1-3]。產(chǎn)蛋高峰期母雞卵巢中含有 30～100個(gè)直徑為1～8 mm的卵泡,但只有5%的卵泡能發(fā)育成小黃卵泡,大量的小卵泡發(fā)生閉鎖。在一個(gè)排卵周期中,只有F1排卵后才會(huì)有一個(gè)小黃卵泡被選擇進(jìn)入等級(jí)卵泡階段,等級(jí)序列中的優(yōu)勢(shì)卵泡再順序發(fā)育[3-5]。

卵泡刺激素(follicle stimulating hormone,FSH)是一種垂體分泌的糖蛋白激素,是正常性腺發(fā)育和繁殖所必需的激素。FSH的瞬時(shí)增加使每個(gè)卵泡波的啟動(dòng)提前,刺激卵泡簇的募集[6-8],FSH通過(guò)促卵泡激素受體(follicle-stimulating hormone receptor,FSHR)促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)環(huán)磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP))形成,刺激未成熟顆粒細(xì)胞激活其增殖和分化所需基因[9]。FSH不僅能維持母雞等級(jí)前卵泡生育能力,還能增加顆粒細(xì)胞的存活率[10-11]。FSH通過(guò)刺激雞等級(jí)前卵泡顆粒細(xì)胞的增殖促使其進(jìn)入等級(jí)發(fā)育[5]。

c-myc是原癌基因家族(c-myc、N-myc、L-myc)中最重要的成員,也是一個(gè)重要的轉(zhuǎn)錄因子。細(xì)胞生長(zhǎng)需要c-myc的參與,c-myc又能誘導(dǎo)很多基因的表達(dá),因此,它是細(xì)胞生長(zhǎng)的主要調(diào)節(jié)器。c-myc對(duì)細(xì)胞具有雙重作用,既可以刺激細(xì)胞增殖,又可以促進(jìn)細(xì)胞凋亡。Myc通過(guò)增強(qiáng)與Bax激活和細(xì)胞色素c釋放相關(guān)的線粒體中凋亡信號(hào)通路來(lái)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[12]。有研究認(rèn)為c-myc可能通過(guò)參與Wnt途徑和Notch信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路啟動(dòng)原始卵泡的生長(zhǎng)發(fā)育[13],還可能通過(guò)PI3K信號(hào)傳導(dǎo)通路來(lái)調(diào)節(jié)在原始卵泡啟動(dòng)中發(fā)揮重要作用的p27kip1基因水平[14]。c-myc對(duì)卵泡早期顆粒細(xì)胞發(fā)育、卵泡退化、卵泡發(fā)育和黃體形成以及卵泡閉鎖期間細(xì)胞死亡有一定的影響[15-17]。目前,有關(guān)c-myc在禽類的卵泡發(fā)育及生殖過(guò)程中的研究較少。本試驗(yàn)旨在通過(guò)研究c-myc在各等級(jí)卵泡中的表達(dá)以及FSH對(duì)c-myc的誘導(dǎo)作用來(lái)探究雞卵泡發(fā)育的機(jī)制,為家禽繁殖育種技術(shù)與方法的改造優(yōu)化提供理論依據(jù)。

圖1 高產(chǎn)母雞不同階段卵泡Fig.1 Follicles at different stages in high-laying chickenF1—F6:1～6等級(jí)卵泡Grade 1-6 follicles;SWF:小白卵泡Small white follice;LWF:大白卵泡Large white follicle;SYF:小黃卵泡Small yellow follice. 下同The same below.

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)所用產(chǎn)蛋雞是200～250日齡的京紅1號(hào),購(gòu)自南京彭福養(yǎng)雞場(chǎng)。試驗(yàn)?zāi)鸽u自由采食、飲水,雞舍內(nèi)保持適宜的溫度、濕度和光照。

試驗(yàn)所用主要試劑:PBS緩沖液、DMEM/F12細(xì)胞培養(yǎng)基、胎牛血清、胰酶、雙抗及ITS(Gibco公司),RNA提取試劑盒和轉(zhuǎn)染所用試劑Lipofectamine 2000(Invitrogen公司),RT-qPCR試劑盒(abm公司),c-Myc一抗(abcam公司),RNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒[寶生物工程(大連)有限公司]和FSH(寧波第二激素廠)。

1.2 方法

1.2.1 卵泡顆粒層、膜層的分離和保存將試驗(yàn)雞用乙醚深度麻醉后通過(guò)頸部放血處死。處死后打開(kāi)母雞的腹腔,取出卵泡置于預(yù)熱的PBS中(圖1)。選取SWF、LWF、SYF以及F4、F1卵泡(n≥3),用手術(shù)剪把卵泡從卵巢上剪下,放入裝有預(yù)熱的PBS培養(yǎng)皿中。分離F1、F4卵泡膜層和顆粒層時(shí),首先用一個(gè)鑷子固定卵泡最外層的結(jié)締組織,另一個(gè)鑷子剝離附著在卵泡上的結(jié)締組織,清洗卵泡,確定結(jié)締組織均已剝離;然后,用一個(gè)鑷子的一角刺破卵泡,2個(gè)鑷子同時(shí)從撕破口朝兩邊撕開(kāi)卵泡,迅速使卵泡卵黃朝下平鋪在培養(yǎng)皿中。隨后,用鑷子的背面輕輕敲打卵泡膜層,使膜層和顆粒層分開(kāi),用鑷子輕輕挑起膜層,另一個(gè)鑷子貼近膜層,把粘連的顆粒層與膜層分開(kāi),直至卵泡的整個(gè)膜層被剝離。最后把分離好的膜層置于PBS中,清洗后裝入離心管中,用鑷子把鋪在卵黃上的顆粒層輕輕撈起,置于PBS中,清洗后裝管。

分離SYF、LWF、SWF時(shí),首先用鑷子把附著在卵泡上的結(jié)締組織清理干凈,然后用鑷子的一角刺破卵泡,2個(gè)鑷子同時(shí)撕開(kāi)卵泡,使卵泡卵黃朝上徹底平鋪在盛有PBS的培養(yǎng)皿中,再用鑷子把上層的卵黃輕輕撥走以露出顆粒層。最后用一個(gè)鑷子固定膜層,另一個(gè)鑷子兩角并攏,貼著膜層把顆粒層分離下來(lái),輕輕清洗干凈后裝管,膜層經(jīng)清洗后也裝入離心管中。

裝入離心管中的膜層和顆粒層儲(chǔ)存在液氮中,經(jīng)組織破碎儀破碎后,用RNA提取試劑盒提取RNA,RT-qPCR 檢測(cè)c-mycmRNA的表達(dá)水平。

1.2.2 免疫組化檢測(cè)屠宰母雞,取出卵泡,用預(yù)熱的PBS清洗后再用4%多聚甲醛固定;經(jīng)過(guò)一定濃度梯度的乙醇和二甲苯脫水和脫色,再經(jīng)石蠟包埋后,切成5 μm的組織切片。組織切片于60 ℃恒溫箱中烘 1 h。制作好的石蠟切片再經(jīng)過(guò)一系列濃度梯度的二甲苯和乙醇分別進(jìn)行脫蠟和水化處理,用雙蒸水(ddH2O)沖洗后置于pH6.0的10 mmol·L-1檸檬酸緩沖液中煮沸以修復(fù)抗原,冷卻后用ddH2O洗滌,再用3% 過(guò)氧化氫-甲醇溶液裂解細(xì)胞以滅活內(nèi)源性過(guò)氧化氫酶。清洗后用10%山羊血清封閉切片40 min,之后用含5% 山羊血清、3% 牛血清白蛋白的磷酸鹽吐溫緩沖液(PBST)稀釋的一抗4 ℃孵育過(guò)夜。取出切片,用PBST清洗4次,加入酶標(biāo)二抗,室溫孵育1 h。洗凈后加DAB顯色液到切片上,濕盒顯色5～10 min后在蒸餾水中終止染色,再進(jìn)行蘇木精復(fù)染、脫水透明、封片。以PBST取代一抗作為空白對(duì)照。

1.2.3 卵泡培養(yǎng)和激素處理取出小黃卵泡后,用預(yù)熱的PBS漂洗干凈,按照每孔1個(gè)卵泡的密度接種24孔培養(yǎng)板。用基礎(chǔ)培養(yǎng)基[含DMEM/F12培養(yǎng)基、1% 胎牛血清(FBS)、1% 雙抗]在37 ℃、5% CO2的培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)16 h。棄去基礎(chǔ)培養(yǎng)基后將卵泡分為2組,每組至少8個(gè)重復(fù)。空白對(duì)照組:ITS培養(yǎng)基,含DMEM/F12培養(yǎng)基、1% ITS(胰島素、轉(zhuǎn)鐵蛋白、亞硒酸)細(xì)胞培養(yǎng)添加物、1% 雙抗;FSH處理組:含50 ng·mL-1FSH的ITS培養(yǎng)基。2組分別處理小黃卵泡36 h后,對(duì)照組和FSH組的卵泡一半用4%多聚甲醛固定,另一半用機(jī)械分離法分離卵泡的膜層和顆粒層,分別用RNA提取試劑盒提取RNA,采用 RT-qPCR 檢測(cè)相關(guān)基因mRNA的表達(dá)。

1.2.4 HE染色及顆粒層厚度測(cè)量對(duì)照組和FSH組的4個(gè)卵泡均經(jīng)4%多聚甲醛固定,參照1.2.2節(jié)步驟制成石蠟切片。依據(jù)蘇木素-伊紅(HE)染色試劑盒說(shuō)明書(shū)對(duì)切片進(jìn)行染色、封片,使用光學(xué)顯微鏡篩選出每個(gè)卵泡染色最清晰的3張切片,對(duì)每張切片從3個(gè)不同的角度進(jìn)行拍照,利用Image-pro plus 6.0 軟件對(duì)每張切片的20倍視野下的顆粒細(xì)胞和顆粒層厚度進(jìn)行測(cè)量及統(tǒng)計(jì)。

1.2.5 RT-qPCR 檢測(cè)基因的表達(dá)在NCBI網(wǎng)站查找相關(guān)基因序列,利用Primer 5.0軟件設(shè)計(jì)基因引物(表1)。參照RNA提取試劑盒說(shuō)明書(shū)提取RNA后用反轉(zhuǎn)錄試劑盒反轉(zhuǎn)錄成cDNA。以β-actin為內(nèi)參基因,用qPCR試劑盒檢測(cè)相關(guān)基因表達(dá)水平。反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng)熔解曲線檢測(cè)特異性。用2-ΔΔCT法計(jì)算目的基因的相對(duì)表達(dá)水平。

表1 基因引物序列Table 1 Primer sequences for qPCR

1.2.6 雞小黃卵泡顆粒細(xì)胞的培養(yǎng)和c-mycsiRNA轉(zhuǎn)染采用機(jī)械分離法分離雞小黃卵泡的顆粒層,用含有雙抗的PBS清洗2次,經(jīng)胰酶消化、過(guò)篩、清洗后用基礎(chǔ)培養(yǎng)基調(diào)整細(xì)胞含量后接種細(xì)胞培養(yǎng)板,置于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)16 h。根據(jù)c-myc基因序列,交由上海吉瑪公司合成2對(duì)c-mycsiRNA(序列如表2)。使用Lipofectamine 2000將2對(duì)c-mycsiRNA轉(zhuǎn)染至2組顆粒細(xì)胞中,并設(shè)陰性對(duì)照(NC)組,篩選出敲減效果最好的c-mycsiRNA對(duì)。將預(yù)培養(yǎng)后的顆粒細(xì)胞分為3組,每組至少3個(gè)重復(fù)。NC組:先用NC轉(zhuǎn)染細(xì)胞24 h,再用ITS培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞24 h;sic-myc組:先用敲減效果最好的c-mycsiRNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞24 h,再用ITS培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞24 h;sic-myc+FSH組:先用敲減效果最好的c-mycsiRNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞24 h,再用50 ng·mL-1FSH處理細(xì)胞24 h。收集顆粒細(xì)胞,提取RNA,采用RT-qPCR檢測(cè)c-mycmRNA的表達(dá)水平。

表2 c-myc siRNA位點(diǎn)序列Table 2 Sequence of c-myc siRNA site

1.3 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析

2 結(jié)果與分析

2.1 c-myc mRNA在卵泡中的表達(dá)

如圖2所示:c-mycmRNA在SWF、LWF、SYF、F4和F1卵泡上都有表達(dá),c-mycmRNA在SYF和SWF顆粒層中的表達(dá)水平極顯著高于F1、F4和LWF(P<0.01)(圖2-A),在SYF上表達(dá)水平最高。c-myc轉(zhuǎn)錄水平在等級(jí)前卵泡的卵泡膜中極顯著高于等級(jí)卵泡(P<0.01),且在等級(jí)前卵泡中隨卵泡發(fā)育逐漸升高,在SYF上表達(dá)量最高(圖2-B)。此結(jié)果提示c-myc參與了雞卵泡的發(fā)育調(diào)控。

圖2 c-myc在雞卵泡上的表達(dá)Fig.2 The expression of c-myc mRNA in chicken follicle柱上大寫字母不同表示在0.01水平上差異顯著。下同。Different uppercase letters on the column indicate significant difference at the level of 0.01. The same below.

2.2 c-Myc蛋白在雞卵泡中的定位

用免疫組化法檢測(cè)c-Myc蛋白在卵泡中的表達(dá)。結(jié)果(圖3)顯示:c-Myc蛋白陽(yáng)性染色定位于細(xì)胞核,為黃棕色顆粒,如圖3-A箭頭所示(紅圓處已進(jìn)行局部放大)。結(jié)果提示c-Myc蛋白在卵泡的顆粒層和膜層都有表達(dá)。

圖3 c-Myc蛋白在雞卵泡的免疫組化定位檢測(cè)Fig.3 Immunocytochemical reation of c-Myc protein for follicle of chickenA. c-Myc 蛋白在卵泡上的定位(紅色箭頭表示陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞)The protein of c-Myc localization(positive expression cells are red arrows);B. 陰性對(duì)照 The negative.O:卵母細(xì)胞Oocyte;GL:顆粒細(xì)胞層Granular layers;ML:卵泡膜層Membrane layers. 下同The same below.

2.3 FSH處理對(duì)雞小黃卵泡顆粒層和膜層的影響

小黃卵泡的HE染色結(jié)果顯示:對(duì)照組中顆粒層由2～3層顆粒細(xì)胞構(gòu)成(圖4-A),而FSH組中顆粒細(xì)胞層數(shù)明顯增加,可達(dá)6～7層,如圖4-B(畫(huà)紅圓處被局部放大)。與對(duì)照組相比,FSH組的雞小黃卵泡顆粒層的厚度增加25.5%(P<0.05,圖4-C),顆粒細(xì)胞的密度極顯著增加27.8%(P<0.01,圖4-D)。

圖4 經(jīng)卵泡刺激素(FSH)處理后雞小黃卵泡的形態(tài)學(xué)測(cè)量結(jié)果Fig.4 The measurement results of morphological changes of chicken SYF treated by follicle stimulation hormone(FSH)A. 對(duì)照組 Control group;B. FSH處理組 FSH group;C. 小黃卵泡顆粒層的厚度The thickness of granular layer for SYF;D.小黃卵泡顆粒細(xì)胞密度The density of granular layer for SYF. *P<0.05, **P<0.01.下同 The same below.

圖5 c-myc、pcna、ccnd2、star mRNA在FSH處理的小黃卵泡中的表達(dá)Fig.5 Expression of c-myc,pcna,ccnd2,star mRNA in SYF follicle treated by FSH

2.4 FSH對(duì)c-myc 在體外培養(yǎng)小黃卵泡中的表達(dá)影響

用RT-qPCR檢測(cè)SYF顆粒層和膜層中c-myc和增殖細(xì)胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,pcna)基因、類固醇激素合成急性調(diào)節(jié)蛋白(steroid acute regulatory protein,star)基因和周期蛋白D2(cyclin D2,ccnd2)基因的表達(dá)水平。如圖5所示:與對(duì)照組相比,FSH處理36 h后,c-mycmRNA在SYF顆粒層中的表達(dá)水平極顯著降低(P<0.01),而在膜層中的表達(dá)水平顯著增加(P<0.05);FSH組pcnamRNA在顆粒層和膜層的表達(dá)水平均顯著高于對(duì)照組(P<0.05);與對(duì)照組相比,ccnd2 mRNA表達(dá)水平在顆粒層上極顯著升高(P<0.01),starmRNA表達(dá)水平在顆粒層顯著降低(P<0.05),而ccnd2和starmRNA在膜層的表達(dá)水平均極顯著升高(P<0.01)。

2.5 c-myc敲減后FSH對(duì)c-myc在SYF上表達(dá)的影響

如圖6-a所示:與對(duì)照組相比,SYF顆粒細(xì)胞轉(zhuǎn)染sic-myc 1和sic-myc 2后,c-mycmRNA的表達(dá)水平均極顯著降低(P<0.01),因sic-myc 2的敲減效率更好,選擇其作為后續(xù)材料。如圖6-b所示:敲減c-myc后加入FSH,與NC組相比,sic-myc組的c-mycmRNA表達(dá)水平極顯著降低(P<0.01),而sic-myc+FSH組的c-mycmRNA表達(dá)水平無(wú)顯著變化(P>0.05)。

圖6 FSH對(duì)c-myc敲減后小黃卵泡顆粒細(xì)胞c-myc表達(dá)的影響Fig.6 The effect of FSH on the expression of c-myc in SYF granular cells after c-myc knockdowna. siRNA干擾效果篩選Sifting of siRNA effect;b. c-myc 敲減對(duì)FSH的影響The regulaion of FSH after c-myc knockdown in granular cell of SYF. NC:陰性對(duì)照 The negative control.

3 討論

3.1 c-myc對(duì)雞卵泡發(fā)育的影響

家禽卵泡分類有很嚴(yán)格的等級(jí)體系,由等級(jí)前卵泡進(jìn)入到排卵前卵泡。若母雞卵泡不斷成熟和排卵,維持周期性發(fā)育,則有較高的產(chǎn)蛋率。本研究選擇SWF、LWF、SYF、F4 和F1這5個(gè)等級(jí)的卵泡進(jìn)行c-myc基因的表達(dá)水平檢測(cè)。c-mycmRNA在豬早期小卵泡(1～2 mm)顆粒細(xì)胞中大量表達(dá),而在大卵泡(3～11 mm)顆粒層中未見(jiàn)表達(dá)[18]。陳五妍[19]在研究小鼠卵泡發(fā)育、閉鎖、黃體形成和退化過(guò)程中發(fā)現(xiàn),c-Myc 蛋白在原始卵泡時(shí)期未見(jiàn)表達(dá),但在其他時(shí)期都有微量表達(dá),且在早期黃體中表達(dá)量達(dá)到最大值。路洪濤等[20]發(fā)現(xiàn)在鵝等級(jí)前卵泡中myc在初級(jí)卵泡中表達(dá)最高,在中白卵泡中最低。而在本試驗(yàn)中,免疫組化顯示c-Myc 蛋白在卵泡的膜層和顆粒層均有表達(dá),c-mycmRNA在等級(jí)前卵泡中的顆粒層和膜層的表達(dá)水平均顯著高于排卵前卵泡F4和F1,且在SYF中表達(dá)水平最高,這可能與種屬及顆粒層、膜層分開(kāi)檢測(cè)有關(guān),說(shuō)明c-myc參與了卵泡的發(fā)育調(diào)控,提示該基因可能與卵泡閉鎖和優(yōu)勢(shì)卵泡的選擇有密切關(guān)系。

3.2 FSH處理對(duì)小黃卵泡增殖和分化的影響

卵泡發(fā)育成熟和維持正常功能的重要條件是卵母細(xì)胞、顆粒細(xì)胞和膜細(xì)胞的相互作用[21]。禽類發(fā)育中,進(jìn)入優(yōu)先等級(jí)的關(guān)鍵點(diǎn)是6～8 mm的小黃卵泡[22],本研究使用50 ng·mL-1FSH 培養(yǎng)小黃卵泡36 h以探究c-myc對(duì)卵泡的作用。pcna可客觀評(píng)價(jià)細(xì)胞的增殖狀態(tài)[23-24],ccnd2在卵巢每個(gè)階段的卵泡顆粒細(xì)胞中表達(dá),調(diào)控細(xì)胞周期G1期、G2期向S期過(guò)渡,對(duì)細(xì)胞周期起正調(diào)控作用[25]。經(jīng)過(guò)FSH處理后,小黃卵泡的顆粒層厚度增加了25.5%,密度增加了27.8%,FSH組的卵泡顆粒層上的pcnamRNA和ccnd2 mRNA表達(dá)水平均顯著高于對(duì)照組,再次證實(shí)了FSH能促進(jìn)顆粒細(xì)胞的增殖[5]。StAR是一種線粒體蛋白,是調(diào)節(jié)類固醇激素生成過(guò)程的重要因子,常被用來(lái)衡量類固醇生成狀況及細(xì)胞分化的指標(biāo)。Lim等[26]發(fā)現(xiàn)FSH能瞬時(shí)誘導(dǎo)c-Myc蛋白在大鼠體外培養(yǎng)的原代支持細(xì)胞的表達(dá)。有研究結(jié)果表明 c-Myc 蛋白表達(dá)的降低與終端分化有關(guān)[27]。在本試驗(yàn)中,FSH能增加體外培養(yǎng)的小黃卵泡膜層c-mycmRNA的表達(dá)水平,但降低了體外培養(yǎng)的小黃卵泡顆粒層c-myc和star表達(dá)水平。體外培養(yǎng)顆粒細(xì)胞和膜細(xì)胞時(shí),FSH處理會(huì)促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng),但用FSH處理單獨(dú)的顆粒細(xì)胞就不會(huì)出現(xiàn)這種現(xiàn)象[28],推測(cè)FSH體外培養(yǎng)卵泡促進(jìn)了卵泡細(xì)胞的生長(zhǎng),誘導(dǎo)了顆粒細(xì)胞和膜細(xì)胞的增殖,但也使顆粒細(xì)胞提前進(jìn)入終端分化。

3.3 FSH處理對(duì)小黃卵泡顆粒細(xì)胞中c-myc轉(zhuǎn)錄的影響

在本試驗(yàn)中,FSH能誘導(dǎo)敲減了c-myc的顆粒細(xì)胞表達(dá)c-myc,這說(shuō)明c-myc可能通過(guò)FSH的誘導(dǎo)而對(duì)雞卵泡的發(fā)育起作用。等級(jí)前卵泡的顆粒細(xì)胞中BTC(β-cellulin,β細(xì)胞素蛋白)和TGF-α(transforming growth factor α,轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子α)通過(guò)MAPK/Erk促進(jìn)了c-myc的表達(dá)[29],ERK信號(hào)通路中myc和srf基因在鵝等級(jí)前卵泡發(fā)育中起一定的作用[20],細(xì)胞因子bFGF和FSH通過(guò)PI3K-AKT和ERK信號(hào)通路刺激顆粒細(xì)胞的增殖和抗凋亡以促進(jìn)早期雞卵巢原始卵泡的激活[30]?？蛇M(jìn)一步研究c-myc是否由FSH通過(guò)ERK信號(hào)通路而對(duì)卵泡閉鎖和優(yōu)勢(shì)卵泡的選擇起作用。

綜上所述,c-myc在雞等級(jí)前卵泡中的表達(dá)水平高于排卵前卵泡,且在SYF中表達(dá)水平最高。FSH能降低c-myc在體外培養(yǎng)的雞小黃卵泡顆粒細(xì)胞上的表達(dá),且能挽回由c-myc敲減導(dǎo)致的c-myc表達(dá)水平降低的趨勢(shì),這為進(jìn)一步研究c-myc在雞卵泡發(fā)育中的作用奠定基礎(chǔ)。