張瑋麗 唐 倩 鄧 鎮(zhèn) 趙元淑 鐘 祎

（廣州醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，廣州 511436）

腰椎間盤突出癥 (lumbar disc herniation, LDH) 是臨床常見疾病，也是神經(jīng)根性疼痛的主要病因。主要表現(xiàn)為單側(cè)下肢的痛覺過敏，痛覺超敏和自發(fā)性疼痛，以及腿麻無力、腰部僵硬和活動受限，嚴(yán)重者引起馬尾神經(jīng)受壓、大小便失禁[1]。長期的慢性疼痛不僅損害病人的身心健康，也帶來沉重的社會和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，深入研究神經(jīng)根性疼痛的發(fā)病機(jī)制，具有重要臨床意義。

外周敏化是指背根神經(jīng)節(jié) (dorsal root ganglia, DRG)神經(jīng)元上離子通道表達(dá)和功能的改變，進(jìn)而引起神經(jīng)元興奮性增加，導(dǎo)致異常放電并產(chǎn)生過多的痛覺信號[2]，外周敏化是神經(jīng)根性疼痛發(fā)生的重要病理生理學(xué)機(jī)制。同行的研究及我們的預(yù)實驗發(fā)現(xiàn)自體髓核(nucleus pulposus, NP)移植大鼠DRG 上電壓門控性鈉通道Nav1.7 表達(dá)增加[3]，并且在神經(jīng)損傷或者高血糖引起的慢性疼痛中，均發(fā)現(xiàn)DRG 中致炎細(xì)胞因子TNF-α 上調(diào)是電壓門控性鈉通道表達(dá)及功能上調(diào)的重要原因[4,5]。因此我們推斷抑制DRG 組織的炎癥反應(yīng)可以通過降低外周敏化治療神經(jīng)根性疼痛。目前臨床治療LDH 的主要手段是通過外科手術(shù)摘除病變椎間盤，但是手術(shù)費(fèi)用較高并存在一定風(fēng)險。本研究以神經(jīng)炎癥反應(yīng)為切入點(diǎn)，探究對神經(jīng)炎癥和外周敏化均有抑制作用的新藥物，以期為治療LDH 提供新的實驗室依據(jù)。

葛根素 (puerarin, PU) 是植物葛根中提取的一種藥物，廣泛應(yīng)用于高血壓、冠心病、心梗等心血管疾病。近年來的研究發(fā)現(xiàn)葛根素對神經(jīng)損傷和糖尿病引起的慢性疼痛有治療作用[6～8]，本課題組既往報道了腹腔注射葛根素明顯降低NP 移植大鼠脊髓Toll-like receptor 4 (TLR4) 的表達(dá)，抑制脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞的活化和致炎細(xì)胞因子的表達(dá)[9,10]，這表明葛根素可通過抑制脊髓水平的神經(jīng)炎癥反應(yīng)治療神經(jīng)根性疼痛，葛根素是否可以通過抑制DRG 水平的神經(jīng)炎癥反應(yīng)降低外周敏化，還值得深入研究。本研究采用自體髓核移植的方法構(gòu)建大鼠LDH 模型，從外周神經(jīng)炎癥及外周敏化的角度，探究葛根素緩解LDH 誘導(dǎo)神經(jīng)根性疼痛的發(fā)生機(jī)制。

方 法

1.動物

成年雄性SD 大鼠，體重200～250 g，購于廣東省實驗動物中心（合格證號：No.44002100020691；No.44002100021111；No.44005800010307），統(tǒng)一規(guī)范飼養(yǎng)在廣州醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心。所有動物實驗依據(jù)國際疼痛學(xué)會的指導(dǎo)方針[11]，并獲得廣州醫(yī)科大學(xué)動物倫理委員會的批準(zhǔn)（倫理批號GD2019-143）。實驗一：取20 只大鼠用完全隨機(jī)化分組法分成假手術(shù)組 (sham,n= 4) 和NP 組 (n= 16)，其中NP 組大鼠分別在術(shù)后3 天、5 天、7 天、14天(n= 4)取出同側(cè)L4和L5DRG 和腦脊液，L4DRG用于檢測鈉通道表達(dá)，L5DRG 和腦脊液用于檢測TNF-α 含量。實驗二：取40 只大鼠用完全隨機(jī)化分組法分為五組 (n= 8)：①sham 組；②NP 移植組；③NP + PU 組；④NP + Veh 組；⑤NP + PU +TNF-α 組，在 術(shù) 后0 天、3 天、5 天、7 天、14 天進(jìn)行痛行為學(xué)檢測，第14 天行為檢測結(jié)束后，每組取4 只大鼠DRG 檢測TNF-α 和p-p65 含量，另外4 只大鼠取DRG 檢測鈉通道表達(dá)。

2.主要試劑

葛根素注射液（麥克林生化科技有限公司，貨號P816258，中國）經(jīng)腹腔注射100 mg(kg·d)，連續(xù)7 天。大鼠重組TNF-α（貨號510-RT）購于R&D Systems 公司（美國），多聚甲醛（PFA，貨號16005）和Triton X-100（貨號X100）購于Sigma-Aldrich 公司（美國）。大鼠TNF-α ELISA 試劑盒（貨號EK0526）購于博士德生物技術(shù)有限公司（中國）。本實驗用的一抗如下：兔抗TNF-α 抗體（ab6671，Abcam，美國），兔抗p-p65 抗體（#3033，Cell Signaling Technology，美國），兔抗GAPDH抗體（BA1054，博士德，中國），兔抗Nav1.7 抗體（SCN9A，Alomone Labs，以色列）。本實驗用的二抗如下：HRP 偶聯(lián)IgG（BA1054，博士德，中國），Cy3 偶聯(lián)IgG（BA1031，博士德，中國）。

3.方法

（1）腰椎間盤突出癥模型

實驗一和二均采用大鼠自體髓核 (neucleus pulposus, NP) 移植方法復(fù)制腰椎間盤突出癥模型[12,13]。戊巴比妥鈉麻醉后，從L4～L5節(jié)段行半椎板切除術(shù)，暴露L5神經(jīng)根，用0.9%氯化鈉注射液棉球保護(hù)手術(shù)面。大鼠改仰臥位，從尾椎取出NP (5 mg)，立即轉(zhuǎn)回俯臥位，將NP 輕置于暴露的L5神經(jīng)根上，避免壓迫。逐層縫合肌肉和皮膚。假手術(shù) (sham) 組大鼠行同樣的手術(shù)操作，但NP 不移植到神經(jīng)根上。

（2）鞘內(nèi)置管

實驗二：NP 移植手術(shù)前2 天進(jìn)行鞘內(nèi)置管用于持續(xù)給藥[14]。麻醉后將充滿0.9%氯化鈉注射液的無菌PE-10 管（Becton, Dickinson and Company，美國）從脊髓L5～L6椎間隙向頭端插入到腰膨大位置，外周端有腦脊液流出為插管成功標(biāo)志。PE-10管外周端經(jīng)皮下組織向頭端推送，藏于兩耳間并燒熔封口。大鼠源性重組TNF-α 用PBS 溶液稀釋至0.3 ng/μl，TNF-α（每次10 μl）或者PBS 溶液（溶劑對照）從外周端緩慢注入（q6 h，持續(xù)7 天），藥物注射后再推注7 μl 無菌0.9%氯化鈉注射液保證藥物進(jìn)入蛛網(wǎng)膜下腔，每次注射后燒熔封口。

（3）機(jī)械性痛閾和熱痛閾檢測

實驗二：采用經(jīng)典的up-down 方法檢測后肢機(jī)械刺激縮足反射閾值 (mechanical withdrawal threshold, MWT)[15]。用vonFrey Filaments（強(qiáng)度依次為：0.41，0.70，1.20，2.04，3.63，5.50，8.51，15.14 g）垂直作用于足底6～8 s，如果大鼠出現(xiàn)迅速的撤足或者舔舐足部，視為陽性反應(yīng)，否則為陰性反應(yīng)。從2.04 g 強(qiáng)度開始測試，如果出現(xiàn)陰性反應(yīng)，則用相鄰的更強(qiáng)的刺激強(qiáng)度，如果出現(xiàn)陽性反應(yīng)，則用相鄰的更弱的刺激強(qiáng)度。

采用熱平板（7370, Ugo Basile, 意大利）方法檢測后肢熱縮足反射潛伏期 (thermal withdrawal latency, TWL)[16]。將熱源置于大鼠足底，如果大鼠出現(xiàn)迅速的撤足或者舔舐足部，視為陽性反應(yīng)。同一只大鼠，同樣溫度下，取3次TWL的平均值作為結(jié)果。術(shù)前3 天，每日檢測MWT 和TWL 作為基礎(chǔ)值對照，行為測試的實驗者不清楚對大鼠的分組情況。

（4）Western blot (WB)

實驗一和二于大鼠麻醉后，取出L4～L5DRG，迅速置于液氮中，加入含蛋白酶抑制劑（1:100,AR1182，博士德，中國）和磷酸酶抑制劑（1:100,AR1183，博士德，中國）的Tris 緩沖液(15 mmol/L,pH 7.6)中，冰上勻漿并超聲破碎。隨后低溫離心(14,000×g , 20 min)取上清液分裝凍存于-80℃。

蛋白質(zhì)定量(bicinchoninic acid, BCA) 法檢測標(biāo)本蛋白濃度，SDS-PAGE 電泳分離蛋白，并轉(zhuǎn)印到PVDF 膜（#1620264, Bio-Rad, 美國）上。PVDF膜 在 室 溫 封 閉1 h 后，加 入 抗TNF-α 或p-p65 或GAPDH 的抗體4℃孵育過夜。洗滌后加入HRP 偶聯(lián)的IgG 常溫孵育1 h，再次洗滌后用超敏ECL 試劑（35055，Pierce，美國）檢測免疫復(fù)合物。計算機(jī)輔助成像分析系統(tǒng)（KONTRON IBAS 2.0，德國）計算條帶灰度。

（5）免疫熒光染色

實驗一和二：大鼠用0.9%氯化鈉注射液灌注沖去血液，再用4% PFA 溶液（溶于0.1 M 磷酸鹽緩沖液中，pH 7.4，4℃）灌注固定。取出DRG 組織，繼續(xù)后固定1 h，隨后轉(zhuǎn)入30%蔗糖溶液脫水1 天。用冰凍切片機(jī)(Leica CM1900, -20℃)將組織切成16 μm 薄片用于染色。

組織片用含3% 驢血清的0.3% Triton X-100 溶液常溫固定1 h，再孵育Nav1.7 抗體4℃過夜，洗滌后常溫避光孵育Cy3 偶聯(lián)的IgG，用熒光顯微鏡和CCD 掃描相機(jī)（Leica，德國）拍照。

（6）ELISA

實驗一：取DRG 組織和腦脊液 (cerebrospinal fluid, CSF)，DRG 組織用預(yù)冷PBS 溶液勻漿（10 mg組織加入100 μl PBS 溶液）并低溫離心取上清液，根據(jù)ELISA 說明書，在預(yù)包被抗體的96 孔板中，先后加入DRG 上清液或者CSF 反應(yīng)1.5 h，生物素標(biāo)記抗體進(jìn)行反應(yīng)1 h。PBS 洗去未結(jié)合的物質(zhì)，隨后加入親和素-過氧化物酶復(fù)合物反應(yīng) 0.5 h，再次洗滌并依次加入TMB 顯色液和TMB 終止液。450 nm 波長下檢測樣本吸光度并制作標(biāo)準(zhǔn)曲線做參照。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算組織中TNF-α 蛋白含量。

4.統(tǒng)計學(xué)分析

結(jié) 果

1.NP 移植大鼠DRG 中Nav1.7 表達(dá)增加，DRG和腦脊液中TNF-α 含量增加

免疫熒光結(jié)果顯示與sham 組相比，NP 后3 天、5 天、7 天、14 天四個時間段，手術(shù)同側(cè)DRG 中Nav1.7 陽性細(xì)胞百分比明顯增加（見圖1A-F, NPvs.sham,F(4,15) = 1782,P< 0.01）；WB 結(jié)果顯示：與sham 組相比，NP 組大鼠在手術(shù)后各時間點(diǎn)，其手術(shù)同側(cè)DRG 組織中TNF-α 含量均明顯增加（見圖1G, NPvs.sham,F(4,15) = 1211,P< 0.01）；ELISA 結(jié)果表明：與sham 組相比，NP 組大鼠在手術(shù)后各時間點(diǎn)，其手術(shù)同側(cè)DRG 組織和CSF 中TNF-α含量均明顯增加（見圖1H, NPvs.sham,F(4,15) = 373.5,P< 0.01;F(4,15) = 5.216,P< 0.05）。表明NP 移植上調(diào)手術(shù)同側(cè)DRG Nav1.7，同時引起顯著的外周神經(jīng)炎癥反應(yīng)。

圖1 NP 移植后DRG 中Nav1.7 表達(dá)增加，DRG 和CSF 中TNF-α 蛋白含量增加 (n = 4)(A-F) 免疫熒光染色發(fā)現(xiàn)，與sham 組相比，NP 移植后3～14 天DRG 中Nav1.7 表達(dá)增加；Western blot (G) 和ELISA 檢測 (H) 均發(fā)現(xiàn)，與sham 組相比，NP 移植后3～14 天DRG 組織和CSF 中TNF-α 蛋白表達(dá)明顯增加*P < 0.05，**P < 0.01，與sham 組相比Fig.1 NP implantation increases Nav1.7 expression in DRG and increases TNF- α expression in both DRG and CSF (n = 4)(A-F) Immunofluorescence staining reveals that compared with sham group, Nav1.7 expression in DRG is increased in rats with NP implantation (group NP) from day 3 to day 14 after surgery; Western blotting (G) and ELISA (H) reveals that compared with group sham, TNF-α protein level is increased in DRG and CSF of rats in NP group from day 3 to day 14 after surgery.*P < 0.05, **P < 0.01, compared with group sham.

2.葛根素明顯增加NP 移植大鼠機(jī)械性和熱痛覺閾值，且外源性給予TNF-α 可逆轉(zhuǎn)葛根素的作用

檢測大鼠后肢MWT 和TWL 評估大鼠痛行為。NP 移植組大鼠手術(shù)同側(cè)MWT 和TWL 明顯降低，持續(xù)到術(shù)后14 天（見圖2, NPvs.sham,t(df) =44.92 for MWT,t(df) = 26.09 for TWL,P< 0.01）。從術(shù)前1 h 開始，連續(xù)7 天腹腔注射葛根素注射液(100 mg/kg, 每日1 次)，于給藥后1 h 進(jìn)行行為學(xué)測試，結(jié)果顯示PU 明顯增加手術(shù)同側(cè)后肢MWT和TWL（見圖2, NP + PUvs.NP + Veh,t(df) = 39.84 for MWT,t(df) = 15.69 for TWL,P< 0.01），效果可持續(xù)至術(shù)后14 天；給予葛根素的同時，鞘內(nèi)給予大鼠重組TNF-α 明顯逆轉(zhuǎn)葛根素提高M(jìn)WT 和TWL的作用（見圖2, NP + PU + TNFvs.NP + PU,t(df) =28.98 for MWT,t(df) = 13.77 for TWL,P< 0.01）。表明葛根素可持續(xù)提高NP 組大鼠痛覺閾值，緩解機(jī)械性痛覺過敏和熱痛覺超敏，其鎮(zhèn)痛效果可被TNF-α 逆轉(zhuǎn)。

圖2 葛根素明顯增加NP移植大鼠機(jī)械刺激縮足反射閾值(A)和熱縮足反射潛伏期(B)，TNF-α可逆轉(zhuǎn)葛根素的作用 (n = 8)**P < 0.01，與sham 組相比，NP 組手術(shù)后3～14 天大鼠后肢MWT 和TWL 明顯下降；##P < 0.01，與溶劑對照組(NP + Veh)相比，葛根素治療組(NP + PU)大鼠的MWT 和TWL 明顯增加；△△P < 0.01，與葛根素治療組(NP + PU)相比，葛根素與TNF-α 同時給藥組(NP + PU + TNF)大鼠的MWT 和TWL 明顯降低Fig.2 Peurarin significantly increases MWT and TWL of rats with NP implantation which is obscured by TNF-α (n = 8)**P < 0.01, compared with sham group, the mechanical MWT and TWL are decreased in rats of NP group from day 3 to day 14 after surgery; ##P < 0.01, compared with group NP + Veh, the MWT and TWL of group NP + PU are significantly increased; △△P < 0.01, compared with group NP + PU, the MWT and TWL of group NP + PU + TNF are significantly decreased.

3.葛根素明顯降低NP 移植大鼠脊髓組織中TNF-α 和p-p65 蛋白表達(dá)

葛根素給藥至術(shù)后7 天，于術(shù)后14 天取DRG組織，用Western blot 方法檢查TNF-α 和p-p65 蛋白水平，與sham 組相比，NP 組大鼠手術(shù)同側(cè)DRG中TNF-α 和 p-p65 表達(dá)明顯增加（見圖3, NPvs.sham, t (df) = 22.36,t(df) = 22.33,P< 0.01）。與溶劑對照組 (NP + Veh) 相比，葛根素 (PU) 明顯降低TNF-α 和p-p65 表達(dá)（見圖3, NP + PUvs.NP + Veh,t(df) = 14.19,t= 30.5,P< 0.01）。

圖3 葛根素明顯降低NP 移植大鼠DRG 中TNF-α 和p-p65 表達(dá) (n = 4)**P < 0.01，與Sham 組相比，NP 移植（NP 組）大鼠DRG 中TNF-α 和p-p65 表達(dá)明顯上升；##P < 0.01，與溶劑對照組 (NP + Veh) 相比，葛根素治療組(NP + PU)組大鼠DRG 中TNF-α 和p-p65 含量明顯降低Fig.3 Peurarin significantly decreases TNF-α and p-p65 expression in DRG of rats with NP implantation (n = 4)**P < 0.01, compared with group sham, TNF-α and p-p65 expression in DRG of rats with NP implantation (group NP)are significantly increased; ##P < 0.01, compared with group NP + Veh, in group NP + PU, TNF-α and p-p65 expression in DRG of rats in group NP + PU are significantly decreased.

4.葛根素明顯抑制NP 移植大鼠DRG Nav1.7表達(dá)，且外源性給予TNF-α 可逆轉(zhuǎn)葛根素的作用

術(shù)后14 天，用免疫熒光染色方法檢測不同組大鼠手術(shù)同側(cè)DRG 中Nav1.7 的表達(dá)。與sham 組相比，NP 組Nav1.7 陽性細(xì)胞百分比明顯增加（見圖4A,B, F, NPvs.sham,t= 12.82,P< 0.01）；與溶劑對照組相比，PU 明顯降低Nav1.7 熒光陽性面積（見圖4C,D, F, NP + PUvs.NP + Veh,t(df) = 4.648,P< 0.01）；給予PU 的同時，鞘內(nèi)給予大鼠重組TNF-α 可明顯增加Nav1.7 陽性細(xì)胞百分比（見圖4C, E, F, NP + PU +TNF-αvs.NP + PU,t= 9.322,P< 0.01）。表明PU 可通過抑制DRG Nav1.7 上調(diào)治療神經(jīng)根性疼痛。

圖4 葛根素抑制NP 移植鼠DRG Nav1.7 的上調(diào)，TNF-α 可阻斷其作用 (n = 4)**P < 0.01，與sham 組相比，NP 移植后（NP 組）大鼠DRG 中Nav1.7 表達(dá)明顯上升(A, B, F)；##P < 0.01，與溶劑對照組 (NP + Veh) 相比，葛根素治療組(NP + PU)大鼠DRG 中Nav1.7 表達(dá)明顯降低(C, D, F)；△△P < 0.01，葛根素治療組(NP + PU)相比，葛根素治療同時外源性給予TNF-α (NP + PU + TNF)大鼠的DRG 中Nav1.7 表達(dá)明顯增加(D-F)Fig.4 Peurarin inhibits Nav1.7 upregulation in DRG of rats with NP implantation which is obscured by TNF-α (n = 4)**P < 0.01, compared with group sham, Nav1.7 expression in DRG of rats with NP implantation (group NP) are significantly increased (A, B, F); ##P < 0.01, compared with group NP + Veh, Nav1.7 expression in DRG of rats in group NP +PU are significantly decreased (C, D, F); △△P < 0.01, compared with group NP + PU, co-administration of peurarin and TNF-α (group NP + PU + TNF) significantly increases Nav1.7 expression in DRG (D-F).

討 論

腰椎間盤突出癥是臨床常見疾病，主要表現(xiàn)為單側(cè)的，沿著坐骨神經(jīng)方向的放射性腰疼和腿疼，臨床也稱為神經(jīng)根性疼痛[1]。目前臨床最常見的治療手段為手術(shù)摘除病變椎間盤。相比藥物治療，手術(shù)治療費(fèi)用更高，并發(fā)癥較多，甚至有10%的病人手術(shù)摘除病變椎間盤后還出現(xiàn)長期的神經(jīng)根性疼痛癥狀，因此深入研究神經(jīng)根性疼痛產(chǎn)生的機(jī)制具有重要臨床意義。

外周敏化是慢性疼痛的重要病理生理學(xué)機(jī)制，是指初級傳入神經(jīng)元上離子通道的表達(dá)、運(yùn)輸及功能的改變，進(jìn)而增加神經(jīng)元的興奮性，誘發(fā)神經(jīng)元異常放電，向中樞傳遞過多的痛覺信號[2,17]。電壓門控性鈉通道 (VGSCs) 是決定神經(jīng)元興奮性最重要的離子通道，神經(jīng)根性疼痛模型中發(fā)現(xiàn)多種亞型的鈉通道如Nav1.3、Nav1.6、Nav1.7和 Nav1.8的上調(diào)[3,18,19]。Nav1.7 通道失活慢，關(guān)閉慢[20]，從而對小而慢的去極化產(chǎn)生一種斜坡電流[21]；Nav1.7 的表達(dá)和功能上調(diào)可降低痛閾，并對閾下刺激產(chǎn)生過激反應(yīng)[21]，因此對神經(jīng)元異常放電的發(fā)生至關(guān)重要。最近的研究發(fā)現(xiàn)Nav1.7 基因SCN9A 的功能喪失型突變是人類先天無痛癥發(fā)生的重要基礎(chǔ)[22]，提示Nav1.7 的功能缺失直接影響傷害性感受器的功能，導(dǎo)致正常痛覺的喪失。既往對神經(jīng)損傷和高血糖引起慢性疼痛的研究，發(fā)現(xiàn)DRG 上致炎細(xì)胞因子TNF-α 表達(dá)增加是鈉通道上調(diào)的重要原因[4,5]。因此，我們推斷抑制DRG 中的神經(jīng)炎癥反應(yīng)可能通過下調(diào)Nav1.7 緩解神經(jīng)根性疼痛。

葛根素是從天然植物葛根中提取的一種C-糖基化大豆異黃酮，具有抗炎、抗氧化和抗凋亡的作用[6～8]，廣泛用于治療心血管系統(tǒng)疾病。近年來實驗室研究發(fā)現(xiàn)葛根素對神經(jīng)損傷、高血糖引起的慢性疼痛有治療作用[6,7,23]。臨床研究發(fā)現(xiàn)，葛根素配合手法治療可明顯緩解頸椎病病人的疼痛和眩暈癥狀[24]，葛根素對于老年女性骨質(zhì)疏松并股骨頸骨折手術(shù)病人也具有較好的鎮(zhèn)痛作用[25]，葛根素注射液對糖尿病引起的肢體麻木、疼痛及感覺異常有明顯緩解作用[8,26]。我們課題組也發(fā)現(xiàn)并報道了腹腔注射葛根素可通過抑制脊髓水平的神經(jīng)炎癥反應(yīng)，抑制小膠質(zhì)細(xì)胞的活化緩解神經(jīng)根性疼痛[9,10]。在此基礎(chǔ)上，我們進(jìn)一步探究葛根素對DRG 水平的炎癥反應(yīng)的作用，發(fā)現(xiàn)連續(xù)7 天腹腔注射葛根素可明顯降低NP 移植大鼠DRG 及腦脊液中致炎細(xì)胞因子TNF-α 含量，并降低下游信號分子p-p65，這表明葛根素對DRG水平的炎癥反應(yīng)同樣具有抑制作用。進(jìn)一步實驗發(fā)現(xiàn)葛根素可降低NP 移植大鼠神經(jīng)元上Nav1.7 的表達(dá)，且注射葛根素的同時，鞘內(nèi)給予大鼠重組TNF-α 可明顯增加Nav1.7 的表達(dá)，因此葛根素可能通過抑制DRG 的神經(jīng)炎癥，下調(diào)DRG Nav1.7 的表達(dá)，緩解神經(jīng)根性疼痛。

綜上所述，本研究從在體水平證實葛根素可能通過抑制TNF-α/NF-κB 信號通路，降低 DRG 中Nav1.7 的表達(dá)，抑制外周敏化，從而治療神經(jīng)根性疼痛。不足之處在于缺乏離體實驗數(shù)據(jù)，后續(xù)研究可以取DRG 組織進(jìn)行神經(jīng)元的原代培養(yǎng)，在細(xì)胞水平再次驗證葛根素及TNF-α/NF-κB 信號通路對Nav1.7 表達(dá)的影響。

利益沖突聲明：作者聲明本文無利益沖突。