■ 王凱 （江門市澳保生物科技有限公司 廣東 江門 52900）

肝臟既是魚體代謝器官，也是重要的免疫器官，不僅具有解毒、代謝脂肪和糖類的功能，而且在氧化防御方面具有重要作用。當(dāng)外界環(huán)境發(fā)生變化時，肝臟中一系列的抗氧化酶類將被激活，快速清除體內(nèi)多余的自由基，以此抵御外界脅迫所產(chǎn)生的侵害，維持魚體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)。

近年來，在高產(chǎn)高效益的驅(qū)使下，我國每年都有由于投喂、管理不當(dāng)造成的白肝、花肝、黃肝等肝臟問題，最終導(dǎo)致魚吃料少、長速慢、免疫力低下。長期的低免疫狀態(tài)使得魚體難以克服多變的外部環(huán)境，易造成魚病的爆發(fā)和魚類的大規(guī)模死亡，從而增加養(yǎng)殖風(fēng)險，影響?zhàn)B殖利潤。

中草藥是一種天然的飼料添加劑，具有提高魚體免疫力、增加魚類食欲、保肝護(hù)腸等功效，加之其低成本、低殘留、低耐藥性等特點，近年來，應(yīng)用中草藥防治魚病受到了越來越多的關(guān)注。

因此，針對現(xiàn)有魚類肝臟問題，對具有護(hù)肝功效的中草藥進(jìn)行探究，不僅有利于魚類的健康養(yǎng)殖，維護(hù)“餐桌上的安全”，也對于水資源環(huán)境的保護(hù)具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

養(yǎng)殖江門市澳保生物科技有限公司種苗廠實驗網(wǎng)箱中的加州鱸，體質(zhì)量為50～100g/條，無病毒性、細(xì)菌性和寄生蟲性疾病。實驗期間養(yǎng)殖水體水質(zhì)良好，水溫21～27℃，氨氮0～0.2mg.L-1，亞鹽0～0.007mg.L-1，pH值7.4～7.8，溶氧5.6～7.6mg.L-1。每天投喂2次。

1.2 實驗材料

江門市澳保生物科技有限公司自主研發(fā)的復(fù)方中草藥護(hù)肝產(chǎn)品A。

圖1 不同肝臟損傷程度分級

1.3 實驗設(shè)計

1.3.1 肝臟損傷檢查和肝臟分級

正式實驗前對現(xiàn)有養(yǎng)殖的15個網(wǎng)箱加州鱸魚肝臟進(jìn)行檢查，每個網(wǎng)箱隨機取5條魚，選擇肝臟損傷較為嚴(yán)重的網(wǎng)箱進(jìn)行實驗，并對不同的肝臟損傷程度進(jìn)行分級。

1.3.2 肝臟修復(fù)實驗一：產(chǎn)品A護(hù)肝效果初步檢驗對肝損傷的網(wǎng)箱F中的加州鱸（200條）拌喂中草藥護(hù)肝產(chǎn)品A進(jìn)行治療，每天拌喂2次，連續(xù)拌喂14d。分別于第0d、第7d和第14d進(jìn)行取樣，每次隨機取樣6條魚，5條用于肝臟觀察，1條用于切片。

實驗二：產(chǎn)品A護(hù)肝效果對比實驗 將肝損傷的15、16號網(wǎng)箱中的加州鱸（200條/網(wǎng)箱）分為兩組，一組為對照組，投喂普通飼料，另一組為實驗組，投喂拌有中草藥護(hù)肝產(chǎn)品A的藥餌，每天拌喂2次，連續(xù)拌喂7d，于第0d、第7d進(jìn)行取樣，每次隨機取樣10條魚，觀察肝臟情況。記錄每日吃料量，采樣前魚體總重，采樣后每條魚體重、肝臟重，計算增重、增重率、吃料量、餌料系數(shù)。

增重=魚體末重-魚體初重

增重率=（魚體末重-魚體初重）/魚體初重×100%

吃料量=每日吃料量×吃料天數(shù)

餌料系數(shù)=每日吃料量×吃料天數(shù)/增重×100%

2 結(jié)果

2.1. 肝臟分級

根據(jù)養(yǎng)殖經(jīng)驗，對魚體不同狀態(tài)下的肝臟進(jìn)行分級，為后續(xù)實驗的分析提供判斷依據(jù)。1級肝臟：肝臟為豬肝紅，肝臟狀態(tài)最好，不需調(diào)理；2級肝臟：肝臟顏色較豬肝紅淡，呈現(xiàn)為粉紅色，肝臟狀態(tài)尚可，可調(diào)理也可不調(diào)理；3級肝臟：肝臟紅潤或粉紅帶白斑或黃斑，肝臟狀態(tài)較差，需要調(diào)理；4級肝臟：肝臟完全轉(zhuǎn)變?yōu)榘咨螯S色，肝臟狀態(tài)很差，急需調(diào)理。

2.2 產(chǎn)品A護(hù)肝效果初步檢驗

2.2.1 肝臟外觀觀察

實驗第0d，加州鱸魚肝臟發(fā)黃，均為4級肝臟；拌喂產(chǎn)品A 7d后，加州鱸魚肝臟好轉(zhuǎn)，4條肝臟為略微粉紅，2級肝臟，1條肝臟為發(fā)黃，4級肝臟；拌喂產(chǎn)品A 14d后，加州鱸魚肝臟基本修復(fù)完全，3條紅潤，1級肝臟，2條粉紅，2級肝臟（圖2），表明隨著時間的增加，在產(chǎn)品A的作用下，加州鱸肝臟逐步修復(fù)。

圖2 網(wǎng)箱拌喂產(chǎn)品A后肝臟修復(fù)情況

圖3 網(wǎng)箱拌喂產(chǎn)品A后肝臟修復(fù)切片

圖4 拌喂產(chǎn)品A后增重、增重率、吃料量、餌料系數(shù)比較

肝臟切片結(jié)果表明，加州鱸胰腺埋于肝臟中，圍繞血管分布。在使用產(chǎn)品A前，肝臟發(fā)黃，血管周圍的胰腺組織完全消失；使用產(chǎn)品A 7d后，肝臟粉紅，血管周圍的胰腺部分修復(fù)，部分出現(xiàn)病變，胰腺部分腫大、出現(xiàn)大量嗜酸性小體和空泡；使用產(chǎn)品A 14d后，肝臟紅潤，胰腺組織恢復(fù)正常，圍繞血管均勻分布。

實驗第0d，對照組和產(chǎn)品A組1～2級肝臟的占有率分別為40%和20%，3～4級肝臟的占有率分別為60%和80%，實驗第7d，對照組1～2級肝臟和3～4級肝臟占有率相比于第0d沒有變化，而產(chǎn)品A組1～2級肝臟占有率顯著上升，為80%，3～4級肝臟的占有率顯著下降，為20%（表1），說明產(chǎn)品A對肝損傷的加州鱸肝臟修復(fù)效果明顯。

表1 網(wǎng)箱拌喂產(chǎn)品A后肝臟修復(fù)效果

實驗結(jié)果表明，投喂產(chǎn)品A組增重、增重率、吃料量、餌料系數(shù)均明顯優(yōu)于對照組，說明魚體肝臟的修復(fù)有利于魚體的生長。

3 討論

肝臟是魚體維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)最核心的器官之一，當(dāng)機體出現(xiàn)代謝紊亂和病變時，肝臟狀態(tài)也隨之發(fā)生變化，如肝臟由光滑有彈性轉(zhuǎn)變?yōu)槎垢癄?、易脆等，顏色由豬肝紅轉(zhuǎn)變?yōu)辄S肝、花肝、白肝、綠肝等（黃春紅等，2019；汪開毓等，2001）。在加州鱸養(yǎng)殖過程中，肝臟的顏色是否紅潤通常是評價魚體是否健康的依據(jù)之一。在本研究中，我們選擇肝臟條件很差的魚類進(jìn)行了兩組不同維度的肝臟修復(fù)實驗，一組是縱向比較實驗，另一組是橫向比較實驗，兩組實驗均發(fā)現(xiàn)損傷的肝臟在使用產(chǎn)品A后明顯變得紅潤，說明產(chǎn)品A對加州鱸的肝臟有明顯的修復(fù)效果。同時，我們注意到兩組肝臟修復(fù)實驗的修復(fù)時間明顯不同，一組14d完全修復(fù)，另一組7d完全修復(fù)，說明用藥后，肝臟修復(fù)的時間并非是固定不變的。這可能與肝臟的損傷程度、天氣的變化以及水質(zhì)等有關(guān)，在多次的養(yǎng)殖實驗中，我們發(fā)現(xiàn)當(dāng)肝臟損傷程度越輕，修復(fù)的時間越短，反之越長。同時，好的天氣條件好和水質(zhì)條件也會加速肝臟的修復(fù)。

同肝臟一樣，胰腺也是魚體重要的消化腺和內(nèi)分泌腺，在魚類的消化和吸收、血糖調(diào)節(jié)方面發(fā)揮著重要的作用，其分布在硬骨魚體內(nèi)非常復(fù)雜，大致分為4種類型：緊湊型、散布致密型、彌散型和彌漫混合型（熊洪林和王志堅，2009）。本研究中，切片結(jié)果表明胰腺埋于肝臟中，與肝臟交替分布，依據(jù)熊洪林等（2009）的分類，加州鱸胰腺屬于迷漫混合型，與蝦蟹的胰腺的分布類似，這一結(jié)果為加州鱸肝胰臟的研究奠定了基礎(chǔ)。此外，據(jù)了解，嗜酸性小體與細(xì)胞的凋亡有關(guān)。本研究中，紅潤的肝臟中胰腺細(xì)胞分布均均；粉紅色的肝臟中胰腺出現(xiàn)部分腫大，腫大部位發(fā)現(xiàn)大量嗜酸性小體；在發(fā)黃的肝臟中，胰腺完全消失；而肝臟組織中并未發(fā)現(xiàn)明顯異常。由此，我們推測在加州鱸營養(yǎng)性的肝損傷過程中，首先損傷的可能是埋藏于肝組織中的胰腺組織，胰腺組織的損傷影響魚體對脂質(zhì)、糖類的吸收和代謝，增加肝臟的負(fù)擔(dān)，從而造成肝臟代謝紊亂，引發(fā)肝臟顏色發(fā)生改變。黃春紅等（2019）發(fā)現(xiàn)不同肝臟等級的平均脂肪質(zhì)量分?jǐn)?shù)不同，且隨著肝臟等級的增加（顏色的改變）平均脂肪質(zhì)量分?jǐn)?shù)顯著增加，與本研究結(jié)果一致。

長期的魚類養(yǎng)殖經(jīng)驗發(fā)現(xiàn)肝臟與腸道之間存在一種“鐵”關(guān)系，魚體肝臟分泌的膽汁會隨胰腺分泌的胰液一起流到腸道里，幫助腸道消化食物、維護(hù)腸道菌群的組成和腸道屏障的完整性，食物消化后的各種產(chǎn)物包括內(nèi)毒素通過腸道粘膜上皮細(xì)胞進(jìn)入血液，通過門靜脈流進(jìn)肝臟進(jìn)行解毒。肝臟與腸道之間形成一個循環(huán)，互相影響，研究者們稱之為“肝腸軸”。本研究發(fā)現(xiàn)，肝臟修復(fù)組的增重、增重率、吃料量、餌料系數(shù)均優(yōu)于未修復(fù)組，說明肝臟的修復(fù)可能促進(jìn)了“肝腸軸”的良性循環(huán)，進(jìn)而有利于魚體生長。

4 結(jié)論

隨著養(yǎng)殖集約化的不斷加強，魚類肝臟問題已經(jīng)成為養(yǎng)殖成功的限制因素之一。本研究對中草藥產(chǎn)品A的護(hù)肝效果進(jìn)行兩種不同維度的檢驗，均發(fā)現(xiàn)產(chǎn)品A對加州鱸魚的肝臟修復(fù)有明顯效果，并發(fā)現(xiàn)肝臟的修復(fù)時間可能與肝臟的損傷情況、水質(zhì)和天氣條件有關(guān)。肝臟切片結(jié)果表明加州鱸魚胰臟分布屬于迷漫混合型，與蝦蟹胰臟分布類似，同時我們推測營養(yǎng)性肝損傷可能最先損傷的是埋藏于肝臟中的胰臟。此外肝臟的修復(fù)可能有利于促進(jìn)“肝腸軸”的良性循環(huán)。