向 麗，尹佟明，陳贏男

(南京林業(yè)大學(xué)林木遺傳與生物技術(shù)省部共建教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，南京林業(yè)大學(xué)林學(xué)院，南方現(xiàn)代林業(yè)協(xié)同創(chuàng)新中心，江蘇 南京 210037)

花是被子植物的繁殖器官，在傳粉、授精和結(jié)實(shí)等過(guò)程及植物生活史中發(fā)揮著關(guān)鍵作用[1-2]，影響植物在自然界中的生存能力以及經(jīng)濟(jì)應(yīng)用價(jià)值。植物開(kāi)花需從營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)階段向生殖生長(zhǎng)階段跨越，啟動(dòng)營(yíng)養(yǎng)芽原基向花芽原基的分化，稱(chēng)之為花芽分化過(guò)程[3]。對(duì)擬南芥(Arabiodopsisthaliana)等植物花發(fā)育的分子調(diào)控研究揭示，植物由營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)向生殖生長(zhǎng)的轉(zhuǎn)變主要由6種途徑(自主、赤霉素、年齡、光周期、溫度、春化)調(diào)控，它們相互形成一個(gè)復(fù)雜多變的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)[3]?；ㄔ纬珊?，花器官的不同部分按不同的時(shí)序開(kāi)始發(fā)育，完成花器官的發(fā)育過(guò)程。林木花芽分化過(guò)程是每年新稍處頂端分生組織中分化出葉及腋芽的生長(zhǎng)點(diǎn)后，再轉(zhuǎn)變分化出花器官，分為生理分化和形態(tài)分化兩種過(guò)程[4]。有研究表明植物花芽發(fā)育過(guò)程中，花芽的外部形態(tài)和內(nèi)部解剖結(jié)構(gòu)兩者之間存在一定的相關(guān)性[5-8]。韓明慧等[9]對(duì)薄殼山核桃(Caryaillinoensis)雌、雄花芽分化外部形態(tài)與內(nèi)部結(jié)構(gòu)的關(guān)系進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)花芽外部形態(tài)與內(nèi)部結(jié)構(gòu)有一定的對(duì)應(yīng)關(guān)系，能從花芽外部形態(tài)的特征進(jìn)一步判斷其內(nèi)部細(xì)胞的發(fā)育動(dòng)態(tài)。洑香香等[10]對(duì)青錢(qián)柳(Cyclocaryapaliurus)雌、雄花芽分化進(jìn)程的形態(tài)解剖特征進(jìn)行研究，為培育優(yōu)質(zhì)的青錢(qián)柳(如人工授粉)提供可靠的理論基礎(chǔ)，同時(shí)也能為相關(guān)研究確定適時(shí)采樣時(shí)間提供依據(jù)。宋興舜等[11]根據(jù)白樺(Betulaplatyphylla)雌花發(fā)育的內(nèi)外部形態(tài)相關(guān)性來(lái)判斷雌花發(fā)育過(guò)程，為開(kāi)展花、雌蕊和胚胎發(fā)育分子機(jī)理研究的適時(shí)取樣提供了參考依據(jù)。

楊柳科植物不僅是重要的能源和工業(yè)原料樹(shù)種，也是重要的城市和園林綠化樹(shù)種。楊柳科植物多為葇荑花序，雌雄異株，其雌株在達(dá)到性成熟后會(huì)產(chǎn)生大量飛絮，持續(xù)期長(zhǎng)達(dá)1～2個(gè)月，飛絮問(wèn)題已成為限制楊柳產(chǎn)業(yè)發(fā)展和綠化種植的瓶頸。解析控制楊柳花芽分化和發(fā)育的分子機(jī)制是解決飛絮問(wèn)題的關(guān)鍵，而對(duì)其花芽分化的全過(guò)程進(jìn)行詳細(xì)研究，是開(kāi)展花芽分化和發(fā)育分子機(jī)制研究的前提和基礎(chǔ)。目前利用石蠟切片技術(shù)，已有多種楊柳科樹(shù)種花器官的分化和發(fā)育過(guò)程研究被相繼報(bào)道，包括毛果楊(Populustrichocarpa)[12]、香脂楊(P.balsamifera)[13]、美洲黑楊(P.deltoides)[14]、蒿柳(Salixviminalis)[15]以及旱柳(S.matsudana)[16]，不同楊柳科樹(shù)種花芽分化的起始時(shí)間差異不大，基本都在6月。彭向永[15]通過(guò)對(duì)蒿柳不同階段芽進(jìn)行形態(tài)組織學(xué)觀察，明確了蒿柳雌株和雄株1年生枝條均于6月初進(jìn)入花芽生理分化期；張明照[16]觀察了旱柳雌、雄花芽外部形態(tài)和解剖結(jié)構(gòu)變化過(guò)程的特征，發(fā)現(xiàn)雄花芽外形稍大于雌花芽，雌、雄花的花序原基在6月下旬已完全形成且出現(xiàn)小花原基突起。

柳樹(shù)廣泛分布于南北半球的溫帶地區(qū)，除澳洲和南極洲之外，各大洲都有天然分布。在我國(guó)除青藏高原個(gè)別地區(qū)外，柳樹(shù)幾乎遍布全國(guó)。柳樹(shù)多樣性豐富，適應(yīng)性強(qiáng)，樹(shù)形優(yōu)美。簸箕柳(S.suchowensis)是第1個(gè)完成全基因組測(cè)序的柳屬樹(shù)種[17]，同時(shí)也已完成高密度遺傳圖譜的構(gòu)建[18]。簸箕柳個(gè)體較小，幼年期相對(duì)較短，是研究柳樹(shù)花芽分化和花序建成的理想材料。本研究以簸箕柳為研究對(duì)象，利用石蠟切片技術(shù)系統(tǒng)觀察了其雌、雄花芽分化和花序建成的完成過(guò)程，以期找出簸箕柳雌、雄花芽分化以及雌蕊和雄蕊發(fā)育的關(guān)鍵時(shí)期，為后續(xù)性別分化分子機(jī)制研究提供花序發(fā)育的關(guān)鍵信息。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

以栽植于江蘇省南京市南京林業(yè)大學(xué)白馬實(shí)驗(yàn)基地的簸箕柳雌株和雄株無(wú)性系為材料，樹(shù)高3～4 m，花芽著生于枝條中上部。選取立地條件一致，生長(zhǎng)健壯且無(wú)病蟲(chóng)害的簸箕柳雌株和雄株各10株，于2020年6月16日(樣品編號(hào)T1)至2021年2月16日(樣品編號(hào)T17)，每月1日和16日各采集1次雌、雄花芽或花序，共計(jì)17次(樣品依次編號(hào)為T(mén)1—T17)。

1.2 試驗(yàn)方法

觀察各階段簸箕柳雌、雄花芽或花序的外觀特征，并利用游標(biāo)卡尺測(cè)量花芽或花序長(zhǎng)度，每個(gè)時(shí)期15個(gè)重復(fù)，將數(shù)據(jù)錄入Excel表格中，對(duì)不同時(shí)期雌、雄花序的長(zhǎng)度差異進(jìn)行單因素方差分析，以P<0.05作為顯著性差異的標(biāo)準(zhǔn)[19]。

用石蠟切片技術(shù)進(jìn)行簸箕柳雌雄花芽分化的細(xì)胞學(xué)動(dòng)態(tài)觀察。不同時(shí)期的雌、雄花芽或花序分別放入含3%(體積分?jǐn)?shù)，下同)巰基乙醇的FAA固定液[70%酒精 90 mL，冰醋酸、38%甲醛和丙三醇各 5 mL]中進(jìn)行固定，用注射器進(jìn)行抽真空處理，固定48 h后，置于4 ℃冰箱進(jìn)行長(zhǎng)期保存。石蠟切片的制作參考付盼等[20]的方法，先將花芽或花序進(jìn)行乙醇脫水、浸蠟包埋、切片烘片、脫蠟復(fù)水處理，后用番紅固綠雙重染色，乙醇脫色、二甲苯梯度透明處理、封片烘干。用ZEISS Axio Imager 2型光學(xué)顯微鏡對(duì)切片進(jìn)行觀察和拍照記錄。

2 結(jié)果與分析

2.1 簸箕柳雌、雄花序外觀形態(tài)變化與生長(zhǎng)節(jié)律特征

雌、雄花序鱗片顏色變化整個(gè)過(guò)程見(jiàn)圖1A。江蘇省南京地區(qū)，每年6月中旬在簸箕柳枝條中上部可以看到鱗片包裹的花芽，此時(shí)簸箕柳營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)旺盛、枝葉繁茂，花芽和葉芽均著生于葉腋處，大小相近、外觀上難以區(qū)分，須用解剖刀切開(kāi)進(jìn)行辨別；7月初雌、雄花芽開(kāi)始膨大，此后營(yíng)養(yǎng)芽和花芽較易于分辨。6月中旬雌花序小而癟、外披嫩綠色鱗片，7月中旬至8月逐漸伸長(zhǎng)膨大，9—10月中旬趨于飽滿，花序鱗片顏色變成黃綠色，11月中旬至12月初，鱗片變?yōu)辄S褐色，休眠期花序鱗片呈褐色，質(zhì)地保持軟而滑(圖1 T2—T14)。第2年2月中旬，隨著氣溫逐漸升高，花序體積迅速變大，掙脫鱗片(圖1 T17)。雄花序比雌花序長(zhǎng)而大，6—10月雄花序鱗片顏色與雌花序相近，到12月隨氣溫下降，鱗片逐漸呈現(xiàn)淡紅色，休眠期變成褐色。次年2月中旬，花序快速伸長(zhǎng)，葇荑花序逐漸露出。

圖1 簸箕柳不同發(fā)育時(shí)期的雌、雄花序形態(tài)變化Fig.1 The morphological changes of male and female inflorescence at different developmental stages for Salix suchowensis

對(duì)不同時(shí)期雌、雄花序長(zhǎng)度進(jìn)行測(cè)量，結(jié)果顯示：雌、雄花序生長(zhǎng)趨勢(shì)都呈現(xiàn)“S”形。花序在6月中旬至10月中旬(T1—T8)生長(zhǎng)速度較快；在10月底至次年2月初期(T9—T16)，隨氣溫降低，生長(zhǎng)速度逐漸變慢，直至進(jìn)入休眠期；次年2月中旬(T17)，花序逐漸打破休眠，長(zhǎng)度增長(zhǎng)迅速，芽鱗出現(xiàn)較大幅度的松動(dòng)，進(jìn)入開(kāi)花期(圖2)。結(jié)合圖1可知，在簸箕柳雌、雄花序生長(zhǎng)發(fā)育的整個(gè)過(guò)程中，其外部形態(tài)的變化主要體現(xiàn)在芽鱗顏色和花序長(zhǎng)度上。

*.P<0.05,**.P<0.01.圖2 雌、雄花序長(zhǎng)度參數(shù)變化Fig.2 The length change of female and male inflorescence of S. suchowensis

根據(jù)對(duì)簸箕柳雌、雄花序建成的動(dòng)態(tài)觀察，可以將簸箕柳在1年內(nèi)的生長(zhǎng)周期劃分為5個(gè)階段(圖3)，即營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)期(5月中旬至6月中旬)、花序原基分化與小花發(fā)育期(6月中旬至10月)、休眠期(11月至次年1月)、開(kāi)花期(2—3月)、結(jié)實(shí)期(4月至5月中旬)。

圖3 簸箕柳年生長(zhǎng)節(jié)律Fig.3 Annual growth rhythm of Salix suchowensis

2.2 簸箕柳雌、雄花序內(nèi)部解剖結(jié)構(gòu)

簸箕柳雌花序中每朵小花有1枚雌蕊，柱頭2裂；雄花序中每朵小花有2枚雄蕊、4枚花藥。通過(guò)觀察花序內(nèi)部解剖特征，發(fā)現(xiàn)雌、雄花序的分化均呈現(xiàn)由下而上向頂式分化，即花序不同部位小花的發(fā)育進(jìn)程是按基部到頂部的順序依次進(jìn)行的。簸箕柳花發(fā)育過(guò)程大致可分為5個(gè)階段：花序建成初期、小花原基分化期、雌/雄蕊分化期、休眠期、大/小孢子發(fā)生及雌/雄配子體發(fā)育期(表1)。

表1 簸箕柳雌、雄花不同發(fā)育階段Table 1 Developmental stages of male and female flowers of Salix suchowensis

1)雌花序發(fā)育的動(dòng)態(tài)解剖特征。

花序建成初期(Stage Ⅰ)。6月中旬至7月初，花序開(kāi)始快速分化，長(zhǎng)苞片腋部細(xì)胞密集，小花原基開(kāi)始出現(xiàn)雛形，苞片持續(xù)生長(zhǎng)(圖4 T1、T2)。

小花原基分化期(Stage Ⅱ)及雌蕊分化期(Stage Ⅲ)。7月中旬至8月初，伴隨著苞片不斷伸長(zhǎng)，小花原基不斷增大，頂部開(kāi)始出現(xiàn)輕微凹陷，形成雌蕊原基(圖4 T3、T4)。8—10月，雌蕊原基不斷發(fā)育分化，原基上部快速向內(nèi)分兩叉凹陷并發(fā)育形成兩心皮，原基基部膨大，逐漸發(fā)育成圓錐形子房；胚珠逐漸凸起、分化，側(cè)膜胎座；胚珠基部分化出珠被，珠被不斷發(fā)育直至將胚珠完全包裹在內(nèi)，同時(shí)兩心皮不斷伸長(zhǎng)，形成2裂柱頭雛形(圖4 T5—T10)。

休眠期 (Stage Ⅳ)、大孢子發(fā)生及雌配子體發(fā)育期(Stage Ⅴ)。隨著氣溫下降，花芽分化逐漸停滯(圖4 T16)，植株進(jìn)入冬季休眠期。第2年春季，氣溫逐漸回升，花芽打破休眠，子房繼續(xù)發(fā)育不斷增大，在這一時(shí)期孢原細(xì)胞經(jīng)平周分裂和減數(shù)分裂形成大孢子，大孢子進(jìn)一步分化形成胚囊，子房一側(cè)有一個(gè)較長(zhǎng)腺體(圖4 T17)。此后，雌花進(jìn)入開(kāi)花期。

2)雄花序發(fā)育的動(dòng)態(tài)解剖特征。

花序建成初期(Stage Ⅰ)。苞片形成，雄花序快速分化，小花原基逐漸呈穹窿形凸起(圖5 T1、T2)。這一階段雄花芽與雌花芽的解剖結(jié)構(gòu)較為相似，尚難以區(qū)分。

小花原基分化期(Stage Ⅱ)及雄蕊分化期(Stage Ⅲ)。苞片繼續(xù)伸長(zhǎng)，苞片葉腋內(nèi)細(xì)胞密集分化，小花原基進(jìn)一步分化膨大，形成雄蕊原基(圖5 T5)。8月中旬，雄蕊原基開(kāi)始分化；9—10月，雄蕊原基出現(xiàn)具有高度分裂能力的薄壁細(xì)胞(圖5 T7)，4個(gè)角隅處細(xì)胞分裂后，形成四棱形的花藥雛體，花藥原始體不斷分裂發(fā)育(圖5 T8—T9)，至11月初，開(kāi)始分裂出具有4個(gè)小花粉囊的蝶形花藥及中央形成藥隔(圖5 T10)。每一個(gè)花粉囊室里的孢原細(xì)胞經(jīng)多次平周分裂形成藥室內(nèi)壁及花粉母細(xì)胞。

休眠期(Stage Ⅳ)、小孢子發(fā)生及雄配子體發(fā)育期(Stage Ⅴ)。11月中旬后，隨著溫度降低，雄蕊發(fā)育變慢直至停滯(圖5 T11—T16)。第2年春季，雄花序打破休眠，小孢子母細(xì)胞繼續(xù)分化，迅速增大，分裂形成大量小孢子即花粉粒 (圖5 T17)，花粉囊壁分層明顯，大量圓而飽滿的花粉粒在每個(gè)藥室內(nèi)松散密布，從該時(shí)期可看出一條花絲上有兩枚花藥，花絲側(cè)邊腺體較大(圖5 T17)。隨后3月，雄花進(jìn)入開(kāi)花期。在花粉粒成熟后，纖維層細(xì)胞失水過(guò)程中的機(jī)械力，使得花藥裂開(kāi)，花粉粒從裂縫處散出，從而利于雌株的傳粉。

T1—T2.縱切面，花序分化，花序軸形成，出現(xiàn)小花原基longitudinal section,inflorescence primordium differentiation,inflorescence axis formation,floret primordium appearance；T3.縱切面，小花原基分化發(fā)育，雌蕊原基形成longitudinal section,floret primordium differentiation and development,pistil primordium formation；T4—T8.縱切面，雌蕊原基上部向內(nèi)分兩叉凹陷，子房膨大開(kāi)始發(fā)育，形成多個(gè)胚珠原基longitudinal section,that the upper part of the pistil primordium is bifurcated inwardly,and the ovary expands and develops,forming multiple ovule primordia；T9—T10.縱切面，子房逐漸膨大，胚珠漸漸成熟longitudinal section,that the ovary gradually expands,and the ovule gradually matures；T12、T16.縱切面，雌蕊分化緩慢，進(jìn)入休眠期longitudinal section,that the pistil differentiates slowly and enters the dormant period；T17.縱切面，花序打破休眠，雌蕊繼續(xù)快速分化，胚珠成熟形成胚囊longitudinal section,that the flower bud breaks dormancy,the pistil continues to differentiate rapidly,and the ovule matures to form an embryo sac.Br.小苞片 bracteoles；Fp.小花原基 floret primordium；Pp.雌蕊原基 pistil primordium；Ov.子房 ovary；Olp.胚珠原基 ovule primordium；Ol.胚珠 ovule；Sty.花柱 style；Ovw.子房壁 ovary wall；Gl.腺體 gland.圖4 簸箕柳雌花發(fā)育過(guò)程的解剖結(jié)構(gòu)觀察Fig.4 Anatomical observation of pistillate flower development in S. suchowensis

T1—T2.縱切面，花序分化，花序軸形成，出現(xiàn)小花原基 longitudinal section,inflorescence primordium differentiation,inflorescence axis formation,floret primordium appearance；T3—T4.縱切面，小花原基不斷分化發(fā)育并增大，形成雄蕊原基longitudinal section,floret primordium continuously differentiated and enlarged,forming stamen primordium；T5—T10.縱切面，雄蕊原基增大發(fā)育，分化出花藥原始體，分裂形成4個(gè)角隅小花粉囊的花藥longitudinal section,the stamen primordium enlarges and develops,differentiates into anther primitives,and splits to form anthers of four corner small pollen sacs；T11—T16.縱切面，雄蕊發(fā)育緩慢，進(jìn)入休眠期，小孢子緊密排列在花粉囊longitudinal section that the stamens develop slowly and enter the dormant period,and the microspores are tightly arranged in the pollen sac；T17.縱切面，雄蕊飽滿圓潤(rùn)的花粉粒松散密布花粉囊內(nèi)longitudinal section,that the stamens are full and round pollen grains are loose and densely packed in the pollen sac.Sp.雄蕊原基 stamen primordium；St.雄蕊 stamen；Anp.花藥原基 anther primordia；Pos.花粉囊 pollen sac；Pog.花粉粒 pollen grain；Fi.花絲 filament；Gl.腺體gland；En.藥室內(nèi)壁 endothecium.圖5 簸箕柳雄花發(fā)育過(guò)程的解剖結(jié)構(gòu)觀察Fig.5 Anatomical observation of staminate flower development in S. suchowensis

2.3 簸箕柳花序發(fā)育的外部形態(tài)與內(nèi)部解剖結(jié)構(gòu)的對(duì)應(yīng)關(guān)系

進(jìn)一步對(duì)簸箕柳雌、雄花序外部形態(tài)與內(nèi)部解剖結(jié)構(gòu)的動(dòng)態(tài)特征進(jìn)行比較分析發(fā)現(xiàn)，不同時(shí)期花序形態(tài)學(xué)變化與解剖結(jié)構(gòu)表現(xiàn)出一定的對(duì)應(yīng)關(guān)系(表2)，可以根據(jù)易于觀察的形態(tài)學(xué)特征推測(cè)花序內(nèi)部結(jié)構(gòu)的發(fā)育階段。

表2 不同時(shí)期簸箕柳雌、雄花序外部形態(tài)變化和內(nèi)部解剖結(jié)構(gòu)的比較Table 2 Comparison between morphological and anatomical characters of inflorescence of Salix suchowensis

3 討 論

植物花芽分化是其生命周期中一個(gè)重要的發(fā)育轉(zhuǎn)變，是植物成功繁殖的關(guān)鍵。花發(fā)育過(guò)程涉及植物細(xì)胞的分化、器官發(fā)育、基因表達(dá)調(diào)控等方面，也會(huì)受到遺傳因素和環(huán)境因子的影響[21]?；ǖ陌l(fā)育過(guò)程包含開(kāi)花轉(zhuǎn)換和花器官的發(fā)育，其中開(kāi)花轉(zhuǎn)換是從營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)向生殖生長(zhǎng)轉(zhuǎn)變，營(yíng)養(yǎng)芽轉(zhuǎn)變成花芽；花器官的發(fā)育是花芽的分化發(fā)育。據(jù)花發(fā)育特點(diǎn)可分為3個(gè)階段：成花誘導(dǎo)、花的發(fā)端、花器官發(fā)育至成熟階段[22-24]。盡管楊樹(shù)被廣泛用作木本植物遺傳研究的模式樹(shù)種，但其童期較長(zhǎng)，通常需要7～10 a才會(huì)開(kāi)花[25]。而簸箕柳實(shí)生苗通常1 a就能開(kāi)花，是研究柳樹(shù)花發(fā)育的理想材料。彭向永[15]對(duì)雌、雄蒿柳生長(zhǎng)發(fā)育物候期進(jìn)行了研究，提出蒿柳1年生枝條的3個(gè)時(shí)期生長(zhǎng)動(dòng)態(tài)：①營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)期，5月上旬枝條上著生少量芽和葉片，未出現(xiàn)花芽；②花芽生理分化期，枝條上著生大量的芽和葉片，未出現(xiàn)花芽；③花芽形態(tài)分化期，6月初，枝條上出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)花芽。本研究于6月中旬開(kāi)始采集雌、雄簸箕柳花芽，發(fā)現(xiàn)該時(shí)期花芽?jī)?nèi)部解剖結(jié)構(gòu)花序開(kāi)始分化，即為花器官分化階段，可以推測(cè)其成花誘導(dǎo)和花的發(fā)端階段在6月之前就已完成。雖然T1時(shí)期的雌、雄花芽和營(yíng)養(yǎng)芽在外形上相似，但該時(shí)期已經(jīng)處于花芽形態(tài)分化期。與雌雄同株植物的完全花(花柄、花托、花萼、花冠、雄蕊群和雌蕊群)不同，楊柳科植物是雌雄異株的典型代表，葇荑花序，其小花是僅由雌蕊或雄蕊、苞片和腺體組成的單性花，楊柳科植物小花花器官的高度退化，有利于傳粉和受精[26]。

系統(tǒng)深入觀察植物花芽分化進(jìn)程不僅是揭示花發(fā)育分子機(jī)理的重要前提和基礎(chǔ)，還可以為開(kāi)展植物遺傳育種研究和制定栽培管理措施的選擇提供基礎(chǔ)資料。目前在組織水平上研究植物花芽分化過(guò)程，主要是通過(guò)石蠟切片技術(shù)觀察內(nèi)部解剖結(jié)構(gòu)的變化。林樹(shù)燕等[27]利用石蠟切片技術(shù)研究‘霞早’綠竹(Bambusaoldhami‘Xia Zao’ ZSX) 的花藥發(fā)育過(guò)程，揭示了花粉發(fā)育異常是該品種不結(jié)實(shí)的主要原因。王星等[28]利用該技術(shù)明確了黃條金剛竹(Sasaellakogasensis‘Aureostriatus’)花序建成以及雌雄配子體發(fā)育過(guò)程，為后續(xù)研究竹類(lèi)植物花發(fā)育分子機(jī)理奠定了基礎(chǔ)。陳斌等[29]采用石蠟切片方法研究了綿棗兒(Barnardiajaponica)花芽分化各時(shí)期的解剖結(jié)構(gòu)，為綿棗兒新品種選育和園林栽培應(yīng)用提供了理論依據(jù)。胡雨逸等[30]用石蠟切片技術(shù)對(duì)絳柳(S.matsudanaf．pendula)雌株花芽前期分化過(guò)程進(jìn)行了研究，結(jié)果顯示絳柳雌花芽5月底開(kāi)始分化，6月初至7月初完成分化，為抑制絳柳花芽分化、控制飛絮提供了科學(xué)依據(jù)。

本研究利用石蠟切片技術(shù)觀察了簸箕柳雌、雄花芽分化和花序建成過(guò)程的解剖結(jié)構(gòu)特征，將簸箕柳花發(fā)育進(jìn)程分為5個(gè)階段：花序建成初期、小花原基分化期、雌/雄蕊分化期、休眠期、大/小孢子發(fā)生及雌/雄配子體發(fā)育期。結(jié)合簸箕柳年生長(zhǎng)發(fā)育節(jié)律發(fā)現(xiàn)，在南京地區(qū)簸箕柳6月中旬形成肉眼可見(jiàn)的花芽，6月中旬至7月初花序已分化，7月中旬至8月下旬小花原基分化期，9月上旬至11月初雌/雄蕊分化期，11月中旬至翌年2月初花序進(jìn)入休眠期，翌年2月中旬至3月完成大/小孢子發(fā)生及雌/雄配子發(fā)育期，隨后雌雄花序開(kāi)放，4—5月為果實(shí)期。簸箕柳花序生長(zhǎng)趨勢(shì)總體呈“S”形上升趨勢(shì)，且花序外部形態(tài)與內(nèi)部解剖結(jié)構(gòu)變化具有一定相關(guān)性，通過(guò)觀察外部形態(tài)特征可以推測(cè)花序發(fā)育的關(guān)鍵時(shí)期。通過(guò)對(duì)簸箕柳花原基的分化和花器官形成過(guò)程的研究，為準(zhǔn)確判斷其花序發(fā)育關(guān)鍵時(shí)期、研究柳樹(shù)花發(fā)育的分子調(diào)控機(jī)理奠定了重要基礎(chǔ)。