趙輝祥，王 艷，王瑞華，王占彬

河南科技大學(xué)動物科技學(xué)院，河南洛陽 471000

隨著飼用抗生素全面禁止管理辦法的落實，新型飼料添加劑在畜禽生產(chǎn)中的研究和應(yīng)用越來越受到關(guān)注。殼聚糖（Chitosan）是天然存在的聚陽離子堿性多糖，也是自然界中除纖維素外含量最豐富的多糖[1]。殼聚糖具有促生長、抗氧化、抗菌殺菌、調(diào)節(jié)免疫能力以及降低膽固醇等多種生物學(xué)活性作用，且在體內(nèi)可降解、無毒性，在畜禽生產(chǎn)中具有良好的飼用價值。有研究表明殼聚糖可以提高肉雞的飼料轉(zhuǎn)化率和平均體重[2]，并能增強動物機體免疫力[3]，達(dá)到了和抗生素相近的效果。但目前鮮有殼聚糖對產(chǎn)蛋后期蛋雞生產(chǎn)性能的影響，更沒有對蛋雞血清生化指標(biāo)、血清免疫指標(biāo)的研究。本試驗旨在研究飼糧中添加不同水平的殼聚糖對產(chǎn)蛋后期蛋雞生產(chǎn)性能、血清生化指標(biāo)、血清免疫指標(biāo)的影響，為殼聚糖在蛋雞生產(chǎn)中的大規(guī)模應(yīng)用提供技術(shù)支撐和理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗設(shè)計與飼養(yǎng)管理

選取450 只500日齡產(chǎn)蛋率相近且健康的海蘭褐蛋雞隨機分為5 組（1 個對照組和4 個試驗組），每組6 個重復(fù)，每個重復(fù)15 只雞。對照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，4 個試驗組分別在基礎(chǔ)飼糧上添加200、400、600、800 mg/kg 的殼聚糖（購自江蘇古貝生物科技有限公司，脫乙酰化度≥95.0%，黏度為20～800 mPa·s，分子質(zhì)量2 500 u），預(yù)試驗期7 d，正試驗期60 d，飼養(yǎng)試驗在河南省洛陽市新安縣紅雨養(yǎng)殖場進(jìn)行。試驗采用3 層全階梯式籠養(yǎng)，每個籠子3 只雞。于每天07:00、14:00 及17:30 分3 次喂料，自由采食、飲水。雞舍為半開放式，自然通風(fēng)結(jié)合縱向負(fù)壓通風(fēng)，光照采用自然光照與人工補光相結(jié)合（16 h/d，光照程序智能控制器控制）。舍溫保持在（20±2）℃，并保持相對濕度50%～60%。采用刮糞板清糞，每天清糞1 次?；A(chǔ)飼糧參照NRC（1994）、中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)《雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》（NY/T33-2004）及《2015 版海蘭褐商品代蛋雞飼養(yǎng)管理手冊》配制的粉狀配合飼糧，試驗飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成和營養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）

續(xù)表1

1.2 生產(chǎn)性能測定

試驗期間每天17:00 收集蛋，以每組各重復(fù)為單位記錄每天的產(chǎn)蛋數(shù)、蛋重、破軟蛋數(shù)；每周統(tǒng)計采食量，計算全期的產(chǎn)蛋率、平均日采食量、平均日產(chǎn)蛋重、料蛋比及破軟蛋率。每天觀察蛋雞的健康狀況。

1.3 血清生化指標(biāo)

試驗第60 天，每個重復(fù)隨機選取1 只雞，禁水空腹12 h 后，使用真空采血管于蛋雞翅下靜脈處采血5 mL，立即送回實驗室分離血清。分離的血清樣本置于-20 ℃冰箱保存。隨后采用全自動生化分析儀（iMagic-V7，深圳庫貝爾生物科技股份有限公司）測定TP（g/L）、ALB（g/L）ALT（U/L）、AST（U/L）、TG（mmol/L）、TC（mmol/L）等血清生化指標(biāo)。

1.4 血清免疫指標(biāo)

血清中IgA（μg/mL）、IgG（μg/mL）以及IgM（μg/mL）指標(biāo)均采用上海鈺博生物科技有限公司生產(chǎn)的ELISA 酶聯(lián)免疫分析試劑盒進(jìn)行測定。結(jié)果采用全波長酶標(biāo)儀（infinite M200，軟件i-control 2.0）進(jìn)行讀數(shù)。Heraeus Megafuge 8R 低溫高速離心機（賽默飛）和HH-S2 數(shù)顯二孔恒溫水浴鍋（深圳三利制造）等也用于試驗操作。所有操作步驟均按試劑盒說明書進(jìn)行。

1.5 數(shù)據(jù)處理

本試驗數(shù)據(jù)采用SPSS 25.0 統(tǒng)計軟件進(jìn)行單因素方差分析（one-way ANOVA），差異顯著時，用Duncan’s 進(jìn)行多重比較檢驗。試驗數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，P＜0.05 表示差異顯著，P＜0.01 表示差異極顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 殼聚糖對產(chǎn)蛋后期蛋雞生產(chǎn)性能的影響

由表2 可知，各試驗組的平均日采食量、料蛋比和平均蛋重與對照組均無顯著差異。200 mg/kg和800 mg/kg 添加組產(chǎn)蛋率顯著高于對照組，200mg/kg 添加組的破軟蛋率顯著低于對照組。

表2 殼聚糖對產(chǎn)蛋后期蛋雞生產(chǎn)性能的影響

2.2 殼聚糖對產(chǎn)蛋后期蛋雞血清生化指標(biāo)的影響

由表3 可知，試驗組ALB、AST、ALT、TC、TG 與對照組均無顯著性差異。200、400、600 mg/kg 添加組的TP 含量顯著高于對照組，600 mg/kg 添加組的TP 含量顯著高于800 mg/kg 添加組。

表3 殼聚糖對產(chǎn)蛋后期蛋雞血清生化指標(biāo)的影響

2.3 殼聚糖對產(chǎn)蛋后期蛋雞血清免疫指標(biāo)的影響

由表4 可知，各試驗組的IgA、IgG、IgM 與對照組相比差異均不顯著。

表4 殼聚糖對產(chǎn)蛋后期蛋雞血清免疫指標(biāo)的影響

3 討 論

3.1 殼聚糖對產(chǎn)蛋后期蛋雞生產(chǎn)性能的影響

本試驗中200 mg/kg 殼聚糖的添加量顯著提高了產(chǎn)蛋后期蛋雞的產(chǎn)蛋率，并能顯著降低破軟蛋率。高忠新等[4]研究發(fā)現(xiàn)，日糧中添加低聚殼聚糖可明顯提高蛋雞產(chǎn)蛋率，這與本試驗結(jié)果一致。在本試驗中，在產(chǎn)蛋后期海蘭褐蛋雞飼糧中添加殼聚糖對蛋雞的ADFI、料蛋比和平均蛋重?zé)o顯著影響。王紅衛(wèi)等[5]報道，在70 周齡蛋雞的基礎(chǔ)日糧中添加200 mg/kg 不同分子量的低聚殼聚糖，對蛋雞的采食量、料蛋比沒有顯著影響，與本試驗結(jié)果一致。但陳中衛(wèi)等[6]發(fā)現(xiàn)，日糧中添加殼聚糖能顯著提高1日齡櫻桃谷肉鴨的平均日增重和ADFI。結(jié)果與本試驗不同，猜測可能與殼聚糖的來源、試驗動物種類等因素有關(guān)。陳智等[7]的研究發(fā)現(xiàn)，在產(chǎn)蛋后期蛋雞飲水中添加1～2 g/t 復(fù)合低聚糖可顯著提高蛋雞的總產(chǎn)蛋重量，改善產(chǎn)蛋后期蛋雞的蛋品質(zhì)。這與本試驗研究結(jié)果不一致，可能與殼聚糖的添加方式不同有關(guān)。

3.2 殼聚糖對產(chǎn)蛋后期蛋雞血清生化指標(biāo)的影響

血清生化指標(biāo)的動態(tài)變化可以反映動物機體炎癥、組織細(xì)胞通透性、肝腎狀態(tài)、新陳代謝機能和相關(guān)酶活力等指標(biāo)，可以用來衡量動物機體健康水平。TP 和ALB 水平增加時蛋白質(zhì)代謝旺盛，機體對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收增加[8]，氨基酸和蛋白質(zhì)的吸收利用率提高，進(jìn)而能提高家禽生產(chǎn)性能[9]。本試驗中，殼聚糖對TP 有明顯提高作用，當(dāng)添加量為600 mg/kg 時差異顯著，并且ALB 有提高趨勢，但不顯著（0.05≤P＜0.10）。劉梅等[10]研究殼聚糖對1日齡肉仔雞的影響時發(fā)現(xiàn)，當(dāng)殼聚糖添加量為100 mg/kg 時可以顯著提高血清中TP 含量。楊偉麗等[11]在研究殼聚糖對均重50 kg 左右的生長育肥豬的影響時，發(fā)現(xiàn)殼聚糖對生長育肥豬的TP 和ALB 等無顯著影響，這提示殼聚糖對育肥豬的蛋白質(zhì)代謝無顯著影響。分析以上3 個試驗結(jié)果猜測殼聚糖對動物血清中TP 和ALB 水平的影響與試驗動物所處年齡段、種類以及殼聚糖脫乙酰度、來源等因素有關(guān)。同時這在一定程度上說明，日糧中添加殼聚糖對產(chǎn)蛋后期蛋雞的蛋白質(zhì)代謝有改善作用，進(jìn)而提高生產(chǎn)性能。高產(chǎn)期蛋雞日糧能量濃度高，脂肪代謝旺盛，加上環(huán)境應(yīng)激等因素的影響容易發(fā)生肝細(xì)胞損傷的情況。肝細(xì)胞受損失時血清中AST 和ALT 2 種轉(zhuǎn)氨酶水平上升。本試驗結(jié)果表明，殼聚糖對產(chǎn)蛋后期蛋雞血清中AST、ALT 水平無顯著影響，這說明殼聚糖對產(chǎn)蛋后期蛋雞肝臟無不良反應(yīng)。彭佳麗等[12]在探究殼聚糖復(fù)方制劑對蛋雞脂肪肝的治療作用發(fā)現(xiàn)，殼聚糖復(fù)方制劑可以促進(jìn)肝臟對脂肪的分解，對肝細(xì)胞損傷有一定的治療作用。在一定程度上驗證了本試驗的正確性。TC、TG 等指標(biāo)與體內(nèi)的脂類代謝有關(guān)，是反映血脂情況重要的指標(biāo)。TC 是指血液中所有脂蛋白所含膽固醇之總和，TG 指血清中甘油三酯的含量。王潤蓮等[13]在研究殼聚糖不同水平添加量對28日齡肉仔鵝的影響時發(fā)現(xiàn)，殼聚糖添加量為0.10%時，可以顯著降低血清中TC 和TG 含量。劉梅等[10]研究殼聚糖對1日齡肉仔雞的影響時，發(fā)現(xiàn)當(dāng)殼聚糖添加量為100 mg/kg 時可以顯著降低血清中TC、TG 含量。本試驗中，殼聚糖對TC、TG 水平有稍微降低，但差異不顯著。這表明殼聚糖對產(chǎn)蛋后期蛋雞脂質(zhì)代謝有一定的改善作用。

3.3 殼聚糖對產(chǎn)蛋后期蛋雞血清免疫指標(biāo)影響

范秋麗等[14]研究發(fā)現(xiàn)，日糧中添加50 mg/kg 殼聚糖可以提高21日齡法氏囊指數(shù)，提高蛋雞免疫能力。華雪銘等[15]給暗紋東方鲀飼喂含0.2%殼聚糖的日糧后，機體的IgM 含量增加了1.01 倍。張彩芬等[16]發(fā)現(xiàn)，日糧中添加殼聚糖能使仔豬血清中IgG、IgM 的含量顯著提高，對IgA 含量也有一定提高作用。經(jīng)研究，其機制可能是殼聚糖所帶正電荷與巨噬細(xì)胞和T 淋巴細(xì)胞表面所帶負(fù)電荷之間相互吸引，激發(fā)巨噬細(xì)胞和T 淋巴細(xì)胞向B 細(xì)胞發(fā)出產(chǎn)生抗體的指令，從而產(chǎn)生各種免疫球蛋白[17]。在本試驗結(jié)果中，雖然各試驗組與對照組的3 種抗體含量無顯著差異，但是可以看出試驗組均有不同程度的提高，與前人試驗結(jié)果一致。

4 結(jié) 論

在本試驗條件下，在飼糧中添加200 mg/kg 殼聚糖可提升產(chǎn)蛋后期蛋雞產(chǎn)蛋率、降低破軟蛋率；改善蛋雞血清生化指標(biāo)，進(jìn)而提高機體蛋白質(zhì)代謝水平、改善脂代謝水平，且添加量為600 mg/kg 時對血清生化指標(biāo)改善效果較好；在一定程度上提高蛋雞血清中IgA、IgG、IgM 3 種抗體的含量，提高蛋雞的免疫能力。