任躍昌， 趙恬玉， 李林葵， 朱政奇， 張凱瑛，馬璐璐， 張鵬飛， 孫作為， 楊維仁*

（1.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，山東泰安 271018；2.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，山東泰安 271018；3.山東玖瑞農(nóng)業(yè)集團(tuán)有限公司，山東青島 266000；4.山東省萊陽市柏林莊畜牧獸醫(yī)站，山東煙臺(tái) 265200）

枯草芽孢桿菌屬于革蘭氏陽性菌，是農(nóng)業(yè)農(nóng)村部批準(zhǔn)添加的飼用益生菌之一，能夠誘導(dǎo)產(chǎn)生在高溫、酸性環(huán)境下具有極強(qiáng)的環(huán)境適應(yīng)能力的抗逆性較強(qiáng)的內(nèi)源孢子（Fortec等，2016；賈久滿等，2015）?？莶菅挎邨U菌能夠泌蛋白酶和纖維素酶等多種生物活性因子，并且可以有效地改善腸道菌群組成，促進(jìn)動(dòng)物機(jī)體對(duì)飼糧營養(yǎng)的消化利用（張安榮等，2020；裴躍明等，2016）；同時(shí)枯草芽孢桿菌還可以產(chǎn)生細(xì)菌素、多不飽和脂肪酸，能夠調(diào)節(jié)腸道pH，對(duì)多種致病菌產(chǎn)生抑制作用（Duc等，2004）。產(chǎn)蛋后期蛋雞由于氧化應(yīng)激的長期積累，抗應(yīng)激能力變差，出現(xiàn)產(chǎn)蛋性能降低、破蛋率增加、哈氏單位下降以及蛋清稀釋等現(xiàn)象，而哈氏單位則直接與貨架期相關(guān)（Vlěcková等，2019）。大量的研究結(jié)果表明，飼糧添加枯草芽孢桿菌能夠調(diào)節(jié)腸道菌群，提高養(yǎng)分的表觀代謝率；在蛋雞飼糧中添加枯草芽孢桿菌能夠提高產(chǎn)蛋率、平均蛋重、哈氏單位，降低料蛋比（Liu等，2018；黃晨軒等，2018；趙姝嫻等，2018；范彧等，2012）。但目前枯草芽孢桿菌對(duì)600日齡后的蛋雞生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)等指標(biāo)研究較少，因此本試驗(yàn)旨在探究在87 w蛋雞飼糧中添加枯草芽孢桿菌對(duì)產(chǎn)蛋性能、血清生化及蛋品質(zhì)的影響，為應(yīng)用枯草芽孢桿菌延長產(chǎn)蛋周期提供數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 采用單因子試驗(yàn)設(shè)計(jì)，選取健康狀況、產(chǎn)蛋性能相近的87 w海蘭褐商品蛋雞2400只，隨機(jī)分為4個(gè)處理，每個(gè)處理6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)100只雞。處理Ⅰ組飼喂玉米-豆粕型基礎(chǔ)飼糧，處理Ⅱ組在基礎(chǔ)飼糧中添加0.05%博落回提取物作為陽性對(duì)照，處理Ⅲ、Ⅳ組分別添加0.2%和0.4%的枯草芽孢桿菌。預(yù)試期1 w，正試期6 w。

1.2 試驗(yàn)材料 試驗(yàn)所用枯草芽孢桿菌由煙臺(tái)深海生物科技有限公司提供，枯草芽孢桿菌含量≥5.5×108CFU/g。博落回提取物由北京科為博生物科技有限公司提供，有效成分為白屈菜紅堿（≥900 mg/kg）和血根堿（≥1500 mg/kg）。

1.3 試驗(yàn)飼糧與飼養(yǎng)管理 《基礎(chǔ)飼糧參照雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》（NY/T 33—2004）配制，基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1；采用半開放式雞舍3層立體籠養(yǎng)，每天光照時(shí)間保證16～17 h。自由采食和飲水。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.3 測定指標(biāo)與方法

1.3.1 生產(chǎn)性能 以重復(fù)為單位，記錄產(chǎn)蛋總數(shù)、產(chǎn)蛋總重、破蛋數(shù)。計(jì)算產(chǎn)蛋率、平均蛋重、料蛋比和平均日采食量。

1.3.2 蛋品質(zhì) 試驗(yàn)結(jié)束前連續(xù)3 d每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選5枚雞蛋，使用Robotmation EMT-5 200多功能蛋品質(zhì)分析儀測定哈氏單位、蛋白高度、蛋黃顏色等蛋品質(zhì)指標(biāo)。

1.3.3 輸卵管指數(shù) 試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，每個(gè)處理選取5只雞屠宰后取輸卵管，生理鹽水洗凈、擦干、稱重，計(jì)算輸卵管指數(shù)。

1.3.4 血清生化 試驗(yàn)結(jié)束，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選取2只雞進(jìn)行翅下靜脈采血，采血前禁食12 h，2500 r/min離心10 min，取上清液-20℃保存。使用山東農(nóng)業(yè)大學(xué)全自動(dòng)生化分析儀測定血清堿性磷酸酶（ALP）活性以及甘油三脂（TG）、膽固醇（TC）、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）、總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）含量。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析 數(shù)據(jù)使用SAS 9.2軟件進(jìn)行單因子分析，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，以P＜0.05作為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 枯草芽孢桿菌對(duì)87～93 w蛋雞生產(chǎn)性能的影響 由表2可見，與對(duì)照組相比，飼糧添加0.05%博落回提取物組以及0.2%、0.4%枯草芽孢桿菌組的產(chǎn)蛋率分別提高了1.65%、3.07%、0.97%，次蛋率分別降低17.65%、55.89%、55.88%；料蛋比顯著降低，以0.2%枯草芽孢桿菌組的料蛋比最低，達(dá)到了2.23；與陽性對(duì)照組博落回提取物組相比，枯草芽孢桿菌組的次蛋率顯著降低。

表2 枯草芽孢桿菌對(duì)87～93 w蛋雞生產(chǎn)性能的影響

2.2 枯草芽孢桿菌對(duì)87～93 w蛋雞蛋品質(zhì)的影響 由表3可見，不同處理組的蛋品質(zhì)指標(biāo)均無顯著差異（P＞0.05）。

表3 枯草芽孢桿菌對(duì)87～93 w蛋雞蛋品質(zhì)的影響

2.3 枯草芽孢桿菌對(duì)87～93 w蛋雞蛋殼顏色的影響 由表4可知，與對(duì)照組相比，博落回提取物組和枯草芽孢桿菌組的紅度值（a*）和黃度值（b*）顯著升高，蛋殼顯示紅色的程度更深。

表4 枯草芽孢桿菌對(duì)87～93 w蛋雞蛋殼顏色的影響

2.4 枯草芽孢桿菌對(duì)87～93 w蛋雞血清生化的影響 由表5可知，與對(duì)照組相比，飼糧添加枯草芽孢桿菌能顯著降低血清TC和HDL的含量，并且0.4%枯草芽孢桿菌組更為顯著。

表5 枯草芽孢桿菌對(duì)87～93 w蛋雞血清生化的影響

2.5 枯草芽孢桿菌對(duì)87～93 w蛋雞輸卵管指數(shù)的影響 由圖1可知，與對(duì)照組和博落回提取物組相比，飼糧添加0.2%枯草芽孢桿菌能夠提高87～93 w蛋雞輸卵管指數(shù)。

圖1 枯草芽孢桿菌對(duì)87～93 w蛋雞輸卵管指數(shù)的影響

3 討論

3.1 枯草芽孢桿菌對(duì)87～93 w蛋雞生產(chǎn)性能的影響 裴躍明等（2016）在47周齡新楊黑蛋雞的基礎(chǔ)飼糧中分別添加0.25%、0.5%、0.75%的枯草芽孢桿菌 （活菌數(shù)分別為16.25×105、32.5×105、48.75×105CFU/g），顯著提高了蛋雞產(chǎn)蛋率，增加蛋重，降低破蛋率、料蛋比。徐海燕等（2012）的研究結(jié)果表明，在80周齡海蘭褐蛋雞飼糧中添加5×105CFU/g的枯草芽孢桿菌可提高產(chǎn)蛋率和蛋殼質(zhì)量，降低料蛋比。Ribeiro等（2014）添加8×105CFU/g的枯草芽孢桿菌，結(jié)果表明，平均蛋重和蛋品質(zhì)指標(biāo)提高。李俊波等（2009）在45周齡尼克珊瑚粉蛋雞飼糧中添加250 mg/kg和500 mg/kg枯草芽孢桿菌制劑（活菌數(shù)分別為5×105、10×105CFU/g），顯著降低了破蛋率，并且在一定程度上提高了平均蛋重以及蛋殼厚度。本次試驗(yàn)結(jié)果表明，在87～93 w海蘭褐蛋雞飼糧中添加0.2%、0.4%的枯草芽孢桿菌（活菌數(shù)分別為11×105、22×105CFU/g）提高了產(chǎn)蛋率和平均蛋重，降低了料蛋比和破蛋率。分析原因可能是由于枯草芽孢桿菌進(jìn)入腸道后可以迅速復(fù)活并分泌活性物質(zhì)，將復(fù)雜的大分子營養(yǎng)物質(zhì)降解；同時(shí)活菌發(fā)酵物產(chǎn)物含有大量的多糖、寡糖、肽類、磷活性物質(zhì)，能夠抑制病原微生物的繁殖，維持腸道健康，提高養(yǎng)分消化吸收率（祝天龍等，2015）。

3.2 枯草芽孢桿菌對(duì)87～93 w蛋雞蛋品質(zhì)和蛋殼顏色的影響 哈氏單位和蛋白高度是衡量蛋品質(zhì)的重要指標(biāo)，關(guān)于枯草芽孢桿菌對(duì)蛋品質(zhì)影響，不同的試驗(yàn)結(jié)果不完全一致。Neijat等（2019）的研究結(jié)果表明，枯草芽孢桿菌能夠提高哈氏單位和蛋白高度。王源昊等（2021）在69周齡海蘭褐蛋雞飼糧添加活菌數(shù)為10×105CFU/g的枯草芽孢桿菌發(fā)現(xiàn)，顯著提高了哈氏單位和蛋黃顏色等級(jí)，且有提高蛋白高度的趨勢。本次試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，博落回提取物組和枯草芽孢桿菌組雞蛋的蛋白高度、哈氏單位、蛋黃顏色、蛋殼強(qiáng)度無顯著的差異，造成這種差異的原因可能與試驗(yàn)周期、飼養(yǎng)環(huán)境、動(dòng)物日齡有關(guān)聯(lián)，同時(shí)枯草芽孢桿菌商品菌株來源不一，活性也不同，因此還需要進(jìn)行大量篩選對(duì)比研究，以便于在飼料配方中的廣泛應(yīng)用。

蛋殼顏色是消費(fèi)者判斷商品雞蛋優(yōu)劣的直接參考指標(biāo)。褐殼蛋的蛋殼色素主要是原卟啉，但也存在膽綠素以及膽綠素的鋅螯合物等其他色素（王晶晶，2008）。本次研究發(fā)現(xiàn)，枯草芽孢桿菌組的紅度值（a*）和黃度值（b*）顯著升高，蛋殼顯示紅色的程度更深。Hooge（2007）研究報(bào)道，羅曼布朗母雞飼糧添加枯草芽孢桿菌至63周，蛋殼顏色深度得到增強(qiáng)。Hansson等（2007）研究提出，枯草芽孢桿菌鐵螯合酶中的His183和Glu264能夠促進(jìn)金屬離子插入原卟啉中氨基酸殘基的作用機(jī)制。枯草芽孢桿菌對(duì)蛋殼顏色調(diào)控的作用方式還需要進(jìn)一步的深入研究。

3.3 枯草芽孢桿菌對(duì)87～93 w蛋雞血清生化指標(biāo)的影響 血液生化指標(biāo)能夠直接反映動(dòng)物機(jī)體的物質(zhì)代謝以及組織機(jī)能狀態(tài)。血清TP、ALB是衡量機(jī)體免疫水平和肝臟功能是否正常的重要指標(biāo)。郭軍蕊等（2017）研究發(fā)現(xiàn)，產(chǎn)蛋雞飼糧添加枯草芽孢桿菌對(duì)血清TP、ALB無顯著影響，本次的試驗(yàn)結(jié)果與其一致。而鄭超等（2020）在飼糧添加2×106CFU/g的枯草芽孢桿菌顯著提高了380日齡京粉2號(hào)蛋雞的血清TP、ALB。不同的試驗(yàn)結(jié)果可能是由于菌株、用量以及蛋雞品種不同造成。TC和TG是反映脂肪代謝水平的重要指標(biāo)，TC含量不正常上升往往會(huì)引起腎臟、心血管疾病，TG含量的異常升高通常反映出脂蛋白代謝異常（李衛(wèi)芬等，2014）。血清TC含量受參與膽固醇合成的關(guān)鍵酶-羥甲基戊二酸單酰輔酶A活性的影響。Fukushima等（1995）研究結(jié)果表明，益生菌能夠抑制膽固醇合成過程中的關(guān)鍵酶。李衛(wèi)芬等（2014）在肉雞飼糧中添加枯草芽孢桿菌發(fā)現(xiàn)，血清TC和TG含量顯著降低；查翹楚等（2017）在19周齡大午金鳳蛋雞上的研究證明，添加枯草芽孢桿菌能夠降低血清膽固醇。本次試驗(yàn)結(jié)果表明，在87～93 w海蘭褐蛋雞飼糧添加枯草芽孢桿菌能夠降低血清膽固醇含量，表明枯草芽孢桿菌能在維持脂質(zhì)代謝方面發(fā)揮作用。

4 結(jié)論

在本試驗(yàn)條件下，87～93 w蛋雞基礎(chǔ)飼糧中添加枯草芽孢桿菌能顯著提產(chǎn)蛋率、平均蛋重，明顯改善蛋殼顏色和脂類代謝。綜合考慮養(yǎng)殖生產(chǎn)、飼糧成本，在飼糧中添加0.2%枯草芽孢桿菌較為合適（活菌數(shù)為11×105CFU/g）。