鄭堅(jiān)強(qiáng)，王悅，趙宇，許家寶，張麗，黃天琪,朱亞娟，司俊玲

(鄭州輕工業(yè)大學(xué) 食品與生物工程學(xué)院,鄭州 450001)

枸杞(Lyciumchinense)是茄科、枸杞屬植物[1],具有藥用價(jià)值、飲用價(jià)值和食用價(jià)值[2]。在食品加工的各個(gè)領(lǐng)域，枸杞可用于提高產(chǎn)品的營養(yǎng)成分，改善產(chǎn)品的色澤、風(fēng)味和營養(yǎng)價(jià)值等[3]。枸杞具有調(diào)節(jié)機(jī)體免疫力、抑制腫瘤生長和細(xì)胞突變、延緩衰老的作用[4-5]，含有花青苷、花青素、甜菜堿、類胡蘿卜素、枸杞多糖和黃酮等活性物質(zhì)[6]。成熟的枸杞中含有豐富的類胡蘿卜素，類胡蘿卜素可以減輕自由基過氧化損傷，因而具有良好的抗氧化性能，類胡蘿卜素共軛雙鍵的數(shù)目會(huì)影響其顏色，最常見的顏色為紅色[7]。研究表明食物自身的顏色會(huì)影響比色法測(cè)定抗氧化活性結(jié)果的準(zhǔn)確性，例如水果本身的顏色能影響紫外分光光度法對(duì)樣品抗氧化活性檢測(cè)的準(zhǔn)確性[8]。郭學(xué)文等[9]發(fā)現(xiàn)，番茄紅素與DPPH在517 nm處都具有較強(qiáng)的吸收值，使得紫外法所測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確。電子順磁共振(electron paramagnetic resonance，EPR)，是一種快速、簡(jiǎn)單、直接的方法，能以譜圖的形式直接反映自由基的種類及數(shù)量，相比于常見的紫外法，能排除枸杞自身顏色對(duì)抗氧化活性的影響，提高試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性[10-11]。

類胡蘿卜素的提取方法主要有微波萃取法、超聲萃取法、溶劑萃取法、脈沖電場(chǎng)萃取法、超臨界流體萃取法和酶輔助萃取法[12-13]。由于類胡蘿卜素對(duì)光、熱、氧等條件比較敏感且穩(wěn)定性差[14-15]，超聲波提取是一種有效的提取方法，超聲波產(chǎn)生的空化現(xiàn)象可以破壞植物的細(xì)胞壁和細(xì)胞膜，并輔助溶劑傳質(zhì)，從而提高提取效率，減少類胡蘿卜素的損失[16-18]。本文通過單因素和均勻試驗(yàn)，以枸杞提取液對(duì)DPPH自由基清除率和β-胡蘿卜素提取含量為指標(biāo)，優(yōu)化超聲提取的條件，并測(cè)定枸杞提取液中常見的抗氧化活性以及枸杞提取液對(duì)羥基自由基、羧基自由基的清除能力，為枸杞的開發(fā)和應(yīng)用、豐富天然抗氧化劑的提取方式和抗氧化活性檢測(cè)方式提供了參考依據(jù)。

1 材料設(shè)備與方法

1.1 材料與設(shè)備

1.1.1 材料

枸杞(產(chǎn)地：寧夏榮平)：購于鄭州市丹尼斯超市；無水乙醇、氫氧化鈉、石油醚、濃硫酸、甲醇、雙氧水(30%過氧化氫)：AR，煙臺(tái)市雙雙化工有限公司；1-1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)、葡萄糖、5,5-二甲基-1-吡咯啉-N-氧化物(DMPO)：AR，上海麥克林生化科技有限公司；二甲基亞砜(DMSO)：AR，天津市富宇精細(xì)化工有限公司；硫酸亞鐵：AR，天津市化學(xué)試劑三廠；β-胡蘿卜素：AR，梯希愛上海化成工業(yè)發(fā)展有限公司；蘆?。篈R，上海源葉生物科技有限公司；亞硝酸鈉、硝酸鋁：AR，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司。

1.1.2 儀器與設(shè)備

高速多功能粉碎機(jī) 永康市鉑歐五金制品有限公司；SQP電子天平 賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司；E-scan Bruker電子順磁共振波譜儀 德國布魯克科技(北京)有限公司；KQ3200DA型超聲波清洗器 昆山市超聲儀器有限公司；YR-PTB真空泵、RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器 上海亞榮生化儀器廠；耐潔聚砜瓶頂過濾器 Thermo Fisher Scientific Inc.；HH-1智能型數(shù)顯恒溫油浴槽 鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司；Tecan Spark 20M多功能微孔板讀數(shù)儀；索氏抽提裝置。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 原料處理

取適量枸杞于高速粉碎機(jī)中，將枸杞粉碎并過60目篩(孔徑0.3 mm)，-20 ℃避光儲(chǔ)藏。

1.2.2 單因素試驗(yàn)

1.2.2.1 提取液配比的選擇

稱取5份1.0 g枸杞粉，按照料液比1∶20、1∶30、1∶40、1∶50、1∶60(g/mL)分別加入1∶50的石油醚-無水乙醇有機(jī)溶劑，充分搖勻，設(shè)定超聲清洗機(jī)的功率為60 W，超聲30 min，冷卻，抽濾，旋蒸至干，最后定容到10.0 mL容量瓶中，采用電子順磁共振波譜儀測(cè)定枸杞中類胡蘿卜素自由基的清除率。

1.2.2.2 料液比的選擇

稱取5份1.0 g枸杞粉，按照料液比1∶50(g/mL)分別加入1∶1、1∶50、1∶100、1∶150、1∶200的石油醚-無水乙醇有機(jī)溶劑，設(shè)定超聲清洗機(jī)的功率為60 W，超聲30 min，冷卻，抽濾，旋蒸至干，最后定容到10.0 mL容量瓶中。

1.2.2.3 提取時(shí)間的選擇

稱取5份1.0 g枸杞粉，按照料液比1∶50(g/mL)分別加入1∶50的石油醚-無水乙醇有機(jī)溶劑，充分搖勻，固定功率60 W，時(shí)間分別設(shè)定為10，20，30，40，50 min，其余操作同上。

1.2.2.4 提取功率的選擇

稱取5份1.0 g枸杞粉，按照料液比1∶50(g/mL)分別加入1∶50的石油醚-無水乙醇有機(jī)溶劑，充分搖勻，超聲清洗機(jī)的超聲功率分別設(shè)定為40，50，60，70，80 W，超聲30 min，按1.2.3的方法測(cè)定枸杞中類胡蘿卜素自由基的清除率。

1.2.3 抗氧化活性的測(cè)定

將0.2 mL樣品溶液和1.00 mL DPPH溶液(濃度0.5 mmol/L)于棕色帶蓋離心管中混勻并反應(yīng)20 min。使用電子順磁共振波譜儀測(cè)定抗氧化活性，用DPPH·譜圖的二重積分值表示DPPH·的含量。

(1)

式中：As為試驗(yàn)二重積分值，Ac為對(duì)照組二重積分值。

EPR的測(cè)定條件：頻率9.79 GHz，功率5.00 mW，中心磁場(chǎng)3 487 G，掃描寬度100 G，調(diào)制幅度2.27 G，調(diào)制頻率86.00 kHz，時(shí)間常數(shù)40.96 ms，掃描時(shí)間83.88 s(20.97 s×4次)，橫坐標(biāo)點(diǎn)數(shù)512，接收機(jī)增益為3.17×103。

1.2.3.1 DPPH標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

以無水乙醇作為溶劑，配制0.1，0.15，0.3，0.45，0.6 mmol/L的DPPH溶液，按照1.2.3的方法進(jìn)行測(cè)定，積分區(qū)域?yàn)?3 450±0.01) G～(3 525±0.01) G，并建立DPPH濃度與EPR二重積分值的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.3.2 暗反應(yīng)時(shí)間的確定

用移液槍吸取0.2 mL樣品溶液和1.00 mL DPPH(濃度0.5 mmol/L)混勻并吸入毛細(xì)管中，放入核磁腔內(nèi)。將參數(shù)改成按時(shí)間掃描，單次掃描時(shí)間20.97 s，掃描間隔時(shí)間99.03 s(即每隔2 min掃描一次),掃描總次數(shù)60次，并記錄第一峰峰高，其余參數(shù)與1.2.3所述一致。

1.2.4β-胡蘿卜素的測(cè)定

特征吸收峰的確定：吸取0.1 mL 0.1 mmol/L的β-胡蘿卜素放入96孔板中，使用多功能孔板讀數(shù)儀測(cè)定其在400～600 nm處的OD值，并繪制吸收曲線。

準(zhǔn)確稱取β-胡蘿卜素2.5 mg，加入1∶50石油醚-無水乙醇有機(jī)溶劑，定容至25 mL容量瓶中，振蕩搖勻，得到0.1 mg/mL的β-胡蘿卜素溶液，分別取上述溶液0，0.25，0.5，1，1.5，2 mL于10 mL容量瓶中，使用多功能孔板讀數(shù)儀在450 nm處測(cè)其吸光度。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并將優(yōu)化結(jié)果帶入曲線方程，算出優(yōu)化結(jié)果的β-胡蘿卜素含量。

1.2.5 均勻試驗(yàn)

選取超聲提取時(shí)間、超聲功率、枸杞和提取液料液比、無水乙醇和石油醚溶劑比作為研究因素，以DPPH自由基(DPPH·)清除率和β-胡蘿卜素為指標(biāo)(為更好地放大各因素水平組之間的抗氧化活性差異，提高均勻試驗(yàn)結(jié)果的精確度，將枸杞提取液與DPPH反應(yīng)量提高1倍，即0.4 mL提取液和1 mL DPPH混合)，并采用 U6(64)均勻試驗(yàn)，因素水平見表1。

表1 U6 (64)均勻試驗(yàn)因素水平表Table 1 Factors and levels of U6(64) uniform test

1.2.6 最優(yōu)提取條件下枸杞提取液活性的測(cè)定

1.2.6.1 羧基自由基清除率的測(cè)定

參考Tong等[19]的方法制備磁性Fe3O4/MoS2納米復(fù)合材料，取5 mg復(fù)合材料、150 μL 30% H2O2溶于5 mL DMSO中，超聲溶解后用0.22 μm尼龍膜過濾，于2.5 mL離心管中依次加入10 μL DMPO、200 μL過濾樣品液、100 μL枸杞提取液(空白組用提取溶劑代替)、10 μL H2O2并用渦旋儀振蕩30 s。樣品于4 min開始測(cè)定，實(shí)際測(cè)定量為23.77 μL(d=0.93 mm,h=35 mm)，并記錄其二重積分值，空白組記為As，試驗(yàn)組記為Ac，清除率見公式(1)。

測(cè)量參數(shù)：頻率9.791 555 GHz，調(diào)制幅度1.80 G，時(shí)間常數(shù)40.96，掃描時(shí)間20.97 s，接收機(jī)增益為3.17×103，其余參數(shù)同1.2.3。

1.2.6.2 羥基自由基清除率的測(cè)定

參考芬頓反應(yīng)[20]及Aleksandra等[21]的研究方法，于2.5 mL離心管中依次加入20 μL DMPO、420 μL去離子水、50 μL枸杞提取液(空白組用提取溶劑代替)、20 μL 5 mmol/L FeSO4，隨后添加20 μL 50 mmol/L H2O2并計(jì)時(shí)，用渦旋儀振蕩40 s。實(shí)際測(cè)定量為23.77 μL(d=0.93 mm, h=35 mm)，樣品于4 min開始測(cè)定，記錄第二條主峰峰高[22],空白組記為As，試驗(yàn)組記為Ac，清除率見公式(1)。

測(cè)量參數(shù)：頻率9.790 245 GHz，調(diào)制幅度1.01 G，時(shí)間常數(shù)20.48，單位掃描時(shí)間10.49 s，接收機(jī)增益為1.00×103，其余參數(shù)同1.2.3。

1.2.6.3 類胡蘿卜素含量的測(cè)定

參考鄭堅(jiān)強(qiáng)的研究結(jié)果，按公式(2)計(jì)算類胡蘿卜含量：

(2)

式中：M為提取的類胡蘿卜素含量(mg/100 g);A為450 nm處提取液的吸光度；v為樣品定容體積(mL)；n為稀釋定容后的倍數(shù)；m為枸杞質(zhì)量(g)；2 480為1 cm光程的比色杯1 g/L枸杞樣品萃取液的理論吸收值(按玉米黃素計(jì))。

1.2.6.4 枸杞多糖與黃酮的測(cè)定

參考張自萍等的測(cè)定方法[23]。

1.2.7 數(shù)據(jù)處理

所有的試驗(yàn)均做3次平行，采用WinEPR-Processing、Origin 8.0、Mathematics 4.0及其相關(guān)方法進(jìn)行處理，并用SPSS軟件進(jìn)行顯著性分析(P<0.05表示差異顯著)。

2 結(jié)果與討論

2.1 DPPH濃度與暗反應(yīng)時(shí)間的確定

不同DPPH濃度與波譜強(qiáng)度的標(biāo)準(zhǔn)曲線關(guān)系圖見圖1。

圖1 不同DPPH濃度與波譜強(qiáng)度的標(biāo)準(zhǔn)曲線關(guān)系圖Fig.1 Standard curve relationship diagram between different DPPH concentrations and spectral intensity

由圖1可知，在0.1～0.6 mmol/L 區(qū)間內(nèi)DPPH濃度與DPPH·譜圖的二次積分值具有良好的線性關(guān)系，線性方程為y=9.230 5x+0.169 4,相關(guān)系數(shù)R2=0.998 8。DPPH·清除的過程實(shí)質(zhì)上是DPPH·含量減少的過程。因此，可以通過DPPH自由基的譜圖的二次積分值來反映DPPH濃度的變化[24]。經(jīng)過試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)0.5 mmol/L的DPPH清除率趨于20%～50%之間，得到的EPR譜圖雜峰少，結(jié)合李輝等[25]優(yōu)化EPR測(cè)定DPPH試驗(yàn)，選定DPPH濃度為0.5 mmol/L進(jìn)行測(cè)定能更好地提高測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性。

DPPH特征峰強(qiáng)度隨反應(yīng)時(shí)間變化的關(guān)系圖見圖2。

圖2 DPPH特征峰強(qiáng)度隨反應(yīng)時(shí)間變化的關(guān)系圖Fig.2 Relationship diagram of change of DPPH characteristic peak intensity with reaction time

由圖2可知，隨著反應(yīng)時(shí)間的延長，DPPH·不斷被枸杞提取液中抗氧化活性物質(zhì)消耗，在前20 min內(nèi)反應(yīng)速率較為迅速，20～40 min內(nèi)有一段平穩(wěn)期。目前大多數(shù)檢測(cè)枸杞提取液抗氧化活性的方法是采用紫外分光光度計(jì)對(duì)比暗反應(yīng)30 min空白組和試驗(yàn)組OD值的變化[26]，首先該方法易受枸杞自身顏色的影響，其次應(yīng)該準(zhǔn)確控制每個(gè)測(cè)定樣品暗反應(yīng)時(shí)間以此提高上述測(cè)定方法的準(zhǔn)確性。本文采用計(jì)時(shí)暗反應(yīng)20 min進(jìn)行DPPH·清除率測(cè)定。

2.2 單因素試驗(yàn)(電子順磁共振法測(cè)定枸杞提取液對(duì)DPPH·的清除率)

單因素試驗(yàn)中溶劑體積比、料液比、超聲時(shí)間和超聲功率對(duì)DPPH·清除率的影響見圖3。

圖3 不同有機(jī)溶劑配比對(duì)DPPH自由基清除率的影響Fig.3 Effect of different organic solvent ratios on DPPH free radical scavenging rate

由圖3可知，在其他提取條件一致時(shí)，不同的提取溶劑配比對(duì)類胡蘿卜素自由基清除效果存在顯著差異，石油醚與無水乙醇的溶劑比為1∶50時(shí)，DPPH·清除效果最好，清除率為36.39%。使用石油醚-無水乙醇有機(jī)溶劑提取類胡蘿卜素時(shí)，適當(dāng)增加無水乙醇的體積有利于類胡蘿卜素提取更完全，但當(dāng)持續(xù)加大無水乙醇的量時(shí)，提取效果下降，這可能是枸杞中黃酮溶于乙醇經(jīng)過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)后被損耗所致。

圖4 不同料液比對(duì)DPPH自由基清除率的影響Fig.4 Effect of different solid-liquid ratios on DPPH free radical scavenging rate

由圖4可知，料液比在1∶50 (g/mL)時(shí)枸杞提取液的抗氧化活性最強(qiáng)，適量的有機(jī)溶劑能增加與枸杞的接觸面積，提高提取效果，但當(dāng)料液比增加到1∶50～1∶60 (g/mL)時(shí)，枸杞提取液對(duì)DPPH·的清除率反而降低，這可能是枸杞提取液中抗氧化活性物質(zhì)達(dá)到飽和，且隨著有機(jī)溶劑的增加，容易造成提取液揮發(fā)損失。

圖5 不同提取時(shí)間對(duì)DPPH·清除率的影響Fig.5 Effect of different extraction time on DPPH free radical scavenging rate

圖6 不同提取功率對(duì)DPPH·清除率的影響Fig.6 Effect of different extraction power on DPPH free radical scavenging rate

由圖5和圖6可知，隨著超聲時(shí)間和功率的增加，枸杞提取液對(duì)DPPH·的清除率逐漸增加，主要原因是超聲的機(jī)械效應(yīng)、空化作用和熱效應(yīng)等能加速枸杞中具有抗氧化活性的有效物質(zhì)例如黃酮、胡蘿卜素、枸杞多糖等的釋放、擴(kuò)散和溶解，顯著提高提取效率[16-18]。

2.3 均勻試驗(yàn)結(jié)果

2.3.1β-胡蘿卜素最大吸收峰的確定及標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

β-胡蘿卜素吸收曲線及標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖7。

圖7 β-胡蘿卜素吸收曲線(A)及標(biāo)準(zhǔn)曲線(B)Fig.7 β-carotene absorption curve (A) and standard curve (B)

由圖7可知，β-胡蘿卜素在400～600 nm的波長處存在兩個(gè)特征吸收峰，最大吸收峰在450 nm處，在此波長下，不同濃度的β-胡蘿卜素與吸光度值具有良好的線性關(guān)系，線性方程為y=1.807 8x+0.113 3，R2=0.978 1。因此,可用450 nm處的OD值表示β-胡蘿卜素的含量。

2.3.2 均勻試驗(yàn)結(jié)果

表2 均勻試驗(yàn)結(jié)果Table 2 Results of the uniform test

以DPPH·清除率為考察指標(biāo)，優(yōu)化結(jié)果如下：

均勻試驗(yàn)采用Mathmatics 4.0軟件分析：以DPPH自由基清除率為考察指標(biāo)Y，料液比(X1)、溶劑比(X2)、超聲時(shí)間(X3)、超聲功率(X4)為影響因素進(jìn)行回歸分析，得到回歸方程：

Y=108.03-123.42X1-2 994.75X2+58.81X2X3-0.009 563X3X4。

從回歸分析的顯著性分析可以看出，溶劑比(X2)對(duì)DPPH·清除率具有顯著的影響，P值為0.033 5；超聲時(shí)間(X3)與溶劑比(X2)和超聲功率(X4)具有顯著的交互作用，對(duì)DPPH·清除率具有顯著的影響，P值分別為0.034 2和0.036 7。由回歸程求極值結(jié)合研究實(shí)際，得到最優(yōu)水平：料液比(X1)1∶50，溶劑比(X2) 1∶50，超聲時(shí)間(X3)30 min，超聲功率(X4)50 W，在此條件下，DPPH·清除率為95.21%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于試驗(yàn)中的最大值90.07%，綜合優(yōu)化試驗(yàn)結(jié)果可靠。

表3 方差分析表Table 3 Analysis of variance

以β-胡蘿卜素含量為考察指標(biāo),優(yōu)化結(jié)果如下：

均勻試驗(yàn)采用Mathmatics 4.0軟件分析：以β-胡蘿卜素含量為考察指標(biāo)Y，料液比(X1)、溶劑比(X2)、超聲時(shí)間(X3)、超聲功率(X4)為影響因素進(jìn)行回歸分析，得到回歸方程：

Y=0.993 8-12.82X2+0.249 7X2X3-0.000 090 2X3X4。

從回歸分析的顯著性分析可以看出，超聲時(shí)間(X3)與超聲功率(X4)具有顯著的交互作用，對(duì)DPPH·清除率具有顯著的影響，P值為0.046 3。

由回歸方程求極值，結(jié)合研究實(shí)際得到最優(yōu)水平：料液比(X1)可任意取值，溶劑比(X2)1∶500，超聲時(shí)間(X3)30 min，超聲功率(X4)40 W，在此條件下，β-胡蘿卜素含量為0.424 mg/mL，接近試驗(yàn)中的最大值0.431 mg/mL。

表4 方差分析表Table 4 Analysis of variance

結(jié)合兩者指標(biāo)，優(yōu)化結(jié)果為料液比(X1)1∶50，溶劑比(X2)1∶500，超聲時(shí)間(X3)30 min，超聲功率(X4)40 W，在此條件下得到的枸杞提取液對(duì)DPPH·的清除率為92.34%，β-胡蘿卜素含量為0.424 mg/mL。

2.4 最優(yōu)提取條件下枸杞提取液活性測(cè)定結(jié)果

2.4.1 羥基自由基和羧基自由基清除能力測(cè)定結(jié)果

由圖8可知，枸杞提取液對(duì)DPPH自由基、羥基自由基、羧基自由基均具有清除作用。最優(yōu)條件下的枸杞提取液對(duì)DPPH自由基的清除率為92.34%，對(duì)羧基自由基的清除率為79.11%，對(duì)羥基自由基的清除率為45.54%。在添加枸杞提取液后，羥基自由基的EPR譜圖出現(xiàn)了除羥基自由基之外的特征峰(圖中1，2，3，4為羥基自由基EPR特征峰[21])，其原因可能是添加枸杞提取液后導(dǎo)致DMPO氧化開環(huán)，或枸杞提取液和H2O2反應(yīng)產(chǎn)生了其他自由基，這一猜想需要進(jìn)一步研究。

圖8 最優(yōu)條件下的枸杞提取液對(duì)羧基自由基(A)與羥基自由基(B)影響的EPR譜圖Fig.8 EPR spectra of effect of wolfberry extract on the carboxyl radical (A) and hydroxyl radical (B) under the optimal condition

2.4.2 總黃酮(以蘆丁計(jì))的吸收曲線及標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

總黃酮(以蘆丁計(jì)[23])的吸收曲線及標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖9。

圖9 總黃酮的吸收曲線(A)及標(biāo)準(zhǔn)曲線(B)Fig.9 Absorption curve (A) and standard curve (B) of total flavonoids

由圖9可知，按1.2.6處理蘆丁后的顯色溶液在440～540 nm的波長處存在一個(gè)特征吸收峰，最大吸收峰對(duì)應(yīng)的波長為510 nm，在此波長下，0.01～0.1 mg/mL的蘆丁與吸光度值具有良好的線性關(guān)系，線性方程為y=2.395 6x+0.040 9，R2=0.996 9。在優(yōu)化條件下枸杞提取液的黃酮含量為0.039 2 mg/mL，在相同條件下未經(jīng)超聲處理的枸杞提取液中黃酮含量為0.032 5 mg/mL，在優(yōu)化條件下黃酮提取率相比空白組提高了20.62%。

2.4.3 枸杞多糖(以葡萄糖計(jì)[23])的吸收曲線及標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

圖10 枸杞多糖的吸收曲線(A)及標(biāo)準(zhǔn)曲線(B)Fig.10 Absorption curve (A) and standard curve (B) of wolfberry polysaccharides

由圖10可知，按1.2.6處理多糖的顯色溶液在400～600 nm的波長處存在一個(gè)特征吸收峰，最大吸收峰對(duì)應(yīng)的波長為485 nm，在此波長下，0.00～0.1 mg/mL的多糖與吸光度值具有良好的線性關(guān)系，線性方程為y=6.213 4x+0.134 3，R2=0.955 3。在優(yōu)化條件下枸杞提取液的多糖含量為0.066 7 mg/mL，在相同條件下未經(jīng)超聲處理的枸杞提取液中多糖含量為0.058 55 mg/mL，在優(yōu)化條件下多糖提取率相比空白組提高了13.92%。

3 結(jié)論

超聲處理有利于枸杞中抗氧化活性物質(zhì)的提取，采用EPR技術(shù)研究枸杞提取液的抗氧化活性可以避免枸杞提取液顏色的干擾，提高測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性。通過芬頓反應(yīng)和自制合成材料的引用可以豐富枸杞提取液抗氧化活性清除指標(biāo)。均勻試驗(yàn)優(yōu)化結(jié)果為料液比1∶50、溶劑比1∶500、超聲時(shí)間30 min、超聲功率40 W，在此條件下得到的枸杞提取液對(duì)DPPH·的清除率為92.34%，β-胡蘿卜素含量為0.424 mg/mL，類胡蘿卜素含量為141.6 mg/100 g，黃酮含量為0.039 2 mg/mL，枸杞多糖含量為0.066 7 mg/mL。超聲輔助可以提高枸杞提取液的抗氧化活性以及黃酮、枸杞多糖等具有抗氧化功能的活性物質(zhì)。