鄧映明，張 雁，曾玉梅，劉志輝（通信作者）

（梅州市食品藥品監(jiān)督檢驗所化學(xué)室 廣東 梅州 514071）

葡萄糖酸鈣片在臨床上廣泛用于補充鈣質(zhì)，治療鈣缺乏癥，如骨質(zhì)疏松、佝僂病[1-2]以及與其他藥物聯(lián)用用于產(chǎn)后出血、小兒厭食等[3-6]。葡萄糖酸鈣片現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)為《中國藥典》2020 年版二部，其含量測定方法以鈣紫紅素為指示劑，EDTA 滴定液滴定至紫色轉(zhuǎn)變?yōu)榧兯{(lán)，滴定鈣的含量，換算為葡糖糖酸鈣的含量；溶出度采用原子吸收分光光度法測定其溶出量，原子吸收分光光度法重現(xiàn)性較差?，F(xiàn)有文獻(xiàn)報道葡萄糖酸鈣含量測定方法主要包括電位滴定法、離子色譜法、ICP-OES、ICP-MS等[7-16]，本文基于高效液相色譜技術(shù)對葡萄糖酸鈣片的含量和溶出度測定方法進(jìn)行了研究，建立了HPLC 法測定葡萄糖酸鈣片的含量和溶出度。該方法靈敏度高、不受輔料干擾、操作簡單、結(jié)果準(zhǔn)確，且成本低，可為該藥品的質(zhì)量控制提供參考。

1.儀器與試藥

Agilent 1200 高效液相色譜儀，Agilent 1200 紫外檢測器；SOTAX 半自動溶出儀；磷酸二氫鉀為分析純；水為超純水。葡萄糖酸鈣對照品（批號100082-201002，含量：99.8%，中國食品藥品檢定研究院）；葡萄糖酸 鈣 片（廠 家A 批 號：2109031、2109012、2010014，廠 家B 批 號：77220503、77220203； 廠 家C 批 號：20211101、20210401，廠家D 批號：3220512、3220214、3220409，廠家E 批號：11220607 廠家F 批號：211201、210609、210104）。

2.方法與結(jié)果

2.1 含量測定

2.1.1色譜條件與溶液制備 （1）色譜條件。色譜柱：安捷倫ZORBAXSB-Aq（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相：0.05 mol·L-1磷酸二氫鉀（磷酸調(diào)節(jié)pH 至2.8），流速0.5 mL·min-1，檢測波長210 nm，柱溫30 ℃，進(jìn)樣量：10 μL。（2）對照品溶液的制備。精密稱取葡萄糖酸鈣對照品55.30 mg 于2 5 mL 量瓶中，加水振搖使溶解，用水稀釋至刻度，搖勻，作為對照儲備液。精密量取對照儲備液2 mL 置10 mL 中，搖勻，作為對照品溶液。（3）供試品溶液的制備。取葡萄糖酸鈣片10 片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取細(xì)粉適量（約相當(dāng)于葡萄糖酸鈣50 mg），置100 mL 量瓶中，加水30 mL，超聲10 min 使溶解，用水稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。（4）陰性樣品溶液的制備。按葡萄糖酸鈣片處方比例（輔料為滑石粉、羧甲基淀粉鈉、蔗糖、硬脂酸鎂），制作除葡萄糖酸鈣外的陰性樣品，并按（2）項下方法制備陰性樣品溶液。

2.1.2 實驗 （1）系統(tǒng)適用性實驗。取對照溶液和供試品溶液注入液相色譜儀，按2.1.1 中的（1）項下色譜條件依次進(jìn)樣，記錄色譜圖。結(jié)果顯示供試品溶液主峰保留時間與對照品主峰保留時間一致，理論塔板數(shù)以葡萄糖酸鈣峰計為15 000 以上。（見圖1）。（2）專屬性實驗。分別吸取上述供試品溶液、對照溶液、含輔料陰性樣品溶液，按照“2.2.1”色譜條件，記錄色譜圖。實驗結(jié)果陰性樣品溶液在與葡萄糖酸鈣相應(yīng)的保留時間處，無色譜峰出現(xiàn)，表明輔料不干擾葡萄糖酸鈣的測定，見圖1。（3）線性關(guān)系與檢出限。①分別精密量取上述對照品儲備液0.5、1、2、5、10 mL 于1 0 mL 量瓶中，用水稀釋至刻度，配制成0.1103、0.2207、0.4414、1.1035、2.207 mg·mL-1的葡萄糖酸鈣系列標(biāo)準(zhǔn)溶液.②按2.1.1中的（1）色譜條件進(jìn)行測定，記錄色譜圖，以峰面積Y為縱坐標(biāo)，系列標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度X 為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性方程Y = 638.45X+9.0113，r= 0.9996。結(jié)果表明：葡萄糖酸鈣在0.1103 ～2.207 mg·mL-1范圍內(nèi)與峰面積呈現(xiàn)線性關(guān)系良好。③量取對照溶液適量，加流動相逐級稀釋，以S/N = 3 時為檢測限。測得檢測限為3.8 ng，以S/N = 10 確定定量限為12.8 ng。（4）精密度試驗取系列標(biāo)準(zhǔn)溶液下濃度為0.220 7 mg·mL-1的對照溶液，按按2.1.1 中的（1）項下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6 次，其峰面積平均值為309.1，RSD 為0.1%。（5）重復(fù)性試驗。取廠家B 樣品（批號：77220503）的葡萄糖酸鈣片，按（3）方法制備樣品進(jìn)樣，平行測定6 次，平均含量為99.76%，RSD 為0.2%。（6）穩(wěn)定性試驗。取廠家C 樣品（批號：20211101），制備供試品溶液，在室溫下放置0、2、4、6、8、12，24 h 后測定，葡萄糖酸鈣的峰面積RSD 為0.3%。試驗結(jié)果表明，供試品溶液配制好后24 h 內(nèi)穩(wěn)定。（7）回收率試驗。稱取已知含量的葡萄糖酸鈣片（批號：2109031，含量：947.12 mg/g）研細(xì)，稱取細(xì)粉適量（約相當(dāng)于葡萄糖酸鈣20、25、30 mg 各3 份）置1 0 0 mL 量瓶中，共9 份，分別精密稱取葡萄糖酸鈣對照品（含量：99.8%，約20、25、30 mg 各3 份）置同一量瓶中，按含量測定方法測定含量，結(jié)果平均回收率為100.54%，RSD為0.74%?；厥章试囼灲Y(jié)果見表1。（8）樣品含量測定精密稱取6 各廠家14 批次的樣品細(xì)粉，按供試品溶液項下制備方法制備含量測定樣品，按照“2.2.1”項下色譜條件，進(jìn)行含量測定，并與容量滴定法進(jìn)行比對，結(jié)果顯示兩種方法含量測定結(jié)果相近，見表2。

表1 回收率試驗結(jié)果

表2 兩種方法含量測定結(jié)果比較（n = 3）

圖1 HPLC 色譜圖

2.2 溶出度測定

2.2.1 測定方法 取葡萄糖酸鈣片6 片，溶出介質(zhì)為水1 000 mL，漿法，轉(zhuǎn)速為每min50轉(zhuǎn)，溫度為37±0.5 ℃，照溶出度與釋放度測定法（《中國藥典》2020 年版四部通則0931），依法操作，經(jīng)45 min，取溶液適量，濾過，取續(xù)濾液作為溶出度測定供試品溶液。

2.2.2 累積溶出量曲線的繪制 取6 片樣品（批號：2109012），按“2.2.1”方法進(jìn)行操作，分別于10、15、20、30、40、45、50、55 min 時取樣5 mL（同時補充溶出介質(zhì)5 mL），濾過，取續(xù)濾液，按“2.1.1”色譜條件進(jìn)樣，計算溶出量和平均累積溶出量，繪制累積溶出量曲線，測定結(jié)果表面45 min 后溶出曲線趨于平穩(wěn)，樣品溶出量接近100%，見圖2。

圖2 葡萄糖酸鈣片溶出曲線

2.2.3溶出度均一性考察 取廠家A 樣品（批號：2109012），按“2.2.1”方法平行操作6 次，計算葡糖糖酸鈣平均累積溶出量，繪制其6 次溶出曲線，得溶出均一性結(jié)果，結(jié)果顯示，6 次溶出試驗的曲線趨勢基本相同，至45 min 時的累積溶出量RSD 為0.85%。見圖3。

圖3 溶出均一性結(jié)果（n = 6）

2.2.4 溶出度測定 取上述6 個廠家各1 批次樣品，分別按“2.2.1”方法操作，結(jié)果6 批次樣品在45 min時的溶出量均大于75%，見表3。

表3 樣品在45 min 時的溶出量（%）

3.討論

檢測波長的選擇。葡萄糖酸根有羰基氧和羥基氧上孤對電子的共軛作用所產(chǎn)生的末端吸收（205～215 nm），波長210 nm 處溶劑及輔料對葡萄糖酸鈣的測定不產(chǎn)生干擾，故選擇210 nm 為檢測波長。

流動相的選擇。葡萄糖酸為有機酸，極性較大，在反相柱上保留較弱，為增加葡萄糖酸鈣的保留，故采用水性柱和純水相作為流動相，由于磷酸鹽在紫外區(qū)幾乎無吸收，故選擇緩沖液；緩沖液的pH 對葡萄糖酸鈣的峰形影響較大，pH 較大時，葡萄糖酸發(fā)生酸式解離，造成峰拖尾，pH 減小由于抑制了葡萄糖酸的解離，峰形變銳，有利于準(zhǔn)確定量；本實驗采用了0.05 mol·L-1磷酸二氫鉀溶液（pH = 2.8）作為流動相，結(jié)果顯示，葡萄糖酸峰峰形好，柱效高，保留時間合適。

提取方法的選擇。采用流動相作為提取溶劑有利于充分提取葡萄糖酸鈣，但是葡萄糖酸鈣溶液不穩(wěn)定，30 min 后會發(fā)生降解。根據(jù)葡萄糖酸鈣在水中緩緩溶解的物理性質(zhì)，可采用簡便、快速的超聲提取的方式，該方式同樣可以充分提取葡萄糖酸鈣，且葡萄糖酸鈣水溶液在24 h 內(nèi)穩(wěn)定。