劉艷春，舒淑芬，項(xiàng)飛兵，陳文煜，肖 妙，崔晨燕

（黃岡市公共檢驗(yàn)檢測(cè)中心，湖北黃岡 438000）

蔬菜中農(nóng)藥殘留（以下簡(jiǎn)稱“農(nóng)殘”）超標(biāo)，會(huì)嚴(yán)重影響消費(fèi)者安全與健康。為應(yīng)對(duì)該類產(chǎn)品保質(zhì)期短、流動(dòng)性快的特殊性，在短時(shí)間內(nèi)完成從樣品制備到檢測(cè)結(jié)果出具整個(gè)過程的快檢是非常必要的。快檢設(shè)備可有效避免大型儀器對(duì)場(chǎng)地、人員等的高要求，實(shí)現(xiàn)在實(shí)驗(yàn)室外對(duì)新鮮蔬菜等初級(jí)農(nóng)產(chǎn)品的快速檢測(cè)。有機(jī)磷及氨基甲酸酯類殺蟲劑使用廣泛，占?xì)⑾x劑用量的70%以上[1]，是蔬菜中殘留的主要農(nóng)藥種類，也是目前農(nóng)藥殘留檢測(cè)的重點(diǎn)。此外，對(duì)于該類物質(zhì)的檢測(cè)已有相關(guān)國(guó)標(biāo)方法[2]，因此對(duì)這兩類農(nóng)殘的快速檢測(cè)方法進(jìn)行研究具有非常重要的意義。

常見的農(nóng)殘快檢方法有酶抑制法、免疫分析法、生物傳感器法等多種方法[3]，每種方法具有不同的特點(diǎn)，適用于不同的檢測(cè)環(huán)境。且已開發(fā)出速測(cè)卡法、快速測(cè)定儀、膠體金法以及生物傳感器[4-6]等多種類型的產(chǎn)品，農(nóng)殘快速檢測(cè)儀以其快速、靈敏便捷、低成本等特點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于商超市場(chǎng)、蔬菜基地等的產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)工作中，成為果蔬類農(nóng)藥殘留初篩的重要工具[2]，通過初篩、定性分析，最終獲得農(nóng)殘初步結(jié)果。本文介紹的是采用乙酰膽堿酯酶抑制方法為原理的農(nóng)殘快速檢測(cè)儀在檢測(cè)過程中的影響因素，旨在通過對(duì)影響檢測(cè)結(jié)果的因素進(jìn)行考察，保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，從而降低檢測(cè)風(fēng)險(xiǎn)，為其推廣應(yīng)用提供技術(shù)支持。

1 工作原理

農(nóng)殘快速檢測(cè)儀的工作原理是比色法[7]，利用農(nóng)藥靶標(biāo)酶活性受抑制的程度，通過測(cè)定特定波長(zhǎng)處吸光度隨時(shí)間的變化值，計(jì)算出抑制率，從而對(duì)有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥進(jìn)行定性判定。

2 檢測(cè)前的質(zhì)量控制

2.1 設(shè)備與試劑

設(shè)備管理人員應(yīng)做好儀器設(shè)備定期檢查檢修工作，做好量具的定期檢定工作，確保儀器設(shè)備能滿足檢測(cè)需求。

試劑管理人員應(yīng)做好試劑驗(yàn)收及管理工作，按要求合理存放試劑。配制的酶、顯色劑、底物應(yīng)于4 ℃冰箱中儲(chǔ)存；緩沖溶液應(yīng)以蒸餾水或去離子水配備，配好后于4 ℃冰箱中儲(chǔ)存。同批次樣品的檢測(cè)中，為減少數(shù)據(jù)的誤差，應(yīng)選用同一批次的試劑。此外，還應(yīng)定期處置過期試劑。

2.2 樣品

抽樣人員應(yīng)按照農(nóng)業(yè)部相關(guān)要求[8]，按操作規(guī)程抽取有代表性樣品，抽樣器具、包裝材料要干凈獨(dú)立，杜絕污染，標(biāo)簽信息要完善，所抽樣品應(yīng)及時(shí)送檢避免變質(zhì)、受損或污染；他人送檢樣品，抽樣人員應(yīng)做好收樣工作，分別包裝登記，及時(shí)送檢。

2.3 人員

抽樣人員、檢測(cè)人員應(yīng)具有一定水平的知識(shí)儲(chǔ)備和業(yè)務(wù)能力，經(jīng)培訓(xùn)后，持考核通過證上崗。抽樣人員要保證所抽樣品能夠反映所抽批次真實(shí)情況；檢測(cè)人員應(yīng)能熟練理解測(cè)試原理，能準(zhǔn)確使用快檢儀器，能及時(shí)發(fā)現(xiàn)異常數(shù)據(jù)并處理常見故障，能對(duì)所檢測(cè)數(shù)據(jù)負(fù)責(zé)。

3 檢測(cè)中的質(zhì)量控制

3.1 樣品前處理

將待檢樣品剪成1 cm2的碎片，選取1 g樣品，加提取液5 mL，振蕩萃取2 min后靜置，濾液即為樣品提取液。

3.1.1 取樣

取樣不可過碎，以免色素過多干擾；對(duì)汁水過多的番茄等樣品，要拭去多余汁液，避免提取液混濁，干擾透光。

3.1.2 萃取

用5 mL提取液提取，時(shí)長(zhǎng)以2 min為宜，該條件下既能充分提取又能避免色素漫出。有研究表明，直接浸提法對(duì)農(nóng)殘的提取率不高，且不能利用相似相溶原理采用有機(jī)溶劑進(jìn)行提取，因有機(jī)溶劑會(huì)使酶失活，而去除有機(jī)溶劑的大型設(shè)備及煩瑣過程將使快檢失去快這一重要特點(diǎn)[9]。姜露等[9]發(fā)現(xiàn)通過超聲萃取可以有效提高農(nóng)藥提取效率；對(duì)顏色較深的提取液經(jīng)有機(jī)濾漠過濾后，可以在保證較好的回收率的前提下，排除有色物質(zhì)的干擾。蘇明偉等[10]通過條件優(yōu)化，首次實(shí)現(xiàn)將亞臨界水萃取技術(shù)用于果蔬中的農(nóng)藥殘留樣品的預(yù)處理，并得到了耗時(shí)短、提取率高的亞臨界水萃取的最優(yōu)條件。也有研究表明，對(duì)易產(chǎn)生假陽性的含硫化合物的蔬菜可采取整株蔬菜浸提法，對(duì)葉菜類含色素較高的蔬菜采用莖處表皮也能減少干擾[11-12]。

3.2 樣品檢測(cè)

3.2.1 酶

酶是一種高度專一，被廣泛應(yīng)用的強(qiáng)催化劑。酶的來源主要有兩種，即動(dòng)物或植物。有研究表明來源于動(dòng)物或植物的酶作用相同，其準(zhǔn)確度和精密度相近[13]。酶活性及對(duì)農(nóng)藥的敏感度會(huì)直接影響檢測(cè)的準(zhǔn)確性及可信度，因此對(duì)其改良優(yōu)化一直是研究熱點(diǎn)。因此，在實(shí)際工作中，同批次檢測(cè)中酶應(yīng)保證其同一性，選用同一廠家同一批次的，且合理保存以保持活性，減少其對(duì)結(jié)果的影響。購(gòu)置的酶于4 ℃冰箱中儲(chǔ)存時(shí)，處于休眠狀態(tài)，使用時(shí)，應(yīng)取出后放置至室溫，蘇醒活性。例如，空白試樣的ΔA＜0.3，則活性已不能滿足實(shí)驗(yàn)要求，不可再用。

3.2.2 pH值

pH值會(huì)影響酶活力。有研究表明不同膽堿酯酶具有最佳活力的pH值略有不同[14]。也有研究顯示，適宜的pH值范圍可以減少某些特殊種類樣品出現(xiàn)假陽性。有些辛辣類的蔬菜，如蔥、大蒜、韭菜等，因其切口會(huì)產(chǎn)生硫化物，與有機(jī)磷和有機(jī)氯類農(nóng)藥性質(zhì)相似，從而產(chǎn)生假陽性[15]，嚴(yán)重影響檢測(cè)結(jié)果。加熱理論上可以去除硫化物，從而避免假陽性，但同時(shí)也會(huì)不可避免的造成農(nóng)藥的分解[16]。王文等[1]研究發(fā)現(xiàn)，通過改進(jìn)檢測(cè)條件（pH值），可以減小檢測(cè)中含硫物質(zhì)對(duì)乙酰膽堿酯酶的抑制作用，同時(shí)還能保證有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥的正常檢測(cè)，為后續(xù)研究開辟了一種新的研究思路。

3.2.3 溫度

提取溫度會(huì)影響提取效率及酶的活性，溫度過高，酶失活，會(huì)降低抑制反應(yīng)；在溫度不足37 ℃的情況下，酶反應(yīng)的速度會(huì)降低；反應(yīng)溫度為37 ℃時(shí)測(cè)定結(jié)果較好[17]。因此，檢測(cè)中應(yīng)配備恒溫水浴鍋，保持溫度恒定，使試樣在恒溫水浴鍋中的反應(yīng)結(jié)果的重現(xiàn)性較好[18]。蘇明偉等[10]研究獲得了抑制率對(duì)溫度的校正公式，真正實(shí)現(xiàn)了野外檢測(cè)。通過溫度較正，實(shí)現(xiàn)了在無恒溫水浴的條件下，將現(xiàn)場(chǎng)溫度下測(cè)得的抑制率校正到37 ℃的抑制率。

4 檢測(cè)后的質(zhì)量控制

2022年新修訂的《中華人民共和國(guó)農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全法》中，第五十條規(guī)定，經(jīng)相關(guān)部門認(rèn)定的快速檢測(cè)方法可以作為行政處罰的證據(jù)。但從業(yè)人員須知由于快檢儀檢測(cè)中大量假陽性的存在，因此快檢結(jié)論通常只作定性結(jié)論，不可輕易作為處罰依據(jù)。對(duì)易出現(xiàn)假陽性的品類，應(yīng)謹(jǐn)慎對(duì)待。必要時(shí)，應(yīng)將前述品類樣品進(jìn)行定量檢測(cè)，測(cè)得農(nóng)藥品種和含量，再作出最終定斷。

5 結(jié)語

農(nóng)殘快檢儀可及時(shí)篩查不合格食用農(nóng)產(chǎn)品，避免不合格食用農(nóng)產(chǎn)品流入市場(chǎng)，對(duì)加快推進(jìn)食用農(nóng)產(chǎn)品集中交易市場(chǎng)快檢室建設(shè)顯得尤為重要。例如，可形成安全預(yù)警前移，為重大活動(dòng)提供食品保障；價(jià)廉快速，有利于大規(guī)模推廣應(yīng)用，對(duì)違規(guī)使用農(nóng)藥形成震懾。相關(guān)從業(yè)者應(yīng)深刻學(xué)習(xí)研究農(nóng)殘快檢的相關(guān)知識(shí)，做好關(guān)鍵點(diǎn)的控制，確保檢測(cè)數(shù)據(jù)的真實(shí)可靠。相關(guān)農(nóng)業(yè)部門應(yīng)做好農(nóng)技、農(nóng)藥宣傳工作，鼓勵(lì)綠色種植，少用或不用農(nóng)藥，綠色種植，從根本上減少農(nóng)藥殘留。