王 躍 武 磊 王美佳 馬 錚 李園園

（北京警察學(xué)院刑事科學(xué)技術(shù)系 北京 102202）

1 引言

在命案犯罪現(xiàn)場上遺留的作案工具、衣物、被服和其他物品上，通常會有血跡或潛在血液痕跡[1]，此類痕跡也是犯罪現(xiàn)場最常見的痕跡物證。無論是在犯罪現(xiàn)場還是在法庭科學(xué)實(shí)驗(yàn)室，刑事科學(xué)技術(shù)人員必須要對一些嫌疑痕跡做出分析，判斷這些嫌疑印痕是血印痕還是其他的特殊斑跡印痕。而在實(shí)際犯罪現(xiàn)場勘查工作過程中，因在犯罪現(xiàn)場發(fā)現(xiàn)的許多血液印痕由于成痕介質(zhì)含量小，與承痕體的背景顏色反差非常微弱，自然光線下難以發(fā)現(xiàn)和提取，更難對這些嫌疑痕跡做出分析和判斷[2-3]。

目前，刑事科學(xué)技術(shù)專家和研究人員已經(jīng)探索出了一系列理化增強(qiáng)提取方法，并取得了較為理想的增強(qiáng)效果，主要有血色原結(jié)晶顯色法、準(zhǔn)化氧化還原染色法和物理化學(xué)吸附顯色法[4]。

血色原結(jié)晶顯色法是早期的潛血印痕顯現(xiàn)技術(shù)，是將血痕置在載玻片上加入如吡啶試劑，在顯微鏡下觀察，吡啶與血紅蛋白中的血紅素、血晶素、血色原等物質(zhì)反應(yīng)衍生成粉紅色的晶體。該方法被稱為高山血色原結(jié)晶法，其靈敏度約0.001mg/L血液或血紅蛋白0.1mg/L。血液的存在呈現(xiàn)陽性，但陽性的結(jié)果不一定就是血液。該方法適用于新鮮和陳舊血液的檢測，有實(shí)驗(yàn)表明，該技術(shù)可以檢測存留20年的陳舊血跡。李亞琴等用離心分離的檢材浸洗液代替檢材，與改良高山試劑進(jìn)行血色原反應(yīng)，用微量分光光度計(jì)測定吸收光譜判斷檢材是否含血，用常見的疑似血液/血斑，從保存時(shí)間、基質(zhì)等方面驗(yàn)證血斑測定的特異性和檢材的適應(yīng)性。但總的來說，由于該法的復(fù)雜性，大多數(shù)刑事技術(shù)人員和實(shí)驗(yàn)室人員難以使用該顯現(xiàn)方法[5]。

準(zhǔn)化氧化還原染色法的反應(yīng)原理是血液中存在著過氧化氫酶及血卟啉，血痕血卟啉環(huán)上的鐵離子能夠起觸媒作用，使過氧化氫釋放出初生態(tài)的氧，而初生態(tài)的氧能夠氧化化學(xué)試劑，使其生成有色的化合物或復(fù)合物，從而使?jié)撗『埏@現(xiàn)出來。但該方法存在的問題是：聯(lián)苯胺是一種強(qiáng)致癌物，已在國際上被明確禁止。陳愛萍等測試四甲基聯(lián)苯胺等顯現(xiàn)法對DNA檢驗(yàn)的影響[6-10]，但傳統(tǒng)的四甲基聯(lián)苯胺顯現(xiàn)法，使用過程中，為保證血痕的原始性與可靠性，需反復(fù)固定, 操作程序復(fù)雜, 難以避免人為因素對血痕形態(tài)的破壞。魯米諾和藍(lán)星試劑顯現(xiàn)法需反復(fù)調(diào)整過氧化氫的劑量，以獲得理想的濃度后，且需使用大量的蒸餾水，容易造成血痕擴(kuò)散，即使有發(fā)光效應(yīng)，難以綜合利用形態(tài)痕跡檢驗(yàn)價(jià)值。

物化吸附顯色法顯現(xiàn)潛血印痕的原理，主要是生物染色劑與血液中的氨基酸非常敏感，試劑中的色團(tuán)與氨基酸的氨基與氫鍵結(jié)合，其顯色色團(tuán)位移到氨基酸上而固定在潛血印痕紋線從而顯現(xiàn)出潛血印痕。但該方法配方復(fù)雜、操作繁瑣、應(yīng)用范圍有限、擴(kuò)散和破壞大，暗色物體顯示反差手印，有些試劑甚至有一定的毒性。此外，在溶液噴涂或涂抹顯現(xiàn)過程中無法進(jìn)行細(xì)化處理，特別是背景干擾形成的粘連性形態(tài)特征效果不佳，血量較小時(shí)，顏色較淡；血量較大時(shí)，容易粘連[11-12]。因此，該方法在實(shí)際現(xiàn)場勘查工作中應(yīng)用較少。

微弱或潛在血液痕跡的增強(qiáng)和顯現(xiàn)通常是通過物理顯現(xiàn)法、化學(xué)顯現(xiàn)法或理化顯現(xiàn)法將微弱或不可見的潛在血痕增強(qiáng)為清晰形態(tài)痕跡的過程。微弱或潛在血液痕跡的種類和介質(zhì)的多寡、承痕體的表面屬性和光滑度、環(huán)境條件等諸多因素決定了潛血印痕顯現(xiàn)技術(shù)和流程的多樣化和復(fù)雜化[13]。每種顯現(xiàn)方法都有其特定的適用對象，即適用于特定類型手印材料和特定特征的對象性能。沒有任何方法是萬能的，必須不斷地探索新的技術(shù)和方法。

據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道[14-17]，熒光鈣血跡藍(lán)鈉顯現(xiàn)液能夠有效增強(qiáng)常見非滲透地板上的潛血足跡，潛血足跡圖案在淺色非滲透表面呈現(xiàn)亮藍(lán)色。特別是田亞杰等[18]提出，熒光鈣血跡藍(lán)鈉是一種便捷高效的潛在足跡增強(qiáng)提取方法，且在制作的12份生物檢材中，利用STR多態(tài)性檢驗(yàn)，12份生物檢材中的23個(gè)基因座上所有位點(diǎn)全部能與已知樣本完全匹配且同一認(rèn)定。綜上所述，熒光鈣血跡藍(lán)鈉能夠增強(qiáng)潛血印痕，且不影響DNA檢驗(yàn)，具有一定的推廣價(jià)值。在實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)，熒光鈣血跡藍(lán)鈉顯現(xiàn)潛血印痕后，能夠在532nm激光下激發(fā)出強(qiáng)烈熒光，有效克服客體表面顏色背景干擾，尤其是熒光鈣血跡藍(lán)鈉顯現(xiàn)液不影響后期依據(jù)顯現(xiàn)出的潛在血跡部位，定位提取生物檢材的檢驗(yàn)價(jià)值，達(dá)到痕跡形態(tài)檢驗(yàn)和生物檢驗(yàn)的綜合利用。

上述文獻(xiàn)中只提到熒光鈣血跡藍(lán)鈉顯現(xiàn)液能夠有效顯現(xiàn)潛血印痕，但對532nm激光下激發(fā)出強(qiáng)烈熒光有效顯現(xiàn)滲透表面上的潛在或微弱血印痕均沒有報(bào)道。因此，本實(shí)驗(yàn)利用熒光鈣血跡藍(lán)鈉顯現(xiàn)液直接處理典型的滲透表面8種顏色紙張樣本，自然光下記錄藍(lán)色花紋后，使用532nm激光照射（Green-L濾鏡）拍照記錄，并與自然光下拍照提取效果進(jìn)行比較，探索熒光鈣血跡藍(lán)鈉試劑能否適用于不同顏色滲透客體上潛在或微弱血手印增強(qiáng)，探索建立一套適用于犯罪現(xiàn)場上微弱或潛在血液痕跡顏色和熒光融合快速增強(qiáng)方法，為基層刑事科學(xué)技術(shù)部門相關(guān)人員提供技術(shù)參考和支持。

2 實(shí)驗(yàn)

針對傳統(tǒng)潛血顯現(xiàn)試劑如結(jié)晶顯色法、準(zhǔn)化氧化還原染色法、化學(xué)反應(yīng)顯色法、物理化學(xué)吸附顯色法等的局限性，通過Optosky手持拉曼光譜儀表征的優(yōu)選濃度的熒光鈣血跡藍(lán)鈉顯現(xiàn)液與血的混合液，在自然光下與532nm激光照射下光譜具有明顯不同，使用微霧霧化器霧化新型熒光鈣血跡藍(lán)鈉顯現(xiàn)液顯現(xiàn)潛血手印，探索自然光下拍照及532nm熒光激發(fā)新型熒光鈣血跡藍(lán)鈉增強(qiáng)透面潛在或微弱血手印，并按手印樣本評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)對顯現(xiàn)效果拍照記錄并分別賦值，統(tǒng)計(jì)顯現(xiàn)效果及評價(jià)數(shù)據(jù)，判斷新型熒光試劑顯現(xiàn)新鮮、陳舊潛血印痕和顏色承痕體有無普適性。

2.1 實(shí)驗(yàn)材料

熒光鈣血跡藍(lán)鈉（北京佳安華創(chuàng)科技有限公司）；無水乙醇（北京化工廠）；95%酒精（北京化工廠）；新鮮兔血（北京市第五肉聯(lián)廠）；脫脂棉（可孚醫(yī)療科技發(fā)展有限公司）；赤、橙、黃、綠、藍(lán)、青、紫、白8種A4打印復(fù)印紙（亞太森博經(jīng)典高品樂A4打印復(fù)印紙）；燒杯（贛州金昌貿(mào)易有限公司）；磁棒（贛州金昌貿(mào)易有限公司）；超聲波振蕩器（無錫鼎實(shí)電子科技有限公司）；Optosky手持拉曼光譜儀（奧普天成科技有限公司）；魚躍M104型霧化器；532nm激光光源（云南先勘科技開發(fā)有限公司）；數(shù)碼照相機(jī)（佳能Canon EOS R7微單相機(jī)）、Green-L濾光鏡（OOTEE FSJOT20220817014）。

2.2 熒光鈣血跡藍(lán)鈉顯現(xiàn)液

配制比例：熒光鈣血跡藍(lán)鈉0.5g、1g、2g、4g；95%酒精1000mL。

配制方法：分別把0.5g（1g、2g、4g）熒光鈣血跡藍(lán)鈉加入容積為2000mL的燒杯中，然后倒入95%酒精1000mL，使用磁棒攪拌3～5min，溶液充分溶解后，然后將燒杯放在超聲波振蕩器5min，顯現(xiàn)液混合均勻后顏色為呈橙黃色透明狀，將配置好的4種濃度的熒光鈣血跡藍(lán)鈉顯現(xiàn)液放在深色玻璃瓶中通風(fēng)避光保存。

2.3 潛血手印樣本評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

熒光鈣血跡藍(lán)鈉顯現(xiàn)液顯現(xiàn)出的潛在血手印質(zhì)量評定標(biāo)準(zhǔn)分別為a、b、c、d、e 5個(gè)等級：a級代表為沒有顯現(xiàn)出手?。籦級代表為顯現(xiàn)顯出的手印上有不超過三分之一的乳突紋線的細(xì)節(jié)特征能夠認(rèn)定；c級代表為有三分之一到三分之二的乳突紋線細(xì)節(jié)特征能夠認(rèn)定；d級代表為有三分之二以上的乳突紋線細(xì)節(jié)特征能夠認(rèn)定，但還不盡完整；e級代表為整個(gè)手印全部細(xì)節(jié)特征基本上可以完整認(rèn)定。

2.4 血液的配制

配制比例：兔血10mL；蒸餾水90mL。

配制方法：把10mL兔血加入容積為50mL的燒杯中，倒入90mL蒸餾水，使用磁棒攪拌3～5min，將燒杯放在超聲波振蕩器5min，將混合均勻的血液樣品放在深色玻璃瓶中置于冰箱避光保存。

2.5 潛血手印樣本的制作

2.5.1 優(yōu)選熒光鈣血跡藍(lán)鈉顯現(xiàn)液濃度及手印樣本制作

實(shí)驗(yàn)以白色A4復(fù)印紙為客體。選擇熒光鈣血跡藍(lán)鈉顯現(xiàn)液的4種不同濃度，分別為5g·L-1、10g·L-1、20g·L-1、40g·L-1。由6名匿名志愿者，首先使用浸泡酒精的脫脂棉把手擦拭干凈，待酒精揮發(fā)后，再使用浸潤V兔血∶V蒸餾水比例為1∶10的脫脂棉均勻涂布手指，在圖 1 所示白色A4復(fù)印紙的十字格內(nèi)，分別捺印遺留5枚潛血手印樣本。

圖1 濃度優(yōu)選實(shí)驗(yàn)的手印樣本制作標(biāo)準(zhǔn)

采用浸泡法處理。將十字格內(nèi)部實(shí)線剪開后，分別使用5g·L-1、10g·L-1、20g·L-1、40g·L-1熒光鈣血跡藍(lán)鈉顯現(xiàn)液進(jìn)行處置，拼接后對比自然光下觀察顯現(xiàn)效果，并按2.3 潛血手印樣本評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)對顯現(xiàn)效果自然光拍照記錄并分別賦值，統(tǒng)計(jì)顯現(xiàn)效果及評價(jià)數(shù)據(jù)，優(yōu)選出熒光鈣血跡藍(lán)鈉顯現(xiàn)液的較佳配比濃度。

2.5.2 優(yōu)選熒光鈣血跡藍(lán)鈉顯現(xiàn)液處置方法與手印樣本制作

實(shí)驗(yàn)以白色A4復(fù)印紙為客體。隨機(jī)選擇20名志愿者，首先使用浸泡酒精的脫脂棉把手擦拭干凈，待酒精揮發(fā)后，再使用浸潤V兔血∶V蒸餾水比例為1∶10的脫脂棉均勻涂布手指，為豐富統(tǒng)計(jì)結(jié)果，在圖2所示的方格內(nèi)每名志愿者在白色A4紙張上重復(fù)捺印5次，最后，將紙張潛在或微弱血手印樣本存放干燥紙箱中。

圖2 處置方法優(yōu)選手印樣本制作標(biāo)準(zhǔn)

采用浸泡法、涂抹法、噴瓶噴涂法和微霧霧化法處理。將十字格內(nèi)部實(shí)線剪開后，分別使用浸泡法、涂抹法、噴瓶噴涂法和微霧霧化法，用熒光鈣血跡藍(lán)鈉顯現(xiàn)液分別對4區(qū)域手印樣本進(jìn)行處置，拼接后對比觀察顯現(xiàn)效果，并按2.3潛血手印樣本評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)對顯現(xiàn)效果拍照記錄并分別賦值，統(tǒng)計(jì)顯現(xiàn)效果及評價(jià)數(shù)據(jù)，優(yōu)選出熒光鈣血跡藍(lán)鈉顯現(xiàn)液處置樣本方法。

2.5.3 濃度優(yōu)選后熒光鈣血跡藍(lán)鈉處置新鮮與陳舊性手印樣本制作

實(shí)驗(yàn)以白色A4復(fù)印紙為客體。隨機(jī)選擇20名志愿者，首先使用浸泡酒精的脫脂棉把手擦拭干凈，待酒精揮發(fā)后，再使用浸潤V兔血∶V蒸餾水比例為1∶10的脫脂棉均勻涂布手指，然后在圖3所示的方格內(nèi)每名志愿者在白色A4紙張上重復(fù)捺印5次，最后，將紙張潛在或微弱血手印樣本存放干燥紙箱中。

圖3 不同顏色A4紙張手印樣本制作標(biāo)準(zhǔn)

采用優(yōu)選的處置方法處理。處置潛在手印樣本時(shí)，從十字格實(shí)線1處剪開，遺留時(shí)間分別為1d、4d、7d和14d時(shí)，優(yōu)選的處置方法處理4區(qū)域潛在血液手印樣本，然后拼接比對顯現(xiàn)效果，并按2.3潛血手印樣本評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)對顯現(xiàn)效果拍照記錄并分別賦值，統(tǒng)計(jì)顯現(xiàn)效果及評價(jià)數(shù)據(jù)，判斷處置新鮮與陳舊性手印樣本有無普適性。

2.6 優(yōu)選后熒光鈣血跡藍(lán)鈉顯現(xiàn)液與血混合液拉曼光譜表征

2.6.1 顯現(xiàn)溶液穩(wěn)定性測定

取5mL顯現(xiàn)溶液放入潔凈的玻璃瓶中，自然光環(huán)境下，Optosky手持拉曼光譜儀3次測定顯現(xiàn)溶液的光譜特征。

2.6.2 外置532nm激光照射顯現(xiàn)溶液光譜測定

取5mL顯現(xiàn)溶液放入潔凈的玻璃瓶中，在30度角置532nm外激光照射，Optosky手持拉曼光譜儀內(nèi)置激光照射同一部位測定顯現(xiàn)溶液的光譜特征。

2.6.3 外置532nm激光照射混合溶液光譜測定

取5mL顯現(xiàn)溶液放入潔凈的10mL玻璃瓶中，將V兔血：V蒸餾水比例為1:10的血液5mL倒入上述瓶中，在30度角外置532nm激光照射，Optosky手持拉曼光譜儀內(nèi)置激光照射同一部位測定混合液的光譜特征。

2.7 優(yōu)選后顯現(xiàn)液cm-1處置8種紙張潛血手印樣本自然光下與激光激發(fā)熒光實(shí)驗(yàn)

2.7.1 濃度優(yōu)選后熒光鈣血跡藍(lán)鈉處置不同材質(zhì)手印樣本制作

實(shí)驗(yàn)以赤、橙、黃、綠、藍(lán)、青、紫、白8種A4紙張為客體。匿名隨機(jī)選擇20名志愿者，首先使用浸泡酒精的脫脂棉把手擦拭干凈，待酒精揮發(fā)后，再使用浸潤V兔血∶V蒸餾水比例為1∶10的脫脂棉均勻涂布3個(gè)手指，然后在圖4所示的方格內(nèi)每個(gè)學(xué)生在赤、橙、黃、綠、藍(lán)、青、紫、白8種A4紙張上重復(fù)捺印，最后，將紙張潛在或微弱血手印樣本存放干燥紙箱中。

圖4 不同材質(zhì)手印樣本制作標(biāo)準(zhǔn)

處置潛在手印樣本時(shí)，采用優(yōu)選的處置方法，對赤、橙、黃、綠、藍(lán)、青、紫、白8種A4紙張比對顯現(xiàn)效果，并按2.3潛血手印樣本評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)對顯現(xiàn)效果拍照記錄并分別賦值，統(tǒng)計(jì)顯現(xiàn)效果及評價(jià)數(shù)據(jù)，判斷處置8種手印樣本有無普適性。

2.7.2 操作步驟

第一步，把制作好的赤、橙、黃、綠、藍(lán)、青、紫、白8種A4紙張樣本依次排列在桌面上。

第二步，把配制好的熒光鈣血跡藍(lán)鈉顯現(xiàn)溶液5mL倒入魚躍M104型霧化器藥盒中。

第三步，使用魚躍M104型霧化器均勻噴涂赤、橙、黃、綠、藍(lán)、青、紫、白8種A4紙張樣本表面，在噴液過程中紙張上呈現(xiàn)藍(lán)色手印圖案。

第四步，噴涂處理1min左右，藍(lán)色圖案穩(wěn)定后拍照記錄，并按2.3潛血手印樣本評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)對顯現(xiàn)效果拍照記錄并分別賦值，統(tǒng)計(jì)顯現(xiàn)效果及評價(jià)數(shù)據(jù)。

第五步，分別使用532nm激光燈照射，橙色濾光鏡濾光，并按2.3潛血手印樣本評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)對顯現(xiàn)效果拍照記錄并分別賦值，顯現(xiàn)效果及評價(jià)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 熒光鈣血跡藍(lán)鈉顯現(xiàn)液濃度優(yōu)選

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：5g·L-1、10g·L-1熒光鈣血跡藍(lán)鈉顯現(xiàn)液沒有沉淀物質(zhì)，20g·L-1、40g·L-1的熒光鈣血跡藍(lán)鈉顯現(xiàn)液均有沉淀物質(zhì)，20g·L-1熒光鈣血跡藍(lán)鈉顯現(xiàn)液沉淀較少，40g·L-1熒光鈣血跡藍(lán)鈉顯現(xiàn)液沉淀物質(zhì)更多，20g·L-1、40g·L-1熒光鈣血跡藍(lán)鈉顯現(xiàn)液取上清液備用。

5g·L-1、10g·L-1、20g·L-1、40g·L-1熒光鈣血跡藍(lán)鈉顯現(xiàn)液均為橙黃色的透明液體，顏色深度依次為40g·L-1≈20g·L-1>10g·L-1>5g·L-1。

以白色A4復(fù)印紙為潛在手印樣本，分別捺印遺留5枚潛血手印樣本，按十字格內(nèi)部實(shí)線剪開后，分別使用5g·L-1、10g·L-1、20g·L-1、40g·L-1熒光鈣血跡藍(lán)鈉顯現(xiàn)液使用浸泡法處置相應(yīng)的區(qū)域樣本，相應(yīng)的區(qū)域樣本，在浸泡過程中，各區(qū)域的指紋樣本即時(shí)均有藍(lán)色紋線出現(xiàn)，浸泡5s取出，自然條件晾干，在干燥過程中反差越來越明顯，紋線越來越清楚，直到干燥完全，紋線顏色不再變化。

按2.3潛血手印樣本評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)對顯現(xiàn)效果拍照記錄并分別賦值，100枚潛血手印樣，400個(gè)區(qū)域，均能夠達(dá)到d級標(biāo)準(zhǔn)以上，d級標(biāo)準(zhǔn)35個(gè)區(qū)域，e級標(biāo)準(zhǔn)的365個(gè)區(qū)域，評價(jià)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)如表1所示。

表1 熒光鈣血跡藍(lán)鈉顯現(xiàn)液濃度優(yōu)選評價(jià)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)

熒光鈣血跡藍(lán)鈉顯現(xiàn)液均有10mg·L-1的熒光鈣血跡藍(lán)鈉顯現(xiàn)液顯現(xiàn)后，自然光下觀察，反差最好，沒有顏色背景；10g·L-1效果良好，稍有黃色背景，20g·L-1、40g·L-1熒光鈣血跡藍(lán)鈉顯現(xiàn)液處理的紋線反差明顯、清晰連貫，背景染色較為嚴(yán)重，但均不干擾紋線的觀察，如圖5所示。

圖5 熒光鈣血跡藍(lán)鈉顯現(xiàn)液濃度優(yōu)選顯現(xiàn)效果

從濃度分別為5g·L-1、10g·L-1、20g·L-1、40g·L-1熒光鈣血跡藍(lán)鈉顯現(xiàn)液綜合顯現(xiàn)效果和溶質(zhì)量兩方面均衡評判，5g·L-1的熒光鈣血跡藍(lán)鈉顯現(xiàn)液為優(yōu)選濃度。

3.2 5g·L-1熒光鈣血跡藍(lán)鈉顯現(xiàn)液處置方法優(yōu)選

將十字格內(nèi)部實(shí)線剪開后，分別使用浸泡法、涂抹法、噴瓶噴涂法和微霧霧化法，用5g·L-1的熒光鈣血跡藍(lán)鈉顯現(xiàn)液分別以白色A4復(fù)印紙為客體4區(qū)域手印樣本進(jìn)行處置，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下。

浸泡法：在浸泡過程中，各區(qū)域的指紋樣本即時(shí)均有藍(lán)色紋線出現(xiàn)，浸泡5s取出，自然條件晾干，在干燥過程中反差越來越明顯，紋線越來越清楚，直到干燥完全，紋線顏色不再變化。

涂抹法：在涂抹過程中，各區(qū)域的指紋樣本即時(shí)均有藍(lán)色紋線出現(xiàn)，自然條件晾干，在干燥過程中反差越來越明顯，紋線越來越清楚，直到干燥完全，紋線顏色不再變化，但有涂抹條紋干擾。

噴瓶噴涂法：在噴瓶噴涂過程中，各區(qū)域的指紋樣本即時(shí)均有藍(lán)色紋線出現(xiàn)，自然條件晾干，在干燥過程中反差越來越明顯，紋線越來越清楚，直到干燥完全，紋線顏色不再變化，但有點(diǎn)狀痕跡圖案干擾。

微霧霧化法：在微霧霧化沉降過程中，各區(qū)域的指紋樣本即時(shí)均有藍(lán)色紋線出現(xiàn)，自然條件晾干，在干燥過程中反差越來越明顯，紋線越來越清楚，直到干燥完全，紋線顏色不再變化，基本沒有顏色干擾。

按2.3潛血手印樣本評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)對顯現(xiàn)效果拍照記錄并分別賦值，100枚潛血手印樣，400個(gè)區(qū)域，均能夠達(dá)到d級標(biāo)準(zhǔn)以上，d級標(biāo)準(zhǔn)35個(gè)區(qū)域，e級標(biāo)準(zhǔn)的365個(gè)區(qū)域，評價(jià)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)如表2所示。拼接后對比觀察顯現(xiàn)效果如圖6所示，并按2.3潛血手印樣本評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)對顯現(xiàn)效果拍照記錄并分別賦值，統(tǒng)計(jì)顯現(xiàn)效果及評價(jià)數(shù)據(jù)，優(yōu)選出熒光鈣血跡藍(lán)鈉顯現(xiàn)液處置為微霧霧化法。

表2 熒光鈣血跡藍(lán)鈉顯現(xiàn)液濃度優(yōu)選評價(jià)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)

圖6 浸泡法、涂抹法、噴瓶噴涂法和微霧霧化法顯現(xiàn)效果

3.3 新鮮與陳舊性手印樣本顯現(xiàn)普適性實(shí)驗(yàn)

從十字格實(shí)線處剪開，對遺留時(shí)間分別為1d、4d、7d和14d的4區(qū)域手印樣本，經(jīng)微霧霧化法處理相應(yīng)區(qū)域潛在血液手印樣本，實(shí)驗(yàn)結(jié)果為：遺留時(shí)間分別為1d、4d、7d和14d時(shí)，將十字格內(nèi)部實(shí)線剪開的以白色A4復(fù)印紙為客體4區(qū)域手印樣本，在微霧霧化沉降過程中，遺留時(shí)間分別為1d、4d、7d和14d區(qū)域的指紋樣本即時(shí)均有藍(lán)色紋線出現(xiàn)，自然條件晾干，在干燥過程中反差越來越明顯，紋線越來越清楚，直到干燥完全，紋線顏色不再變化，基本沒有顏色干擾。

然后拼接比對顯現(xiàn)效果，并按2.3潛血手印樣本評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)對顯現(xiàn)效果拍照記錄并分別賦值，統(tǒng)計(jì)顯現(xiàn)效果及評價(jià)數(shù)據(jù)，按2.3潛血手印樣本評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)對顯現(xiàn)效果拍照記錄并分別賦值，100枚潛血手印樣，420個(gè)手印，均能夠達(dá)到d級標(biāo)準(zhǔn)以上，d級標(biāo)準(zhǔn)51個(gè)區(qū)域，e級標(biāo)準(zhǔn)的449個(gè)，評價(jià)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)如表3所示，顯現(xiàn)效果如圖7所示。

表3 新鮮與陳舊性手印樣本評價(jià)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)

圖7 新鮮與陳舊性手印樣本顯現(xiàn)效果

綜上，5g·L-1熒光鈣血跡藍(lán)鈉顯現(xiàn)液微霧霧化法處置新鮮與陳舊性手印樣本具有普適性。

3.4 優(yōu)選后的顯現(xiàn)液與混合液光譜測定

5g·L-1熒光鈣血跡藍(lán)鈉顯現(xiàn)液的自然光環(huán)境下，Optosky手持拉曼光譜儀3次測定顯現(xiàn)溶液的熒光光譜峰值均在1400 cm-1處，如圖8所示；外置532nm激光30度夾角照射，Optosky手持拉曼光譜儀測定5g·L-1顯現(xiàn)溶液同一位置的熒光光譜位移至1800 cm-1處，如圖9所示；外置532nm激光30度夾角照射，Optosky手持拉曼光譜儀血與5g·L-1顯現(xiàn)液混合溶液的熒光頻率位移至2300 cm-1處，如圖10所示；外置532nm激光30度夾角照射，Optosky手持拉曼光譜儀測定的光譜，與5g·L-1顯現(xiàn)溶液光譜圖比較，混合溶液熒光散射光譜位移明顯，區(qū)別極大。

圖8 自然光環(huán)境下，Optosky手持拉曼光譜儀3次測定顯現(xiàn)液的拉曼位移譜圖

圖9 外置532nm激光30度夾角照射，Optosky手持拉曼光譜儀內(nèi)置激光測定顯現(xiàn)溶液同一位置的拉曼位移譜圖

圖10 外置532nm激光30度夾角照射，Optosky手持拉曼光譜儀內(nèi)置激光測定混合溶液同一位置的拉曼位移譜圖

3.5 潛血手印樣本顯現(xiàn)自然光下記錄與激光激發(fā)實(shí)驗(yàn)

5g·L-1熒光鈣血跡藍(lán)鈉顯現(xiàn)液 cm-1處置8種A4紙張潛血手印樣本，在微霧霧化沉降過程中，遺留時(shí)間分別為1d、4d、7d和14d區(qū)域的指紋樣本均有即時(shí)藍(lán)色紋線出現(xiàn)，自然條件晾干，在干燥過程中反差越來越明顯，紋線越來越清楚，直到干燥完全，紋線顏色不再變化，基本沒有顏色干擾。

自然光下觀察，紅（A4紙）、橙（A4紙）、黃（A4紙）、綠（A4紙）、青（A4紙）、紫（A4紙）、白（A4紙）7種紙張上的420個(gè)手印，均能夠達(dá)到d級標(biāo)準(zhǔn)以上，d級標(biāo)準(zhǔn)51個(gè)區(qū)域，e級標(biāo)準(zhǔn)的449個(gè)；藍(lán)（A4紙）上的60個(gè)手印，b級標(biāo)準(zhǔn)22個(gè)區(qū)域，c級標(biāo)準(zhǔn)的 18個(gè)，d級標(biāo)準(zhǔn)的13個(gè)，e級標(biāo)準(zhǔn)的僅7個(gè)；在532nm激光激發(fā)，Green-L濾光鏡，藍(lán)（A4紙）、黃（A4紙）、綠（A4紙）、青（A4紙）、紫（A4紙）5種紙張上的300個(gè)手印，均能夠達(dá)到d級標(biāo)準(zhǔn)以上，d級標(biāo)準(zhǔn)51個(gè)，e級標(biāo)準(zhǔn)的309個(gè)；白（A4紙）紅（A4紙）、橙（A4紙）上的180個(gè)手印，b級標(biāo)準(zhǔn)44個(gè)，c級標(biāo)準(zhǔn)的 56個(gè)，d級標(biāo)準(zhǔn)的43個(gè)，e級標(biāo)準(zhǔn)的僅17個(gè)。評價(jià)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)如表4所示，自然光下記錄與激光激發(fā)熒光效果如表5所示。

表4 自然光下記錄與激光激發(fā)熒光評價(jià)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)

表5 自然光下記錄與激光激發(fā)熒光效果

4 分析與討論

8種潛血手印樣本，與自然光線下直接拍照提取比較，熒光鈣血跡藍(lán)鈉試劑顏色增強(qiáng)提取法取得了較為理想的顯現(xiàn)效果，有效增強(qiáng)了顏色反差，提高了潛在痕跡的發(fā)現(xiàn)率、提取率、利用率。從樣本承痕體顏色上比較，淺色的背景反差效果明顯，藍(lán)色紙張上有效增強(qiáng)性略低，可能原因是：熒光鈣血跡藍(lán)鈉增強(qiáng)試劑與血液中蛋白質(zhì)發(fā)生絡(luò)合作用，形成的藍(lán)色絡(luò)合物及混合物將手印紋線顯現(xiàn)出來，陽性顏色反應(yīng)非常明顯，而對于藍(lán)色紙張的顏色與絡(luò)合物及混合物的藍(lán)色相近或同色，導(dǎo)致顏色反差明顯降低。

與傳統(tǒng)的溶液噴涂或涂抹顯現(xiàn)法相比，使用魚躍M104型霧化器直接霧化新型熒光鈣血跡藍(lán)鈉顯現(xiàn)液對潛血手印樣本進(jìn)行處理，自然光下拍照記錄和激光激發(fā)熒光增強(qiáng)，均呈現(xiàn)較好的連貫性，無擴(kuò)散現(xiàn)象，可能的原因是：傳統(tǒng)的顯現(xiàn)方法使用溶液或者涂抹，溶液浸泡法容易過度，涂抹法容易擦劃痕跡，造成人為影響；而該實(shí)驗(yàn)使用的是微孔霧化法，顯現(xiàn)液經(jīng)霧化后，溶劑可能在沉降過程中揮發(fā)掉大部分，而溶質(zhì)沉降吸附在承痕體與介質(zhì)上，溶質(zhì)與介質(zhì)接觸均勻，且不受如魯米諾顯現(xiàn)法中大量水溶液影響，不會發(fā)生擴(kuò)散現(xiàn)象，因而顯現(xiàn)出的手印紋線清晰連貫、反差明顯。

遺留時(shí)間分別為1d、4d、7d、14d的潛血手印變化不大，可能原因是：血跡干燥后，血跡中熒光鈣血跡藍(lán)鈉反應(yīng)的成分基本不變，因而顯現(xiàn)效果基本不變，也具有顯現(xiàn)新鮮和陳舊手印的普適性。

測定顯現(xiàn)液與混合溶液的熒光光譜峰值位移較大，可能原因是：由于血液中的蛋白作為一種陽離子，結(jié)合陰離子熒光鈣血跡藍(lán)鈉形成藍(lán)色化合物，導(dǎo)致了熒光光譜峰值位移，也正滿足了潛血手印顯現(xiàn)需求。

使用魚躍M104型霧化器直接霧化新型熒光鈣血跡藍(lán)鈉顯現(xiàn)液對潛血手印樣本進(jìn)行處理，自然光下拍照記錄，然后使用532nm激光照射（Green-L濾鏡），可以有效增強(qiáng)滲透表面上的潛血手印。由于顯現(xiàn)溶液的熒光頻率位移至1400 cm-1處、532nm激光表征顯現(xiàn)溶液的熒光頻率位移至1800cm-1處、血與顯現(xiàn)液混合溶液的532nm激光表征熒光頻率位移至2300cm-1處，熒光光譜散射光的頻率位移較大，新型熒光鈣血跡藍(lán)鈉顯現(xiàn)液對潛血手印增強(qiáng)后的手印紋線清晰連貫、反差明顯。

白色紙張?jiān)谧匀还庀掠^察藍(lán)色紋線反差非常明顯；而在532nm激光激發(fā)下，Green-L濾鏡觀察熒光反差比較小，究竟是因白色紙張中增白顏料或是因紙張?zhí)畛洳牧霞ぐl(fā)出的相同或相近的熒光光譜仍需進(jìn)一步探索。

5 結(jié)語

本實(shí)驗(yàn)針對傳統(tǒng)潛血顯現(xiàn)試劑（如結(jié)晶顯色法、準(zhǔn)化氧化還原染色法、化學(xué)反應(yīng)顯色法、物理化學(xué)吸附顯色法等）的局限性，通過Optosky手持拉曼光譜儀表征的熒光鈣血跡藍(lán)鈉顯現(xiàn)液與血的混合液，在自然光下與532nm激光照射下光譜具有明顯不同，使用新型熒光鈣血跡藍(lán)鈉用于顯現(xiàn)8種A4紙張上潛血手印的實(shí)驗(yàn)，探索熒光鈣血跡藍(lán)鈉顯現(xiàn)液的適用客體及實(shí)際顯現(xiàn)效果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，使用5g·L-1、10g·L-1、20g·L-1，40g·L-1等4種濃度的熒光鈣血跡藍(lán)鈉顯現(xiàn)液優(yōu)選實(shí)驗(yàn)中，熒光鈣血跡藍(lán)鈉顯現(xiàn)液最佳濃度為5g·L-1和10g·L-1之間，優(yōu)選熒光鈣血跡藍(lán)鈉顯現(xiàn)液的濃度為5g·L-1。因?yàn)?0g·L-1及40g·L-1均有沉淀，說明過多溶質(zhì)無法繼續(xù)溶解，也容易造成溶質(zhì)浪費(fèi)，且不會有較大顯現(xiàn)效果提升，也容易造成污染。

使用優(yōu)選濃度為5g·L-1熒光鈣血跡藍(lán)鈉顯現(xiàn)液，對遺留時(shí)間分別為1d、4d、7d、14d白色A4紙張上新鮮及陳舊性手印樣本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，熒光鈣血跡藍(lán)鈉顯現(xiàn)液對遺留時(shí)間不同的潛血印痕顯現(xiàn)效果區(qū)別不大，說明光鈣血跡藍(lán)鈉顯現(xiàn)液既能夠顯現(xiàn)新鮮的潛血印痕，又能夠有效顯現(xiàn)陳舊的潛血印痕，對不同時(shí)間的潛血印痕顯現(xiàn)具有普適性。

使用優(yōu)選濃度為5g·L-1的熒光鈣血跡藍(lán)鈉顯現(xiàn)液處置赤、橙、黃、綠、藍(lán)、青、紫、白8種A4紙張上潛血手印樣本表明，赤、橙、黃、綠、藍(lán)、青、紫、白8種A4紙張上潛血手印樣本均能夠明顯增強(qiáng)，雖然藍(lán)色紙張手印紋線顏色與藍(lán)色紙張顏色趨同，但在潛血印痕發(fā)現(xiàn)中反差也極其明顯，如圖11所示，如需達(dá)到鑒定條件，還要借助其他光源進(jìn)一步處理。

圖11 藍(lán)色紙張上自然光與532nm下顯現(xiàn)效果

使用優(yōu)選濃度為5g·L-1的熒光鈣血跡藍(lán)鈉顯現(xiàn)液及與血的混合液，自然光下使用532nm激光照射下穩(wěn)定性光譜特征，3次測定顯現(xiàn)溶液的熒光光譜峰值均在1400cm-1處，表明光譜特征穩(wěn)定；而532nm激光表征顯現(xiàn)溶液的熒光光譜位移至1800cm-1處、血與顯現(xiàn)液混合溶液的532nm激光表征熒光峰值位移至2300cm-1處，熒光光譜峰值位移明顯，其光譜區(qū)別極大，表明熒光鈣血跡藍(lán)鈉顯現(xiàn)液能夠用于潛血印痕的熒光增強(qiáng)顯現(xiàn)；但實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，不同的顏色紙張熒光背景強(qiáng)弱不同，表明熒光鈣血跡藍(lán)鈉顯現(xiàn)液對不同客體的熒光背景具有選擇性，不具有普適性，使用熒光增強(qiáng)適應(yīng)該考慮個(gè)體的適用性。

綜上，新型熒光鈣血跡藍(lán)鈉試劑的在顯現(xiàn)潛血手印上既有顏色增強(qiáng)，又有熒光增強(qiáng)，在性能上相互補(bǔ)充，產(chǎn)生協(xié)同效應(yīng)，能夠有效增強(qiáng)常見紙張表面上的微弱血手印或潛在血手印。且使用微霧霧化方式顯現(xiàn)潛血手印，既能夠確保手印降低人為破壞程度，又能夠確保溶質(zhì)與手印介質(zhì)均勻反應(yīng)。熒光鈣血跡藍(lán)鈉試劑經(jīng)前期檢驗(yàn)，尚未檢測到對人體有危害性，在霧化使用過程中做好氣溶膠防護(hù)即可。新型熒光鈣血跡藍(lán)鈉試劑顯現(xiàn)出手印，經(jīng)拍照記錄供形態(tài)檢驗(yàn)，而不損害后期DNA檢驗(yàn)價(jià)值，并且能夠有效靶向定位提取血痕DNA檢材，可有效提高形態(tài)檢驗(yàn)和生物DNA個(gè)體識別的綜合應(yīng)用價(jià)值，是一種便捷高效的潛血手印增強(qiáng)方法。