張雪健 ,吳向未, ,謝松松 ,李顏玲 ,任中業(yè)

布魯氏菌病(簡(jiǎn)稱布病),是由布魯氏菌引起的人獸共患傳染病[1]。世界衛(wèi)生組織(WHO)和聯(lián)合國(guó)糧食和農(nóng)業(yè)組織(FAO)宣布,布魯氏菌病是易被忽視的人獸共患病之一,每年在170多個(gè)國(guó)家發(fā)生約50萬件新病例[1]。在中國(guó),布魯氏菌病是一種持久的公共衛(wèi)生問題。21世紀(jì)隨著中國(guó)的經(jīng)濟(jì)水平增加,人們的流動(dòng)性大大增加,養(yǎng)殖業(yè)也越來也繁榮,布魯氏菌病的發(fā)病率持續(xù)增加。自2004 年以來,感染的人畜的數(shù)量飆升,2014年達(dá)到了57 222的峰值[2-3]。人類布魯氏菌病主要是由于暴露于布魯氏菌感染的家畜,帶菌的排泄物或進(jìn)食被布魯氏菌污染的食物,尤其是綿羊和山羊奶制品[4]。研究表明,空氣溫度、陽光持續(xù)時(shí)間、降雨、相對(duì)濕度、相對(duì)濕度和蒸發(fā)在季節(jié)性波動(dòng)傳播人體布魯氏的傳播中發(fā)揮了至關(guān)重要的作用[5]。布魯氏菌感染后臨床表現(xiàn)無特異性,以低燒、出汗、疲勞和關(guān)節(jié)疼痛是患者最為常見。如果布魯氏菌病患者不被診斷和治療,可引起全身性多系統(tǒng)損害。慢性布魯氏菌病的治愈具有一定挑戰(zhàn)性,這影響了患者的生活質(zhì)量,并導(dǎo)致巨大的家庭和社會(huì)經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。

目前,針對(duì)布魯氏菌的檢測(cè)方法主要有3類:一是細(xì)菌分離鑒定,它是布病診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”,但布魯氏菌的分離培養(yǎng)耗時(shí)長(zhǎng),技術(shù)較復(fù)雜,檢出率低,對(duì)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)條件要求較高,對(duì)試驗(yàn)技術(shù)人員的危險(xiǎn)較大[6-7],存在相應(yīng)的生物安全隱患。二是血清學(xué)檢測(cè),它是診斷布魯氏菌病的重要檢測(cè)方法,但其敏感性差、特異性不強(qiáng)、操作繁多,易受人為判斷主觀意識(shí)的影響等缺點(diǎn),需要通過其他方法輔助才能確診,且存在假陽性和假陰性[8-9]。三是分子生物學(xué)檢測(cè)[7]。自1985年聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)問世以來,PCR 技術(shù)作為一種快速、高效、簡(jiǎn)便的體外核酸擴(kuò)增技術(shù)被廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)、生物學(xué)、食品衛(wèi)生等多個(gè)領(lǐng)域[10]。但各種分子生物學(xué)檢測(cè)方法均有優(yōu)缺點(diǎn),因此,全面了解布魯氏菌病分子生物學(xué)檢測(cè)方法的研究進(jìn)展有助于更好的檢測(cè)手段的選擇。

1 分子生物學(xué)檢測(cè)方法

1.1 AMOS-PCR(Abortus Melitensis Ovis Suis PCR) 由于布魯菌種屬內(nèi)不同生物型或基因型的流行病學(xué)意義不同,為有效追溯傳染源及遺傳進(jìn)化關(guān)系,有必要對(duì)引起人布魯菌病菌株的生物型及基因型進(jìn)行鑒定。由于存在不能歸因于現(xiàn)有布魯氏菌種的非典型生化反應(yīng)的菌株的存在,使得區(qū)分和分類變得更加復(fù)雜[11]。在1968年,HOYERBH 首次用DNA-瓊脂法和過濾法對(duì)布魯氏菌屬進(jìn)行了分子水平上的研究[12-13],1985年,Verger等人利用現(xiàn)代DNA-DNA 雜交技術(shù)(細(xì)菌種類劃分的金標(biāo)準(zhǔn),實(shí)驗(yàn)確定的70%DNA 雜交閾值與以前的表型分類相一致),證實(shí)了不同物種之間的密切遺傳關(guān)系[11,14]?；诿舾小⑻禺?、快速的PCR 技術(shù)的分子生物學(xué)方法具有廣闊的應(yīng)用前景[15]。隨著20世紀(jì)90年代以來分子生物學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展,分子生物學(xué)檢測(cè)方法越來越廣泛地用于迅速檢測(cè)布魯氏菌病[16]。1994年,Bricher和Halling首次將PCR 方法用于布魯氏菌的分型研究,建立了AMOS-PCR[17]方法。重復(fù)遺傳元件IS711(之前也被報(bào)道為IS6501)是布魯氏菌物種特有的,并且對(duì)于大多數(shù)物種,布魯氏菌至少有一個(gè)元件的拷貝占據(jù)了特定的染色體位點(diǎn)[17],AMOS-PCR 是以IS711片段設(shè)計(jì)引物,從而擴(kuò)增出布魯氏菌的DNA,可在24 h內(nèi)鑒定牛種布魯菌,羊種布魯菌,豬種布魯菌以及綿羊附睪種布魯菌[17-18]。鑒定結(jié)果與傳統(tǒng)方法符合率高,操作安全且簡(jiǎn)單快速,更具實(shí)用性,在臨床布魯氏菌檢測(cè)以及實(shí)驗(yàn)研究中運(yùn)用較為廣泛[18-19]。通過AMOS-PCR對(duì)各地牲畜布魯菌種水平的分析,為有針對(duì)性的開展疫苗免疫起至關(guān)重要的作用[15]。

1.2 巢式PCR(Nested PCR) 巢式PCR 是由PATRICIA M.等人于1992年首次提出[20],它是2個(gè)連續(xù)的PCR 反應(yīng),是使用2 對(duì)(而非一對(duì))PCR引物擴(kuò)增完整的片段。第一對(duì)PCR 引物擴(kuò)增片段和普通PCR 相似。第二對(duì)引物稱為巢式引物結(jié)合在第一次PCR 產(chǎn)物內(nèi)部,使得第二次PCR 擴(kuò)增片段短于第一次擴(kuò)增[21-22]。與其他傳統(tǒng)的PCR 方法相比,巢式PCR 降低了分子靶標(biāo)檢測(cè)的閾值,可提高PCR 檢測(cè)的靈敏度和準(zhǔn)確性,并提高診斷預(yù)測(cè)的準(zhǔn)確性[21-22],不僅有助于目標(biāo)擴(kuò)增產(chǎn)物與非特異性產(chǎn)物的區(qū)分,并有較好的時(shí)效性[23]。從樣本的DNA 提取到結(jié)果判定最快可在5 h內(nèi)完成,對(duì)患者的及時(shí)快速診斷具有重要意義[24]。巢式PCR 不僅可克服單次PCR 擴(kuò)增平臺(tái)期效應(yīng)的限制,極大地提高擴(kuò)增倍數(shù),從而提升PCR 的敏感性[21-22]。此外,由于二次擴(kuò)增時(shí)模板、引物的改變,有效降低了非特異性反應(yīng)連續(xù)放大的可能,提高了擴(kuò)增的特異性[21,24]。但由于目前該方法缺乏統(tǒng)一的判定標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)范化檢測(cè)流程,限制了其在臨床中的應(yīng)用,尚需進(jìn)一步優(yōu)化提升其在臨床樣本檢測(cè)中的穩(wěn)定性和實(shí)用性。

1.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-time fluorescence quantitative PCR,qPCR) 1999年Vogelstein and Kinzler等人提出了數(shù)字聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(DPCR),2010年Scott O Sundberg等人在在此基礎(chǔ)上提出了實(shí)時(shí)熒光定量PCR[25],使PCR 技術(shù)得到進(jìn)一步發(fā)展[26],它不受其他理化因素的影響,相對(duì)普通PCR 操作簡(jiǎn)單,耗時(shí)少,減少操作中病原體的接觸,有效降低生物安全風(fēng)險(xiǎn),且可同時(shí)進(jìn)行大批量檢測(cè)[7,27],是一種快速、靈敏、特異的目標(biāo)分子實(shí)時(shí)定量檢測(cè)技術(shù),無需進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳,將檢測(cè)時(shí)間大大縮短,也無需電泳,大大降低體系污染的風(fēng)險(xiǎn),同時(shí)對(duì)反應(yīng)體系進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)控,實(shí)現(xiàn)定性又定量的目的[6,26]。為臨床檢測(cè)提供新興檢測(cè)手段,具有較好的潛在應(yīng)用價(jià)值,但是熒光定量PCR 由于易污染、實(shí)驗(yàn)成本和對(duì)實(shí)驗(yàn)場(chǎng)所要求較高等原因不易在基層推廣[7,24,28],導(dǎo)致其在臨床中的應(yīng)用不太廣泛,但是由于實(shí)驗(yàn)室設(shè)備較為完善,其應(yīng)用較為普遍,是科學(xué)研究中較為常用的方法。

1.4 環(huán)介導(dǎo)等溫核酸擴(kuò)增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP) 環(huán)介導(dǎo)等溫核酸擴(kuò)增技術(shù)由Notomi 2000年發(fā)明[29],是一種在近年來有極大發(fā)展前景的核酸擴(kuò)增技術(shù),這種技術(shù)使用了DNA 聚合酶和一組4個(gè)特別設(shè)計(jì)的引物(DNA 正、反義鏈序列的內(nèi)引物、外部引物),它們總共識(shí)別目標(biāo)DNA 上的6 個(gè)不同的序列。內(nèi)引物啟動(dòng)LAMP,外部引物啟動(dòng)的鏈置換DNA 合成釋放出單鏈DNA。這作為DNA 合成的模板,由第2個(gè)內(nèi)外引物啟動(dòng),與目標(biāo)的另一端雜交,產(chǎn)生莖環(huán)DNA結(jié)構(gòu)。循環(huán)反應(yīng)繼續(xù)進(jìn)行中,最終產(chǎn)物是具有目標(biāo)的幾個(gè)反向重復(fù)的莖環(huán)DNA 和具有多個(gè)環(huán)的花椰菜狀結(jié)構(gòu),這些結(jié)構(gòu)是通過在同一鏈中目標(biāo)的交替反向重復(fù)之間退火而形成的,因此它有望高選擇性地?cái)U(kuò)增靶序列[29]。它可以用肉眼直接判定,使得成本大幅下降,便捷性明顯提高,而且不需要專用的儀器,只需4個(gè)引物、DNA 聚合酶和常規(guī)實(shí)驗(yàn)室水浴或熱塊即可進(jìn)行反應(yīng)[29-30],它在等溫條件下擴(kuò)增DNA 具有高特異性、高效率和快速的特點(diǎn),靈敏性較高、擴(kuò)增時(shí)間短[29]。對(duì)于家畜布病檢測(cè)及基層衛(wèi)生防疫有十分重要的意義[31]。但LAMP的效率取決于靶DNA 的大小,在30～200 bp的DNA 效果最好,超過500 bp的DNA 擴(kuò)增效果很差,無法對(duì)長(zhǎng)片段進(jìn)行擴(kuò)增,其擴(kuò)增結(jié)果只有擴(kuò)增與不擴(kuò)增,對(duì)非特異擴(kuò)增產(chǎn)物也無法區(qū)分,并且該技術(shù)操作過程容易受氣溶膠污染,造成假陽性結(jié)果的出現(xiàn)[29-30]。而我們?cè)诔Ｒ?guī)實(shí)驗(yàn)操作中,各種實(shí)驗(yàn)均在同一個(gè)大環(huán)境中進(jìn)行,專門為其準(zhǔn)備一個(gè)獨(dú)立的封閉的空間不切實(shí)際,氣溶膠的產(chǎn)生不可避免,且無特異性檢測(cè),導(dǎo)致其在臨床中的實(shí)用性較低。

1.5 微滴式數(shù)字PCR(droplet digital PCR) 微滴式數(shù)字PCR 由Christopher M Hindson 等人于2013年提出,他們將納升大小的液滴技術(shù)與數(shù)字PCRdigital PCR 相結(jié)合形成微滴式數(shù)字PCR[32],微滴式數(shù)字PCR 將一個(gè)待分析的PCR 反應(yīng)體系進(jìn)行微滴化處理,每個(gè)微滴中含有一個(gè)、多個(gè)或不含有待檢測(cè)的核酸靶分子,數(shù)萬個(gè)微滴進(jìn)行獨(dú)立PCR 擴(kuò)增反應(yīng)后,對(duì)每個(gè)微滴的熒光信號(hào)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,含有熒光信號(hào)的微滴判讀為1,不含熒光信號(hào)則判讀為0,從而實(shí)現(xiàn)對(duì)病原體DNA 或RNA 的絕對(duì)定量,實(shí)現(xiàn)高精度的絕對(duì)核酸定量[10,32]。目前已被應(yīng)用于病原微生物檢測(cè)、腫瘤相關(guān)基因檢測(cè)等多個(gè)領(lǐng)域[6,10,32]。這是一種新興的技術(shù),與傳統(tǒng)的熒光定量PCR 方法相比,微滴式數(shù)字PCR 技術(shù)的定量方式不依賴于標(biāo)準(zhǔn)曲線,它在檢測(cè)低濃度DNA 方面具有更高的靈敏度和準(zhǔn)確性[6,33]。最低檢測(cè)限達(dá)到單個(gè)拷貝,靈敏度高于熒光定量;特異性強(qiáng);重復(fù)性好,批內(nèi)和批間變異系數(shù)均小于10%[33-34];在臨床中,對(duì)于低細(xì)菌載量樣品的檢測(cè),可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品的絕對(duì)定量,為布魯氏菌的診斷和防控提供可靠保障[6]。但是數(shù)字PCR 方法仍存在一定的缺陷,由于對(duì)數(shù)萬微滴進(jìn)行檢測(cè),故檢測(cè)時(shí)間較長(zhǎng)、單位時(shí)間內(nèi)所能產(chǎn)生的數(shù)據(jù)量較低,即通量低[6,33]。通量低一定程度上會(huì)導(dǎo)致測(cè)序速度較慢、時(shí)間長(zhǎng),測(cè)序數(shù)量較少,在樣本量較多時(shí)應(yīng)用受到限制,故臨床中應(yīng)用不廣泛。

2 布魯氏菌分子分型數(shù)據(jù)分析檢測(cè)方法

2.1 多位點(diǎn)序列分型(Multi locus sequence typing,MLST) 多位點(diǎn)序列分型是一種基于DNA 序列的分型方法,可用于許多不同細(xì)菌物種的菌株區(qū)分和克隆譜系鑒定,由Maiden 等人1998 年提出[35]。在MLST 中,來自多個(gè)管家基因內(nèi)部片段的核苷酸序列確定的等位基因的直接分配是明確的,并且每個(gè)基因座可以區(qū)分更多的等位基因[35]。所有基因座上的每一種獨(dú)特的等位基因圖譜都被識(shí)別為一種序列類型[36]。通過聚類分析,根據(jù)多位點(diǎn)等位基因圖譜的兩兩差異構(gòu)建樹狀圖。MLST 可以應(yīng)用于幾乎所有的細(xì)菌物種和其他單倍體生物,包括那些難以培養(yǎng)的生物[35,37]。多個(gè)基因座的使用對(duì)于實(shí)現(xiàn)提供菌株間有意義關(guān)系所需的分辨率至關(guān)重要,因?yàn)榭寺‰S著年齡的增長(zhǎng)而多樣化,這是突變或重組事件的結(jié)果,如果只檢查單個(gè)基因座,可能會(huì)被錯(cuò)誤地分型[35,37]。

在布魯氏菌中,根據(jù)之前發(fā)表的MLST 數(shù)據(jù)庫(kù)[38-39],選擇9個(gè)不同的基因組位點(diǎn),所選的9個(gè)基因座中有7個(gè)代表了MLST 中常規(guī)使用的傳統(tǒng)管家基因類型,因?yàn)槔鄯e的變化發(fā)生得很慢,并且被認(rèn)為是選擇性中性的[39-40]。其余使用的位點(diǎn)是omp25的片段,編碼一個(gè)25 k Da的外膜蛋白,作為一個(gè)潛在的更可變的表面標(biāo)記,可能有助于區(qū)分密切相關(guān)的經(jīng)典物種和標(biāo)記為int-Hyp的片段,該片段基本上是基因間的,盡管它確實(shí)包括假設(shè)蛋白質(zhì)的極端5’。所選擇的基因座散布在布魯氏菌基因組中,因此一個(gè)基因座上的變化應(yīng)該獨(dú)立于其他基因座[39-40]。即7個(gè)管家基因、1個(gè)外膜蛋白和1個(gè)基因間片段[39-40]。這9個(gè)基因座的每個(gè)等位基因都被賦予了不同的數(shù)字名稱[36]。根據(jù)組成每個(gè)ST 的全部9個(gè)DNA 片段的串聯(lián)核苷酸序列構(gòu)建鄰接樹,以檢驗(yàn)STS之間的關(guān)系[39],再使用軟件Bio Numerics Version 5.1(Application-Maths,Inc.)用UPGMA 進(jìn)行聚類分析。使用Bio Numerics軟件5.1版構(gòu)建最小生成樹(MST),確定從一個(gè)菌株到網(wǎng)絡(luò)上所有其他菌株的最小進(jìn)化路徑[36]。2016年,Adrian M.Whatmore等[41]在9個(gè)基因座的MLST基礎(chǔ)上,添加了代表12 個(gè)額外信息的管家基因片段,以表征總共21個(gè)不同的基因組位點(diǎn)。這些數(shù)據(jù)極大的增加了對(duì)布魯氏菌遺傳多樣性的了解,拓展了對(duì)布魯氏菌進(jìn)化史、基因型和生物群之間的關(guān)系研究,以進(jìn)一步研究這些問題,為未來新出現(xiàn)的非典型分離株的分類以及可靠和準(zhǔn)確的快速診斷、分析提供了一個(gè)更全面的框架[41]。

在中國(guó),MLST 方法識(shí)別出18種已知的ST 段類型:ST7、ST8、ST34、ST35 和ST37、ST1、ST2、ST5、ST28、ST29、ST30、ST31、ST32、ST33 和ST38(流產(chǎn)B.biovar1和3),以及ST14、ST17 和ST36(B.suisbiovar1和3)[2,36,42]。對(duì)無根的系統(tǒng)發(fā)育樹的研究表明,STS歸入與經(jīng)典分類學(xué)劃分基本一致的類群。雖然ST6(對(duì)應(yīng)于B.bortusbiovar3)與剩余的B.bortusSTS不同,但B.melitensis和B.bortus都屬于得到良好支持的簇[43]。該方法已被廣泛應(yīng)用于地方和全球?qū)用娴奈⑸锓中秃土餍胁W(xué)研究,并產(chǎn)生對(duì)研究種群結(jié)構(gòu)和系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系非常理想的數(shù)據(jù)[39,44]。

2.2 多位點(diǎn)變數(shù)串聯(lián)重復(fù)分析(Multiple-locus variable-number tandem-repeat analysis,MLVA) 2002年,第一個(gè)布魯氏菌全基因組序列(B.melitensis16M)被公布[45],緊隨其后的是豬布魯氏菌1 330株的基因組序列[46]。比較全基因組分析證實(shí)這些基因組的遺傳親緣關(guān)系較近(平均核苷酸同源性在99%以上),與DNA-DNA 雜交結(jié)果一致。在大多數(shù)物種中,存在著進(jìn)一步分化為生物群的現(xiàn)象。在遺傳上,所有的布魯氏菌物種之間都有很高的親緣關(guān)系,在比對(duì)區(qū)域(核心基因組)顯示出98%到100%的序列相似值[11]。2006年,Le F等開發(fā)了一種基于多位點(diǎn)變數(shù)串聯(lián)重復(fù)分析的基因分型方法[47],極大地促進(jìn)了基因分型和流行病學(xué)研究[48]。在布魯氏菌中,具有21個(gè)位點(diǎn)(MLVA-21)和MLVA-16(1,22,41)的MLVA 方案使用分布在布魯氏菌基因組上的多個(gè)重復(fù)標(biāo)記的組合,能夠區(qū)分布魯氏菌的分離株。具有廣泛的時(shí)間和地理淵源或非常接近的淵源[49],MLVA-16應(yīng)用較廣泛且數(shù)據(jù)庫(kù)中的數(shù)據(jù)較多。MLVA-16 系統(tǒng)包括8 個(gè)小衛(wèi)星或Pane1 標(biāo)記(Bruce06、Bruce08、Bruce11、Bruce12、Bruce42、Bruce43、Bruce45和Bruce55)和8個(gè)互補(bǔ)的微衛(wèi)星或Pane2 標(biāo)記,分為Pane2A(Bruce18、Bruce19和Bruce21)和Pane2B(Bruce04、Bruce07、Bruce09、Bruce16和Bruce30)。MLVA8(Panel 1)被認(rèn)為適用于布魯氏菌的物種鑒定,而Panel 2B標(biāo)記被認(rèn)為適用于亞種分化,因?yàn)镻anel 2B基因座中的3個(gè)(bruce04、bruce09、bruce30)是Bricker等人描述的高變量八聚體寡核苷酸指紋可變數(shù)目串聯(lián)重復(fù)序列(蹄印)MLVA 基因座的一部分[50]。MLVA16(Panel 1 ＋Pane2)適用于基因型鑒定[46,51]。多位點(diǎn)可變數(shù)目串聯(lián)重復(fù)分析(MLVA)已被證實(shí)是鑒定和分型布魯氏菌分離株的有用工具,這些數(shù)據(jù)已被用于流行病學(xué)調(diào)查[52]。目前,MLVA-16檢測(cè)正被用于分析不同毒株之間的流行病學(xué)相關(guān)性。這種方法還可以通過比較內(nèi)源性菌株和外來菌株的遺傳模式來追蹤地理來源[52-53]。高度區(qū)分性的多位點(diǎn)可變數(shù)目串聯(lián)重復(fù)序列(VNTR)分析(MLVA)可以對(duì)單個(gè)分離株進(jìn)行物種描述和區(qū)分,因此是暴發(fā)調(diào)查中分子流行病學(xué)研究的一種完美的第一線工具[11,53]。雖然MLVA 是一種高效的菌株聚類工具,但它不是一種系統(tǒng)發(fā)育工具,因?yàn)榭焖龠M(jìn)化的VNTR 標(biāo)記往往存在同源性問題[11]。

與其他分子分型方法相比,MLST 與MLVA的壓倒性優(yōu)勢(shì)是序列數(shù)據(jù)真正可以在實(shí)驗(yàn)室之間進(jìn)行比較,允許每個(gè)物種有一個(gè)不斷擴(kuò)大的全球數(shù)據(jù)庫(kù)放在萬維網(wǎng)(World Wide Web)上,從而能夠通過互聯(lián)網(wǎng)交換全球流行病學(xué)的分子分型數(shù)據(jù)[35,41]?？梢院苋菀自趯?shí)驗(yàn)室之間比較序列數(shù)據(jù),并且存儲(chǔ)在單個(gè)擴(kuò)展的中央多位點(diǎn)序列數(shù)據(jù)庫(kù)中的數(shù)據(jù)可以通過互聯(lián)網(wǎng)以電子方式進(jìn)行查詢,以產(chǎn)生用于全球流行病學(xué)的強(qiáng)大資源[35-36,41]。

3 小結(jié)與展望

PCR 技術(shù)的檢測(cè)敏感性、效率、準(zhǔn)確性高,能夠?yàn)椴剪斒暇〉脑\斷和治療提供強(qiáng)有力的證據(jù),已成為當(dāng)前布魯氏菌病分子生物學(xué)檢測(cè)和病原學(xué)分型的重要手段。單重PCR 可一次性鑒別布魯氏菌的菌種,在檢測(cè)時(shí)直接取感染動(dòng)物或患者臨床血液組織,十分便捷,方便在基層推廣應(yīng)用。多重PCR 是利用多對(duì)引物在同一個(gè)反應(yīng)體系中對(duì)多個(gè)靶基因進(jìn)行擴(kuò)增檢測(cè),該技術(shù)應(yīng)用靈活性強(qiáng),靈敏度高,可快速檢測(cè)鑒別多種病原體,在臨床多種病原體混合感染的鑒別診斷上具有獨(dú)特優(yōu)勢(shì)。然而,分子生物學(xué)檢測(cè)需培養(yǎng)細(xì)菌,滅活菌株,有二次感染的風(fēng)險(xiǎn),對(duì)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境、儀器要求高,需要在專門的實(shí)驗(yàn)室操作,且實(shí)驗(yàn)試劑價(jià)格昂貴,不適合在基層推廣,但在科學(xué)研究中具有較高的實(shí)用性,且在大數(shù)據(jù)時(shí)代,PCR 與基因測(cè)序、生信分析等技術(shù)結(jié)合,利用全球數(shù)據(jù)庫(kù)平臺(tái),可研究細(xì)菌的流行病學(xué)和分子生物學(xué)特征,以及其與臨床特征之間的相關(guān)性,指導(dǎo)臨床診斷和治療。

利益沖突:無

引用本文格式:張雪健,吳向未,謝松松,等.布魯氏菌分子診斷與分型技術(shù)研究進(jìn)展[J].中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào),2022,38(6):533-538.DOI:10.3969/j.issn.1002-2694.2022.00.073