楊貝貝 鄭小菊 韓義明

大皰性類天皰瘡屬于自身免疫性皮膚病，在65 歲以上的老年人中高發(fā)，部分年輕人及兒童也可發(fā)病，影響患者生活質(zhì)量［1］。白細(xì)胞介素-17（Interleukin -17，IL-17）及白細(xì)胞介素-23（Interleukin-23，IL-23）均由CD4+T 淋巴細(xì)胞亞群中的Th17細(xì)胞分泌而來(lái)［2］。已有較多研究發(fā)現(xiàn)IL-17、IL-23在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、過(guò)敏性鼻炎、銀屑病等慢性炎癥疾病中呈異常表達(dá)狀態(tài)［3］。近年來(lái)有研究發(fā)現(xiàn)，IL-17、IL-23 可能在大皰性類天皰瘡的發(fā)病過(guò)程中發(fā)揮至關(guān)重要的作用，可能通過(guò)多種激酶途徑，促進(jìn)炎癥細(xì)胞釋放，引發(fā)炎癥反應(yīng)，加重病情［4］。嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子（Eotaxin-2）是CC型趨化因子家族的成員，是目前發(fā)現(xiàn)的具有超強(qiáng)嗜酸性粒細(xì)胞趨化活性作用的因子，其與支氣管哮喘、變應(yīng)性鼻炎等疾病的發(fā)生密切相關(guān)［5］，但Eotaxin-2 與大皰性類天皰瘡的關(guān)系研究較為缺乏。本研究旨在探討IL-17、IL-23 及Eotaxin-2 水平檢測(cè)在大皰性類天皰瘡病情評(píng)估中的應(yīng)用，現(xiàn)將研究報(bào)告整理如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2014 年3 月至2020 年3 月于信陽(yáng)職業(yè)技術(shù)學(xué)院附屬醫(yī)院進(jìn)行治療的大皰性類天皰瘡患者的臨床資料。納入標(biāo)準(zhǔn)：①存在皮膚紅斑、水皰、皰壁厚、不易破等臨床癥狀，均經(jīng)病理組織檢查證實(shí)為大皰性類天皰瘡［6］；②納入研究前一個(gè)月內(nèi)無(wú)大劑量糖皮質(zhì)激素和/或免疫抑制劑治療史。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并嗜酸性粒細(xì)胞增多癥、哮喘、蕁麻疹者；②患有寄生蟲病、濕疹、特異性皮炎的患者；③合并腫瘤、血液病或相關(guān)性皮膚病者。

本研究最終納入104 例患者，設(shè)為觀察組：其中男49 例，女55 例；年齡32～85 歲，平均年齡（73.83±9.54）歲。選取同期在本院進(jìn)行健康體檢的健康者110 名設(shè)為對(duì)照組，男52 名，女58 名；年齡35～87 歲，平均年齡（74.25±9.84）歲。兩組一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者已簽署知情同意書。

1.2 方法

觀察組于入院后次日采集空腹肘前靜脈血5 mL，對(duì)照組于體檢當(dāng)日采集空腹肘前靜脈血5 mL，將標(biāo)本放入4℃冰箱內(nèi)進(jìn)行凝血反應(yīng)0.5 h，以3 000 r/min 離心15 min（r=10 cm），提取上層血清凍存于-80℃冰箱待測(cè)。統(tǒng)一將凍存樣品取出，預(yù)先置入4℃冰箱緩慢融化12 h，測(cè)試前0. 5 h 再將其與試劑盒一同放入室溫環(huán)境進(jìn)行溫度平衡。IL-17、IL-23 及Eotaxin-2 水平測(cè)試均應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法進(jìn)行檢測(cè)。試劑盒購(gòu)自貝克曼庫(kù)爾特商務(wù)（中國(guó)）有限公司。具體操作步驟參見試劑盒說(shuō)明書。

1.3 觀察指標(biāo)

比較各組間IL-17、IL-23 及Eotaxin-2 水平，并分析IL-17、IL-23、Eotaxin-2 水平與臨床嚴(yán)重程度評(píng)分（Autoimmune bullous skin disorder intensity score，ABSIS）［7］的相關(guān)性。由1 名皮膚科醫(yī)師對(duì)ABSIS 評(píng)分進(jìn)行評(píng)定：0～1 分，基本無(wú)活動(dòng)；2～3分，輕度活動(dòng)；4～5 分，中度活動(dòng)；6～7 分，重度活動(dòng)。根據(jù)ABSIS 評(píng)分將觀察組分為輕度40 例、中度例33 例、重度31 例。通過(guò)ROC 曲線分析IL-17、IL-23、Eotaxin-2 及三者聯(lián)合檢測(cè)對(duì)大皰性類天皰的診斷價(jià)值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料采用（±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，多組間比較采用F檢驗(yàn)；采用Pearson 直線相關(guān)分析IL-17、IL-23、Eotaxin-2 水平與ABSIS 評(píng)分的相關(guān)性；繪制ROC 曲線，計(jì)算AUC，分析IL-17、IL-23、Eotaxin-2 及三者聯(lián)合檢測(cè)對(duì)大皰性類天皰的診斷價(jià)值；以P＜0.05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組IL-17、IL-23、Eotaxin-2 水平比較

觀察組IL-17、IL-23、Eotaxin-2 水平均顯著高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組IL-17、IL-23、Eotaxin-2水平比較［（±s），（pg/mL）］Table 1 Comparison of the levels of IL-17，IL-23 and Eotaxin-2 between the two groups［（±s），（pg/mL）］

表1 兩組IL-17、IL-23、Eotaxin-2水平比較［（±s），（pg/mL）］Table 1 Comparison of the levels of IL-17，IL-23 and Eotaxin-2 between the two groups［（±s），（pg/mL）］

組別觀察組對(duì)照組t 值P 值n 104 110 IL-17 139.32±25.89 23.67±3.10 46.505＜0.001 IL-23 55.89±4.61 31.54±2.36 48.842＜0.001 Eotaxin-2 288.01±56.52 26.45±5.24 48.324＜0.001

2.2 不同病情嚴(yán)重程度的患者IL-17、IL-23、Eotaxin-2 水平比較

3 組IL-17、IL-23、Eotaxin-2 水平比較：輕度組＜中度組＜重度組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 不同病情嚴(yán)重程度的患者IL-17、IL-23、Eotaxin-2水平比較［（±s），（pg/mL）］Table 2 Comparison of IL-17，IL-23 and Eotaxin-2 levels in patients with different disease severity［（±s），（pg/mL）］

表2 不同病情嚴(yán)重程度的患者IL-17、IL-23、Eotaxin-2水平比較［（±s），（pg/mL）］Table 2 Comparison of IL-17，IL-23 and Eotaxin-2 levels in patients with different disease severity［（±s），（pg/mL）］

注：與輕度組比較，aP＜0.05；與中度組比較，bP＜0.05。

組別輕度組中度組重度組F 值P 值n 40 33 31 IL-17 122.45±19.34 146.69±23.69a 153.24±36.68ab 13.290＜0.001 IL-23 48.41±3.45 52.25±5.07a 69.45±5.62ab 189.300＜0.001 Eotaxin-2 272.48±51.23 287.74±55.69a 308.34±64.23ab 3.490 0.034

2.3 IL-17、IL-23、Eotaxin-2 水平與ABSIS 評(píng)分的相關(guān)性

經(jīng)Peɑrson直線相關(guān)分析顯示：IL-17、IL-23、Eotaxin-2 水平與ABSIS 評(píng)分均呈正相關(guān)（R=0.758，P=0.021；R=0.569，P=0.005；R=0.727，P=0.013）。見圖1。

圖1 IL-17、IL-23、Eotaxin-2 水平與ABSIS 評(píng)分的相關(guān)性分析Figure 1 Correlation analysis of IL-17，IL-23，Eotaxin-2 levels and ABSIS score

2.4 聯(lián)合IL-17、IL-23、Eotaxin-2 檢測(cè)對(duì)大皰性類天皰的診斷價(jià)值

聯(lián)合IL-17、IL-23、Eotaxin-2 靈敏度（0.923）、特異度（0.943）、AUC（0.998）均高于單一指標(biāo)檢測(cè)（P＜0.05）。見表3、圖2。

表3 聯(lián)合IL-17、IL-23、Eotaxin-2 檢測(cè)對(duì)大皰性類天皰的診斷價(jià)值分析Table 3 Analysis of the diagnostic value of combined IL-17，IL-23 and Eotaxin-2 detection for bullous pemphigoid

圖2 預(yù)測(cè)價(jià)值Figure 2 Predictive value

3 討論

大皰性類天皰瘡病理表現(xiàn)為表皮下水皰，可伴有多種炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，患者常伴有不同程度的皮膚瘙癢。對(duì)大皰性類天皰瘡患者實(shí)施有效的、早期的治療，控制患者病情，促進(jìn)預(yù)后意義重大。目前，大皰性類天皰瘡發(fā)病機(jī)制尚未明確，但有學(xué)者發(fā)現(xiàn)多種細(xì)胞因子及嗜酸性粒細(xì)胞與免疫性疾病之間的關(guān)系錯(cuò)綜復(fù)雜，T 細(xì)胞介導(dǎo)的免疫學(xué)說(shuō)參與大皰性類天皰瘡的發(fā)病機(jī)制已被證實(shí)［8］。IL-17是Th17 細(xì)胞中最重要的細(xì)胞因子之一，大多數(shù)為CD4+T 細(xì)胞分泌，但部分IL-17 也可由嗜中性粒細(xì)胞等多數(shù)固有免疫細(xì)胞產(chǎn)生，其表達(dá)于肝腎、成骨細(xì)胞等多種組織中［9］。本研究發(fā)現(xiàn)，大皰性類天皰瘡患者血清中IL-17 表達(dá)水平較高，且隨著患者病情的加重IL-17 水平逐漸升高，考慮原因?yàn)椋弘S著病情的發(fā)展，機(jī)體Th 免疫系統(tǒng)逐漸活躍，其中Th2 細(xì)胞活化、嗜酸性粒細(xì)胞聚集，促進(jìn)慢性炎癥的發(fā)生，從而導(dǎo)致IL-17 水平升高，最終促使皮損中水皰形成。

國(guó)外研究發(fā)現(xiàn)，IL-23 具有獨(dú)特的免疫調(diào)節(jié)作用，可誘導(dǎo)幼稚CD4+T 細(xì)胞新型Th 細(xì)胞分化，通過(guò)不同T 細(xì)胞亞群發(fā)揮作用，產(chǎn)生大量促炎因子IL-17，同時(shí)可通過(guò)促進(jìn)多種炎癥介質(zhì)的分泌和釋放而參與炎癥損傷［10-11］。既往研究顯示，IL-23 在急性感染早期機(jī)體細(xì)胞與微生物接觸幾小時(shí)內(nèi)便產(chǎn)生，細(xì)胞因子迅速聚集于感染病灶以控制感染，若IL-23 免疫調(diào)節(jié)功能異常，會(huì)破壞大皰性類天皰瘡患者免疫耐受功能，加重病情［12-13］。本研究中，大皰性類天皰瘡患者血清IL-23 水平較對(duì)照組明顯升高，且因病情程度不同，輕度組、中度組、重度組之間表達(dá)存在明顯差異，由此認(rèn)為，IL-23 介導(dǎo)的免疫通路可能參與了大皰性類天皰瘡致病過(guò)程，且與疾病活動(dòng)性關(guān)系密切。

程秀芳等［14］報(bào)道，Eotaxin-2 能促進(jìn)嗜酸性粒細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞黏附，Eotaxin-2 表達(dá)水平上調(diào)會(huì)使嗜酸性粒細(xì)胞快速在炎癥部位聚集，且文章中進(jìn)一步分析Eotaxin-2 與患者病情輕重的關(guān)系發(fā)現(xiàn)：Eotaxin-2 與疾病早期活動(dòng)密切相關(guān)。而本文研究數(shù)據(jù)結(jié)果顯示：觀察組Eotaxin-2 水平顯著高于對(duì)照組，且觀察組中輕度組＜中度組＜重度組，進(jìn)一步證實(shí)了上述程秀芳等學(xué)者的研究觀點(diǎn)。提示Eotaxin-2 可作為標(biāo)志性實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)來(lái)監(jiān)測(cè)大皰性類天皰瘡患者病情變化，指導(dǎo)臨床治療，以改善患者生活質(zhì)量。ABSIS 評(píng)分是評(píng)價(jià)大皰性皮膚疾病病情嚴(yán)重程度的有力工具［15］。本文研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，IL-17、IL-23、Eotaxin-2 水平與ABSIS評(píng)分呈正相關(guān)，證實(shí)三者表達(dá)水平可反應(yīng)大皰性類天皰瘡病情的嚴(yán)重程度。進(jìn)一步ROC 曲線結(jié)果 顯 示：聯(lián) 合IL-17、IL-23、Eotaxin-2 靈 敏 度（0.923）、特異度（0.943）、AUC（0.998）均高于單一指標(biāo)檢測(cè)，表明加強(qiáng)三項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)能有效診斷大皰性類天皰瘡。

綜上所述，IL-17、IL-23 及Eotaxin-2 大皰性類天皰瘡發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系密切，三者聯(lián)合檢測(cè)可為臨床診斷該疾病、判斷病情、評(píng)估預(yù)后提供更好的理論依據(jù)。