劉嘉鑫，陳小梅，曾 慧，王淑美,3,4,*，向麗敏,3,4,*

（1.廣東藥科大學(xué)中藥學(xué)院，廣東 廣州 510006；2.廣東藥科大學(xué)藥學(xué)院，廣東 廣州 510006；3.國家中醫(yī)藥管理局中藥數(shù)字化質(zhì)量評(píng)價(jià)技術(shù)重點(diǎn)研究室，廣東 廣州 510006；4.廣東中藥質(zhì)量工程技術(shù)研究中心，廣東 廣州 510006）

由于不健康的飲食及生活習(xí)慣，糖尿病已成為全球主要的公共衛(wèi)生問題[1]，患病人數(shù)逐年上升[2]。糖尿病及其并發(fā)癥的發(fā)生、發(fā)展與氧化應(yīng)激密切相關(guān)[3-5]，應(yīng)用抗氧化治療可逆轉(zhuǎn)氧化應(yīng)激對(duì)組織的損傷，從而阻止或延緩糖尿病及其并發(fā)癥的發(fā)生、發(fā)展，從天然產(chǎn)物中尋找有效的抗氧化劑將成為預(yù)防和治療糖尿病及其并發(fā)癥藥物開發(fā)的有效策略[6]。

蒲桃（Syzygium jambosL. Alston），又稱香果、響鼓等，為桃金娘科（Myrtaceae）蒲桃屬植物，在我國福建、廣東等地有栽培[7]。除了可作為熱帶水果食用外，蒲桃藥用歷史也較為悠久。據(jù)《中華本草》記載，蒲桃種子可健脾止瀉，多用于脾虛泄瀉及糖尿病的治療；現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明蒲桃不同部位均有降血糖作用，尤以種子的降糖作用最強(qiáng)[8-9]。三萜類化合物是許多具有降血糖中藥的有效成分[10-11]，具有顯著的抗氧化活性，在糖尿病防治方面具有巨大的潛力。三萜類化合物是蒲桃的主要化學(xué)成分之一[12]，也是其發(fā)揮降糖活性的有效成分之一[13]。蒲桃不同藥用部位均含有烏蘇烷型三萜[12,14-15]。但目前國內(nèi)外對(duì)蒲桃屬植物三萜成分的研究主要集中在果實(shí)和莖葉部位[12-15]，對(duì)蒲桃籽三萜的研究罕見報(bào)道。

一般來說，三萜類化合物常用的提取方法有堿水提取法、超臨界CO2提取法、超聲輔助提取法、有機(jī)溶劑提取法等[16-17]。某些皂苷含有羧基，可溶于堿水，可以采用堿水提取法提取，但是該法提取效率低[16]。超臨界CO2提取法及超聲輔助提取法提取效率高，能耗低，但對(duì)設(shè)備要求較高，提取成本高，不適合規(guī)?；a(chǎn)[17-18]。與其他提取方法相比，有機(jī)溶劑提取法具有提取周期短、操作簡便，適應(yīng)性廣的優(yōu)點(diǎn)[16]，因此本文選擇有機(jī)溶劑提取法來研究蒲桃籽三萜的提取工藝，在單因素實(shí)驗(yàn)考察甲醇體積分?jǐn)?shù)、料液比、提取時(shí)間對(duì)蒲桃籽三萜得率影響的基礎(chǔ)上，采用響應(yīng)面試驗(yàn)優(yōu)化其提取工藝，并采用DPPH 和ABTS 法評(píng)價(jià)了其體外抗氧化活性，為后續(xù)蒲桃資源的開發(fā)利用、糖尿病的防治及天然食品抗氧化劑的開發(fā)奠定了一定的理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

蒲桃籽 2019 年6 月在廣東藥科大學(xué)大學(xué)城校區(qū)的校園內(nèi)采摘，經(jīng)廣東藥科大學(xué)中藥學(xué)院向麗敏博士鑒定為蒲桃（Syzygium jambosL. Alston）；烏蘇酸對(duì)照品 純度95%，實(shí)驗(yàn)室自制；石油醚 分析純，天津市百世化工有限公司；甲醇、冰乙酸 分析純，天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司；高氯酸 分析純，廣州市安捷匯貿(mào)易有限公司；香草醛（香蘭素） 分析純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；2, 2-聯(lián)苯基-1-苦基肼基、2, 2'-聯(lián)氨-雙（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二胺鹽、抗壞血酸、過硫酸鉀 分析純，上海麥克林生化科技有限公司；5%的香蘭素-冰乙酸溶液 精密稱取香蘭素2.5 g，于50 mL 的棕量瓶，加冰乙酸定容至刻度線，搖勻即得。

DFY-200C 搖擺式高速粉碎機(jī) 溫嶺市林大機(jī)械有限公司；JM-B2002 電子天平 余姚市紀(jì)銘稱重校驗(yàn)設(shè)備有限公司；ME104 萬分之一天平 梅特勒-托利多儀器上海有限公司；HH-4 數(shù)顯恒溫水浴鍋國華電器有限公司；SB-1300 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 廣州騰朗科技儀器有限公司；SHZ-D（III）循環(huán)水式真空泵鞏義市予華有限責(zé)任公司；DLSB-5110 低溫冷卻液循環(huán)泵 鄭州長城科工貿(mào)有限公司；KQ-500DE 數(shù)控超聲清洗器 昆山市超聲儀器有限公司；UV-2600紫外可見分光光度計(jì) 島津儀器蘇州有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 蒲桃籽前處理 取適量干燥的蒲桃籽藥材粉粹，過1 號(hào)篩，得到蒲桃籽粗粉。取100 g 蒲桃籽粗粉與5 倍量石油醚于65 ℃的水浴鍋中加熱回流脫脂1 h，重復(fù)操作2 次。過濾，將脫脂后的蒲桃籽粗粉平鋪于法蘭盤中，在通風(fēng)櫥放置過夜，期間時(shí)常翻動(dòng)，待其徹底揮去石油醚后過2 號(hào)篩，所得蒲桃籽粉末保存?zhèn)溆肹19-20]。

將未脫脂蒲桃籽粗粉、脫脂蒲桃籽粗粉在50 ℃下加熱回流30 min，得到醇提物過濾，在550 nm 下測其吸光度值A(chǔ)。由于A脫脂樣品＞A未脫脂樣品，所以選擇脫脂粉末作為本實(shí)驗(yàn)的研究對(duì)象。

1.2.2 蒲桃籽三萜提取工藝 稱取0.5 g 蒲桃籽脫脂粉末，根據(jù)后續(xù)不同實(shí)驗(yàn)參數(shù)條件，加入不同體積分?jǐn)?shù)的甲醇溶液，在不同的提取溫度、時(shí)間、料液比下進(jìn)行回流提取。提取結(jié)束后室溫冷卻10 min 定容，移取上清液，過濾，即為蒲桃籽三萜類化合物提取液。

1.2.3 單因素實(shí)驗(yàn) 精密稱取0.5 g 蒲桃籽粗粉，按照設(shè)定條件進(jìn)行提取，分別考察甲醇體積分?jǐn)?shù)、提取溫度、提取時(shí)間以及料液比對(duì)蒲桃籽三萜得率的影響：固定料液比1:10 g/mL，提取溫度50 ℃，提取時(shí)間30 min 下，考察甲醇體積分?jǐn)?shù)（10%、30%、50%、70%、80%、95%）對(duì)蒲桃籽三萜得率的影響；固定料液比1:10 g/mL，甲醇體積分?jǐn)?shù)50%，提取時(shí)間30 min下，考察提取溫度（40、50、60、70、80、90 ℃）對(duì)蒲桃籽三萜得率的影響；固定料液比1:10 g/mL，甲醇體積分?jǐn)?shù)50%，提取溫度50 ℃下，考察提取時(shí)間（20、40、60、90、120 min）對(duì)蒲桃籽三萜得率的影響；固定甲醇體積分?jǐn)?shù)50%，提取溫度50 ℃，提取時(shí)間30 min 下，考察料液比（1:10、1:40、1:50、1:70、1:80 g/mL）對(duì)蒲桃籽三萜得率的影響。

1.2.4 響應(yīng)面法優(yōu)化提取工藝 上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示蒲桃籽中三萜類化合物的得率隨著溫度的升高而逐漸上升，但是由于甲醇的沸點(diǎn)為64.7 ℃，而且溫度過高會(huì)引起部分三萜類化合物結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，本實(shí)驗(yàn)將60 ℃作為最佳提取溫度（固定溫度）。

選取甲醇體積分?jǐn)?shù)（A）、提取時(shí)間（B）、料液比（C）三個(gè)因素為自變量，以蒲桃籽中三萜類化合物得率（D）為響應(yīng)值，運(yùn)用Design-Expert 12 軟件進(jìn)行三因素三水平的Box-Behnken 響應(yīng)面設(shè)計(jì)，試驗(yàn)因素水平見表1。

表1 Box-Behnken 試驗(yàn)設(shè)計(jì)因素和水平Table 1 Test factors and levels of Box-Behnken design

1.2.5 三萜類化合物含量測定 取1 mg/mL 烏蘇酸對(duì)照品溶液0.2 mL 于80 ℃下蒸干。依次加入0.3 mL 5%的香蘭素-冰乙酸溶液和1 mL 高氯酸，混勻。60 ℃恒溫加熱20 min，取出后立即置于冷水中冷卻5 min，最后加入5 mL 冰乙酸稀釋搖勻，以空白試劑（0.3 mL 5%的香蘭素-冰乙酸溶液+1 mL 高氯酸+5 mL 冰乙酸，混勻）為參比，在400～800 nm 下掃描吸收?qǐng)D譜，選擇其最大吸收峰550 nm 為檢測波長[21]。將對(duì)照品分別配制成100、200、400、600、800、1000 μg/mL，根據(jù)上述方法測得吸光度值A(chǔ)，并得到回歸方程Y=0.0011x+0.0239，R2=0.9995。

根據(jù)上述方法測得樣品吸光度值，并結(jié)合回歸方程及以下公式計(jì)算得到蒲桃籽中三萜類化合物得率W：

式中：W 表示蒲桃籽中三萜類化合物的得率，mg/g；V 表示吸取的蒲桃籽樣品溶液的體積，mL；c 表示提取液中三萜的濃度，mg/mL；D 表示稀釋倍數(shù)；m 表示粉末的重量，g。

1.2.6 抗氧化活性試驗(yàn)

1.2.6.1 DPPH 自由基清除能力的測定 取14 g 脫脂粉末，按上述試驗(yàn)所得最優(yōu)工藝提取，蒸干后得1.5 g 浸膏。配制為15、20、25、30、35、40、45 μg/mL的樣品溶液，各取20 μL，加入20 μL 0.2 mmoL/L DPPH 溶液，搖勻后避光30 min 后，以甲醇為空白對(duì)照，VC為陽性對(duì)照，在517 nm 下測定其吸光度，進(jìn)行3 次平行實(shí)驗(yàn)[18,22]。按照以下公式計(jì)算其DPPH·清除能力。

式中：D1表示樣品或陽性對(duì)照吸光度；D2表示空白對(duì)照吸光度。

1.2.6.2 ABTS+·清除能力的測定 7 mmoL/L 的ABTS溶液和2.45 mmoL/L 的過硫酸鉀溶液等體積（5 mL）混合，室溫避光條件下反應(yīng)14～16 h 制得ABTS 儲(chǔ)備液。將儲(chǔ)備液用pH 為7.4 的磷酸鹽緩沖液稀釋（約40～45 倍），直至測得其在734 nm 下吸光度為0.700±0.020。各取0.5 mL 濃度為1、5、10、15、20、25 μg/mL 的樣品溶液，加3 mL ABTS 工作液振蕩搖勻，黑暗反應(yīng)8 min，檢測其在波長734 nm 處的吸光度值A(chǔ)1，純水代替ABTS 工作液測得吸光度值A(chǔ)2，同樣用純水代替樣品溶液測得其吸光度值A(chǔ)0。以VC為陽性對(duì)照，進(jìn)行3 次平行實(shí)驗(yàn)[21,23]，按照以下公式計(jì)算其ABTS+·清除能力。

式中：A1表示樣品/陽性對(duì)照+ABTS 工作液的吸光度值；A2表示樣品/陽性對(duì)照+純水的吸光度值；A0表示純水/陽性對(duì)照+ABTS 工作液的吸光度值。

1.3 數(shù)據(jù)處理

所有試驗(yàn)平行測定3 次，取平均值。數(shù)據(jù)采用Graphpad prism 8 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)整理和繪圖。采用Design-Expert 12 軟件進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化及方差分析；P＜0.05 表示差異顯著，P＜0.01 表示差異極顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 單因素實(shí)驗(yàn)

2.1.1 甲醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)三萜得率的影響 由圖1 可知，三萜類化合物得率隨甲醇體積分?jǐn)?shù)的增加，呈現(xiàn)出先上升后下降的趨勢。甲醇體積分?jǐn)?shù)為50%時(shí)，其得率達(dá)到最大值9.90 mg/g，說明蒲桃籽三萜類成分在甲醇體積分?jǐn)?shù)為50%時(shí)溶解度最大。而甲醇體積分?jǐn)?shù)超過50%后，三萜的得率逐漸降低。一方面可能與三萜的極性有關(guān)[24]，隨著甲醇體積分?jǐn)?shù)的增加，部分三萜類化合物的溶解度下降而導(dǎo)致總?cè)祁惢衔锏牡寐式档停涣硪环矫鎰t是因?yàn)橐恍┐既苄噪s質(zhì)、脂溶性雜質(zhì)等隨之溶出[25]，與三萜類成分產(chǎn)生了競爭[26]，從而導(dǎo)致了蒲桃籽中三萜類成分的得率下降。綜上，應(yīng)選擇甲醇體積分?jǐn)?shù)為30%、50%、70%的溶劑進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化。

圖1 甲醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)三萜類化合物得率的影響Fig.1 Effect of methanol volume fraction on the yield of triterpenoids

2.1.2 提取溫度對(duì)三萜得率的影響 由圖2 可知，隨著溫度的升高，其得率逐漸上升?？赡苁怯捎陔S著溫度的升高，高分子的熱運(yùn)動(dòng)加劇，使得甲醇溶液更容易滲透、擴(kuò)散進(jìn)入藥粉組織細(xì)胞內(nèi)，而有利于三萜類化合物的提取[25]，但是超過80 ℃可能會(huì)引起部分三萜類化合物結(jié)構(gòu)的變化。且考慮到甲醇的沸點(diǎn)為64.7 ℃[27]，將60 ℃作為最佳提取條件。

圖2 提取溫度對(duì)三萜類化合物得率的影響Fig.2 Effect of extraction temperature on the yield of triterpenoids

2.1.3 提取時(shí)間對(duì)三萜得率的影響 由圖3 可知，在本試驗(yàn)條件范圍內(nèi)，提取時(shí)間對(duì)蒲桃籽中三萜類化合物的得率影響較小，總體來看得率隨時(shí)間的變化呈現(xiàn)出平緩-上升-再下降的趨勢。提取時(shí)間為90 min 時(shí)，得率達(dá)到最大值10.22 mg/g。說明在提取90 min時(shí)，蒲桃籽粉末與甲醇溶液可以充分接觸，其組織細(xì)胞基本破裂，三萜類化合物的溶出已經(jīng)達(dá)到最大的限度。而繼續(xù)延長加熱提取時(shí)間，不僅不會(huì)提高三萜類化合物的得率，反而會(huì)使某些三萜成分的穩(wěn)定性降低[25]。甚至隨著時(shí)間的延長，會(huì)有更多的雜質(zhì)產(chǎn)生，這些雜質(zhì)可能與三萜類化合物產(chǎn)生反應(yīng)，形成吸附作用或者與三萜類化合物競爭溶劑，使得三萜類化合物的得率降低[28]。綜上，應(yīng)選擇60、90、120 min 的提取時(shí)間進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化。

圖3 提取時(shí)間對(duì)三萜類化合物得率的影響Fig.3 Effect of extraction time on the yield of triterpenoids

2.1.4 料液比對(duì)三萜得率的影響 由圖4 可知，得率隨料液比的增加呈現(xiàn)出先上升后下降的趨勢。料液比達(dá)到1:40 時(shí)，蒲桃籽中三萜類化合物的得率達(dá)到了最大值11.97 mg/g?？赡苁遣煌牧弦罕葧?huì)對(duì)蒲桃籽粉末產(chǎn)生不同的細(xì)胞外滲透壓[24]，從而導(dǎo)致其細(xì)胞破裂程度不同，進(jìn)而使得三萜得率不同。當(dāng)其料液比較小時(shí)，由于其粉末與溶劑之間的濃度梯度較小，使得甲醇溶液與蒲桃籽粉末的接觸面積較少，加熱回流受限，甲醇溶液不能完全滲透擴(kuò)散進(jìn)入藥粉的組織細(xì)胞內(nèi)，從而使其三萜類化合物不能全部提出。而當(dāng)其料液比增加時(shí)，甲醇溶液與蒲桃籽粉末的接觸面積增加，三萜的得率逐漸增加；直至料液比達(dá)到1:40時(shí)，其三萜的提取達(dá)到上限飽和。此后，溶劑繼續(xù)增加，反而會(huì)形成稀釋，其甲醇溶液與蒲桃籽粉末的有效碰撞面積減少，三萜得率下降[21,26]。同時(shí)，由于其甲醇溶液增加，雜質(zhì)也隨之增加，雜質(zhì)既可能影響三萜類化合物的提取，也能吸附三萜類化合物或者與其發(fā)生反應(yīng)，使之得率降低。且料液比增大，不僅產(chǎn)生浪費(fèi)，還會(huì)對(duì)之后的富集純化等實(shí)驗(yàn)加大難度。綜上，應(yīng)選擇1:10、1:40、1:70 g/mL 的料液比進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化。

圖4 料液比對(duì)三萜類化合物得率的影響Fig.4 Effect of material-liquid ratio on the yield of triterpenoids

2.2 響應(yīng)面試驗(yàn)優(yōu)化提取工藝

2.2.1 響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì) 運(yùn)用Design-Expert 12 軟件對(duì)蒲桃籽中三萜類化合物的提取工藝進(jìn)行優(yōu)化，共產(chǎn)生17 組實(shí)驗(yàn)（包括5 組零點(diǎn)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行誤差校正），其設(shè)計(jì)結(jié)果見表2。

2.2.2 建立回歸模型及方差分析 運(yùn)用Design-Expert 12 軟件對(duì)表2 的數(shù)據(jù)進(jìn)行二次多項(xiàng)式回歸擬合，并進(jìn)行方差分析，結(jié)果見表3。得到二次多項(xiàng)回歸方程為（A：甲醇體積分?jǐn)?shù)；B：提取時(shí)間；C：料液比；D：得率；以下均同）：

表2 Box-Behnken 試驗(yàn)設(shè)計(jì)和結(jié)果Table 2 Box-Behnken experimental design and results

表3 回歸方程方差分析Table 3 Analysis of variance of regression equation

其中，模型的決定系數(shù)R2=0.9717，表明模型擬合情況良好，試驗(yàn)因素與得率之間的關(guān)系較為明顯，蒲桃籽中三萜類化合物的得率的變化中，97.17%來自于試驗(yàn)因素[25]。因此，此模型可以很好地解釋得率與三個(gè)因素的關(guān)系。調(diào)整系數(shù)R2Adj=93.53%，表明此模型誤差較小，能很好地解釋93.53%的得率的變化，可以用模型來代替實(shí)際值，所以此模型可以進(jìn)行蒲桃籽中三萜類化合物提取的工藝優(yōu)化[25-26]。變異系數(shù)CV（%）代表試驗(yàn)結(jié)果的精度，其CV 值越小，實(shí)驗(yàn)結(jié)果越可靠[26]。本模型的CV（%）=3.66%，重現(xiàn)性較好，可以用于蒲桃籽中三萜類化合物提取的工藝預(yù)測與優(yōu)化。

由表3 可知，模型P=0.0001，＜0.01，差異極顯著，說明實(shí)驗(yàn)方法可靠。失擬項(xiàng)P=0.1351，＞0.05，差異不顯著，說明本數(shù)據(jù)模型擬合良好，預(yù)測值與真實(shí)值之間的偏差較小[26]，模型可以用來描述各因素與得率之間的關(guān)系。

因素C（料液比）P＜0.01，差異極顯著，說明料液比對(duì)蒲桃籽中三萜類化合物的得率有極顯著的影響；而A（甲醇體積分?jǐn)?shù)）和B（提取時(shí)間）P＞0.05，無顯著性，說明二者對(duì)蒲桃籽三萜得率的影響不顯著。試驗(yàn)因素的F值越大，說明其對(duì)響應(yīng)值得率的影響越大[25]。因此，影響蒲桃籽中三萜類化合物得率的因素由大到小是：C＞A＞B，即料液比＞甲醇體積分?jǐn)?shù)＞提取時(shí)間。交互項(xiàng)AB、AC、BC 均不顯著（P＞0.05），說明這些因素之間的內(nèi)在聯(lián)系不大。A2、C2的P＜0.01，差異極顯著。

2.2.3 模型診斷 擬合得到的模型可以通過殘差分析來進(jìn)行診斷。這種方法主要是建立在模型無法完全解釋的變異基礎(chǔ)上，通過圖形來診斷的。在診斷過程中，有兩個(gè)判斷極其重要，即殘差方差齊性與正態(tài)分布。首先判斷殘差方差齊性，若預(yù)測值的內(nèi)部t化殘差呈隨機(jī)分布，則其殘差方差齊性符合要求。由圖5（a）可以看出，其呈散點(diǎn)分布，符合要求。其次判斷正態(tài)分布，若殘差呈正態(tài)分布，則其擬合的曲線呈線性。由圖5（b）可以看出，其殘差呈正態(tài)分布。因此，可以診斷得出本試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)值與實(shí)際值偏差較小，擬合的模型有價(jià)值[29]。

圖5 模型診斷工具圖Fig.5 Diagnostic tool diagram of the model

2.2.4 工藝優(yōu)化 運(yùn)用Design-Expert 12 軟件得到蒲桃籽中三萜類化合物的最佳提取工藝是：甲醇體積分?jǐn)?shù)44.30%、料液比1:47.18、提取時(shí)間101.07 min（實(shí)驗(yàn)時(shí)調(diào)整為101 min），此條件下的理論得率為12.28 mg/g。

根據(jù)以上條件進(jìn)行三組平行實(shí)驗(yàn)提取蒲桃籽中的三萜類化合物，得到的平均濃度為256.76 μg/mL，得率為12.11 mg/g，其RSD（%）為0.82%，實(shí)際的得率與理論得率之間的偏差僅為1.26%（＜5%），偏差較小，說明用此方法優(yōu)化后的蒲桃籽中三萜類化合物的提取工藝可行。

2.3 抗氧化活性試驗(yàn)

2.3.1 DPPH 自由基清除能力的測定結(jié)果 由圖6可見，蒲桃籽中三萜類化合物對(duì)DPPH·的清除能力與三萜類化合物濃度有一定的量效關(guān)系，IC50值為24.93 μg/mL。在15～30 μg/mL 的濃度范圍內(nèi)，隨著蒲桃籽中三萜類化合物濃度的增大，其對(duì)DPPH 自由基的清除能力增強(qiáng)，且各濃度間清除能力具有顯著差異（P＜0.05），當(dāng)蒲桃籽中三萜類化合物濃度為30 μg/mL 時(shí)，DPPH·清除率為83.90%，清除能力顯著，與VC相近。

圖6 蒲桃籽總?cè)啤C 的DPPH·清除能力測定結(jié)果Fig.6 Results of DPPH scavenging ability of total triterpenoids in the seeds of S. jambos L. Alston and VC

2.3.2 ABTS+·清除能力的測定結(jié)果 由圖7 可見，蒲桃籽中三萜類化合物對(duì)ABTS+·的清除率呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系，IC50值為12.16 μg/mL。在1～25 μg/mL的濃度范圍內(nèi)，隨著蒲桃籽中三萜類化合物濃度的增大，其對(duì)ABTS+·的清除能力增強(qiáng)，且各濃度間清除能力具有顯著差異（P＜0.05），當(dāng)蒲桃籽中三萜類化合物濃度為25 μg/mL 時(shí)，清除能力達(dá)到91.29%，略低于VC，表現(xiàn)出很強(qiáng)的清除能力。與上述三萜類化合物對(duì)DPPH·清除能力相比，其對(duì)ABTS+·的清除能力更強(qiáng)，這可能是由于三萜類化合物具有較高的供氫能力，結(jié)果與靈芝三萜類化合物類似[30]。

圖7 蒲桃籽總?cè)啤C 的ABTS+·清除能力測定結(jié)果Fig.7 Results of ABTS+· scavenging ability of total triterpenoids in the seeds of S. jambos L. Alston and VC

從上述結(jié)果可以看出蒲桃籽中三萜類化合物對(duì)不同的自由基（DPPH·、ABTS+·）均有較強(qiáng)的清除能力，與VC相近或略低，抗氧化活性強(qiáng)，可以作為潛在的抗氧化劑。

3 結(jié)論

本研究以蒲桃籽為原料，通過響應(yīng)面優(yōu)化得到蒲桃籽中三萜類化合物的最優(yōu)提取工藝為：甲醇體積分?jǐn)?shù)44.30%、料液比1:47.18 mg/L、提取時(shí)間101 min。在該工藝下，實(shí)際得率（12.11 mg/g）與理論得率（12.28 mg/g）之間的偏差僅為1.26%（＜5%）。且蒲桃籽中三萜類化合物具有較強(qiáng)的DPPH·、ABTS+·清除能力（與VC相近或略低），IC50值分別是為24.93、12.16 μg/mL，抗氧化活性較強(qiáng)。本研究為今后蒲桃資源的綜合開發(fā)利用奠定了基礎(chǔ)，也為其日后作為天然糖尿病防治資源或者食品天然抗氧化劑等提供了數(shù)據(jù)支撐。