楊幸怡，方博，徐際超，鐘利倫，張翼，劉超

1.廣州市刑事科學(xué)技術(shù)研究所，廣東 廣州 510080；2.廣州市公安局海珠區(qū)分局，廣東 廣州510630

1 案 例

1.1 簡(jiǎn)要案情

2002 年某日，易某（女性）在其租屋內(nèi)被鈍物打擊頭部導(dǎo)致重型顱腦損傷死亡。尸體頭部北側(cè)有一水泥方磚，大小為15 cm×15 cm×15 cm。該水泥方磚上可見(jiàn)明顯血跡，曾多次對(duì)其進(jìn)行DNA 檢驗(yàn)，但未發(fā)現(xiàn)除死者外其他個(gè)體DNA 分型。2020 年，辦案單位送檢該水泥方磚，要求對(duì)其再次進(jìn)行DNA 檢驗(yàn)。

1.2 檢驗(yàn)方法

1.2.1 潛在手印顯現(xiàn)

采用新鮮配制的茚二酮作為生物發(fā)光液[1]對(duì)方磚6個(gè)面進(jìn)行全方位噴灑，等待4 h后，采用波長(zhǎng)532 nm綠光進(jìn)行照射，在橙色濾光片下觀察。對(duì)磚塊上帶有熒光的位置用馬克筆進(jìn)行圈畫(huà)、拍照。在激發(fā)光源下發(fā)現(xiàn)方磚表面類(lèi)似手印的熒光3處，分別編號(hào)位置1～3。

1.2.2 DNA 提取

對(duì)方磚上圈畫(huà)的3 處潛在手印，分別位于3 個(gè)不同面上的鄰邊處，采用自制棉簽用干濕兩步法擦拭。編號(hào)位置1 用3 支棉簽分區(qū)擦拭，編號(hào)位置2、3 分別用1 支棉簽擦拭。擦拭棉簽分別編號(hào)1～5，剪取棉簽用Maxwell?FSC Cartridge 磁珠法提取[2]。

1.2.3 擴(kuò)增及電泳

使用PowerPlex?21 試劑盒（美國(guó)Promega 公司）進(jìn)行PCR擴(kuò)增，10 μL體系（含6 μL模板），擴(kuò)增30個(gè)循環(huán)。同時(shí)采用Yfiler?Plus PCR 擴(kuò)增試劑盒（美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司）進(jìn)行擴(kuò)增，10 μL體系（含4 μL模板），擴(kuò)增30 個(gè)循環(huán)。上述擴(kuò)增產(chǎn)物均使用3500xL 基因分析儀（美國(guó)Applied Biosystems 公司）進(jìn)行電泳檢測(cè)，進(jìn)樣時(shí)間選擇12 s，GeneMapper?ID-X1.4 軟件（美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司）進(jìn)行STR分型。

1.3 檢驗(yàn)結(jié)果

方磚擦拭棉簽1、2 檢出混合STR 分型，包含死者和嫌疑人1～4 個(gè)STR 分型，擦拭棉簽3～5 檢出死者STR 分型（附表1）。擦拭棉簽1、2 檢出25 個(gè)Y-STR基因座分型，且與嫌疑人Y-STR 分型相同，方磚擦拭棉簽3、4 檢出部分Y-STR 基因座分型（附表2），檢出的部分基因座與嫌疑人Y-STR 分型相同。方磚擦拭棉簽5 未檢出Y-STR 分型結(jié)果。

1.4 鑒定意見(jiàn)

方磚擦拭棉簽1、2 檢出混合STR 分型，包括男性嫌疑人和女性死者分型。

方磚擦拭棉簽1、2 檢出25 個(gè)Y-STR 分型與男性嫌疑人Y-STR 分型相同，不排除二者來(lái)源于同一父系。

2 討論

近年來(lái)，隨著對(duì)痕跡、生物物證技術(shù)聯(lián)合應(yīng)用的認(rèn)識(shí)不斷增強(qiáng)，對(duì)噴顯后的指印進(jìn)行脫落細(xì)胞STR 分型檢驗(yàn)，可獲得更多對(duì)破案有價(jià)值的證據(jù)信息。有研究[1]表明，茚二酮顯現(xiàn)手印技術(shù)的優(yōu)勢(shì)在于茚二酮本身屬于熒光試劑，與汗液中氨基酸反應(yīng)的靈敏度更高，在多波段光源（綠光）的照射下產(chǎn)生很強(qiáng)的橙色熒光，可以減少背景干擾，是一種可以替代傳統(tǒng)方法、較為理想的手印顯現(xiàn)試劑。本案法醫(yī)學(xué)鑒定死因?yàn)殁g器打擊頭部導(dǎo)致重型顱腦損傷，作案兇器為現(xiàn)場(chǎng)死者頭部旁的水泥方磚，作案工具明確。18 年來(lái)，在歷次命案?jìng)善茖?zhuān)項(xiàng)行動(dòng)中多次進(jìn)行DNA 檢驗(yàn)，均沒(méi)有獲得嫌疑人的有效基因型。分析原因?yàn)樗喾酱u上有大量死者的血液，且無(wú)法確定嫌疑人持握水泥磚塊的確切位置，靠隨意擦拭獲取嫌疑人可能留下的脫落細(xì)胞極為困難。本次檢驗(yàn)全面分析嫌疑人可能接觸部位、通過(guò)新配茚二酮生物顯現(xiàn)試劑，避開(kāi)血液的干擾，使18 年前留下的手印成功顯現(xiàn)。盡管手印不具備比對(duì)條件，但精準(zhǔn)指引了物證提取部位，再通過(guò)分區(qū)擦拭富集脫落細(xì)胞，最大程度提高嫌疑人脫落細(xì)胞的獲得率。檢出25 個(gè)Y-STR 基因座分型與嫌疑人相同，應(yīng)用混合樣本DNA 拆分法分析，檢出的21 個(gè)常染色體STR 基因座符合嫌疑人與死者混合基因型。

Y-STR 在男女混合樣本中鑒定有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)[2]。在男女混合斑中，當(dāng)男女性DNA 比例高達(dá)1∶1 000 時(shí)仍能獲得男性Y-STR 分型，但做常染色體STR 檢測(cè)卻只能檢出女方單一分型。由于絕大多數(shù)Y-STR 基因座分型為一條帶，Y-STR 分型結(jié)果還可判斷檢材包含男性個(gè)體的數(shù)目[3]。本次檢驗(yàn)5 份手印擦拭棉簽，其中2 份檢出全部Y-STR 分型，2 份檢出部分YSTR 分型。物證上檢出的Y-STR 分型來(lái)源單一，所有Y-STR 分型與嫌疑人Y-STR 分型一致，提示常染色體混合STR 分型來(lái)源于同一男性個(gè)體，對(duì)混合基因型拆分有價(jià)值[4]。當(dāng)年的現(xiàn)場(chǎng)照片顯示方磚上沾染了大量女性死者血跡，導(dǎo)致男性嫌疑人成分比例偏低，PCR 呈現(xiàn)優(yōu)勢(shì)擴(kuò)增，所以本次檢驗(yàn)僅其中2 支擦拭棉簽檢出女性死者與男性嫌疑人常染色體混合STR 分型，其余3 支只檢出女性死者STR 分型。

本案通過(guò)綜合分析現(xiàn)場(chǎng)檢材所有圖譜，判斷混合檢材組分、推測(cè)出潛在的個(gè)體基因型組合。在分析混合檢材來(lái)源時(shí)，有1～4 個(gè)STR 分型，與已知的個(gè)體基因分型比較，確定了混合成分中嫌疑人常染色體STR分型，且入庫(kù)比中嫌疑人，為破案提供了關(guān)鍵線索及證據(jù)。