馮曉天，王時(shí)偉，許非帆，何良軍

（塔里木大學(xué) 動(dòng)物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，新疆 阿拉爾 843300）

驢性情溫馴，耐粗飼，適應(yīng)性強(qiáng)，抗病力強(qiáng)，且易于管理。目前人們逐漸意識(shí)到了驢產(chǎn)品的營養(yǎng)價(jià)值。國內(nèi)外市場(chǎng)上對(duì)驢肉、驢皮、驢乳的需求越來越火爆［1-3］，導(dǎo)致驢的屠宰量越來越大，驢存欄量卻不斷下降［4］。

直腸B超作為一種安全、迅速、準(zhǔn)確、直觀的技術(shù)被廣泛應(yīng)用于動(dòng)物繁殖中。妊娠檢查通常也是驢規(guī)模化養(yǎng)殖場(chǎng)工作人員重要的工作內(nèi)容之一，直腸檢查和超聲波檢查是目前馬屬動(dòng)物常用的妊娠檢查手段，直腸檢查一般需在配種60 d后進(jìn)行；超聲檢查準(zhǔn)確率較高［5］，確診時(shí)間較晚。同時(shí)，由于經(jīng)濟(jì)和技術(shù)水平的影響，我國獸用B超并沒有在規(guī)?；H場(chǎng)普遍應(yīng)用，也缺少相關(guān)專業(yè)人技術(shù)人員，對(duì)該方面診斷技術(shù)的研究也開展得比較少，尤其是在驢繁殖方面。通過B超檢查能夠有效判斷母驢是否妊娠及準(zhǔn)確的妊娠時(shí)間、是否患有子宮疾病等情況，從而及時(shí)進(jìn)行治療或者淘汰，以便于母驢科學(xué)化養(yǎng)殖管理，進(jìn)一步提高母驢的繁殖效率和飼養(yǎng)效益［6-9］。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

5歲疆岳驢母驢2頭，來源于塔里木大學(xué)動(dòng)物科學(xué)與技術(shù)試驗(yàn)站。兩頭驢體高分別為125，130 cm，體質(zhì)健康，營養(yǎng)狀況良好，通過人工授精（具體步驟參考文獻(xiàn)［10］）使母驢妊娠，采用直腸檢查判斷母驢的排卵時(shí)間。一頭母驢排卵日期約為2021年9月1日，分娩時(shí)間為2022年8月12日；另一頭排卵日期約為2021年8月25日，分娩時(shí)間為2022年8月6日。

1.2 主要儀器、設(shè)備

RKU10型全數(shù)字B型超聲診斷儀（獸用），徐州市凱信電子設(shè)備有限公司制造，采用6.5 MHz直腸線性探頭。

1.3 檢查方法

與直腸檢查方法類似，將直腸探頭送入直腸至盆骨口，向下呈45°～90°，從子宮體分別向兩側(cè)子宮角滑行檢查，緩慢移動(dòng)并不斷調(diào)整角度觀察，探查到有清楚的圖像為止。用手將B超放在母驢子宮上照射，對(duì)兩側(cè)子宮角和子宮全部進(jìn)行掃描，觀察B超影像中的妊娠特征。第一、二階段每3 d檢查一次，第三階段每7 d一次，第四階段每10 d一次。

2 結(jié)果與分析

2.1 第一階段胚胎直徑變化

母驢排卵后第14天，B超檢查結(jié)果顯示2頭母驢均懷孕。排卵日記為第0天。從排卵后第14天開始，每3 d用B超觀測(cè)胚胎的變化。妊娠母驢早期子宮超聲圖像寬度見表1，14～63 d胚胎B超圖像見圖1。

測(cè)量長(zhǎng)度用兩點(diǎn)直線法，子宮體橫斷面距離代表子宮體寬度，如圖1C中的a、b。由于檢查時(shí)圖像常常不規(guī)則，寬度是在B超顯示器上顯示，利用B超儀本身的標(biāo)尺對(duì)待測(cè)圖像縱向最長(zhǎng)距離進(jìn)行測(cè)量（B超圖片中可以看見測(cè)量部位和距離）。

由表1、圖1可以看出胚胎14～63 d的變化。在第14天（13～15 d）首次檢測(cè)到胚胎囊泡，1，2號(hào)母驢分別為26.3，24.4 mm，并且在第15.5天（14～17 d）胚胎囊泡固定之前是可移動(dòng)的。在14～17 d，囊泡呈球形，平均生長(zhǎng)速率為3.74 mm／d。17～23 d，囊泡呈三角型，平均生長(zhǎng)速率為0.72 mm／d，然后以中等速率1.83 mm／d生長(zhǎng)到第53天。在第21.5天（20～23 d）檢查到胚胎，胚胎總是位于卵黃囊的腹側(cè)，第24.5天（23～26 d）形成尿囊，并于第35.5天完成（32～38 d），在第36.5天（35～38 d）形成臍帶。之后胚胎開始下降，在第42.5天完成（41～45 d）。在53～62 d子宮的生長(zhǎng)速率繼續(xù)提高，達(dá)到8.09 mm／d。

表1 妊娠母驢第一階段子宮超聲圖像寬度Tab.1 W idth of early uterine u ltrasound images of 2 pregnant female donkeys mm

妊娠囊是超聲首先觀察到的妊娠標(biāo)志。妊娠最初的圖像表現(xiàn)為在增厚的子宮內(nèi)見到一個(gè)無回聲結(jié)構(gòu)，即妊娠囊。在14～17 d妊娠囊檢測(cè)到的形狀為圓形，圖1A、圖1B代表第14，17天的卵黃囊，其直徑分別為26.3，30.0 mm。20～23 d，圖1C、圖1D形狀進(jìn)一步發(fā)生改變，圓形的孕體囊（妊娠囊）進(jìn)一步發(fā)育，形狀從圓形或橢圓形變成不規(guī)則的三角形。這時(shí)由于孕體背部子宮壁增生，壓迫孕囊，導(dǎo)致孕體囊呈三角形，孕體囊呈三角形時(shí)腔囊內(nèi)可以隱約在囊泡底部看到胚胎，隨后胚胎逐漸變大，并且始終位于卵黃囊的腹側(cè)半球。卵黃囊的特點(diǎn)是一個(gè)亮回聲環(huán)狀結(jié)構(gòu)，中間為無聲回聲區(qū)，位于妊娠囊內(nèi)。圖1的D～I(xiàn)小圖代表尿囊變化的過程，尿囊大約在第24.5天（23～26 d）可以觀察到，并于第35.5天完成（32～38 d），圖1I表示的是在第36.5天（35～38 d）臍帶（u）形成后的圖像（第39天）。在尿囊發(fā)育的同時(shí)，胚胎本身從腹側(cè)遷移到胚胎囊泡的背極，開始腹側(cè)下降，同時(shí)也是臍帶形成的開始。圖1K表示胚胎（e）位置靠近腹面的底部，臍帶（u）明顯。圖1的L～Q小圖表示胚胎（e）進(jìn)一步發(fā)育，發(fā)生遷移。所有這些方面的發(fā)展特征都與母馬類似。

平均而言，在第14天左右可以檢查到妊娠囊，最大直徑為30 mm，檢測(cè)到的形狀為圓形，由于子宮張力的原因，在16～19 d時(shí)形狀會(huì)進(jìn)一步發(fā)生改變。在第21天左右，圓形的孕體囊（妊娠囊）進(jìn)一步發(fā)育，形狀會(huì)從圓形或橢圓形變成不規(guī)則的三角形。尿囊大約在第24天左右可以觀察到，在第36天左右完成，在尿囊發(fā)育的同時(shí)胚胎本身從腹側(cè)遷移到胚胎囊泡的背極。在第39天左右卵黃囊?guī)缀跬嘶?，在?0天左右胚胎到達(dá)腹側(cè)，60 d后胚胎發(fā)生遷移。

2.2 第二階段胚胎變化

母驢胚胎66～99 d胚胎變化見圖2。

圖2 妊娠母驢69～99 d子宮B超圖像Fig.2 B-ultrasound images of uterus on days 69-99 of pregnancy

在第60天后胚胎緩慢正常發(fā)育，胚胎開始從骨盆腔向著腹腔移動(dòng)，在第69天左右每3 d 1次的B超檢查往往觀察不到胎兒影像，胎兒只能偶爾出現(xiàn)。從圖2A和圖2C可以看出，B超只能掃描出子宮上部，子宮底部的少部分區(qū)域沒在B超影像中顯示。為此對(duì)觀察到次數(shù)與未觀察到次數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，結(jié)果見表2。在檢查過程中，2只母驢此階段的發(fā)育進(jìn)行時(shí)間長(zhǎng)度不一樣，其中1號(hào)驢此階段持續(xù)28 d，2號(hào)驢持續(xù)31 d。由于胎兒在子宮底部運(yùn)動(dòng)，有時(shí)能夠進(jìn)入B超的觀測(cè)視野。由表2可以了解到，2號(hào)驢未觀察到次數(shù)是14次，1，2號(hào)驢觀察到的次數(shù)相差不大，約是未觀察到次數(shù)的1／2。母驢妊娠B超圖像常常觀察不到胎兒的時(shí)間持續(xù)30 d左右。當(dāng)可以連續(xù)觀察到胎兒影像后，在第100天以后選擇每7 d進(jìn)行一次B超檢查。

表2 母驢妊娠第二階段胚胎觀察次數(shù)統(tǒng)計(jì)Tab.2 Embryo observation times at stage 2 of pregnancy

2號(hào)驢在90 d后通過B超檢查，可以明顯觀察到一些顯著的特征，為說明顯著特征，選擇肋骨、頭部、眼部，臍帶、羊膜、脊椎等明顯的B超影像。

2.3 第三階段胚胎變化

母驢妊娠第二、三階段胚胎特征見圖3。

圖3 母驢妊娠第二、三階段胚胎特征Fig.3 Embryologic characterization at stage 2 and stage 3 of pregnancy

在第60天后胚胎發(fā)育緩慢，子宮開始從骨盆腔向著腹腔移動(dòng)，從第100天開始，到第190天結(jié)束，大約持續(xù)90 d。此時(shí)期由于子宮擴(kuò)張，整個(gè)子宮充滿液體，胎兒附著的子宮角體積急劇增大，隨著子宮生長(zhǎng)，部分子宮角進(jìn)入腹腔。在這個(gè)階段，胎兒處于子宮角底部，B超圖像顯示，子宮角上部液體為黑色，無超聲反射物。在子宮角的底部有灰色陰影，表面這里有一些超聲反射物。

B超由于頻率原因無法明顯觀察到影像，第75天時(shí)胎兒在子宮壁的底部，運(yùn)動(dòng)范圍小，胎兒這個(gè)期間子宮緩慢移向腹腔底部，B超檢查時(shí)探測(cè)深度不強(qiáng)，無法看到胎兒圖像，如圖2C。待子宮完全進(jìn)入腹腔底部，直腸檢查時(shí)可以感覺到子宮內(nèi)胎兒的頭部。

2.4 第四階段胚胎變化特征

見圖4。

圖4 母驢妊娠第四階段胚胎特征Fig.4 Embryonic characteristics at stage 4 of pregnancy

從子宮完全進(jìn)入腹腔底部開始到母驢分娩結(jié)束，大約持續(xù)150 d。胎兒在子宮內(nèi)繼續(xù)發(fā)育生長(zhǎng)，母驢腹部緩慢增大，在第250天左右胎兒的蹄部會(huì)在骨盆腔出現(xiàn)，直腸檢查時(shí)可以清楚感受到胎兒的前肢。待胎兒進(jìn)入骨盆腔，對(duì)母驢進(jìn)行直腸20 cm檢查時(shí)輕輕向下觸摸就可以感受到胎兒的頭部和前肢，也會(huì)明顯感受到胎動(dòng)。

3 討論

目前在我國，獸用B超妊娠檢查多用于牛、羊、豬等且技術(shù)較為成熟。2020年，陳童等［11］采用B超儀對(duì)羊進(jìn)行妊娠檢查，妊娠羊在（20～25 d）可以探查到子宮內(nèi)的胚囊，30 d以后胚囊、胎體、胎心都較為明顯，妊娠40～60 d容易觀察到子葉結(jié)構(gòu)。同時(shí)也能通過B超檢查判斷羊是否患有子宮積液和子宮蓄膿等常見的子宮疾病，這對(duì)提高羊繁殖效率具有重要意義。賈國慧等［12］采用B超儀檢查奶牛早期胚胎的大小、子宮變化等，同時(shí)對(duì)奶牛妊娠診斷B超假象經(jīng)典圖例做出了較為詳細(xì)的介紹，為奶牛的生產(chǎn)實(shí)踐過程提供了借鑒。2014年意大利學(xué)者首次利用超聲研究觀測(cè)驢胚胎和胎盤在整個(gè)妊娠期的正常生長(zhǎng)和發(fā)育，共測(cè)7頭阿米塔驢，首次觀察到胚胎，并對(duì)眼眶和主動(dòng)脈直徑進(jìn)行了測(cè)定［13］。多數(shù)母驢在排卵后第11天若成功妊娠就可以觀察到胚胎囊泡；但一般不建議過早進(jìn)行檢查，以防操作不當(dāng)造成流產(chǎn)。檢測(cè)到胚胎的概率隨著第11天囊泡直徑的增加而增加，在母馬的另一項(xiàng)研究中，首次發(fā)現(xiàn)胚胎囊泡的時(shí)間從第11天到第14天不等［14］。在母馬早期妊娠診斷上已證明，在妊娠第16天前胚胎囊泡具有很強(qiáng)的流動(dòng)性，這種宮內(nèi)運(yùn)動(dòng)可以增強(qiáng)子宮內(nèi)膜和胚胎之間的代謝交換［3］，這似乎是維持母馬妊娠所必需的，但在母驢上的研究尚未得到類似的結(jié)果。本次觀測(cè)中在第15.5天（14～17 d）檢測(cè)到囊泡減少流動(dòng)，附著在子宮角，而母馬子宮中同樣情況通常發(fā)生在15～17 d［14］，母馬在極少數(shù)情況下在第13天就會(huì)發(fā)生固定，膀胱直徑和最大子宮張力的增加可能是固定的重要因素，從而阻止了囊泡的持續(xù)運(yùn)動(dòng)。

胚胎囊泡在早期生長(zhǎng)速率非常迅速，在15.5天（14～17 d）胚胎囊泡固定之前，平均生長(zhǎng)速率為3.74 mm／d；17～23 d平均生長(zhǎng)速率為0.72 mm／d，相對(duì)緩慢；然后以中等速率1.83 mm／d生長(zhǎng)到第53天。這與C.Meira等［15］的研究結(jié)果基本相似。母馬妊娠第15.6天，囊泡呈球形，16～18 d囊泡呈橢圓形，第28天囊泡變得不規(guī)則。本研究中，母驢妊娠14～17 d囊泡呈球形，17～23 d囊泡呈三角形，第28天囊泡變得不規(guī)則，這與母馬妊娠情況類似。

驢胚胎從腹側(cè)到胚胎囊泡背極的上升發(fā)生在妊娠23～38 d，并且總是與尿囊的發(fā)育和卵黃囊的消退有關(guān)，與在母馬上的報(bào)道［16］基本一致。隨后胎兒下降到囊泡腹側(cè)極（約在第42.5天完成）與臍帶的形成相關(guān)，平均在排卵后36.5～42.5 d發(fā)生。以上這些妊娠發(fā)育方面的變化都類似于母驢［17］和母馬［16］以前的報(bào)道。

母驢妊娠常常有一段時(shí)間不能通過B超檢查到胚胎，在妊娠第一階段的后期可以看到，胎兒位于子宮的底部，因?yàn)锽超沒有顯示子宮底部，所以觀測(cè)不到胎兒。這個(gè)階段偶爾可見胎兒，并且觀測(cè)到的胎兒都位于子宮底部，還在不停運(yùn)動(dòng)。猜測(cè)胎兒此時(shí)期從子宮底部的B超盲區(qū)進(jìn)入了B超的可視范圍。由于胎兒的運(yùn)動(dòng)，同一天觀察同一只驢也會(huì)存在觀察到和觀察不到圖像的情況；同時(shí)兩只母驢第二階段的持續(xù)時(shí)間不一樣長(zhǎng)，并且由于個(gè)體差異，導(dǎo)致觀察次數(shù)不一致。另一個(gè)原因是本研究使用的B超探頭頻率為6.5 MHz，穿透力較低，超出探測(cè)極限，無法觀察到胚胎；而且胚胎圖像容易與子宮積液或者蓄膿混淆，易造成誤判。賈國慧等［12］認(rèn)為，奶牛妊娠期部分圖像出現(xiàn)許多不規(guī)則黑色暗區(qū)或暗區(qū)，內(nèi)有散在等回聲光點(diǎn)（光斑），暗區(qū)也位于子宮角。導(dǎo)致此現(xiàn)象出現(xiàn)的原因主要是奶牛子宮炎或者是奶牛子宮積水，還有部分假象圖主要是擠壓空腔或者血管形成。孫學(xué)良［18］對(duì)患子宮疾病的母驢進(jìn)行B超檢查發(fā)現(xiàn)，子宮積液變成了無規(guī)則液性結(jié)構(gòu)。鄭艷玲等［19］也認(rèn)為，通過B超診斷驢子宮積液時(shí)可見子宮角內(nèi)有斑點(diǎn)狀不規(guī)則強(qiáng)回聲。因此，用B超儀檢查時(shí)需要辨別此時(shí)期子宮積液與妊娠的區(qū)別。首先從大小上進(jìn)行分辨，通過B超檢查此時(shí)子宮寬度有110.0 mm左右，子宮積液常常比子宮寬度小。其次，通過B超檢查液性暗區(qū)是圓形或近圓形強(qiáng)回聲區(qū)（一般為純黑色），在暗區(qū)周圍有白亮的環(huán)形，子宮積液是無規(guī)則回聲結(jié)構(gòu)，上下無回聲亮點(diǎn)。妊娠時(shí)只有孕側(cè)子宮角變大，另一側(cè)子宮角不會(huì)發(fā)生改變，母驢患有子宮積液時(shí)在兩側(cè)子宮角都會(huì)感覺有液體存在且大小不變。