李余先 張俊國

（1.吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院中藥學(xué)學(xué)院 吉林 132101 2.吉林省白山本苜藥業(yè)有限公司 長春 130600）

1 實(shí)驗(yàn)儀器及材料

1.1 試驗(yàn)材料

防風(fēng)（河北福君堂藥業(yè)有限公司）、蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品、5-O-甲基維斯阿米醇苷標(biāo)準(zhǔn)品、升麻素苷標(biāo)準(zhǔn)品、升麻素標(biāo)準(zhǔn)品、補(bǔ)骨脂素標(biāo)準(zhǔn)品、（標(biāo)準(zhǔn)品均為上海源葉生物科技有限公司）。

1.2 試驗(yàn)儀器

炒藥機(jī)（南京海善制藥設(shè)備有限公司）、2H-200A型手提式粉碎機(jī)（西安寶正實(shí)業(yè)有限公司）、SB-5200DT型超聲波清洗機(jī)（寧波新藝超聲設(shè)備有限公司）、J-HH-6A型精密數(shù)顯恒溫水浴鍋（上海皓莊儀器有限公司）、AUW120D分析天平（日本島津）、高效液相儀器（日本島津）、SHB-IV型循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長城科工貿(mào)有限公司）、N-1100型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海愛朗儀器有限公司）、OSB-2100型水浴鍋（上海愛朗儀器有限公司）、SB-5200DT型超聲波清洗機(jī)、（寧波新藝超聲設(shè)備有限公司）、TS100恒溫振動儀（杭州瑞誠儀器有限公司）

2 方法與結(jié)果

2.1 焦防風(fēng)炮制工藝優(yōu)化研究

2.1.1 焦防風(fēng)的制備

將凈選或切制后的防風(fēng)飲片，置炒制容器中，用中火或武火加熱，炒至藥物表面呈焦黃色或焦褐色，內(nèi)部顏色加深，并伴有焦香氣味。

2.1.2 HPLC法測定防風(fēng)樣品中麻素苷、升麻素、5-O-甲基維斯阿米醇苷）、補(bǔ)骨脂素的含量

2.1.2.1 色譜條件確立：色譜柱為Diamonsil C18柱（4.6mm×250 mm，5μm），流動相為乙腈-水（15∶85），檢測波長為254nm，流速為1.0mL/mim。

2.1.2.2 對照品溶液制備：用微量分析天平精密稱定0.99mg升麻素、0.72mg5-O-甲基維斯阿米醇苷、0.91mg升麻素苷、0.90mg補(bǔ)骨脂素，混合加入1mL的色譜甲醇制成每1mL含有3.52mg物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.1.2.3 樣品溶液處理：用分析天平分別精密稱定0.2500g生品防風(fēng)、焦防風(fēng)的細(xì)粉，各自放置在25mL具塞錐形瓶中，用移液管精密吸取10.00mL甲醇加入其中，稱定重量，水浴回流2h，靜置放涼，再稱定其重量。缺失的重量用甲醇補(bǔ)足，搖勻靜置，樣品圖譜見圖。

圖1 對照品（A）、生防風(fēng)（B）、焦防風(fēng)（C）分別在245NM波長下的色譜圖

2.1.2.4 方法學(xué)考察：線性關(guān)系考察：取2.1.2.2下的對照品溶液，按2.1.2.1的色譜條件進(jìn)行測定，進(jìn)樣體積分別為1、2、5、10和20 uL，進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制，升麻素苷：Y=7.063787e-007X+7.451957e-003，R2=0.9996，濃度范圍（mg/uL）0.091-0.91；升麻素：Y=5.016273e-007X+4.634783e-003，R2=0.9996，濃度范圍（mg/uL）0.099-0.99；5-O-甲基維斯阿米醇苷：Y=1.352315e-006X+7.793854e-003，R2=0.9995。

精密度實(shí)驗(yàn)：精密吸取混合對照品溶液10μl，按上述色譜條件測定，選擇重復(fù)進(jìn)樣6次，計(jì)算各目標(biāo)化合物峰面積的RSD值，結(jié)果表明升麻素苷、升麻素、5-O-甲基維斯阿米醇苷、補(bǔ)骨脂素RSD分別為1.321%、1.019%、0.984%、1.523%。

重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)：取同一條件炮制的苦參樣品6份，按上述樣品處理方法將其制成供試品溶液，按上述色譜條件，分別進(jìn)行進(jìn)樣檢測，測得各色譜峰峰面積的RSD值，結(jié)果表明升麻素苷、升麻素、5-O-甲基維斯阿米醇苷、補(bǔ)骨脂素RSD分別為0.978%、1.562%、1.041%、1.324%。

穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)：取上述樣品溶液，分別在0h、4h、8h、12h、24h，按上述液相色譜條件，分別進(jìn)行進(jìn)樣測定，測得各指標(biāo)性成分色譜峰峰面積RSD值，結(jié)果表明升麻素苷、升麻素、5-O-甲基維斯阿米醇苷、補(bǔ)骨脂素RSD分別為1.011%、1.232%、1.541%、1.421%。

加樣回收率試驗(yàn)：分別精密稱取焦防風(fēng)樣品3份，分別加入已精密稱定的升麻素苷、升麻素、5-O-甲基維斯阿米醇苷、補(bǔ)骨脂素，按2.1.2.3方法將其制成供試品溶液，按2.1.2.1液相色譜條件測定測定含量，分別計(jì)算加樣回收率和RSD值，結(jié)果表明升麻素苷、升麻素、5-O-甲基維斯阿米醇苷、補(bǔ)骨脂素RSD分別為2.011%、2.056%、1.968%、1.894%，平均加樣回收率分別100.5%、99.8%、98.7%、100.2%。

2.1.3 焦防風(fēng)炮制工藝兩因素試驗(yàn)

取大小均勻，色澤均一的焦防風(fēng)9份，每份100g，以炒制溫度，炒制時(shí)間為考察因素，每個(gè)因素3個(gè)水平，通過兩因素方差分析試驗(yàn)，篩選焦防風(fēng)的最佳炮制工藝。將升麻素苷、升麻素、5-O-甲基維斯阿米醇苷、補(bǔ)骨脂素的總含量作為主要評價(jià)指標(biāo)，篩選優(yōu)化炮制工藝。

實(shí)驗(yàn)因素水平：炒制溫度分別為160℃、180℃、200℃；炒制時(shí)間分別為7、9、11min。焦防風(fēng)兩因素試驗(yàn)結(jié)果見表1。

表1 焦防風(fēng)兩因素試驗(yàn)結(jié)果

利用SPSS22.0對其進(jìn)行方差分析。結(jié)果顯示，影響防風(fēng)炒焦工藝因素因素A（炒制溫度），B（炒制時(shí)間），A溫度×B時(shí)間（交互作用）存在顯著性差異P＜0.05，對試驗(yàn)結(jié)果具有一定的影響。各因素對試驗(yàn)結(jié)果的影響，優(yōu)選出防風(fēng)炒焦的最佳工藝為A2B1，溫度180℃，炒制7min。

2.1.4 驗(yàn)證試驗(yàn)

按2.1.3優(yōu)選的工藝制備3份樣品，測定升麻素苷、升麻素、5-O-甲基維斯阿米醇苷、補(bǔ)骨脂素總含量，結(jié)果顯示升麻素苷、升麻素、5-O-甲基維斯阿米醇苷、補(bǔ)骨脂素總含量（%）分別為1.369、1351、1.378。結(jié)果表明焦防風(fēng)炮制工藝穩(wěn)定可行。

3 結(jié)論與討論

本實(shí)驗(yàn)對焦防風(fēng)炮制工藝開展研究，利用兩因素實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)選兩種炮制品最佳炮制工藝，優(yōu)選出防風(fēng)炒焦的最佳工藝為A2B1，溫度180℃，炒制7min。比較炮制前后升麻素苷、升麻素、5-O-甲基維斯阿米醇苷、補(bǔ)骨脂素總含量變化，為防風(fēng)炮制工藝和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范化奠定基礎(chǔ)。