劉淑芳 陳杏禹 王海榮 侯慧鋒

（遼寧農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，遼寧 熊岳 115009）

紫背天葵為菊科三七屬多年生常綠草本植物，又名兩色三七草、紫背紅鳳菜、紅玉菜等。紫背天葵全株肉質(zhì)，嫩葉和莖均可食用，口感柔嫩，風(fēng)味獨(dú)特，除具有一般蔬菜所含有的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值外，還富含有造血功能的鐵素、維生素A、黃酮類(lèi)化合物以及黃酮苷等成分，具有生津止渴、潤(rùn)燥止咳、活血化瘀、清熱解毒等功效，能有效提高機(jī)體的免疫力、清除自由基、延緩衰老，是一種藥食兼用的高檔蔬菜。

紫背天葵不易采收種子，生產(chǎn)上常采用扦插或分株繁殖。然而，扦插和分株繁殖無(wú)法保證種苗整齊一致，且易感染病毒，不利于其規(guī)模化生產(chǎn)。組培快繁技術(shù)具有不受時(shí)間限制、繁殖速度快、繁殖系數(shù)大等優(yōu)點(diǎn)，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中廣泛應(yīng)用。利用紫背天葵嫩葉、嫩枝進(jìn)行組織培養(yǎng)，能在短期內(nèi)生產(chǎn)出大量?jī)?yōu)質(zhì)商品紫背天葵種苗，可在不影響原有紫背天葵采收的前提下獲得較高的經(jīng)濟(jì)效益?，F(xiàn)將紫背天葵葉片培養(yǎng)技術(shù)及組培快繁的影響因素介紹如下。

1 紫背天葵葉片培養(yǎng)技術(shù)

1.1 外植體的采集和處理

從健康、無(wú)病蟲(chóng)害的紫背天葵植株上選取幼嫩的葉片，連同葉柄一起剪下作外植體，用75%酒精棉球擦拭干凈后裝入保鮮袋，帶回實(shí)驗(yàn)室。將外植體置于流水下沖洗50 min，然后在超凈工作臺(tái)上用75%酒精浸潤(rùn)30 s，用無(wú)菌水沖洗2次，用1%次氯酸鈉溶液消毒5 min，再用無(wú)菌水沖洗5次，最后將其置于無(wú)菌濾紙上吸干表面水分，備用。

1.2 初代培養(yǎng)

將消毒好的葉片沿主脈剪切成5 mm×5 mm的葉塊，接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS＋BA 0.5～1.0 mg/L＋NAA 0.5～1.0 mg/L上進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為溫度23～25℃、光照時(shí)間14 h/d、光照強(qiáng)度2 000～3 000 lx。接種10 d后，葉片增厚、邊緣扭曲，切口處出現(xiàn)少量綠色、顆粒狀、疏松的愈傷組織。隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，顆粒物上分化出大量綠色芽點(diǎn)（見(jiàn)圖1），最后形成叢生芽苗。

圖1 紫背天葵葉片誘導(dǎo)出的叢生芽

1.3 增殖培養(yǎng)

初代培養(yǎng)誘導(dǎo)出的叢生芽苗高3 cm以上時(shí)，將其切割成長(zhǎng)1～2 cm、帶腋芽的莖段，并接種到增殖培養(yǎng)基MS＋BA 0.3～0.5 mg/L＋NAA 0.05～0.2 mg/L上進(jìn)行增殖培養(yǎng)，培養(yǎng)條件同初代培養(yǎng)。芽苗莖段增殖培養(yǎng)25 d后，又分化出多個(gè)芽苗，形成新的芽叢（見(jiàn)圖2）。利用新的芽叢可再次進(jìn)行增殖培育，25 d為1個(gè)周期，反復(fù)轉(zhuǎn)接即可擴(kuò)繁大量芽苗。

圖2 紫背天葵增殖培養(yǎng)產(chǎn)生的叢生芽

1.4 生根培養(yǎng)

增殖苗的數(shù)量達(dá)到生產(chǎn)需求時(shí)即可進(jìn)行生根培養(yǎng)。將增殖培養(yǎng)的芽苗切割成單苗轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基1/2 MS＋NAA 0.1 mg/L＋I(xiàn)BA 0.1 mg/L上進(jìn)行生根培養(yǎng)。培養(yǎng)7 d后芽苗基部可誘導(dǎo)出根原基，20 d后每個(gè)芽苗基部能產(chǎn)生3～5條、長(zhǎng)2 cm以上的根（見(jiàn)圖3）。生根培養(yǎng)條件基本同初代培養(yǎng)，僅需適當(dāng)提高光照強(qiáng)度。

圖3 紫背天葵試管生根苗

1.5 馴化移栽

芽苗生根培養(yǎng)20 d后，即可進(jìn)行馴化移栽。

1.5.1 移栽前準(zhǔn)備

在溫室或大棚內(nèi)進(jìn)行馴化移栽，將芽苗移栽至苗床或穴盤(pán)均可。使用苗床馴化的，提前建苗床，苗床寬1 m、深15 cm，床長(zhǎng)依溫室或大棚跨度定，苗床上方搭建拱棚；使用穴盤(pán)馴化的，可選用72孔或105孔穴盤(pán)。移栽基質(zhì)用珍珠巖、蛭石、草炭按1∶1∶1比例配制。基質(zhì)、苗床或穴苗盤(pán)使用前需用多菌靈1 000倍液消毒。

1.5.2 瓶苗馴化

將紫背天葵生根的試管苗移至溫室內(nèi)，閉瓶煉苗5 d，再開(kāi)瓶煉苗2 d。

1.5.3 移栽

將生根的試管苗從瓶中取出，洗凈根部附著的培養(yǎng)基，在多菌靈800～1 000倍液中消毒5～10 min，撈出瀝干水分，移栽至穴苗盤(pán)或苗床上，加扣小拱棚，蓋上遮陽(yáng)網(wǎng)。

1.5.4 栽后管理

移栽后，大棚內(nèi)保持相對(duì)濕度85%以上、溫度15～30℃、光照強(qiáng)度3 000～5 000 lx；移栽1周后，逐漸通風(fēng)；移栽后約1個(gè)月即可成活，成活率在98%以上。紫背天葵移栽馴化苗見(jiàn)圖4。

圖4 紫背天葵移栽馴化苗

2 紫背天葵組培快繁的影響因素

2.1 外植體

選用適宜的外植體是建立紫背天葵組培快繁體系的關(guān)鍵點(diǎn)。目前，紫背天葵組培快繁的外植體材料主要為球莖、葉片和莖段，也有選用種子作外植體。相關(guān)試驗(yàn)結(jié)果表明，葉片、莖段作初代培養(yǎng)材料，誘導(dǎo)效果最好。李媛等［1］以紫背天葵莖段為外植體，采用常規(guī)消毒方法進(jìn)行消毒滅菌，莖段誘導(dǎo)率達(dá)到70%以上。

2.2 培養(yǎng)條件

溫度、光照、濕度是影響紫背天葵組培苗是否生長(zhǎng)健壯的主要因素。莖段或葉片在試管內(nèi)的培養(yǎng)條件為溫度（25±2）℃、光照時(shí)間14 h/d、光照強(qiáng)度2 000～3 000 lx；在試管外的培養(yǎng)條件為相對(duì)濕度85%以上、溫度15～30℃、光照強(qiáng)度3 000～5 000 lx。在適宜的溫濕度條件下，莖段或葉片的誘導(dǎo)、增殖效果較好，生根率較高。

2.3 植物激素

不定芽的誘導(dǎo)與細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素的種類(lèi)及濃度密切相關(guān)。陳剛等［2］研究表明，1 mg/L 2，4-D和1 mg/L 6-BA對(duì)紫背天葵愈傷組織的誘導(dǎo)效果較好；張少平等［3］研究發(fā)現(xiàn)，在MS培養(yǎng)基中加入3 mg/L BA和0.2 mg/L NAA有利于外植體誘導(dǎo)不定芽；陳雄偉等［4］研究表明，噻苯?。╰hidiazuron，TDZ）和CPUU［N（-2-氯-4-吡啶基）-N’-苯基脲］也能誘導(dǎo)紫背天葵葉片和愈傷組織分化出不定芽，在MS培養(yǎng)基中添加0.5 mg/L TDZ誘導(dǎo)率可達(dá)81.3%。

2.4 發(fā)生途徑

紫背天葵組培的發(fā)生途徑主要有叢生芽發(fā)生型、體細(xì)胞發(fā)生型、器官發(fā)生型、胚狀體發(fā)生型。林碧英等［5］以莖段為外植體，通過(guò)叢生芽增殖途徑成功獲得再生植株；張少平等［3］以紫背天葵葉片為外植體進(jìn)行胚狀體誘導(dǎo)，成功獲得再生植株，但效率不高；陳剛等［2］以葉片為外植體，構(gòu)建了器官發(fā)生型植株再生培養(yǎng)體系，所產(chǎn)生的試管苗易生根，再生植株成活率高達(dá)95%以上。