王 聰，楊美鳳，姚 昶，許巖磊＊＊

（1.南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院 南京 210029；2.江蘇省中醫(yī)院 南京 210029；3.南京市兒童醫(yī)院 南京 210008）

在全球范圍內(nèi)，乳腺癌是女性最常見(jiàn)的導(dǎo)致死亡的惡性腫瘤。盡管目前的治療手段及策略取得飛速發(fā)展，部分乳腺癌患者療效提高顯著，但乳腺癌本身存在較大的異質(zhì)性，可根據(jù)患者發(fā)病年齡，腫瘤組織學(xué)分級(jí)，雌孕激素受體表達(dá)狀態(tài)，HER-2基因表達(dá)狀態(tài)，Ki-67指數(shù)等指標(biāo)，對(duì)乳腺癌的復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)及治療反應(yīng)性進(jìn)行分級(jí)[1-3]。

Aurora激酶A為絲／蘇氨酸蛋白激酶家族的重要組成部分，在細(xì)胞周期有絲分裂及胞質(zhì)分裂中發(fā)揮重要作用[4]。Aurora激酶A擴(kuò)增常導(dǎo)致細(xì)胞染色體不穩(wěn)定性增加，DNA復(fù)制異倍體增加，細(xì)胞周期延遲，中心體異常等一系列細(xì)胞功能紊亂[5]。多項(xiàng)研究表明，Aurora激酶A的過(guò)度表達(dá)與多種惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切[6-12]。在乳腺惡性腫瘤中，Aurora激酶A表達(dá)異常通常提示腫瘤組織學(xué)分級(jí)較高，ER、PR表達(dá)偏低，Ki-67指數(shù)偏高，腫瘤傾向于復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移[13-18]。不僅如此，Aurora激酶A高表達(dá)與VEGF轉(zhuǎn)錄高水平密切相關(guān)，可引起腫瘤血管新生異常，最終導(dǎo)致腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移[19]。

三黃煎劑為江蘇省中醫(yī)院乳腺外科臨床治療乳腺癌患者常用中藥煎劑，由江蘇省國(guó)醫(yī)名師許芝銀教授創(chuàng)立，其中包括黃芪、姜黃、制大黃三味中藥，按照劑量3:1:1組合使用。在前期研究中，我們團(tuán)隊(duì)已經(jīng)證實(shí)三黃煎劑對(duì)于乳腺癌細(xì)胞增殖抑制作用及細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)作用，還能夠靶向性下調(diào)Aurora激酶A的表達(dá)水平，對(duì)乳腺癌常用化療藥物表柔比星、內(nèi)分泌治療藥物他莫昔芬顯示出一定增效作用，且三黃煎劑能夠顯著調(diào)節(jié)乳腺癌MCF-7細(xì)胞氧化應(yīng)激反應(yīng)，從而減少細(xì)胞VEGF分泌[20-27]。然而三黃煎劑抑制乳腺癌血管新生方面的功效及機(jī)制未進(jìn)行充分探討，本研究旨在基于下調(diào)Aurora激酶A，深入探討三黃煎劑抑制乳腺癌血管新生的功效及其內(nèi)在機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 一般材料

MCF-7細(xì)胞、MDA-MB-231細(xì)胞，HUVECs均購(gòu)于南京凱基生物公司；三黃煎劑由江蘇省中醫(yī)院藥學(xué)部代為煎制，其飲片成分黃芪、制大黃、姜黃，配置劑量分別為30 g、10 g、10 g，煎煮、去渣后，將上清液定容至100 mL，運(yùn)用PBS配制成所需濃度；高糖DMEM培養(yǎng)基、RPMI-1640培養(yǎng)基、PBS、胎牛血清均購(gòu)于美國(guó)Hyclone公司；Opti-MEM I減血清培養(yǎng)基購(gòu)于美國(guó)Gibco公 司；Lipofectamine 2000購(gòu) 于 美 國(guó)Invitrogen公司。

2.2 細(xì)胞培養(yǎng)

MCF-7細(xì)胞、HUVECs運(yùn)用RPMI1640培養(yǎng)液（含10%胎牛血清）進(jìn)行培養(yǎng)，MDA-MB-231細(xì)胞運(yùn)用高糖DMEM培養(yǎng)液（含10%胎牛血清）進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)箱設(shè)置參數(shù)為37℃，5%CO2。

2.3 細(xì)胞遷移檢測(cè)

將Matrigel膠稀釋于無(wú)血清培養(yǎng)基中，稀釋比例為1:4，后在transwell小室的下表面均勻平鋪并脫水。HUVECs饑餓過(guò)夜，次日收集細(xì)胞，以每孔1x104個(gè)細(xì)胞的密度植入24孔板上的小室上室中。在上室中加入有或沒(méi)有經(jīng)Aurora激酶A敲減的乳腺癌細(xì)胞上清，作為HUVECs的條件培養(yǎng)基。將細(xì)胞置于參數(shù)為5%CO237℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，然后用棉簽刮除膜上表面的細(xì)胞，下表面的細(xì)胞先用75%乙醇固定，后用結(jié)晶紫細(xì)胞染色液染色，安裝在載玻片上進(jìn)行觀察。顯微鏡下觀察并計(jì)算5個(gè)隨機(jī)視野細(xì)胞數(shù)，并取每組結(jié)果的平均值來(lái)量化細(xì)胞的數(shù)量。

2.4 HUVECs管腔形成檢測(cè)

收集HUVECs，將其以75000個(gè)/孔的密度接種在包有250 μL Matrigel基質(zhì)膠的24孔板中。每個(gè)樣品在形成毛細(xì)血管樣小管結(jié)構(gòu)的過(guò)程中，定期用顯微鏡觀察。孵育8 h后，對(duì)樣品進(jìn)行拍照，從5個(gè)獨(dú)立的顯微鏡視野觀察，評(píng)估小管的平均數(shù)。

2.5 siNRA沉默Aurora激酶A

配置含8×104個(gè)細(xì)胞的2ml細(xì)胞懸液，接種到6孔板的每個(gè)孔中。培養(yǎng)24 h后棄去上清液，將15μL濃度 為500 nmol/L的Aurora A siRNA及5 μL Lipofectamine 2000稀釋 于1ml Opti-MEM I減血清 培養(yǎng)基，并加入每孔，培養(yǎng)4-6 h。棄去上清液，加入培養(yǎng)基孵育48 h后收集蛋白，用Western Blot檢測(cè)此時(shí)細(xì)胞Aurora激酶A蛋白水平。

2.6 qRT-PCR檢測(cè)

各組總RNA采用TRIzol試劑分離提取。采用TaKaRa RT試劑盒（中國(guó)大連寶生物工程公司）逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。本研究所用引物序列見(jiàn)表1。使用SYBR Premix Ex TaqTM（中國(guó)大連寶生物工程公司）采用ABI 7500Fast qRT-PCR系 統(tǒng) 定 量Aurora激 酶A和GAPDH（內(nèi)參）mRNA水平，得出Aurora激酶A和GAPDH的周期閾值（Ct）。每組實(shí)驗(yàn)3個(gè)重復(fù)。ΔCt=Ct目標(biāo)基因-CtGAPDH。ΔΔCt=ΔCt實(shí)驗(yàn)組-ΔCt對(duì)照組。RQ值為2-ΔΔCt。

表1 qRT-PCR檢測(cè)所需引物序列

2.7 Western Blot檢測(cè)

用不同濃度的三黃煎劑干預(yù)細(xì)胞并獲得細(xì)胞蛋白，蛋白濃度檢測(cè)方法為BCA法。將20-30μg蛋白注入各組泳道。電泳方式為運(yùn)用80 V恒定電壓進(jìn)行前20 min電泳，運(yùn)用120 V恒定電壓進(jìn)行后60 min電泳，轉(zhuǎn)膜方式為運(yùn)用250 mA恒定電流進(jìn)行90 min轉(zhuǎn)膜，封閉方式為運(yùn)用5%牛血清白蛋白溶液進(jìn)行1 h封閉，后運(yùn)用一抗進(jìn)行整夜孵育，使用的一抗購(gòu)于CST公司（美國(guó)），分別為兔抗人多克隆抗體p-AURKA（1:1000）、AURKA（1:1000）、p-ERK（1:1000）、ERK（1:1000）和β-actin（1:2000）。第二日以TBST溶液對(duì)條帶進(jìn)行漂洗，每張條帶漂洗3次，每次漂洗5 min，后在室溫下運(yùn)用二抗進(jìn)行孵育1 h；再次以TBST溶液對(duì)條帶進(jìn)行漂洗，每張條帶漂洗3次，每次漂洗5 min，后以TBS溶液對(duì)條帶進(jìn)行漂洗5 min；以ECL發(fā)光劑對(duì)條帶進(jìn)行處理，以化學(xué)發(fā)光成像儀分析條帶。

2.8 雞胚絨毛膜尿囊膜（CAM）檢測(cè)

CAM檢測(cè)按照Li-Jing Wang團(tuán)隊(duì)設(shè)計(jì)的方法進(jìn)行[28]。第9天，用手術(shù)刀打開受精卵（中國(guó)南京開基生物科技有限公司）的小窗口（10×10 mm2）。然后用無(wú)菌鑷子打開蛋殼。將細(xì)胞懸浮液以1×106個(gè)細(xì)胞/100μL PBS的密度通過(guò)開口直接涂抹在CAM表面。蓋好蛋殼開口，將雞蛋放入37.8℃、60%濕度的培養(yǎng)箱中，旋轉(zhuǎn)48 h。然后用剪刀小心翼翼地剪開蛋殼，形成方形。觀察并記錄蛋殼開口CAM的血管結(jié)構(gòu)，用相機(jī)獲取圖像，并計(jì)算圖像中血管的數(shù)量。

2.9 統(tǒng)計(jì)方法

本研究數(shù)據(jù)的呈現(xiàn)形式為平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差，數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)選用SPSS 16.0軟件，統(tǒng)計(jì)方法為“one-way ANOVA”，當(dāng)P＜0.05或0.01時(shí)，認(rèn)為對(duì)照組和治療組之間的差異顯著。western blot條帶的強(qiáng)度分析由Image J軟件完成。

2 結(jié)果

2.1 三黃煎劑抑制乳腺癌細(xì)胞增殖

如圖1-圖2所示，前期研究結(jié)果顯示三黃煎劑能夠抑制MCF-7、MDA-MB-231細(xì)胞增殖，抑制率均呈濃度依賴性增加。在給藥后24 h、48 h，三黃煎劑對(duì)MCF-7、MDA-MB-231細(xì)胞增殖抑制率呈時(shí)間依賴性增加。值得注意的是，MCF-7細(xì)胞對(duì)三黃煎劑的干預(yù)較MDA-MB-231細(xì)胞更敏感。故在本研究中，我們根據(jù)前期研究三黃煎劑對(duì)MCF-7、MDA-MB-231細(xì)胞IC50值的結(jié)果（圖3），選取三黃煎劑2 mg·mL-1和4 mg·mL-1濃度作用于MCF-7細(xì)胞，4 mg·mL-1和8 mg·mL-1濃度的三黃煎劑作用于MDA-MB-231細(xì)胞進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)。

圖1 三黃煎劑抑制乳腺癌MCF-7細(xì)胞增殖

圖2 三黃煎劑抑制乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞增殖

圖3 三黃煎劑對(duì)乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231細(xì)胞增殖IC50值

2.2 三黃煎劑抑制乳腺癌細(xì)胞Aurora激酶A表達(dá)

乳腺癌細(xì)胞中Aurora激酶A的表達(dá)通常是正常乳腺上皮細(xì)胞的20-50倍[29]，前期研究已在體外水平初步探討三黃煎劑對(duì)Aurora激酶A的調(diào)節(jié)作用[22,27]，本次研究我們?cè)俅螜z測(cè)三黃煎劑對(duì)乳腺癌細(xì)胞Aurora激酶A表達(dá)的影響，并與沉默Aurora激酶A進(jìn)行比較。如圖4所示，不同濃度的三黃煎劑均能夠下調(diào)乳腺癌細(xì)胞中Aurora激酶A蛋白水平，且均與沉默Aurora激酶A藥效類似。如圖5所示，對(duì)western blot檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行半定量分析，三黃煎劑給藥組Aurora激酶A蛋白水平顯著低于對(duì)照組（P＜0.01）。進(jìn)一步的qRT-PCR結(jié)果顯示，三黃煎劑能夠顯著抑制MCF-7、MDA-MB-231細(xì)胞Aurora激酶A的mRNA表達(dá)，且抑制方式與蛋白表達(dá)水平相似（圖6）。Aurora激酶A蛋白、mRNA的下調(diào)與MCF-7、MDA-MB-231細(xì)胞增殖抑制具有較強(qiáng)的相關(guān)性。結(jié)合前期研究結(jié)果[23]，Aurora激酶A敲減影響了三黃煎劑對(duì)乳腺癌細(xì)胞的抑制效果，我們認(rèn)為三黃煎劑對(duì)Aurora激酶A具有靶向性抑制作用。

圖5 乳腺癌細(xì)胞Aurora激酶A蛋白表達(dá)半定量分析

圖6 三黃煎劑抑制乳腺癌細(xì)胞Aurora激酶A的mRNA表達(dá)

2.3 三黃煎劑通過(guò)下調(diào)Aurora激酶A抑制乳腺癌血管新生

Aurora激酶A通過(guò)上調(diào)腫瘤細(xì)胞內(nèi)VEGF的轉(zhuǎn)錄水平，增加其分泌，從而導(dǎo)致其侵襲行為，在促進(jìn)腫瘤血管生成中起著至關(guān)重要的作用[30]。本研究中，我們繼續(xù)探討三黃煎劑下調(diào)Aurora激酶A是否對(duì)抑制新生血管有影響。收集癌細(xì)胞上清，用于測(cè)定HUVECs的遷移和管腔形成。結(jié)果顯示，三黃煎劑對(duì)HUVECs遷移的抑制作用與Aurora激酶A敲減的抑制作用一樣顯著（P＜0.01）（圖7）。此外，三黃煎劑干預(yù)后的MCF-7和MDA-MB-231細(xì)胞上清液中HUVECs的管腔形成明顯減少（P＜0.01）。三黃煎劑治療取得的效果與在Aurora激酶A敲減腫瘤細(xì)胞上清中培養(yǎng)HUVECs時(shí)觀察到的效果相似（圖8）。

圖7 三黃煎劑抑制乳腺癌細(xì)胞誘導(dǎo)下HUVECs遷移

圖8 三黃煎劑抑制乳腺癌細(xì)胞誘導(dǎo)下HUVECs管腔形成

2.4 三黃煎劑下調(diào)Aurora激酶A抑制雞胚尿囊膜上腫瘤血管新生

在前期研究中，通過(guò)qRT-PCR和western blot檢測(cè)，我們發(fā)現(xiàn)MBA-MD-231細(xì)胞中的Aurora激酶A表達(dá)水平顯著高于MCF-7細(xì)胞，而作為MDA-MB-231細(xì)胞的表型，三陰性乳腺癌較其他分子分型的乳腺癌侵襲性更強(qiáng)，患者復(fù)發(fā)率更高。故本研究我們以三黃煎劑對(duì)于不同細(xì)胞系的IC50值為依據(jù)，選取了濃度為4 mg·mL-1的三黃煎劑作用于MDA-MB-231細(xì)胞建立的雞胚尿囊膜模型進(jìn)行體內(nèi)水平的探索[27]。我們?cè)诖嘶A(chǔ)上驗(yàn)證三黃煎劑能否通過(guò)下調(diào)Aurora激酶A抑制雞胚尿囊膜上的乳腺癌血管新生。如圖9所示，與對(duì)照組相比，MDA-MB-231細(xì)胞混懸液顯著提高了雞胚尿囊膜上的血管數(shù)量，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.01）。當(dāng)運(yùn)用三黃煎劑干預(yù)后，血管數(shù)量顯著下降（P＜0.01），且效果與敲減MDA-MB-231細(xì)胞中的Aurora激酶A近似。我們又進(jìn)一步運(yùn)用三黃煎劑干預(yù)Aurora激酶A沉默的MDA-MB-231細(xì)胞混懸液建立的雞胚尿囊膜模型，我們觀察到聯(lián)合運(yùn)用Aurora激酶A敲減僅僅小幅提升了三黃煎劑對(duì)于腫瘤血管新生的抑制效果（圖10）。所以，我們推測(cè)三黃煎劑可能是通過(guò)抑制了Aurora激酶A的表達(dá)，從而抑制了乳腺癌血管新生。

圖9 三黃煎劑或/和Aurora激酶A敲減干預(yù)雞胚尿囊膜上乳腺癌血管新生

圖10 三黃煎劑或/和Aurora激酶A敲減干預(yù)雞胚尿囊膜血管計(jì)數(shù)

2.5 三黃煎劑靶向調(diào)節(jié)Aurora激酶A下調(diào)ERK表達(dá)

由于Aurora激酶A過(guò)表達(dá)能夠通過(guò)異常激活ERK信號(hào)通路促進(jìn)腫瘤血管新生[31]，ERK信號(hào)通路激活常常通過(guò)調(diào)節(jié)VEGF水平誘導(dǎo)血管新生[32]，故本研究我們通過(guò)western blot檢測(cè)，初步探討三黃煎劑對(duì)MCF-7和MDA-MB-231細(xì)胞 中ERK蛋 白 表達(dá)的 影響。如圖11所示，western blot檢測(cè)結(jié)果提示三黃煎劑和Aurora激酶A敲減均能夠顯著抑制ERK蛋白表達(dá)水平。我們對(duì)western blot檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行半定量分析發(fā)現(xiàn)，三黃煎劑能夠顯著抑制乳腺癌ERK蛋白表達(dá)，且能達(dá)到與沉默Aurora激酶A類似的藥效（圖12）。所以我們推測(cè)三黃煎劑抑制了Aurora激酶A表達(dá)水平，進(jìn)而下調(diào)了下游ERK信號(hào)通路，從而抑制了乳腺癌血管新生。

圖11 三黃煎劑抑制乳腺癌細(xì)胞ERK蛋白表達(dá)

圖12 乳腺癌細(xì)胞ERK蛋白表達(dá)半定量分析

3 討論

眾所周知，根據(jù)ER、PR、HER-2、Ki-67表達(dá)狀態(tài)的不同，我們可將乳腺癌分為不同的亞型，以指導(dǎo)針對(duì)性的臨床實(shí)踐。如雌激素受體拮抗劑、芳香化酶抑制劑、雌激素受體下調(diào)劑、CDK4/6抑制劑等內(nèi)分泌治療藥物，可用于激素受體陽(yáng)性的乳腺癌患者，曲妥珠單抗、帕托珠單抗、拉帕提尼、吡咯替尼、T-DM1作為抗HER-2治療的主要藥物，用于治療HER-2基因擴(kuò)增的早期及晚期乳腺癌患者[33-35]。在過(guò)去的幾十年間，由于分子靶向藥物的運(yùn)用，乳腺癌的治療策略發(fā)生革命性的改變，患者的無(wú)疾病生存期、總生存期、生活質(zhì)量都得到了不同程度的改善。不幸的是，由于ER、PR、HER-2表達(dá)的缺失，約占乳腺癌患者總數(shù)20%的三陰性乳腺癌患者無(wú)法從內(nèi)分泌治療、靶向治療中獲益，想要治愈此亞型的乳腺癌仍是一項(xiàng)巨大的挑戰(zhàn)。不僅如此，由于三陰性乳腺癌機(jī)制未明，目前尚缺乏靶向性治療手段。雖然在免疫治療方面取得巨大進(jìn)展，但考慮到以藥物可及性為主的諸多因素，手術(shù)、化療、放療是目前仍是三陰性乳腺癌最主要的治療手段。如上所屬，基于三陰性乳腺癌的侵襲性、治療手段的局限性，探索針對(duì)此亞型乳腺癌的更加有效的治療手段刻不容緩。

據(jù)文獻(xiàn)顯示，Aurora激酶A在乳腺癌中常常呈高表達(dá)狀態(tài)[12,36]，并在乳腺癌的轉(zhuǎn)移過(guò)程中起重要作用[14,37]。目前，Aurora激酶A靶向抑制劑已廣泛運(yùn)用于惡行腫瘤的臨床前研究及臨床實(shí)驗(yàn)研究中。作為口服Aurora激酶A靶向抑制劑，MLN8237能夠通過(guò)調(diào)節(jié)乳腺癌p38 MAPK、Akt/mTOR信號(hào)通路誘導(dǎo)細(xì)胞周期停滯、凋亡、自噬[38]。在本研究中，我們基于Aurora激酶A的調(diào)節(jié)，運(yùn)用ER、PR表達(dá)陽(yáng)性乳腺癌MCF-7細(xì)胞，三陰性乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞探索三黃煎劑的功效。Western Blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與沉默Aurora激酶A效果近似，三黃煎劑能夠抑制MCF-7、MDA-MB-231細(xì)胞Aurora激酶A蛋白、mRNA的表達(dá)水平，且對(duì)MCF-7細(xì)胞Aurora激酶A蛋白、mRNA水平下調(diào)程度相對(duì)更為明顯。這與Yi Gong主持開展的研究結(jié)果類似[29]，丹參酮能夠通過(guò)調(diào)節(jié)Aurora激酶A蛋白、功能從而抑制乳腺癌細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞周期停滯、細(xì)胞凋亡，同樣MCF-7細(xì)胞對(duì)丹參酮給藥比三陰性乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞敏感。這些結(jié)果說(shuō)明，三黃煎劑對(duì)乳腺癌細(xì)胞的抑制率與其表型所對(duì)應(yīng)的乳腺癌自身的侵襲性存在密切聯(lián)系。

血管新生對(duì)于實(shí)體惡行腫瘤的發(fā)生、維持、進(jìn)展至關(guān)重要。據(jù)報(bào)道稱，VEFG過(guò)表達(dá)強(qiáng)烈預(yù)示乳腺癌惡性程度較大，侵襲性較強(qiáng)，預(yù)后不良[39-40]。研究表明，靶向抑制Aurora激酶A能夠調(diào)節(jié)VEGF轉(zhuǎn)錄，抑制血管新生[19,30]。此外，一種口服VEFG選擇性抑制劑能夠降低腫瘤患者血清VEGF水平并已通過(guò)I期臨床試驗(yàn)[41]。本研究結(jié)果顯示，與Aurora激酶A沉默作用類似，三黃煎劑能夠抑制在乳腺癌細(xì)胞條件培養(yǎng)基誘導(dǎo)下的HUVECs遷移、管腔形成。我們建立雞胚尿囊膜模型，在體內(nèi)水平探索三黃煎劑的功效及機(jī)制。結(jié)果表明，三黃煎劑能夠抑制雞胚尿囊膜上的新生血管數(shù)，藥效與Aurora激酶A敲減近似。然而，當(dāng)我們聯(lián)合運(yùn)用三黃煎劑與沉默AUKRA時(shí)，我們發(fā)現(xiàn)血管的數(shù)量與單用三黃煎劑或沉默AUKRA相比，并沒(méi)有明顯的減少。所以，我們推測(cè)三黃煎劑可能是通過(guò)靶向調(diào)控了Aurora激酶A從而抑制乳腺癌血管新生。

腫瘤發(fā)生和發(fā)展通常與細(xì)胞信號(hào)通路中致癌基因和底物之間的串?dāng)_密切相關(guān)。Aurora激酶A與各種下游腫瘤相關(guān)信號(hào)通路相互作用，在腫瘤血管生成和進(jìn)展中發(fā)揮關(guān)鍵作用。如Karar等人所述[42]，PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路的構(gòu)成性激活會(huì)導(dǎo)致血管的異常形成和生長(zhǎng)，進(jìn)而導(dǎo)致腫瘤血管的紊亂，在介導(dǎo)腫瘤血管新生方面起關(guān)鍵作用。此外，據(jù)報(bào)道稱，ERK 1/2的激活促進(jìn)血管生成和VEGF的上調(diào)[43-44]。本研究中，與對(duì)照組相比，三黃煎劑治療和Aurora激酶A沉默導(dǎo)致MCF-7和MDA-MB-231細(xì)胞中ERK的表達(dá)降低。我們的研究結(jié)果表明三黃煎劑可能以Aurora激酶A為靶點(diǎn)，從而介導(dǎo)下游ERK信號(hào)通路，進(jìn)而調(diào)控腫瘤血管生成。在調(diào)節(jié)腫瘤血管新生和VEGF表達(dá)中，三黃煎劑對(duì)Aurora激酶A和ERK的具體調(diào)節(jié)機(jī)制有待深入探討。

綜上所述，本研究證實(shí)了三黃煎劑對(duì)Aurora激酶A的調(diào)控作用，對(duì)乳腺癌血管新生的抑制作用，且與沉默Aurora激酶A療效相仿。其機(jī)制可能是：三黃煎劑靶向性下調(diào)了Aurora激酶A，從而調(diào)控下游ERK通路，從而抑制乳腺癌腫瘤血管生成。本研究為國(guó)家自然科學(xué)基金（三黃煎劑基于抑制Aurora激酶A調(diào)節(jié)NF-κB信號(hào)通路影響乳腺癌血管新生的機(jī)制研究，負(fù)責(zé)人：許巖磊）的重要組成部分，在此基礎(chǔ)上，我們將繼續(xù)深入探討在三黃煎劑抑制乳腺癌血管新生中Aurora激酶A與下游信號(hào)通路之間的確切相互作用關(guān)系。本研究基于新型癌基因Aurora激酶A的調(diào)控，探討三黃煎劑抑制血管新生的功效，從而防治早期乳腺癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，契合中醫(yī)藥治未病理論，為中醫(yī)藥防治乳腺癌提供了新的研究思路。由于腫瘤血管新生預(yù)示疾病不良預(yù)后，我們的研究結(jié)果將為患者、臨床工作者在決策三陰性乳腺癌治療方案，特別是晚期三陰性乳腺癌治療方案時(shí)提供更多的理論依據(jù)。