鄭慧敏，陳躍來(lái)，蔡君豪，李之豪，李珊珊，宓軼群＊＊

（1.上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院 上海 200071；2.上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬龍華醫(yī)院 上海 200032）

前列腺癌根治術(shù)后尿失禁（Radical Prostatectomy Urinary Incontinence，RPUI）是前列腺癌患者術(shù)后最常見的并發(fā)癥，主要類型是壓力性尿失禁，表現(xiàn)為體位改變、腹壓增高等原因?qū)е滦”悴蛔灾髀┏鯷1]。隨著我國(guó)醫(yī)療水平提高和國(guó)民健康意識(shí)增強(qiáng)，近20年來(lái)通過(guò)各種篩查手段，發(fā)現(xiàn)患有前列腺癌的患者比率顯著上升，相比1997年上升7-8倍[2]。根據(jù)早診斷早治療原則，診療指南推薦根治性前列腺切除術(shù)是治療局限性前列腺癌最有效的方法（I，A）[3]，越來(lái)越多前列腺癌患者接受手術(shù)治療，這也勢(shì)必造成術(shù)后尿失禁的高發(fā)，據(jù)流行病學(xué)調(diào)查顯示[4-5]患者術(shù)后拔除導(dǎo)尿管近期內(nèi)均存在不同程度的尿失禁，盡管漏尿程度會(huì)隨盆底組織恢復(fù)而改善，術(shù)后3個(gè)月仍有42%的患者存在尿失禁，而術(shù)后1年以上尿失禁患病率可達(dá)16%，在我國(guó)RPUI的發(fā)生率約2%-87%。RPUI患者需長(zhǎng)期佩戴尿墊，不便長(zhǎng)途旅行，畏于參加社交，容易產(chǎn)生抑郁自卑的負(fù)面情緒，嚴(yán)重影響患者的身心健康及生活質(zhì)量[6]。

RPUI目前無(wú)特效藥物治療，術(shù)后早期只能通過(guò)盆底肌功能鍛煉、生物反饋等保守治療，術(shù)后一年仍有嚴(yán)重尿失禁者可行二次手術(shù)重建尿道盆底結(jié)構(gòu)[7]。雖然泌尿外科微創(chuàng)技術(shù)突飛猛進(jìn)，相比常規(guī)手術(shù)具有切除范圍小，對(duì)盆腔組織損傷少等諸多優(yōu)勢(shì)，術(shù)后護(hù)理及圍手術(shù)期尿失禁宣教工作也在日益精進(jìn)，但術(shù)后尿失禁的發(fā)生率并無(wú)下降趨勢(shì)[8-9]。術(shù)后尿失禁的主要原因是內(nèi)源性括約肌功能障礙（Intrinsic Sphincter Deficiency，ISD）和 尿 道 過(guò) 度 移 動(dòng)（Urethral Hypermobility，UH）[10]，前列腺癌根治術(shù)過(guò)程中不可避免地?fù)p傷了尿道括約肌、縮短膜性尿道導(dǎo)致尿道閉合壓下降可能是發(fā)病機(jī)制，也有學(xué)者認(rèn)為膀胱過(guò)度活動(dòng)和盆腔自主神經(jīng)叢的損傷也會(huì)造成術(shù)后尿失禁[11]，RPUI到底是屬于單純性外周神經(jīng)肌肉組織損傷，還是與中樞內(nèi)分泌有關(guān)有待進(jìn)一步研究[12]。

我們前期研究發(fā)現(xiàn)電針可改善女性壓力性尿失禁患者的漏尿頻率和漏尿量，療效不劣于作為一線治療方案的西藥聯(lián)合盆底肌訓(xùn)練[13]，針灸對(duì)尿道功能有顯著調(diào)節(jié)作用，通過(guò)尿動(dòng)力學(xué)等評(píng)價(jià)方法，證實(shí)針刺可使尿失禁患者尿道閉合壓力上升，改善尿失禁癥狀[14]。根據(jù)中醫(yī)“異病同治”理論，針刺治療也可改善RPUI的程度和頻率[15]。為了進(jìn)一步研究電針控尿機(jī)制，課題組擬開展關(guān)于電針干預(yù)RPUI模型大鼠的實(shí)驗(yàn)研究，然而卻發(fā)現(xiàn)RPUI的研究熱點(diǎn)多集中前列腺癌根治術(shù)方式改良及針對(duì)尿失禁的保守治療和二次手術(shù)臨床療效評(píng)估，關(guān)于電針治療RPUI的臨床和基礎(chǔ)研究較少，因此有必要開展相關(guān)研究，而穩(wěn)定成熟的動(dòng)物模型對(duì)探索該疾病生理病理基礎(chǔ)以及針刺控尿有重要意義。為此，本研究擬通過(guò)評(píng)估RPUI動(dòng)物模型穩(wěn)定性，為進(jìn)一步研究電針治療尿失禁的控尿機(jī)制提供模型依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組

選用SPF級(jí)雄性SD大鼠24只，由上海杰思捷實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，許可證號(hào)碼：SCXK（滬）2018-0004。實(shí)驗(yàn)大鼠體質(zhì)量180-200 g，6周齡，采用SPSS軟件生成隨機(jī)數(shù)后將大鼠分成空白組、假手術(shù)組和模型組，每組8只，每籠4只。飼養(yǎng)于上海中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物房，飼養(yǎng)溫度20-23℃，濕度60-70%，所有實(shí)驗(yàn)大鼠均給與正常飲食飲水常規(guī)飼養(yǎng)，入組3天后進(jìn)行基線評(píng)估及造模等處理。本研究通過(guò)上海中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物倫理委員會(huì)審批，倫理編號(hào)：PZSHUTCM210820007。

1.1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器和試劑

德國(guó)充電式電凝止血器，型號(hào)：HARDOX400；Polaris多光譜組織切片掃描儀；加拿大Laborie-Medical-Technology公司BONITO型尿動(dòng)力學(xué)分析儀；Masson三色染色試劑盒，南京?？藸柹锟萍加邢薰荆?%戊巴比妥鈉溶液，上海中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 造模方法

模型組參照尿道括約肌電灼傷法進(jìn)行造模[16]，將大鼠腹腔注射1%戊巴比妥鈉溶液（0.4 mL/100 g）麻醉后仰臥于保溫墊上，捆綁四肢，固定頭部，下腹部備皮，定位恥骨聯(lián)合后沿下腹部正中線縱行切口2-3 cm，逐層剪開皮膚及下腹部肌肉，游離膀胱、前列腺和尿道近端組織，于恥骨聯(lián)合后緣處找到定位近端尿道和兩側(cè)的尿道括約肌組織，接通電凝止血器電源（50 w，600 Hz，強(qiáng)度3），充分加熱刀頭至紅色后在兩側(cè)尿道括約肌（長(zhǎng)度約2 cm）進(jìn)行電灼傷，每側(cè)尿道括約肌等距離灼傷4個(gè)點(diǎn)，每點(diǎn)灼傷持續(xù)時(shí)間1 s以建立RPUI模型，逐層縫合關(guān)閉腹腔，術(shù)后3天預(yù)防性應(yīng)用抗生素，于第10天和第17天進(jìn)行模型評(píng)估。

假手術(shù)組麻醉后打開腹腔暴露膀胱前列腺及尿道組織，不接通電凝止血器電源，僅用常溫電凝刀頭觸碰尿道括約肌兩側(cè)而不進(jìn)行電灼傷，逐層關(guān)閉腹腔后常規(guī)飼養(yǎng)，預(yù)防性應(yīng)用抗生素，各項(xiàng)指標(biāo)評(píng)估時(shí)間同模型組。

空白組不采取任何干預(yù)措施，常規(guī)飼養(yǎng)，同樣抓取，各項(xiàng)指標(biāo)評(píng)估時(shí)間同模型組。

1.2.2 指標(biāo)觀察

一般情況：觀察雄性SD大鼠體重、飲食、精神狀態(tài)和活動(dòng)情況，術(shù)后腹部切口有無(wú)炎癥反應(yīng)及滲出等。

噴嚏試驗(yàn)：采用尿動(dòng)力學(xué)檢測(cè)儀測(cè)量最大膀胱容量（Maximal Bladder Capacity，MBC）及漏尿點(diǎn)壓力（Leak Point Pressure，LPP），采用腹部按摩法排空大鼠膀胱，注入一半MBC容量混有美蘭染液的生理鹽水，剪取鼠須輕掃大鼠鼻孔誘發(fā)噴嚏反射，觀察有無(wú)藍(lán)色液體從尿道口流出。若有藍(lán)色液體流出則噴嚏試驗(yàn)陽(yáng)性，否則陰性。由于RPUI屬于壓力性尿失禁，噴嚏試驗(yàn)用于檢測(cè)模型是否成功。

尿動(dòng)力學(xué)測(cè)定：大鼠麻醉后取仰臥位，用腹部按摩法排空膀胱后暴露陰莖“m”型骨性標(biāo)志，將實(shí)驗(yàn)用動(dòng)物導(dǎo)尿管頭端蘸取石蠟油，用止血鉗固定陰莖遠(yuǎn)端后插入導(dǎo)尿管，遇阻后將陰莖往頭側(cè)略微傾斜，導(dǎo)尿管向尾側(cè)輕探深入，有落空感后繼續(xù)往里插直至出現(xiàn)第二次落空感，導(dǎo)尿管插入總深度約4 cm左右，微量泵以0.3 mL·min-1的速度向膀胱內(nèi)注入無(wú)菌生理鹽水；同時(shí)，尿動(dòng)力學(xué)檢測(cè)儀校“0”并開始檢測(cè)。當(dāng)尿道口出現(xiàn)第一滴液體時(shí)，停止灌注，計(jì)算MBC＝灌注時(shí)間×灌注速度，此刻標(biāo)記處為L(zhǎng)PP；每只大鼠反復(fù)拔除導(dǎo)尿管排空膀胱后重新留置導(dǎo)尿，尿動(dòng)力學(xué)檢測(cè)共3次，取平均值。三組大鼠于入組后第3天（造模當(dāng)天）、第10天（造模后1周）、第17天（造模后2周）進(jìn)行尿動(dòng)力學(xué)檢測(cè)。

尿道括約肌組織形態(tài)學(xué)觀察：入組后第10天采用過(guò)量注射1%戊巴比妥鈉麻藥安樂(lè)死，開腹定位膀胱，剪去恥骨聯(lián)合后游離并剪取近端尿道組織，浸泡于4%多聚甲醛溶液靜置3d進(jìn)行組織固定，石蠟包埋切片后采用Masson染色，觀察實(shí)驗(yàn)大鼠尿道括約肌組織形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用SPSS24.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料用N（%）表示，計(jì)量資料均以±s表示，計(jì)數(shù)資料采用Fisher確切概率法；計(jì)量資料采用方差齊性檢驗(yàn)與正態(tài)性檢驗(yàn)，符合正態(tài)分布的多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較用LSD檢驗(yàn)；不符合正態(tài)分布或各組方差不齊的采用非參數(shù)檢驗(yàn)的Kruscal-Wallis法，如果檢驗(yàn)結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，則進(jìn)一步作兩兩比較，采用Bonferroni法校正P值，然后用成組的Wilcoxon檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，兩兩比較以P＜0.017為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般情況

實(shí)驗(yàn)共24只雄性SD大鼠，每組8只，其中模型組1只大鼠于造模后半小時(shí)死亡，考慮原因?yàn)樾g(shù)中大出血導(dǎo)致臟器衰竭；另1只于第7天死亡，考慮術(shù)后感染可能；假手術(shù)組1只大鼠第7天出現(xiàn)拱背現(xiàn)象，精神萎靡，無(wú)二便，考慮術(shù)后感染，第8天死亡，開腹探查發(fā)現(xiàn)盆腔組織黏連明顯。剩余21只大鼠反應(yīng)靈敏，活動(dòng)正常，飲水、飲食良好，大便干燥、量正常，在不同觀察時(shí)間點(diǎn)三組大鼠之間體重比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。模型組大鼠手術(shù)傷口愈合好，未見紅腫滲液。大鼠體重情況見表1。

表1 各組大鼠體重平均值比較（±s，g）

注：組間比較，各觀察時(shí)間點(diǎn)三組大鼠比較，P＞0.05。

組別空白組假手術(shù)組模型組第3天例數(shù)第10天例數(shù)體質(zhì)量（g）235.75±5.75 243.92±3.78 231.07±2.32體質(zhì)量（g）289.64±6.14 291.01±4.23 283.38±4.98體質(zhì)量（g）187.78±4.63 185.67±3.54 182.24±4.12第17天例數(shù)8 8 7 8 7 6 5 4 3

2.2 噴嚏試驗(yàn)結(jié)果

第6天實(shí)驗(yàn)大鼠噴嚏試驗(yàn)結(jié)果：空白組和假手術(shù)組噴嚏試驗(yàn)均為陰性；模型組有4只大鼠噴嚏試驗(yàn)陽(yáng)性，模型組與空白組、假手術(shù)比，噴嚏試驗(yàn)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.026＜0.05），結(jié)果見表2。

表2 各組大鼠噴嚏試驗(yàn)結(jié)果

2.3 尿道括約肌組織形態(tài)學(xué)結(jié)果

尿道括約肌組織形態(tài)學(xué)染色結(jié)果：各組大鼠在第10天隨機(jī)挑選3只取材后進(jìn)行Masson染色，從圖中可見空白組和假手術(shù)組大鼠尿道組織在4倍鏡下見尿道結(jié)構(gòu)完整，尿道外括約肌包膜光滑無(wú)破裂，10倍鏡下可見尿道括約肌纖維結(jié)構(gòu)排列緊密整齊，無(wú)明顯充血及炎性滲出（圖A、圖D，圖B、圖E）；模型組大鼠尿道組織在4倍鏡下見尿道外括約肌組織結(jié)構(gòu)松散，紅色箭頭所指處可見細(xì)胞間質(zhì)炎性滲出伴血腫，結(jié)締組織增生，10倍鏡下見尿道外括約肌肌纖維排列結(jié)構(gòu)紊亂，而尿道橫紋括約肌結(jié)構(gòu)完整排列尚整齊（圖C、圖F）。

2.4 尿動(dòng)力學(xué)檢測(cè)結(jié)果

3組大鼠尿動(dòng)力學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示：組內(nèi)比較，模型組第10天MBC較第3天降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.017），第10天LPP較第3天降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.017），第17天與第3天比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.017）；空白組、假手術(shù)組第3天、第10天和第17天之間比較MBC和LPP差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.017）；組間比較，模型組第10天MBC較假手術(shù)降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.017），模型組第10天LPP較假手術(shù)降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.017）；造模后第3天、第10天和第17天空白組和假手術(shù)組MBC和LPP比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）；通過(guò)以上結(jié)果我們發(fā)現(xiàn)采用尿道灼傷法造?？稍谛g(shù)后1周內(nèi)降低雄性SD大鼠MBC和LPP，結(jié)果見表3-表4和圖2-圖3。

圖1 各組大鼠近端尿道組織Masson染色結(jié)果

圖2 各組大鼠最大膀胱容量測(cè)定結(jié)果比較

圖3 各組大鼠漏尿點(diǎn)壓測(cè)定結(jié)果比較

表3 各組大鼠最大膀胱容量平均值比較（±s，mL）

表3 各組大鼠最大膀胱容量平均值比較（±s，mL）

注：組內(nèi)比較，與第3天比較，*P＜0.017；組間比較，與假手術(shù)組比較，△P＜0.017。

組別空白組假手術(shù)組模型組第3天例數(shù)第10天例數(shù)第17天例數(shù)MBC（mL）0.95±0.14 0.97±0.23 0.72±0.18 8 8 8 MBC（mL）0.91±0.14 0.90±0.09 0.95±0.18 8 7 6 MBC（mL）0.98±0.12 0.93±0.21 0.42±0.19△*5 4 3

表4 各組大鼠漏尿點(diǎn)壓平均值比較（±s，cmH2O）

表4 各組大鼠漏尿點(diǎn)壓平均值比較（±s，cmH2O）

注：組內(nèi)比較，與第3天比較，*P＜0.017；組間比較，與假手術(shù)組比較，△P＜0.017。

LPP（cmH2 O）90.43±3.84 87.35±4.95 86.22±5.43組別第3天例數(shù)LPP（cmH2 O）86.42±3.52 82.36±4.82 82.81±5.32第17天例數(shù)第10天例數(shù)空白組假手術(shù)組模型組8 8 8 8 7 6 LPP（cmH2O）88.68±4.32 86.33±3.43 51.98±4.58△*5 4 3

3 討論

壓力性尿失禁高危因素主要包含年齡、肥胖、分娩、雌激素改變等，所以臨床上在正常人群中，女性壓力性尿失禁的患病率要比男性高出3-5倍。女性多胎分娩及圍絕經(jīng)期雌激素變化使壓力性尿失禁患病率明顯上升[17]，男性由于較長(zhǎng)的膜性尿道結(jié)構(gòu)和膀胱頸尿道口特殊解剖結(jié)構(gòu)，使得患?jí)毫π阅蚴Ы母怕瘦^低。然而前列腺癌根治術(shù)為了減少切緣陽(yáng)性率，需要進(jìn)行完整前列腺以及膀胱頸、尿道括約肌、精阜等組織的切除，同時(shí)清掃盆腔淋巴結(jié)，即使目前先進(jìn)的機(jī)器人腹腔鏡手術(shù)中最大程度保留控尿神經(jīng)血管束核盆底結(jié)構(gòu)，但重建膀胱頸和尿道使得男性正常盆腔結(jié)構(gòu)遭破壞無(wú)可避免[18]。早在上世紀(jì)國(guó)外學(xué)者通過(guò)“整體理論”和“吊床理論”強(qiáng)調(diào)盆底韌帶肌肉及內(nèi)臟筋膜等組織復(fù)雜的互相作用形成一個(gè)動(dòng)態(tài)平衡的盆底支撐結(jié)構(gòu)，而不是簡(jiǎn)單的各部分組織結(jié)構(gòu)累加，該結(jié)構(gòu)對(duì)維持下尿路正常控尿機(jī)能上發(fā)揮重要作用，雌性壓力性尿失禁大鼠造模方法主要通過(guò)模擬產(chǎn)傷、尿道灼傷等破壞盆底結(jié)構(gòu)來(lái)構(gòu)造尿失禁的病理狀態(tài)[19]，手術(shù)操作難度不高、模型穩(wěn)定性可，有了簡(jiǎn)便穩(wěn)定的動(dòng)物模型后女性盆底障礙性疾病手術(shù)也產(chǎn)生了飛躍性進(jìn)展。而雄性尿失禁動(dòng)物模型的類型較少，目前只有大鼠、小鼠有相應(yīng)的模型制作方法，但缺乏統(tǒng)一的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，因此我們需要通過(guò)該疾病的臨床特征，結(jié)合相應(yīng)的理化檢查來(lái)建立和評(píng)估相應(yīng)動(dòng)物模型的穩(wěn)定性，并根據(jù)干預(yù)方式的特點(diǎn)選擇合適的動(dòng)物模型來(lái)研究疾病的生理病理機(jī)制。

根據(jù)RPUI臨床特征，患者切除前列腺的同時(shí)縮短膜性尿道長(zhǎng)度、損傷尿道括約肌及其支配神經(jīng)、破壞盆底組織結(jié)構(gòu)，術(shù)后短期內(nèi)發(fā)生尿失禁的原因主要是由于手術(shù)導(dǎo)致尿道括約肌功能減退、膜性尿道缺失造成盆底組織結(jié)構(gòu)失衡，通過(guò)盆底肌功能訓(xùn)練、生物反饋等治療可改善漏尿癥狀，超過(guò)12個(gè)月后由于盆底組織疤痕增生、尿道括約肌纖維化等原因，導(dǎo)致尿失禁難以自行恢復(fù)而需通過(guò)二次手術(shù)、干細(xì)胞注射等治療方案來(lái)重塑盆底結(jié)構(gòu)[20]，由于手術(shù)過(guò)程中切除了整個(gè)前列腺和膀胱頸，術(shù)后膜性尿道長(zhǎng)度即重建后的膀胱頸到陰莖球部尿道距離減少，可導(dǎo)致重塑后的膀胱頸位置下移、尿道括約肌變薄變短，再加上術(shù)后長(zhǎng)時(shí)間留置導(dǎo)尿引起尿道外括約肌麻痹和松弛，以上這些原因均是導(dǎo)致盆底結(jié)構(gòu)破壞、尿道閉合壓下降，最終影響RPUI患者控尿能力[21]。在治療上保守治療首推盆底肌功能鍛煉，然而來(lái)自Cochrane的系統(tǒng)綜述中表明盆底肌功能訓(xùn)練只能加速尿失禁恢復(fù)，并不能提高術(shù)后尿失禁的有效率[22]，對(duì)術(shù)后尿失禁的有效治療主要集中在人工括約肌置入、陰莖袖套等二次手術(shù)上。但二次手術(shù)高昂的費(fèi)用及患者明顯的心理負(fù)擔(dān)又使手術(shù)開展率低下。

針灸作為一種保守治療的方法自古就有記錄可治療排尿功能障礙性疾病。《靈樞·癲狂》：“內(nèi)閉不得溲，刺足少陰、太陽(yáng)于骶上以長(zhǎng)針?！惫糯t(yī)家認(rèn)為長(zhǎng)針透刺腰骶部特定腧穴后可通過(guò)循經(jīng)感傳，調(diào)節(jié)膀胱經(jīng)氣，振奮膀胱機(jī)能，達(dá)到固澀止遺之效。腰骶部腧穴所對(duì)應(yīng)的脊神經(jīng)節(jié)段主要為S2-4，與盆神經(jīng)進(jìn)入骶髓排尿中樞的部分重合，有調(diào)節(jié)膀胱和尿道括約肌的作用，針刺腰骶部腧穴對(duì)下尿路排尿功能障礙具有雙向調(diào)節(jié)作用，既可降低膀胱過(guò)度活動(dòng)癥患者的逼尿肌興奮性，又可提高壓力性尿失禁患者的尿道阻力，因此針灸治療泌尿系統(tǒng)疾病的機(jī)制可能為提高了膀胱尿道的順應(yīng)性[23]。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)電針刺激雌性壓力性尿失禁大鼠骶尾部腧穴對(duì)尿道括約肌功能有著顯著的調(diào)節(jié)作用，通過(guò)尿動(dòng)力學(xué)等評(píng)價(jià)方法，證實(shí)針刺可降低膀胱內(nèi)壓，提高尿道閉合壓，而根據(jù)“異病同治”理論又進(jìn)行了男性尿失禁的臨床小樣本觀察，發(fā)現(xiàn)同樣的配穴方案也可改善男性RPUI患者術(shù)后尿失禁程度。為了進(jìn)一步研究針刺控尿機(jī)制需要選擇適合的尿失禁動(dòng)物模型，鑒于針灸治療需要一定療程，所選模型穩(wěn)定性非常重要，穩(wěn)定性過(guò)低會(huì)導(dǎo)致后期自愈傾向出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果，若造模時(shí)對(duì)模型形成不可逆損傷盡管長(zhǎng)效穩(wěn)定，但對(duì)針灸治療可能會(huì)出現(xiàn)假陰性結(jié)果，此類模型更適用于神經(jīng)肌肉再生性研究而不適合針灸。為此，我們亟需尋找適合研究針刺控尿的RPUI動(dòng)物模型，并選擇合適的下尿路評(píng)估方法，這對(duì)泌尿系統(tǒng)疾病的機(jī)制探索和治療方案評(píng)估非常重要[24]，因?yàn)楹侠硪?guī)范、客觀科學(xué)的評(píng)估方案同樣對(duì)研究電針治療尿失禁動(dòng)物模型的控尿機(jī)制及臨床推廣意義重大。

本研究采用尿道括約肌電灼傷法進(jìn)行造模，該方法模擬了患者手術(shù)過(guò)程中電凝刀對(duì)盆底組織造成的灼傷狀態(tài)，電灼傷對(duì)大鼠兩側(cè)尿道括約肌造成直接損傷外還破壞了貼在尿道兩側(cè)的神經(jīng)血管等組織，本造模方法操作簡(jiǎn)單、可重復(fù)性高，模型大鼠會(huì)出現(xiàn)ISD表現(xiàn)，符合術(shù)后尿失禁的臨床病理特點(diǎn)，然而本法也存在一定局限性，電灼傷主要是肌源性損傷，無(wú)法復(fù)制根治術(shù)過(guò)程中可能發(fā)生的所有損傷，為此我們將進(jìn)一步尋找更符合RPUI病理機(jī)制和發(fā)病過(guò)程的造模方法用來(lái)探索針刺控尿的療效判定。本研究通過(guò)觀察噴嚏實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性率、尿道括約肌組織形態(tài)學(xué)觀察和尿動(dòng)力學(xué)測(cè)定來(lái)評(píng)估模型穩(wěn)定性。噴嚏試驗(yàn)在模型組陽(yáng)性率不高（57.14%），與空白組、模型組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，偏低的陽(yáng)性率可能與樣本量小、大鼠性別、麻醉大鼠仰臥位測(cè)量有關(guān)，戊巴比妥鈉麻醉時(shí)間、麻醉量、大鼠精神狀態(tài)等各項(xiàng)指標(biāo)也可能影響噴嚏試驗(yàn)，噴嚏試驗(yàn)通過(guò)誘發(fā)噴嚏模擬腹壓增高狀態(tài)檢驗(yàn)?zāi)Ｐ痛笫舐┠蚯闆r，與壓力性尿失禁患者臨床表現(xiàn)最相符，團(tuán)隊(duì)前期研究中，通過(guò)模擬產(chǎn)傷法制備雌性SD大鼠壓力性尿失禁模型后進(jìn)行噴嚏試驗(yàn)，陽(yáng)性率約67.8%左右，RPUI模型大鼠的噴嚏試驗(yàn)結(jié)果可作為判定模型成功的參考指標(biāo)并非主要指標(biāo)，模型建立成功與否需進(jìn)一步行組織學(xué)觀察及尿動(dòng)力測(cè)定。Masson三色染色是對(duì)膠原、結(jié)締組織經(jīng)典的染色法，在Masson染色中膠原纖維、結(jié)締組織等會(huì)呈藍(lán)色，胞漿肌肉、纖維素等呈紅色，細(xì)胞核呈藍(lán)黑色，大鼠尿道解剖結(jié)提示膀胱、前列腺、尿道構(gòu)成的尿路系統(tǒng)存在豐富的彈力纖維如盆底筋膜及尿道懸韌帶，這些組織含有豐富膠原在Masson染色下更能清晰地被識(shí)別，我們前期研究發(fā)現(xiàn)雌性壓力性尿失禁大鼠盆底組織中的I、III型膠原較正常大鼠減少，故本研究采用Masson染色法觀察RPUI模型中尿道括約肌形態(tài)。通過(guò)觀察我們此次實(shí)驗(yàn)中尿道組織的Masson染色的組織學(xué)圖片可發(fā)現(xiàn)SD大鼠的尿道括約肌分為內(nèi)層的尿道橫紋肌以及外層的尿道外括約肌，內(nèi)側(cè)的橫紋肌組織與尿道壁結(jié)締組織并非有清晰的隔膜而是互相嵌插重疊的，當(dāng)橫紋括約肌收縮時(shí)可封閉尿道來(lái)提高尿道壓防止漏尿。Masson染色的特殊顯示可見尿道上皮及尿道橫紋括約肌周圍分布大量膠原纖維，尿道括約肌呈Ω狀附在尿道周圍，尿道括約肌細(xì)胞比普通骨骼肌細(xì)胞小，這些排列緊密的肌纖維參與了尿道支撐結(jié)構(gòu)，對(duì)控尿發(fā)揮重要作用，當(dāng)排尿時(shí)由骶髓初級(jí)中樞發(fā)出神經(jīng)沖動(dòng)控制尿道括約肌開闔使尿道膀胱頸開放以利小便排出。尿道周圍的括約肌受損影響接受來(lái)自中樞神經(jīng)支配時(shí)，就無(wú)法完成主動(dòng)收縮或被動(dòng)協(xié)調(diào)盆底支撐結(jié)構(gòu)聯(lián)動(dòng)作用。模型組大鼠由于尿道外括約肌受到電灼傷，肌纖維出現(xiàn)明顯病理改變，因此造成控尿能力降低，且術(shù)后形成疤痕組織較難恢復(fù)如初，后期控尿能力的恢復(fù)并非尿道括約肌功能恢復(fù)，而是通過(guò)尿道平滑肌、盆底支撐組織功能代償來(lái)改善尿失禁。我們對(duì)第3、10、17天的尿動(dòng)力分別進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)模型組大鼠第10天MBC和LPP均降低，但第17天尿動(dòng)力數(shù)據(jù)趨于正常組數(shù)據(jù)，出現(xiàn)這種情況可能的原因有以下兩點(diǎn)：①SD大鼠身體自我修復(fù)能力強(qiáng)，第17天大鼠已經(jīng)出現(xiàn)自愈傾向，因此尿動(dòng)力學(xué)結(jié)果趨于正常；②由于雄性SD大鼠尿道較雌性大鼠長(zhǎng)，且有兩次生理狹窄，尿動(dòng)力檢測(cè)需要反復(fù)進(jìn)行導(dǎo)尿管插管，這將對(duì)雄性大鼠尿道造成損傷，損傷可表現(xiàn)為尿道粘膜水腫增加了尿道閉合壓，本次研究第17天三組大鼠中均出現(xiàn)不同程度的尿道損傷，具體表現(xiàn)為導(dǎo)尿管插入過(guò)程中反復(fù)遇阻、尿道出血等，尿動(dòng)力測(cè)定的MBC和LPP值可能呈假陰性，最終統(tǒng)計(jì)結(jié)果出現(xiàn)測(cè)量偏倚，今后可通過(guò)增加樣本量或改良尿動(dòng)力檢測(cè)方式來(lái)提高數(shù)據(jù)質(zhì)量。有研究者采用腹壓漏尿點(diǎn)壓結(jié)合最大尿道閉合壓對(duì)RPUI患者進(jìn)行尿動(dòng)力學(xué)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)上述方法可以良好的評(píng)估尿道括約肌功能，是前列腺根治術(shù)后評(píng)價(jià)尿失禁可行的方案[25]，在雌性尿失禁動(dòng)物模型上也證實(shí)腹壓漏尿點(diǎn)壓和逆行漏尿點(diǎn)壓均能客觀評(píng)估尿失禁程度[26]，然而缺乏雄性尿失禁大鼠相關(guān)指標(biāo)的評(píng)價(jià)研究，今后研究可采用順行尿動(dòng)力檢測(cè)以避免對(duì)遠(yuǎn)端尿道的損傷程度，減少實(shí)驗(yàn)誤差，提高數(shù)據(jù)客觀性。

綜上所述，尿道括約肌電灼傷法可以成功建立RPUI大鼠模型，模型具有可重復(fù)性，且該模型癥狀、病理和尿動(dòng)力均符合術(shù)后尿失禁患者臨床表現(xiàn)及體征，是研究RPUI的理想模型。模型建立后7天內(nèi)穩(wěn)定性較高，我們通常采用電針治療尿失禁模型大鼠的時(shí)間是5天左右，因此本模型適用于研究電針控尿的近期療效，而遠(yuǎn)期療效評(píng)估則需選擇長(zhǎng)效穩(wěn)定的動(dòng)物模型。本實(shí)驗(yàn)首次采用噴嚏實(shí)驗(yàn)結(jié)合尿道括約肌組織學(xué)涂片及尿動(dòng)力檢測(cè)等方法來(lái)評(píng)估RPUI動(dòng)物模型穩(wěn)定性，并對(duì)尿動(dòng)力檢測(cè)可能存在的測(cè)量偏倚進(jìn)行深入分析。目前關(guān)于RPUI的研究熱點(diǎn)多集中前列腺癌根治術(shù)方式改良及臨床療效評(píng)估，電針作為保守治療方法之一，尚缺乏嚴(yán)謹(jǐn)?shù)碾S機(jī)對(duì)照研究[27]，同樣也缺少相關(guān)的電針控尿機(jī)制研究，因此，為了進(jìn)一步開展電針治療RPUI的臨床和基礎(chǔ)研究，動(dòng)物模型的穩(wěn)定性至關(guān)重要，今后我們將在此實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上改良尿動(dòng)力評(píng)估方法，同時(shí)對(duì)模型動(dòng)物中樞神經(jīng)系統(tǒng)與外周盆底組織的神經(jīng)傳導(dǎo)遞質(zhì)進(jìn)行探索，擬為下一步驗(yàn)證電針治療尿失禁的控尿機(jī)制和作用靶點(diǎn)提供可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。