趙宏宇，王 舒，周 帆

（1. 鎮(zhèn)平縣人民醫(yī)院檢驗科，河南南陽 473000；2. 南石醫(yī)院）

急性心力衰竭（acute heart failure，AHF）屬于心力衰竭的一種，其中急性左心衰竭的發(fā)生率高于急性右心衰竭，且此類患者多出現(xiàn)急性肺水腫和心源性休克臨床癥狀[1]。目前，臨床認(rèn)為AHF的發(fā)病與心室充盈和（或）射血功能因各種心臟結(jié)構(gòu)或功能性疾病受損相關(guān)，機(jī)體組織代謝需求增加，而心排血量無法滿足，最終導(dǎo)致疾病發(fā)生發(fā)展[2]。既往研究顯示，隨著人口老齡化的加劇、營養(yǎng)狀況不均衡、心血管疾病危險因素增多等，AHF的患病率呈上升趨勢并對人類的生命安全造成嚴(yán)重威脅[3]。AHF的病因復(fù)雜多樣、預(yù)后情況較差，故對此病的鑒別診斷仍是臨床工作的重點和難點。早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療是改善患者病情、減少住院時間、降低死亡率的重要措施[4]。研究發(fā)現(xiàn)，血清中部分指標(biāo)水平在AHF的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用，可成為AHF診斷和預(yù)后評估的重要生物標(biāo)志物[5]。在本文研究中，對75例急性心力衰竭患者血清中miR-181b、E-選擇素（endothelium-selectin，E-selectin）、可溶性人基質(zhì)裂解素2（soluble isoform of suppression of tumorigenicity 2，sST2）水平進(jìn)行檢測，探究上述指標(biāo)在AHF中的診斷價值、臨床應(yīng)用價值，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選取2021年1月～2022年1月于鎮(zhèn)平縣人民醫(yī)院接受治療的75例急性心力衰竭患者作為AHF組研究對象，另外在同一時期選取體檢健康人61名作為對照組研究對象。AHF組男35例、女40例，平均年齡（58.23±6.23）歲，按照美國紐約心臟病學(xué)會分級標(biāo)準(zhǔn)將心功能分級[6]：Ⅱ級46例、Ⅲ級21例、Ⅳ級8例。對照組男31例、女30例，平均年齡（58.14±6.27）歲，上述對象資料均衡可比（P＞0.05）。

1.1.1 納入標(biāo)準(zhǔn) AHF組：符合《急性心力衰竭診斷和治療指南》[7]中AHF診斷標(biāo)準(zhǔn)且經(jīng)臨床癥狀及體征、實驗室檢查及影像學(xué)檢查等確診者。對照組：身體健康無異常者。

1.1.2 排除標(biāo)準(zhǔn) 嚴(yán)重肝腎疾病、免疫或血液系統(tǒng)疾病者；合并慢性心力衰竭者；急、慢性感染性疾病者；孕產(chǎn)婦及哺乳期婦女。

1.2 指標(biāo)檢測

1.2.1 熒光定量聚合酶檢測miR-181b miR-181b采用熒光定量聚合酶檢測，將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，條件：25℃、50℃、85℃（10min、45min、5min）。cDNA進(jìn)行擴(kuò)增，引物：miR-181b，F(xiàn)：5’-GCGGATCATTCATTGCTGTCG-3’，R：5’-G T G C A G G G T C C G A G G T-3’。以U6為內(nèi)參，F(xiàn)：5’-G G T TA G A A G T C ATA C G-3’，R：5’-TGTCATGAATGATCC-3’。反應(yīng)體系為：10μL BeyoFastTMSYBRGreenqPCRMix（2×），2μL cDNA模板，1μL上下游引物和6μL H2O。產(chǎn)物擴(kuò)增條件：95℃預(yù)變性、變性均5min，95℃退火、72℃延伸分別15s、30s，共40個循環(huán)，miR-181b相對表達(dá)量采用2-ΔΔCt計算。

1.2.2 酶聯(lián)免疫吸附法檢測E-selectin、sST2 E-selectin、sST2均采用酶聯(lián)免疫吸附法，將冰箱中血清標(biāo)本取出放置室溫30s，備置標(biāo)準(zhǔn)血清及溶液，300μL洗板液洗板30s，微孔拍干后加入檢測緩沖液、標(biāo)準(zhǔn)液、樣本、檢測抗體均50μL，封板，震蕩，室溫（37℃）孵育2h，洗板，100μL的酶標(biāo)記物導(dǎo)入檢測孔，封板，震蕩，放置室溫內(nèi)45min，洗板，將100μL底物液加入微孔，避光孵育30min、終止液100μL、震蕩，在450nm處使用酶標(biāo)儀測吸光值。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 26.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。用Kolmogorov-Smirnov檢驗數(shù)據(jù)是否符合正態(tài)分布，符合則計量資料使用（）進(jìn)行描述，組間兩兩比較采用獨(dú)立t檢驗，計數(shù)資料以%表示，多組間行F值數(shù)據(jù)計算，以Logistic回歸模型分析miR-181b、E-selectin、sST2與AHF的關(guān)系，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 miR-181b、E-selectin、sST2在AHF組的水平

相比對照組，AHF組miR-181b顯著較低，E-selectin、sST2顯著升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 miR-181b、E-selectin、sST2在AHF組的水平（）

表1 miR-181b、E-selectin、sST2在AHF組的水平（）

對比對照組，△P＜0.05

組別 例數(shù) miR-181b E-selectin（pg/mL） sST2（ng/L）AHF組 75 18.34±1.86△5167.94±517.23△1654.23±166.71△對照組 61 27.58±2.79 248.56±24.87 587.46±58.77

2.2 miR-181b、E-selectin、sST2在不同分級AHF組中比較

相比心功能Ⅱ級，心功能Ⅲ級、心功能Ⅳ級miR-181b顯著降低，E-selectin、sST2顯著升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；相比心功能Ⅲ級，心功能Ⅳ級miR-181b降低、E-selectin、sST2升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 miR-181b、E-selectin、sST2在不同分級AHF組中比較（）

表2 miR-181b、E-selectin、sST2在不同分級AHF組中比較（）

對比心功能Ⅱ級，*P＜0.05；對比心功能Ⅲ級，#P＜0.05

不同分級例數(shù)miR-181b E-selectin（pg/mL） sST2（ng/L）心功能Ⅱ級46 21.46±2.18 4317.65±431.58 1482.56±148.37心功能Ⅲ級21 17.59±1.78*5367.28±536.79*1659.74±166.02*心功能Ⅳ級8 15.23±1.56*# 7215.49±722.36*# 2015.49±201.67*#

2.3 miR-181b、E-selectin、sST2之間相關(guān)性分析

以miR-181b、E-selectin、sST2進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果顯示，miR-181b、E-selectin負(fù)相關(guān)（r=-0.539、P=0.001）；miR-181b、sST2負(fù)相關(guān)（r=-0.439、P=0.001）；E-selectin、sST2正相關(guān)（r=0.511、P=0.001）。見附圖。

附圖 miR-181b、E-selectin、sST2之間相關(guān)性分析

2.4 AHF發(fā)生影響因素的多元Logistic回歸分析

AHF為因變量（未發(fā)生=0，發(fā)生=1），miR-181b、E-selectin、sST2為自變量，賦值升高設(shè)為1，正常設(shè)為0，納入二分類多因素Logistic回歸模型分析。結(jié)果顯示，miR-181b、E-selectin、sST2為影響AHF發(fā)生的危險因素，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表3。

表3 AHF發(fā)生影響因素的多元Logistic回歸分析

2.5 miR-181b、E-selectin、sST2對AHF的診斷價值

與miR-181b、E-selectin、sST2單一診斷相比，聯(lián)合診斷對AHF的診斷價值較高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表4。

表4 miR-181b、E-selectin、sST2對AHF的診斷價值（%）

3 討論

急性心力衰竭是由于心臟突發(fā)結(jié)構(gòu)及功能異常，心排出量在短時間內(nèi)顯著降低，進(jìn)而引起組織灌注量不足、循環(huán)阻力增加并發(fā)生肺循環(huán)和體循環(huán)瘀血的一種臨床綜合征[8-10]。臨床癥狀、實驗室檢查結(jié)果有助于輔助AHF的診斷。在本文研究中，選取AHF患者血清miR-181b、E-selectin、sST2作為生物標(biāo)志物，探究上述指標(biāo)在AHY中的診斷價值。

有研究顯示，大部分miRNA分布于血液中，可調(diào)節(jié)靶基因降解和調(diào)控轉(zhuǎn)錄后基因表達(dá)且在組織細(xì)胞中表達(dá)具有特異性，可根據(jù)其水平變化評估心血管疾病的發(fā)生發(fā)展[11]。多數(shù)臨床研究表明，miRNA介導(dǎo)的基因調(diào)控在多種生理病理過程中具有調(diào)節(jié)作用，心力衰竭的發(fā)生發(fā)展中有較多miRNA表達(dá)存在特異性，且被證實在心力衰竭中對疾病的發(fā)生發(fā)展起著重要作用[12,13]。如，miRNA-423-5p在人類衰竭的心肌中呈高表達(dá)，表明在心力衰竭患者心肌中循環(huán)miRNA-423-5p顯著增加，臨床可根據(jù)心力衰竭患者心肌中miRNA-423-5p水平變化評估疾病進(jìn)展，且miRNA-423-5p有望成為輔助疾病診斷的生物學(xué)指標(biāo)。miR-181b是miR-181家族主要成員之一，可調(diào)節(jié)血管的生理病理過程，其作用機(jī)制可能為通過靶細(xì)胞下調(diào)平滑肌細(xì)胞的基因表達(dá)，穩(wěn)定外周血腫，且在心肌肥大等心血管疾病中發(fā)揮重要作用，對心肌細(xì)胞的凋亡具有調(diào)節(jié)功能[14]。本研究結(jié)果顯示，miR-181b在AHF患者血清中表達(dá)顯著低于健康體檢者，且隨著患者心功能級別升高，表達(dá)水平顯著降低，與心功能級別呈反比，臨床可根據(jù)miR-181b水平變化評估AHF患者心功能分級和疾病進(jìn)展，為患者的治療及診斷提供一定的依據(jù)。

血小板選擇素、內(nèi)皮細(xì)胞選擇素、白細(xì)胞選擇素均是細(xì)胞黏附因子家族的重要組成成員，在機(jī)體發(fā)生炎癥時，白細(xì)胞、白細(xì)胞與血小板以及白細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞之間相互黏附；還在血栓形成、淋巴細(xì)胞歸巢、自身免疫性疾病中起著重要的調(diào)節(jié)作用，對心肌細(xì)胞功能衰竭產(chǎn)生影響[15,16]。大多數(shù)組織細(xì)胞中均有選擇素的存在，而E-selectin是其類型之一，也是一種跨膜糖蛋白，主要表達(dá)于活化的內(nèi)皮細(xì)胞中。既往研究證實，充血性心力衰竭患者血清中E-selectin水平顯著高于正常體檢，且E-selectin水平伴隨心功能分級升高[17]。此外，充血性心力衰竭患者體內(nèi)存在顯著的機(jī)體炎癥反應(yīng)，E-selectin水平與心肌組織中炎癥細(xì)胞浸潤、充血性心力衰竭程度以及充血性心力衰竭的進(jìn)程密切相關(guān)，說明E-selectin水平升高可能是心肌細(xì)胞壞死和充血性心力衰竭反復(fù)發(fā)病并持續(xù)進(jìn)展的重要因素，即血清E-selectin水平持續(xù)升高意味著AHF患者病情加重。

既往研究結(jié)果證實，sST2參與AHF的生理病理過程，是診斷此病的生物標(biāo)志物，但其水平變化與患者臨床基線資料無關(guān)[18,19]。另外，sST2水平可預(yù)測AHF患者1年內(nèi)終點事件率，但在本文研究中并未對AHF患者血清sST2表達(dá)與上述臨床基線資料和1年內(nèi)終點事件發(fā)生率進(jìn)行分析，存在一定局限性，后續(xù)研究有待深入探究。心功能分級在一定程度上可直觀反映AHF程度，在重度AHF患者血清中sST2水平顯著高于輕度AHF患者，進(jìn)一步表明sST2可作為AHF程度的診斷的重要生物標(biāo)志物，與本文研究結(jié)果一致[20]。在本文研究中，AHF患者血清中sST2呈高表達(dá)且心功能分級越高、sST2水平越高，其原因可能為sST2通過與白介素細(xì)胞-33結(jié)合形成IL-33/ST2L軸，發(fā)揮保護(hù)機(jī)體過度應(yīng)答。在AHF發(fā)生發(fā)展時，因心室容量負(fù)荷短時間內(nèi)急劇增加、受壓力刺激，心肌細(xì)胞和成纖維細(xì)胞分泌過多的sST2，若心力衰竭病情不能及時控制，將進(jìn)一步導(dǎo)致心肌肥大以及纖維化，使心臟在原有疾病基礎(chǔ)上雪上加霜，甚至對患者生命安全造成威脅。

綜上所述，本文研究結(jié)果顯示，miR-181b、E-selectin、sST2參與AHF的發(fā)病過程，其中miR-181b在AHF患者血清中呈低表達(dá)，E-selectin、sST2在AHF患者血清中呈高表達(dá)，且與AHF患者的心功能分級密切相關(guān)，早期檢測可作為臨床輔助診斷AHF和評估病情的重要指標(biāo)，具有重要的臨床參考價值。但本文研究仍存在不足之處，如樣本量小、研究對象單一、病例來源受地域限制，故在今后研究中需增加樣本量、納入多中心研究對象并擴(kuò)大病例來源范圍，以證實本文研究的準(zhǔn)確性。