張藝林，劉靜飛，任夢夢，牛力源,2,3，張志堅(jiān),2,3

1.鄭州輕工業(yè)大學(xué) 食品與生物工程學(xué)院，河南 鄭州 450001；2.河南省冷鏈?zhǔn)称焚|(zhì)量安全控制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，河南 鄭州 450001；3.食品生產(chǎn)與安全河南省協(xié)同創(chuàng)新中心，河南 鄭州 450001

0 引言

食品加工環(huán)節(jié)中的殺菌技術(shù)分為熱殺菌和非熱殺菌。熱殺菌是一種常用的殺菌方式，但高溫會(huì)破壞維生素等熱敏性營養(yǎng)成分及風(fēng)味物質(zhì)，易對食品營養(yǎng)和感官品質(zhì)造成不良影響[1-3]。超高壓、紫外線、加壓CO2等非熱殺菌技術(shù)具有處理溫度低、節(jié)能、殺菌效果好等優(yōu)點(diǎn)，近年來在食品保鮮領(lǐng)域受到廣泛關(guān)注[4-5]。

CO2具有化學(xué)惰性及無腐蝕性、高揮發(fā)性、價(jià)格低廉等優(yōu)點(diǎn)，單獨(dú)作用即可抑制微生物生長[6]，但不足以殺死微生物，若將其與壓力結(jié)合，則能達(dá)到更好的殺菌效果，加壓CO2殺菌技術(shù)在果蔬、肉制品、谷物、液體食品的加工、貯藏與保鮮中的應(yīng)用已有廣泛研究[7-9]。根據(jù)壓力的不同，加壓CO2殺菌技術(shù)分為高壓CO2(High Pressure Carbon Dioxide，HPCD)殺菌技術(shù)和微高壓CO2(petit-High Pressure Carbon Dioxide,p-HPCD)殺菌技術(shù)。其中，HPCD殺菌技術(shù)中的CO2壓力通常處于亞臨界狀態(tài)(2.00～7.38 MPa)[10]甚至超臨界狀態(tài)(>7.38 MPa)[11-12]，而p-HPCD殺菌技術(shù)中的CO2壓力通常為0.15～1.30 MPa[13]。由于p-HPCD殺菌技術(shù)對CO2壓力需求較小，因此具有諸多優(yōu)勢：1)比冷藏技術(shù)的抑菌效果好；2)可有效減少加工設(shè)備的資金投入；3)可在p-HPCD狀態(tài)下運(yùn)輸食品，減少運(yùn)輸安全隱患[13]。

目前，關(guān)于p-HPCD殺菌技術(shù)的相關(guān)研究主要集中在日本清酒、傳統(tǒng)腌漬食品等生產(chǎn)加工領(lǐng)域[14-15]，其對肉制品中常見腐敗菌的殺滅效果及作用機(jī)制尚不清楚。PseudomonasdeceptionensisCM2是謝美娟等[16]從雞胸肉中分離出的一株具有較強(qiáng)致腐力的細(xì)菌，本文以其為目標(biāo)菌株，研究p-HPCD殺菌技術(shù)在不同壓力、保壓時(shí)間下對P.deceptionensisCM2的殺菌效果及作用機(jī)制，以期為p-HPCD殺菌技術(shù)在肉制品安全控制領(lǐng)域的應(yīng)用提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

P.deceptionensisCM2菌株，分離自腐敗雞胸肉，由鄭州輕工業(yè)大學(xué)實(shí)驗(yàn)室分離鑒定并保存，已經(jīng)分子生物學(xué)鑒定為P.deceptionensis；高純CO2(純度為99.9%)，購自河南迎眾化工產(chǎn)品有限公司；胰蛋白胨大豆肉湯(TSB)培養(yǎng)基、瓊脂粉，購自青島海博生物技術(shù)公司；體積分?jǐn)?shù)為2.5%的戊二醛(AR)、碘化丙啶(PI)、雙(1,3-二丁基巴比妥酸)三次甲基氧雜菁(DiBAC4(3))、乙酸異戊酯(AR)，購自上海阿拉丁生物科技股份有限公司。

1.2 主要儀器與設(shè)備

OST-200 ML型微高壓CO2殺菌實(shí)驗(yàn)裝置，西安歐士特儀器科技有限公司產(chǎn)；20049C型紫外可見分光光度計(jì)，北京普析通用儀器責(zé)任有限公司產(chǎn)；3K15型臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)，德國SIGMA實(shí)驗(yàn)室離心機(jī)公司產(chǎn)；SW-CJ-1FD型超凈工作臺(tái)，蘇州凈化設(shè)備有限公司產(chǎn)；MQD-S2R型恒溫振蕩培養(yǎng)箱，上海旻泉儀器有限公司產(chǎn)；MERLIN Compact型場發(fā)射掃描電鏡(FE-SEM)，德國Zeiss公司產(chǎn)；HUS-5GB型真空蒸鍍儀，日本日立公司產(chǎn)；NanoReady型超微量紫外可見分光光度計(jì)，杭州遂真生物技術(shù)有限公司產(chǎn)；LDZM-60KCS型立式壓力滅菌鍋，上海申安醫(yī)療器械廠產(chǎn)；Tecan Spark 20 M型多功能酶標(biāo)儀，瑞士Tecan公司產(chǎn)；Eclipse 80i型熒光顯微鏡，日本尼康(Nikon)產(chǎn)。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 菌懸液制備將凍存的P.deceptionensisCM2菌株接種至TSB培養(yǎng)液中，于25 ℃條件下振蕩培養(yǎng)2～3 d，然后接種至TSA(在TSB中加入瓊脂粉制得)固體培養(yǎng)基，于25 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3 d。取單個(gè)菌落接種至新鮮TSB培養(yǎng)液中，于25 ℃條件下振蕩培養(yǎng)，并測定菌液在600 nm處的吸光度(OD600)，培養(yǎng)至OD600為0.9～1.0，備用。

1.3.2p-HPCD處理加壓CO2裝置示意圖如圖1所示，其中，1為CO2氣瓶，2為減壓閥，3為壓力顯示器，4為溫度顯示器，5為CO2反應(yīng)釜，6為恒溫水浴鍋。將加壓CO2反應(yīng)釜預(yù)熱至25 ℃，將P.deceptionensisCM2菌懸液加入無菌離心管中，打開離心管口并置于反應(yīng)釜中；通入高純CO2，加壓至實(shí)驗(yàn)所需壓力(0.5 MPa、0.9 MPa和1.3 MPa)，保壓一定時(shí)間(2 h、4 h和6 h)后，打開減壓閥，從反應(yīng)釜中取出樣品進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)分析。每個(gè)處理均重復(fù)3次。

圖1 加壓CO2裝置示意圖Fig.1 Schematic of pressurized CO2 setup

1.3.3 微生物菌落計(jì)數(shù)將p-HPCD處理后的菌液用磷酸緩沖鹽溶液(PBS緩沖液，0.01 mol/L)進(jìn)行10倍稀釋，選擇合適的稀釋度并吸取0.1 mL稀釋樣品滴于TSA平板上，使用涂布玻璃棒涂布均勻。于25 ℃條件下培養(yǎng)2～3 d后，進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)，結(jié)果以log10CFU/mL表示。

1.3.4 菌體細(xì)胞形態(tài)觀察取1 mL菌懸液，于4 ℃、3500 r/min條件下離心15 min，棄上清液，加入PBS緩沖液漂洗細(xì)胞2次，然后重懸浮于PBS緩沖液中。參考Q.S.Xiang等[17]的方法，采用FE-SEM觀察p-HPCD處理對P.deceptionensisCM2細(xì)胞形態(tài)的影響。在25 ℃、1.3 MPa條件下，將P.deceptionensisCM2菌液經(jīng)p-HPCD分別處理0 h、2 h、4 h和6 h后，于4 ℃、8000 r/min條件下離心5 min，收集菌體；用PBS緩沖液(pH值為7.2～7.4)清洗菌體3次，于4 ℃，8000 r/min條件下離心5 min，收集菌體；在菌體中加入1 mL預(yù)冷的2.5%戊二醛，于4 ℃冰箱中避光放置4 h后，用PBS緩沖液清洗菌體3次；分別用體積分?jǐn)?shù)為30%、50%、70%、80%、90%和95%的乙醇溶液對菌體進(jìn)行梯度洗脫15 min，再用乙醇洗脫2次，乙酸異戊酯置換2次，每次20 min，于4 ℃，8000 r/min條件下離心5 min，收集菌體；將菌體滴加在干凈的硅片上，于50 ℃烘箱中烘干，采用真空蒸鍍儀噴金150 s，采用FE-SEM進(jìn)行觀察，加速電壓為20 kV。

1.3.5 胞外核酸和蛋白滲漏量的測定在25 ℃、1.3 MPa條件下，將懸浮于PBS緩沖液中的P.deceptionensisCM2經(jīng)p-HPCD分別處理0 h、2 h、4 h和6 h后，取出樣品，于3500 r/min條件下離心15 min，收集上清液，使用超微量紫外可見分光光度計(jì)測定其在260 nm和280 nm處的吸光度，計(jì)算胞外核酸和蛋白滲漏量/(μg·mL-1)。

1.3.6 細(xì)胞膜完整性的測定參考相啟森等[18]的方法，將懸浮于PBS緩沖液中的P.deceptionensisCM2經(jīng)p-HPCD于25 ℃、1.3 MPa條件下分別處理0 h、2 h、4 h和6 h后，加入終濃度為3 μmol/L的PI染液，在37 ℃黑暗處孵育15 min的菌懸液于4 ℃，10 000 r/min條件下離心10 min，用PBS緩沖液清洗菌體2次后重懸浮于PBS緩沖液中，立即用多功能酶標(biāo)儀在535 nm激發(fā)波長和605 nm發(fā)射波長處檢測菌懸液的熒光強(qiáng)度，以63 ℃處理30 min的細(xì)菌細(xì)胞作為陽性對照。PI的相對熒光強(qiáng)度(FPI)計(jì)算公式如下。

FPI=F1/F0×100%

式中：F1為p-HPCD處理組細(xì)胞熒光強(qiáng)度，F(xiàn)0為陽性對照組細(xì)胞熒光強(qiáng)度。

參考相啟森等[18]的方法，利用熒光顯微鏡對PI染色的細(xì)菌進(jìn)行觀察。將懸浮于PBS緩沖液中的P.deceptionensisCM2經(jīng)p-HPCD于25 ℃、1.3 MPa條件下處理6 h后，加入終濃度為3 μmol/L的PI染液，在37 ℃黑暗處孵育15 min。將染色后的細(xì)菌徹底清洗以除去游離探針，使用適當(dāng)激發(fā)/發(fā)射過濾器的熒光顯微鏡觀察并拍照。

1.3.7 細(xì)胞膜電位的測定參考L.Y.Niu等[19]的方法，將懸浮于PBS緩沖液中的P.deceptionensisCM2經(jīng)p-HPCD于25 ℃、1.3 MPa條件下分別處理0 h、2 h、4 h和6 h。用PBS緩沖液制備EDTA溶液(4 mmol/L)，以其為稀釋液將DiBAC4(3)染液稀釋至質(zhì)量濃度為50 μg/mL，取50 μL稀釋后的DiBAC4(3)染液加入菌懸液中并使DiBAC4(3)染液終質(zhì)量濃度為2.5 μg/mL，將該菌懸液在37 ℃黑暗處孵育15 min，然后于4 ℃、10 000 r/min離心10 min，收集菌體，用PBS緩沖液清洗菌體2次后重懸浮于PBS緩沖液中，立即用多功能酶標(biāo)儀在490 nm激發(fā)波長和516 nm發(fā)射波長處檢測細(xì)菌懸浮液的熒光強(qiáng)度，DiBAC4(3)的相對熒光強(qiáng)度(FDiBAC4(3))計(jì)算公式如下。

FDiBAC4(3)=F1/F0×100%

參考相啟森等[18]的方法，利用熒光顯微鏡對DiBAC4(3)染色的細(xì)菌進(jìn)行觀察。將懸浮于PBS緩沖液中的P.deceptionensisCM2經(jīng)p-HPCD于25 ℃、1.3 MPa條件下處理6 h后，加入終質(zhì)量濃度為2.5 μg/mL的DiBAC4(3)染液，在37 ℃黑暗處孵育15 min。將染色后的細(xì)菌徹底清洗以除去游離探針，使用適當(dāng)激發(fā)/發(fā)射過濾器的熒光顯微鏡觀察并拍照。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析

每個(gè)實(shí)驗(yàn)均重復(fù)3次，數(shù)據(jù)結(jié)果以(平均值±標(biāo)準(zhǔn)差)表示。使用IBM SPSS 20.0軟件，通過單因素方差分析(ANOVA)、Duncan’s多重比較法對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行差異顯著性分析。以5%的比較錯(cuò)誤率作為差異顯著的標(biāo)準(zhǔn)(P<0.05)。

2 結(jié)果與討論

2.1 不同壓力和保壓時(shí)間對p-HPCD殺菌效果的影響分析

不同壓力和保壓時(shí)間下，p-HPCD處理對P.deceptionensisCM2的殺菌效果如圖2所示。由圖2可以看出，p-HPCD能夠有效殺滅P.deceptionensisCM2，且殺菌效果與壓力和保壓時(shí)間有關(guān)。在25 ℃條件下，經(jīng)0.5 MPa、0.9 MPa和1.3 MPa處理2 h后，P.deceptionensisCM2活菌數(shù)分別降低了0.66 log10CFU/mL、1.04 log10CFU/mL和1.48 log10CFU/mL。在相同的保壓時(shí)間下，p-HPCD的殺菌效果與壓力呈正相關(guān)，這與沈培奇[20]觀察到的結(jié)果一致，即在25 ℃條件下使用加壓CO2(1～7 MPa)處理生理鹽水中的大腸桿菌60 min，大腸桿菌的失活率隨CO2壓力的升高而增加。這是因?yàn)閴毫?huì)影響CO2在液態(tài)介質(zhì)中的溶解速率及溶解度：CO2壓力的升高會(huì)導(dǎo)致反應(yīng)體系中CO2密度增大，溶解速率及溶解度也隨之增加，而較高密度的CO2會(huì)破壞細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)和功能，使CO2更易滲透進(jìn)入微生物細(xì)胞，引起胞內(nèi)pH值下降、代謝紊亂等，進(jìn)而導(dǎo)致微生物失活[21]。

圖2 p-HPCD處理對P.deceptionensis CM2的殺菌效果Fig.2 Bactericidal effect of P.deceptionensis CM2 after p-HPCD treatment

保壓時(shí)間是影響p-HPCD殺菌效果的另一個(gè)重要因素。在1.3 MPa條件下，經(jīng)p-HPCD分別處理2 h、4 h和6 h后，P.deceptionensisCM2數(shù)量與處理前相比分別減少了2.49 log10CFU/mL、2.52 log10CFU/mL和3.65 log10CFU/mL。同樣地，在0.5 MPa和0.9 MPa條件下，經(jīng)p-HPCD處理后的細(xì)菌失活率也隨保壓時(shí)間的延長呈現(xiàn)相同趨勢。F.Y.Xu等[22]也報(bào)道了相似的結(jié)果，HPCD在25 MPa、40 ℃條件下對Vibrioparahaemolyticus分別處理10 min和40 min后，其活菌數(shù)分別降低5.69 log10CFU/mL和7.02 log10CFU/mL。

由此可見，CO2壓力和保壓時(shí)間是影響p-HPCD對P.deceptionensisCM2殺菌效果的重要因素。此外，處理溫度、處理基質(zhì)、細(xì)菌初始濃度等也可能對p-HPCD殺滅P.deceptionensisCM2的效果產(chǎn)生影響，需要后續(xù)進(jìn)一步深入研究。

2.2 p-HPCD處理對P.deceptionensis CM2細(xì)胞形態(tài)的影響分析

在25 ℃、1.3 MPa條件下，經(jīng)p-HPCD處理后P.deceptionensisCM2的FE-SEM圖像如圖3所示。由圖3a)可以看出，未經(jīng)p-HPCD處理的P.deceptionensisCM2細(xì)胞具有完整的細(xì)胞結(jié)構(gòu)，呈表面光滑的棒狀；由圖3b)可以看出，p-HPCD于1.3 MPa處理2 h后，P.deceptionensisCM2細(xì)胞表面出現(xiàn)輕微皺縮；由圖3 c)和d)可以看出，隨著保壓時(shí)間的延長，細(xì)胞表面皺縮加重，細(xì)胞膜出現(xiàn)裂痕，甚至出現(xiàn)細(xì)胞外膜與質(zhì)膜分離，而這可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)流出，影響P.deceptionensisCM2細(xì)胞的正常代謝。由FE-SEM觀察到的p-HPCD對P.deceptionensisCM2細(xì)胞的損傷進(jìn)程與上述殺菌效果結(jié)論一致。周先漢等[23]也發(fā)現(xiàn)，與HPCD處理前相比，經(jīng)HPCD處理的大腸桿菌細(xì)胞表面出現(xiàn)了許多細(xì)密的小坑，表面也變得更加粗糙。

圖3 p-HPCD處理后P.deceptionensis CM2的FE-SEM圖像Fig.3 FE-SEM images of P.deceptionensis CM2 after p-HPCD treatment

2.3 p-HPCD處理對細(xì)胞膜通透性的影響分析

通過測定胞外核酸和蛋白滲漏量可評價(jià)p-HPCD處理對細(xì)胞膜通透性的影響[24]。p-HPCD處理對P.deceptionensisCM2細(xì)胞膜通透性的影響如圖4所示。由圖4可以看出，未處理組細(xì)胞的胞外核酸和蛋白的滲漏量分別為1.71 μg/mL和46.67 μg/mL。然而，在1.3 MPa條件下經(jīng)p-HPCD處理會(huì)導(dǎo)致胞外核酸和蛋白滲漏量隨保壓時(shí)間的延長而增加。經(jīng)p-HPCD處理6 h后，胞外核酸和蛋白的滲漏量分別增加了10.95 μg/mL和83.83 μg/mL，這與P.deceptionensisCM2失活率增加的結(jié)論一致。如前所述，通過FE-SEM觀察到了隨著保壓時(shí)間的延長，細(xì)胞膜損傷加重(圖2)，損傷程度與胞外核酸和蛋白滲漏量的增加相符合。結(jié)合FE-SEM結(jié)果可以推斷，細(xì)胞膜是p-HPCD殺滅P.deceptionensisCM2的主要靶點(diǎn)之一。S.R.Kim等[25]也發(fā)現(xiàn)，隨著HPCD保壓時(shí)間的延長，菌懸液在260 nm和280 nm波長處的吸光度均顯著增加。這可能是因?yàn)镃O2分子具有親脂性、低黏度和高擴(kuò)散率，因此在壓力的作用下可能會(huì)擴(kuò)散到細(xì)胞膜的脂質(zhì)雙分子層中，從而改變P.deceptionensisCM2細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)和功能，并對其通透性產(chǎn)生影響[26]。

圖4 p-HPCD 處理對P.deceptionensis CM2細(xì)胞膜通透性的影響Fig.4 The effects of p-HPCD treatment on cell membrance permeability of P.deceptionensis CM2

2.4 p-HPCD處理對細(xì)胞膜完整性的影響分析

PI是一種疏水性的熒光染料，當(dāng)細(xì)胞膜通透性增強(qiáng)時(shí)，它能夠進(jìn)入細(xì)胞，與細(xì)胞內(nèi)的遺傳物質(zhì)結(jié)合并發(fā)射出紅色熒光[27]。p-HPCD處理對P.deceptionensisCM2細(xì)胞膜完整性的影響如圖5所示。由圖5a)可以看出，P.deceptionensisCM2中的FPI隨著保壓時(shí)間的延長而增強(qiáng)。與未處理細(xì)胞相比，p-HPCD(1.3 MPa)保壓2 h、4 h和6 h后，P.deceptionensisCM2細(xì)胞中的FPI分別顯著增加了90.58%、114.98%和122.23%(P<0.05)。這表明p-HPCD處理可誘導(dǎo)P.deceptionensisCM2細(xì)胞膜通透性增加，證實(shí)了FE-SEM觀察到的細(xì)胞形態(tài)改變。由圖5b)可以看出，在具有完整細(xì)胞膜的細(xì)胞中，PI陽性細(xì)胞數(shù)量很少。而p-HPCD處理6 h后，紅色熒光細(xì)胞的比例增加，這表明細(xì)胞膜的完整性受到破壞。H.Li等[28]也發(fā)現(xiàn)，在HPCD處理后，細(xì)菌失活率與FPI呈正相關(guān)。P.deceptionensisCM2細(xì)胞膜完整性的破壞會(huì)導(dǎo)致胞內(nèi)核酸和蛋白滲漏，進(jìn)而影響細(xì)胞的正常生長和代謝，最終導(dǎo)致微生物死亡。

圖5 p-HPCD處理對P.deceptionensis CM2細(xì)胞膜完整性的影響Fig.5 The effects of p-HPCD treatment on cell membrance integrity of P.deceptionensis CM2

2.5 p-HPCD處理對細(xì)胞膜電位的影響分析

細(xì)胞膜電位是存在于活細(xì)胞細(xì)胞膜兩側(cè)的電位差，是細(xì)胞膜通透性變化的先兆。細(xì)胞膜電位在細(xì)菌的能量轉(zhuǎn)化、pH穩(wěn)態(tài)、主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)、環(huán)境感知等生理行為的調(diào)節(jié)中起著重要作用[29]。DiBAC4(3)是一種膜電位敏感的染料，能夠進(jìn)入去極化細(xì)胞并通過與胞內(nèi)蛋白結(jié)合表現(xiàn)出增強(qiáng)的熒光[30]。p-HPCD處理對P.deceptionensisCM2細(xì)胞膜電位的影響如圖6所示。由圖6a)可以看出，P.deceptionensisCM2細(xì)胞經(jīng)p-HPCD(1.3 MPa)處理不同保壓時(shí)間后，細(xì)胞中的FDiBAC4(3)隨著保壓時(shí)間的延長而增強(qiáng)。經(jīng)p-HPCD處理2 h、4 h和6 h后，胞內(nèi)FDiBAC4(3)分別增加至106.09%、110.66%和111.94%，與P.deceptionensisCM2胞內(nèi)的FPI逐漸增強(qiáng)的趨勢相似。L.Y.Niu等[31]研究發(fā)現(xiàn)，p-HPCD(1.3 MPa，30 ℃)處理S.typhimurium3 h后，細(xì)胞中的FDiBAC4(3)顯著強(qiáng)于未處理組。熒光顯微鏡觀察證實(shí)了上述結(jié)果(見圖6b))，p-HPCD處理后綠色熒光細(xì)胞比例明顯多于未處理細(xì)胞，胞內(nèi)DiBAC4(3)累積量的增加表明p-HPCD處理導(dǎo)致細(xì)胞膜電位發(fā)生了去極化，膜內(nèi)外離子梯度發(fā)生的變化影響了細(xì)胞的正常代謝活動(dòng)，從而導(dǎo)致細(xì)胞活性降低。

圖6 p-HPCD處理對P.deceptionensis CM2細(xì)胞膜電位的影響Fig.6 The effects of p-HPCD treatment on cell membrance potential of P.deceptionensis CM2

3 結(jié)論

本文以P.deceptionensisCM2為目標(biāo)菌株，通過FE-SEM、熒光顯微鏡等，研究了p-HPCD殺菌技術(shù)在不同壓力、保壓時(shí)間下對P.deceptionensisCM2的殺菌效果，并對其殺菌機(jī)制進(jìn)行了初步探索。結(jié)果表明，經(jīng)p-HPCD在1.3 MPa、25 ℃條件下分別保壓2 h、4 h和6 h后，P.deceptionensisCM2活菌數(shù)分別降低了1.48 log10CFU/mL、3.11 log10CFU/mL和3.55 log10CFU/mL。p-HPCD在1.3 MPa、25 ℃條件下保壓4 h后，P.deceptionensisCM2細(xì)胞表面發(fā)生明顯的皺縮，出現(xiàn)了裂痕，胞外核酸和蛋白滲漏量升高，細(xì)胞膜通透性及細(xì)胞膜電位發(fā)生了改變，而這些都可能是p-HPCD殺滅P.deceptionensisCM2的重要機(jī)制。該結(jié)果為p-HPCD殺菌技術(shù)在食品加工、貯藏和保鮮中的應(yīng)用提供了理論依據(jù)。在今后的研究中，可將p-HPCD與其他技術(shù)相結(jié)合，在最大限度保持食品品質(zhì)的同時(shí)，縮短殺菌時(shí)間，提高殺菌效率，從而推動(dòng)p-HPCD殺菌技術(shù)在食品工業(yè)中的廣泛應(yīng)用。