趙琴，楊輝* ，席旭晴，張建超，李敏，王承義，陳功，聶厚湘，唐建如，陳濤

（1.湖南省瀏陽(yáng)市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局 長(zhǎng)沙 410300；2.河北省固安縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局 河北廊坊 065500）

小反芻獸疫（peste des petis ruminants，PPR）是由副粘病毒科麻疹病毒屬的小反芻獸疫病毒（peste des petis ruminants virus，PPRV）引起的，以發(fā)熱、口炎、腹瀉、肺炎為特征的急性接觸性傳染病，山羊和綿羊易感，但山羊發(fā)病率和病死率均較高，易感羊群發(fā)病率通常達(dá)60%以上，病死率可達(dá)50%以上，特急性、急性病死率高達(dá)100%，目前尚無(wú)有效的治療方法。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為法定報(bào)告動(dòng)物疫病，我國(guó)將其列為一類(lèi)動(dòng)物疫病。

2007 年，PPR 首次傳入我國(guó)西藏阿里地區(qū)，自2013 年底起，全國(guó)多個(gè)省份均發(fā)生PPR。近期，以色列、蒙古國(guó)、阿爾及利亞、利比亞等境外國(guó)家陸續(xù)發(fā)現(xiàn)羊群感染小反芻獸疫，而我國(guó)西北方西藏自治區(qū)、新疆維吾爾自治區(qū)、青海省等地也陸續(xù)發(fā)現(xiàn)多起小反芻獸疫，雖然都及時(shí)按照有關(guān)預(yù)案和當(dāng)?shù)匾箝_(kāi)展疫情處置工作，但仍給養(yǎng)殖戶造成了不可挽回的損失。近年來(lái)，瀏陽(yáng)市通過(guò)強(qiáng)制免疫、監(jiān)測(cè)、調(diào)運(yùn)監(jiān)管等綜合措施使得該病得到有效控制。為評(píng)估2021 年的PPR 流行情況和抗體水平，瀏陽(yáng)市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心對(duì)轄區(qū)內(nèi)部分規(guī)模羊場(chǎng)進(jìn)行抽檢，對(duì)其采集的樣品開(kāi)展病原學(xué)和血清學(xué)的檢測(cè)?，F(xiàn)將檢測(cè)結(jié)果分析如下。

1 材料與方法

1.1 樣品來(lái)源

2021 年8 月，瀏陽(yáng)市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心隨機(jī)選取了轄區(qū)內(nèi)存欄50 只以上的規(guī)模羊場(chǎng)41 家，采樣地點(diǎn)覆蓋瀏陽(yáng)市4 個(gè)分區(qū)，采集樣品共2,160 份，其中羊眼-鼻拭子樣品1,352 份，血清樣品808 份，所有樣品采集至實(shí)驗(yàn)室后立即置于-20℃保存，備檢。

1.2 實(shí)驗(yàn)器材

熒光定量PCR 儀，核酸提取儀，電熱恒溫培養(yǎng)箱，12 道移液器，單道移液器、離心機(jī)、酶標(biāo)儀、純水儀、冰箱、生物安全柜等。

1.3 檢測(cè)試劑及方法

小反芻獸疫檢測(cè)參照國(guó)標(biāo)規(guī)定方法（GB/T 27987-2011）。小反芻獸疫病毒單重?zé)晒釶CR 檢測(cè)試劑盒來(lái)源于北京億森寶生物科技有限公司；小反芻獸疫競(jìng)爭(zhēng)ELISA 抗體檢測(cè)試劑盒來(lái)源于中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所。檢測(cè)步驟及判定標(biāo)準(zhǔn)均按照各項(xiàng)目試劑盒說(shuō)明書(shū)執(zhí)行。

2 結(jié)果與分析

2.1 總體情況

本次共檢測(cè)存欄50 只以上的規(guī)模羊場(chǎng)41 家，涵蓋瀏陽(yáng)市東西南北4 個(gè)片區(qū)，累計(jì)檢測(cè)樣品2,160 份次，其中眼-鼻拭子樣品病原學(xué)檢測(cè)1,352 份次，均未檢出PPRV 核酸陽(yáng)性，血清學(xué)檢測(cè)808 份次，整體抗體水平為60.02%。

2.2 場(chǎng)點(diǎn)分布情況

從場(chǎng)點(diǎn)的統(tǒng)計(jì)結(jié)果來(lái)看，在10 個(gè)被抽檢的鄉(xiāng)鎮(zhèn)中，有8 個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)的小反芻獸疫抗體水平高于農(nóng)業(yè)農(nóng)村部最低標(biāo)準(zhǔn)70%，其中西區(qū)和北區(qū)的羊場(chǎng)抗體水平均已達(dá)標(biāo)，不達(dá)標(biāo)的羊場(chǎng)分布在東區(qū)的小河鄉(xiāng)和南區(qū)的中和鎮(zhèn)。

表1 各鄉(xiāng)鎮(zhèn)小反芻獸疫抗體水平檢測(cè)結(jié)果

3 小結(jié)與討論

3.1 血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果分析

從本次小反芻獸疫的專項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果來(lái)看，各鄉(xiāng)鎮(zhèn)的小反芻獸疫免疫抗體水平參差不齊，整體水平低于農(nóng)業(yè)農(nóng)村部的最低標(biāo)準(zhǔn)70%，僅有60.02%，80%的鄉(xiāng)鎮(zhèn)抗體效價(jià)達(dá)標(biāo)，2 個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)存在多家羊場(chǎng)抗體水平遠(yuǎn)低于70%的情況。根據(jù)瀏陽(yáng)市2021 年重大動(dòng)物疫病免疫效果評(píng)估的檢測(cè)結(jié)果，5 月PPR 的抗體檢測(cè)評(píng)估結(jié)果為97.63%，11 月抗體檢測(cè)評(píng)估結(jié)果為93.79%，本次檢測(cè)時(shí)間為8月，介于兩個(gè)時(shí)間節(jié)點(diǎn)之間，抗體水平整體呈現(xiàn)下降的情況，分析其原因，可能是由于7—8 月尚未開(kāi)展小反芻獸疫的免疫接種工作，免疫期限已過(guò)或尚未進(jìn)行補(bǔ)免，從而導(dǎo)致機(jī)體內(nèi)的小反芻獸疫的抗體水平較低。

3.2 病原學(xué)檢測(cè)結(jié)果分析

按照瀏陽(yáng)市小反芻獸疫監(jiān)測(cè)計(jì)劃要求，每年在春季和秋季各進(jìn)行一次集中監(jiān)測(cè)，常規(guī)監(jiān)測(cè)根據(jù)各鄉(xiāng)鎮(zhèn)（街道）實(shí)際情況進(jìn)行計(jì)劃。目前，在湖南省、長(zhǎng)沙市等上級(jí)部門(mén)的統(tǒng)一部署下，全省將逐步推行PPR 退出強(qiáng)制免疫的工作。2021 年2 月份在永安鎮(zhèn)某養(yǎng)羊戶從外市交易市場(chǎng)調(diào)入的羊群出現(xiàn)過(guò)小反芻獸疫可疑病例，已迅速按照當(dāng)?shù)貏?dòng)物疫情防控要求將病羊及同群羊18 只實(shí)施強(qiáng)制撲殺和無(wú)害化處理，全場(chǎng)內(nèi)外進(jìn)行全面大消毒和墊料、廢棄物等的無(wú)害化處理，及時(shí)消除疫情擴(kuò)散風(fēng)險(xiǎn)，同時(shí)組織對(duì)該養(yǎng)殖戶周邊3km范圍內(nèi)所有羊只進(jìn)行小反芻獸疫緊急免疫?，F(xiàn)從本次病原學(xué)的檢測(cè)結(jié)果來(lái)看，盡管PPR 的整體抗體水平僅為60.02%，但并未檢測(cè)出PPRV 核酸陽(yáng)性，由此可見(jiàn)該市轄區(qū)內(nèi)的小反芻獸疫疫病防控成效較好。

3.3 小反芻獸疫診斷技術(shù)分析

目前，除采用GB/T 27982-2011《小反芻獸疫診斷技術(shù)》規(guī)定的臨床癥狀和病理變化進(jìn)行診斷外，還包括很多其他的病原學(xué)和血清學(xué)的診斷方法，其中病原鑒定主要有以下幾種：①電鏡觀察法。根據(jù)病毒粒子的形態(tài)特征和大小等特點(diǎn)使用電鏡技術(shù)進(jìn)行觀察而進(jìn)行的診斷，此方法對(duì)儀器設(shè)備和技術(shù)人員的要求都較高，臨床上較為少用；②病毒培養(yǎng)法。通過(guò)采集發(fā)病羊只的病料，選擇急性期或具有明顯臨床癥狀的眼-口鼻試子、淋巴結(jié)組織或血液等樣品，使用羔羊原代腎細(xì)胞或VERO 細(xì)胞、綿陽(yáng)上皮細(xì)胞等進(jìn)行分離培養(yǎng)，此方法所需時(shí)間較長(zhǎng)，適用于對(duì)小反芻獸疫病毒進(jìn)行更加深入的研究；③瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散試驗(yàn)（AGID）和對(duì)流免疫電泳（CIEP）法。通過(guò)分離樣品中的病毒上清與標(biāo)準(zhǔn)抗血清之間的抗原抗體特異性反應(yīng)檢測(cè)病毒抗原的一種方法，CIEP 的靈敏度高于AGID；④間接免疫熒光抗體試驗(yàn)（IFAT）法。該方法要具有病毒特異性單抗的條件才可開(kāi)展檢測(cè)，可對(duì)羊只發(fā)病初期和后期的病料進(jìn)行檢測(cè)并作出快速的鑒別診斷；⑤夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（sELISA）。1994 年Jeremiah 等利用病料組織中含有PPRV 粒子，通過(guò)捕獲抗體和特異性檢測(cè)抗體建立的一種夾心ELISA 方法；⑥核酸識(shí)別法（PCR）?；诓《镜暮怂嵝蛄羞M(jìn)行檢測(cè)，針對(duì)病毒特異性的N、F、P 基因建立的PCR 和qPCR 檢測(cè)方法，能快速、靈敏并特異的對(duì)病毒的存在進(jìn)行檢測(cè)，而qPCR 不僅可以判斷樣品中是否存在病原污染，還能通過(guò)熒光探針和模板特異性結(jié)合由儀器采集熒光信號(hào)達(dá)到定量的目的，對(duì)病毒的豐度進(jìn)行研究。而血清學(xué)鑒定的方法主要包括中和實(shí)驗(yàn)和競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫測(cè)定法（cELISA）。中和試驗(yàn)的敏感性和特異性較好，但耗時(shí)較長(zhǎng)、操作較為復(fù)雜，不適合大規(guī)模的樣品檢測(cè)。cELISA 的使用較為廣泛，主要是利用PPRV核蛋白（N）單克隆抗體來(lái)構(gòu)建的一種酶聯(lián)免疫吸附法，用來(lái)檢測(cè)血清中是否含有PPR 的抗體，若存在，則會(huì)與單抗競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合病毒蛋白表位，快速的檢測(cè)樣品中是否存在PPR 抗體。

3.4 關(guān)于小反芻獸疫疫病防控的幾點(diǎn)建議

①多管齊下抓實(shí)疫情風(fēng)險(xiǎn)排查和監(jiān)測(cè)預(yù)警。進(jìn)一步加強(qiáng)對(duì)規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)、農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)和大型超市銷(xiāo)售攤位等重點(diǎn)場(chǎng)所的監(jiān)測(cè)范圍和力度，同時(shí)督導(dǎo)落實(shí)消毒滅原、生物安全體系建設(shè)、應(yīng)急處置等綜合防控措施，嚴(yán)防病毒在各環(huán)節(jié)交叉污染，尤其要截?cái)嗖《緩钠渌h(huán)節(jié)向養(yǎng)殖場(chǎng)戶的傳播途徑；②多方聯(lián)動(dòng)抓強(qiáng)動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督和執(zhí)法監(jiān)管。建議市、鎮(zhèn)兩級(jí)農(nóng)業(yè)執(zhí)法機(jī)構(gòu)切實(shí)加強(qiáng)與公安、市場(chǎng)監(jiān)督等執(zhí)法單位的協(xié)同互動(dòng)，建立聯(lián)合打擊違規(guī)調(diào)運(yùn)、私屠濫宰、隨意丟棄病死動(dòng)物等不法行為的常態(tài)化機(jī)制，完善相關(guān)有獎(jiǎng)舉報(bào)制度，強(qiáng)化體制機(jī)制保障；③多措并舉抓細(xì)防控技術(shù)培訓(xùn)和督查指導(dǎo)。各鄉(xiāng)鎮(zhèn)（街道）要切實(shí)加強(qiáng)動(dòng)物疫病防控相關(guān)政策、生物安全知識(shí)、消毒滅原技術(shù)規(guī)范等方面的宣傳普及，在養(yǎng)殖密集區(qū)、農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)銷(xiāo)售區(qū)等實(shí)行“小區(qū)域單元格式”防控，嚴(yán)格落實(shí)“風(fēng)險(xiǎn)排查+重點(diǎn)監(jiān)控”“隔離防護(hù)+消毒滅原”等措施。

3.5 小結(jié)

瀏陽(yáng)市位于湘東山地丘陵地區(qū)，牧草資源較為豐富，全市年出欄二十余萬(wàn)只，養(yǎng)殖規(guī)?；桓?，大部分為散養(yǎng)養(yǎng)殖，圈牧混合為主，管理粗放，養(yǎng)殖環(huán)境一般，養(yǎng)殖戶疫病防控意識(shí)較差，缺乏良好的生物安全條件。雖然小反芻獸疫檢測(cè)陽(yáng)性情況較為罕見(jiàn)，但該病的防控意識(shí)不可松懈，各級(jí)動(dòng)物疫病防控人員要進(jìn)一步提高認(rèn)識(shí)，做好各級(jí)生物安全防控，根據(jù)實(shí)際情況合理制定免疫計(jì)劃，免疫后定期做好抗體水平監(jiān)測(cè)，實(shí)時(shí)觀察動(dòng)物的臨床飼養(yǎng)情況，有效降低疫情發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，提高養(yǎng)殖效率。