李曉玲，謝麗華 *，肖萍，王健文，莫奇初，嚴(yán)珮珊，吳穎航，黃治權(quán)，林嘉敏

（1.藤縣埌南鎮(zhèn)水產(chǎn)畜牧獸醫(yī)站 廣西梧州 543304；2.梧州市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 廣西梧州 543002；3.藤縣嶺景鎮(zhèn)水產(chǎn)畜牧獸醫(yī)站 廣西梧州 543309；4.藤縣新慶鎮(zhèn)水產(chǎn)畜牧獸醫(yī)站 廣西梧州 543307；5.梧州市漁業(yè)資源養(yǎng)護(hù)中心 廣西梧州 543002）

羊主要傳染病有口蹄疫（foot and mouth Disease，F(xiàn)MD）、小反芻獸疫（peste des petits ruminants，PPR）、布魯氏菌?。╞rucellosis）等。口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的以偶蹄類動(dòng)物為主的急性、熱性、高度傳染性疫病，臨床以唇舌、齒齦、蹄踵、乳房等部位出現(xiàn)水皰為特征。小反芻獸疫，是由小反芻獸疫病毒引起的一種急性病毒性傳染病，臨床以發(fā)熱、口炎、腹瀉、肺炎為特征。FMD、PPR 均是我國(guó)一類動(dòng)物疫病和強(qiáng)制免疫的病種。布魯氏菌病是由細(xì)胞內(nèi)寄生的布魯氏菌引起的一種人獸共患病，該菌侵害淋巴系統(tǒng)和生殖系統(tǒng)，導(dǎo)致母畜流產(chǎn)和公畜睪丸炎。上述三種羊病不僅對(duì)羊健康危害巨大，同時(shí)也是其他偶蹄、小反芻動(dòng)物甚至人類傳染病的感染來(lái)源，嚴(yán)重威脅畜牧業(yè)或人體健康，加強(qiáng)監(jiān)測(cè)具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 材料

1）免疫疫苗?？谔阋逴 型滅活疫苗、小反芻獸疫弱毒疫苗，均為政府采購(gòu)疫苗。

2）樣品數(shù)量。采集2019—2021 年梧州市七個(gè)縣（市、區(qū)）養(yǎng)殖場(chǎng)戶、屠宰場(chǎng)羊血清8,691 份，羊眼結(jié)膜棉拭子和淋巴結(jié)、脾、肺等組織樣品1,920 份。

3）儀器設(shè)備。帝肯Sunrise 酶標(biāo)儀、ABI Q5 實(shí)時(shí)熒光PCR 儀、賽默飛二級(jí)生物安全柜等。

4）檢測(cè)試劑。O 型口蹄疫液相/固相阻斷ELISA 抗體檢測(cè)試劑盒（蘭州所/金諾）、小反芻獸疫競(jìng)爭(zhēng)ELISA 抗體檢測(cè)試劑盒（青島立見(jiàn)）、布病虎紅平板凝集試驗(yàn)抗原（青島立見(jiàn)）、布病競(jìng)爭(zhēng)ELISA抗體檢測(cè)試劑盒（青島立見(jiàn)）、小反芻獸疫病毒實(shí)時(shí)熒光RT-PCR 檢測(cè)試劑盒（深圳梓?。?/p>

1.2 方法

1）口蹄疫免疫和抗體檢測(cè)。規(guī)模場(chǎng)羔羊28～35 日齡首免，一個(gè)月后二免，以后每隔4 個(gè)月免疫一次。散養(yǎng)戶每年春秋兩季集中免疫，每月對(duì)新增補(bǔ)欄免疫。免疫21d 后，采集血清檢測(cè)抗體。參照GB/T18935-2018 口蹄疫診斷技術(shù)液相阻斷ELISA 檢測(cè)方法，羊血清抗體效價(jià)≥27 判定為免疫合格個(gè)體；或使用固相阻斷ELISA 檢測(cè)方法，血清抗體陽(yáng)性，判定為免疫合格個(gè)體。免疫合格個(gè)體數(shù)量占群體總數(shù)的70%（含）以上，判定免疫合格群體。

2）小反芻獸疫免疫和抗體、病毒檢測(cè)。新生羔羊1 月齡以后免疫1 次。免疫1～3 個(gè)月內(nèi)，采集血清檢測(cè)抗體。參照GB/T27982—2011 小反芻獸疫診斷技術(shù)競(jìng)爭(zhēng)ELISA 檢測(cè)方法，結(jié)果陽(yáng)性判定為免疫合格個(gè)體。免疫合格個(gè)體數(shù)量占群體總數(shù)的70%（含）以上，判定免疫合格群體。病原學(xué)樣品參照GB/T27982—2011 小反芻獸疫診斷技術(shù)實(shí)時(shí)熒光RT-PCR 方法檢測(cè)小反芻獸疫病毒。

3）布魯氏菌病非免疫檢測(cè)和陽(yáng)性剔除。采集血清，參照GB/T 18646—2018 動(dòng)物布魯氏菌病診斷技術(shù)及虎紅平板凝集試驗(yàn)初篩檢測(cè)，陽(yáng)性樣品用競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（cELISA）進(jìn)行復(fù)核。確診陽(yáng)性動(dòng)物按照農(nóng)業(yè)農(nóng)村部布魯氏菌病防治技術(shù)規(guī)范予以撲殺、無(wú)害化處理。

2 結(jié)果

2.1 口蹄疫免疫和抗體檢測(cè)情況

2019—2021 年累計(jì)免疫羊口蹄疫9.13 萬(wàn)只次，每年應(yīng)免免疫密度達(dá)100%。平均群體免疫合格率為91.18%，個(gè)體免疫合格率為89.05%（表1）。

表1 羊口蹄疫免疫和抗體檢測(cè)情況

2.2 小反芻獸疫免疫和抗體、病毒檢測(cè)情況

2020—2021 年累計(jì)免疫羊小反芻獸疫7.75 萬(wàn)只次，每年應(yīng)免免疫密度達(dá)100%。平均群體免疫合格率為96.52%，個(gè)體免疫合格率為95.01%。病原學(xué)檢測(cè)樣品1920 份病毒均為陰性（表2）。

表2 小反芻獸疫免疫和抗體、病毒檢測(cè)情況

2.3 布魯氏菌病非免疫抗體檢測(cè)情況

2019—2021 年累計(jì)監(jiān)測(cè)羊布魯氏菌病場(chǎng)點(diǎn)154 個(gè)次、羊血清3,319 份，群體陽(yáng)性率為0.65%，個(gè)體陽(yáng)性率為0.03%（表3）。

表3 布魯氏菌病非免疫抗體檢測(cè)情況

3 討論

本研究采用最新國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)診斷方法，使用權(quán)威機(jī)構(gòu)或進(jìn)口診斷試劑開(kāi)展羊病檢測(cè)。其中，蘭州所口蹄疫改進(jìn)型液相阻斷ELISA試劑盒、韓國(guó)金諾口蹄疫固相阻斷ELISA 試劑盒在廣西疫控機(jī)構(gòu)廣泛使用，檢測(cè)時(shí)間短，試劑穩(wěn)定，必要時(shí)采用液相、固相互相驗(yàn)證，確保準(zhǔn)確性。青島立見(jiàn)小反芻獸疫競(jìng)爭(zhēng)ELISA 試劑盒是診斷國(guó)家外來(lái)性疫病-小反芻獸疫的可靠試劑，小反芻獸疫病毒熒光RT-PCR 方法較常規(guī)RT-PCR 方法更為敏感、快速。布魯氏菌病檢測(cè)采用平板凝集初篩、競(jìng)爭(zhēng)ELISA 復(fù)核方式，既能提高效率，又能實(shí)施確診，且布病ELISA 確診方法相對(duì)于傳統(tǒng)試管凝集試驗(yàn)，減少人為主觀誤差，縮短反應(yīng)時(shí)間。本研究檢測(cè)數(shù)據(jù)可靠，為廣西梧州市口蹄疫、小反芻獸疫、布病防控提供科學(xué)支撐。

當(dāng)前，口蹄疫、小反芻獸疫防治采用強(qiáng)制免疫方法，免疫密度和抗體水平是防控效果的重要指標(biāo)。梧州市2019—2021 年羊飼養(yǎng)量介于2.97～3.86 萬(wàn)只之間，口蹄疫、小反芻獸疫免疫數(shù)量分別達(dá)到2.55～3.39 萬(wàn)只和2.15～3.01 萬(wàn)只，個(gè)體免疫抗體合格率分別為85.42%～91.74%和90.98%～97.3%，群體免疫合格率分別為88.37%～94.29%和95.0%～97.67%，小反芻獸疫病毒檢測(cè)均為陰性。除去免疫保護(hù)期內(nèi)、未達(dá)免疫日齡或因病不宜免疫等客觀因素外，免疫密度均達(dá)到100%，免疫抗體合格率均遠(yuǎn)超過(guò)國(guó)家規(guī)定的70%最低保護(hù)線要求。監(jiān)測(cè)結(jié)果表明，梧州市羊口蹄疫和小反芻獸疫免疫效果良好，政府采購(gòu)疫苗效果確切，可以阻斷相應(yīng)病種的大面積流行。但也需要注意，口蹄疫、小反芻獸疫每年都有免疫不合格的場(chǎng)群，特別是口蹄疫的個(gè)體和群體合格率不穩(wěn)定，仍然存在散發(fā)感染傳播的潛在風(fēng)險(xiǎn)。

近年來(lái)，我國(guó)布魯氏菌病流行呈上升趨勢(shì)。根據(jù)《國(guó)家布魯氏菌病防治計(jì)劃》（2016—2020 年）顯示，2015 年全國(guó)布病重點(diǎn)地區(qū)22 個(gè)縣248 個(gè)定點(diǎn)場(chǎng)群的羊布魯氏菌病個(gè)體陽(yáng)性率達(dá)到3.3%、群體陽(yáng)性率達(dá)到34%。廣西梧州市2019 年監(jiān)測(cè)羊1,647 只，布病陽(yáng)性1 只，個(gè)體陽(yáng)性率為0.06%，群體陽(yáng)性率為1.56%。監(jiān)測(cè)結(jié)果表明，2019 年以來(lái)梧州市羊只出現(xiàn)布病感染情況，但數(shù)量不多，以零星個(gè)體陽(yáng)性為主，2020—2021 年未發(fā)現(xiàn)感染情況，羊群布病處于穩(wěn)定控制標(biāo)準(zhǔn)（個(gè)體陽(yáng)性率0.1%）以內(nèi)。隨著廣西大力發(fā)展牛羊產(chǎn)業(yè)政策出臺(tái)，牛羊跨區(qū)域調(diào)運(yùn)將愈發(fā)頻繁，不按規(guī)定調(diào)運(yùn)、檢疫和隔離觀察可能成為輸入性布魯氏菌病的主要因素。因此，持續(xù)加強(qiáng)布魯氏菌病監(jiān)測(cè)，防止布病輸入和傳播擴(kuò)散顯得尤為重要。