◎ 楊 武，李夢(mèng)媛，劉朝陽(yáng)，余的軍，劉海洋

（1.華南理工大學(xué) 化學(xué)與化工學(xué)院，廣東 廣州 510640；2.廣西自貿(mào)區(qū)燕握生物科技有限公司，廣西 欽州 535000；3.可萊康燕窩科技（深圳）有限公司，廣東 深圳 518056）

人類食用燕窩（Edible Bird’s Nest，EBN）的歷史可追溯至唐朝（公元618—907 年）[1]。燕窩的傳統(tǒng)食用方法是用糖加水熬煮成為營(yíng)養(yǎng)湯，被認(rèn)為有美容養(yǎng)顏的功效[2]。燕窩被中國(guó)人認(rèn)為是一種滋補(bǔ)品，有“天然人參”之稱[3]。食用燕窩是雨燕科（Aerodramus）、金絲燕屬（Collocalia）的多種金絲燕用唾液筑成的鳥(niǎo)巢。金絲燕是一種分布于印度洋西部各島、亞洲南部大陸、菲律賓、北澳大利亞和西南太平洋島嶼的小型食蟲(chóng)性鳥(niǎo)類[4]。燕窩的成分主要來(lái)自金絲燕的唾液分泌物。在筑巢和繁殖季節(jié)，金絲燕舌下唾液腺的重量從2.5 mg 增加至160 mg，可以達(dá)到最大的分泌量。金絲燕的唾液分泌物黏稠，與羽毛、海藻、苔蘚或特定的木材之類的物質(zhì)接觸時(shí)容易變硬，燕窩是金絲燕鳥(niǎo)巢經(jīng)除羽毛等雜質(zhì)后加工而成。根據(jù)產(chǎn)地不同，一般有白、黑和紅色3種顏色的燕窩（圖1）[5]。燕窩從古至今都被認(rèn)為是珍貴的補(bǔ)品，但其功效的科學(xué)依據(jù)仍然是個(gè)有待深入開(kāi)展的課題。近年來(lái)，燕窩提取物的生理功效研究日益引起了人們的廣泛關(guān)注。本文就燕窩提取物近年來(lái)的生理效應(yīng)研究進(jìn)展進(jìn)行綜述。

圖1 白色（A）、黑色（B）和紅色（C）燕窩圖[5]

1 燕窩的主要成分及其提取工藝

燕窩主要是作為補(bǔ)品或功能性食品來(lái)消費(fèi)的。為了確保食用的安全性早在1921 年人們就對(duì)燕窩的化學(xué)組成進(jìn)行了分析，發(fā)現(xiàn)糖蛋白是燕窩的主要成分[6]。糖蛋白由蛋白質(zhì)和碳水化合物組成，分別占總質(zhì)量的60%和30%左右[7]。其中碳水化合物主要由N-乙酰神經(jīng)氨酸（唾液酸）組成，占總含量的33%。

1.1 燕窩中的蛋白質(zhì)

燕窩中的平均粗蛋白質(zhì)含量達(dá)50%～65%，部分為水溶性蛋白質(zhì)[8]。通?？梢杂昧蛩徜@沉淀，超速離心、電泳、凝膠過(guò)濾和高效液相色譜來(lái)分離燕窩蛋白質(zhì)[9-10]。 目前尚無(wú)通用的提取方法來(lái)獲得燕窩中發(fā)現(xiàn)的所有蛋白質(zhì)[11]。蛋白質(zhì)提取的常規(guī)方法包括化學(xué)、機(jī)械和酶解法。化學(xué)法涉及使用離子型、非離子型或兩性離子型表面活性劑，以幫助釋放蛋白質(zhì)。由于高濃度的表面活性劑通常會(huì)導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性，一般采用低于0.1%的非離子型表面活性劑進(jìn)行提取[12]。機(jī)械方法通常是研磨處理燕窩。由于干燥的燕窩是厚而硬的樣品，因此在提取蛋白質(zhì)前用研缽和研杵研磨成粉末，蛋白質(zhì)的提取效率在很大程度上取決于燕窩粉末的細(xì)度[13]，細(xì)粉通常用于蛋白質(zhì)組學(xué)樣品的制備[14]。由于純機(jī)械提取法的提取效果較差，目前幾乎沒(méi)有人使用純機(jī)械法提取。酶解法是目前使用最多的方法，主要分為蛋白原料預(yù)處理、酶解、滅酶、精制和干燥等過(guò)程。但酶解法也存在過(guò)程復(fù)雜、提取過(guò)程營(yíng)養(yǎng)流失的問(wèn)題。研究者發(fā)現(xiàn)水提取是最簡(jiǎn)單和最常用的方法，特別是對(duì)于水溶性和熱穩(wěn)定性蛋白。這是因?yàn)檠喔C主要包含水溶性蛋白質(zhì)[15]。此外，先在水溶液中用超聲波將燕窩纖維分解，然后進(jìn)行透析，透析后將燕窩提取物凍干即可；也可采用類似于燕窩湯制備的水提取法[16]。

1.2 燕窩中的碳水化合物

燕窩中的碳水化合物主要是唾液酸（9%）、半乳糖胺（7.2%）、葡萄糖胺（5.3%）、半乳糖（16.9%）和巖藻糖（0.7%）[17]。通常，碳水化合物的分離方法包括熱水提取、酸堿水解、酶水解和離子交換色譜法[18]。燕窩是唾液酸含量最高的天然產(chǎn)物，唾液酸是腦神經(jīng)節(jié)苷的重要組成部分，可以作用于神經(jīng)黏附細(xì)胞[19]，是改善神經(jīng)元和腦功能發(fā)育的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子[20-21]。 唾液酸在細(xì)胞間的相互作用、神經(jīng)元生長(zhǎng)和改善記憶形成的突觸連接中起著關(guān)鍵的作用[22]。在哺乳動(dòng)物中，富含唾液酸的飲食會(huì)增加腦細(xì)胞的水平，并幫助表達(dá)與認(rèn)知功能相關(guān)的基因[23-24]。在燕窩的碳水化合物組分中，N-乙酰半乳糖胺對(duì)神經(jīng)突觸的功能也很重要，N-乙酰半乳糖胺的缺乏會(huì)導(dǎo)致記憶喪失[25]。從燕窩中提取唾液酸工藝有較多的報(bào)道，其中微波輔助酶法提取工藝唾液酸的得率較高[26]。其主要工藝如下。①燕窩粉末的制備：稱取一定量的燕窩，研磨過(guò)40 目篩備用。②酶處理：稱取一定量燕窩粉末，按燕窩∶水（m/m）為1 ∶20 的比例加入蒸餾水，加入4%木瓜蛋白酶（以燕窩粉末計(jì)），在一定的酶解溫度、時(shí)間和pH 值的條件下進(jìn)行酶解。③微波處理：將酶解好的混合液在一定功率、時(shí)間下進(jìn)行微波提取。④滅酶：將微波處理后的混合液在沸水浴中滅酶 10 min。⑤離心：在3 000 r·min-1條件下離心10 min，取上清液即為燕窩唾液酸提取液。這一工藝中，酶解溫度與微波處理時(shí)間對(duì)燕窩酸提取率有重要影響，燕窩唾液酸的最佳提取工藝為微波時(shí)間100 s、酶解溫度60 ℃、pH 值7.0，該工藝條件下燕窩唾液酸的提取率為12.58%。

1.3 燕窩中的氨基酸

燕窩蘊(yùn)含種類豐富的氨基酸，如絲氨酸、蘇氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、脯氨酸和纈氨酸[17]。燕窩中含有至少18種氨基酸，其中包含了全部8種人體必須外源攝入的氨基酸，即蛋氨酸（MET）、纈氨酸（VAL）、賴氨酸（LYS）、異亮氨酸（ILE）、苯丙氨酸（PHE）、亮氨酸（LEU）、色氨酸（TRP）和蘇氨酸（THR），而且含比達(dá)26%。天冬氨酸和絲氨酸是燕窩中的主要氨基酸[27]。

1.4 燕窩中的微量元素

除主要化合物外，燕窩中還含有微量營(yíng)養(yǎng)素，包括鈉、鉀、鈣、鎂、磷和鐵等礦物質(zhì)[28]。這些礦物質(zhì)在人體內(nèi)是必不可少的，它們對(duì)人體內(nèi)很多酶反應(yīng)的激活至關(guān)重要。例如，鈉能夠平衡電解質(zhì)、維持神經(jīng)沖動(dòng)；鎂能維持堿性平衡、控制神經(jīng)肌肉活動(dòng)。通常，采集時(shí)間和繁殖地點(diǎn)的變化可以影響燕窩中微量營(yíng)養(yǎng)素的含量，其原因是當(dāng)?shù)丨h(huán)境會(huì)對(duì)金絲燕的飲食造成影響。

2 燕窩提取物的生理效應(yīng)

近30 年來(lái)，隨著科技的進(jìn)步，研究者們通過(guò)實(shí)驗(yàn)逐步揭示了燕窩的多種藥理活性[29]，包括促進(jìn)細(xì)胞分裂、抗氧化、抗病毒、抗炎癥、改善股骨強(qiáng)度作用、神經(jīng)保護(hù)作用、改善代謝指數(shù)和預(yù)防心血管系統(tǒng)疾 病等。

2.1 促進(jìn)細(xì)胞分裂增殖

最早的燕窩生理功能研究文獻(xiàn)可追溯到1986 年，據(jù)報(bào)道，在伴刀豆球蛋白或植物血凝素存在的情況下，金絲燕（Collocalia）的燕窩提取物中的糖蛋白可增強(qiáng)人外周血單核細(xì)胞的有絲分裂反應(yīng)[30]。一年后，研究人員從金絲燕的燕窩中發(fā)現(xiàn)了一種類似于表皮生長(zhǎng)因子（Epidermal Growth Factor，EGF）樣的物質(zhì)[16]，并對(duì)這種物質(zhì)使用多種生化方法進(jìn)行了表征，如分子量、競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合測(cè)定和凝膠電泳。就其物理性質(zhì)而言，該物質(zhì)與從小鼠體內(nèi)分離得到的EGF 具有相似性，這是燕窩中可能存在EGF 的最早科學(xué)證據(jù)之一。EGF 是一類重要的生長(zhǎng)因子，在對(duì)其靶細(xì)胞的增殖、分化和存活中起著關(guān)鍵作用[31]。

2011 年，馬來(lái)西亞學(xué)者以人類結(jié)腸腺癌細(xì)胞（Caco-2）為模型研究了燕窩對(duì)細(xì)胞增殖的影響[32]；并使用小鼠白血病單核巨噬細(xì)胞（RAW 267.2）研究了燕窩對(duì)其腫瘤壞死因子（TNF-α）釋放的影響。Caco-2 和RAW 267.2 是常見(jiàn)的分別用于研究細(xì)胞代謝和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的細(xì)胞系。結(jié)果表明不同來(lái)源的燕窩均可以顯著促進(jìn)細(xì)胞增殖，增殖的百分比從135.48%±10.50% 到215.07%±4.74%（P＜0.05）。此外，當(dāng)用燕窩處理RAW 264.7 細(xì)胞時(shí)，發(fā)現(xiàn)燕窩可以顯著降低TNF-α 釋放。自體免疫性疾病如類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎和炎性腸病被認(rèn)為與TNF-α 水平增加有關(guān)，因此這一結(jié)果提示燕窩具有免疫調(diào)節(jié)功能。體外實(shí)驗(yàn)顯示，低濃度燕窩可促進(jìn)白兔角膜細(xì)胞增殖，尤其在血清介質(zhì)中（圖2），而且不會(huì)改變角膜細(xì)胞的表型[33]。這提示燕窩可以促進(jìn)角膜傷口的愈合，在滴眼護(hù)理液方面有潛在應(yīng)用。燕窩提取物還可以促進(jìn)人源脂肪干細(xì)胞（hADSCs）的增殖[34]。在非血清介質(zhì)中燕窩提取物主要是通過(guò)增加白細(xì)胞介素IL-6 和血管內(nèi)皮（細(xì)胞）生長(zhǎng)因子VEGF 的表達(dá)來(lái)促進(jìn)hADSCs 增殖的。無(wú)論粗燕窩還是燕窩提取物對(duì)CD3+T-淋巴細(xì)胞的增殖都有促進(jìn)作用，而對(duì)B 細(xì)胞和NK 細(xì)胞的影響不大 （圖3）[35]。服用燕窩大鼠的外周血T 細(xì)胞數(shù)量也顯著增加，說(shuō)明燕窩可以改善免疫系統(tǒng)，尤其改善服用免疫抑制劑患者的免疫平衡。

圖2 不同培養(yǎng)基中培養(yǎng)的角膜角質(zhì)細(xì)胞的形態(tài)圖 （放大50 倍的相差顯微照片）[33]

圖3 燕窩對(duì)免疫細(xì)胞增殖作用的影響圖[35]

2.2 抗衰老與抗氧化

燕窩提取物，尤其是分子量小于3 kDa 的組分，可增加黑腹果蠅抗氧化酶的活性和降低脂質(zhì)過(guò)氧化物的含量，進(jìn)而延緩果蠅的衰老[36]。燕窩可以通過(guò)下調(diào)細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白激酶/c-Jun N-末端激酶和轉(zhuǎn)錄因子，激活蛋白-1通路抑制基質(zhì)金屬蛋白酶-1的表達(dá)，從而顯示抗衰老特性[37]。體外細(xì)胞（HEPG2）實(shí)驗(yàn)顯示，燕窩直接水提物抗氧化活性低，而水提取物經(jīng)過(guò)進(jìn)一步酶解后，樣品的抗氧化活性顯著增強(qiáng)[38]。表明燕窩生物活性物質(zhì)很可能在腸道消化時(shí)從其基質(zhì)中釋放出來(lái)，然后通過(guò)腸道吸收以發(fā)揮其功能。同時(shí)，無(wú)論酶解與未酶解的提取物，均可以很好地保護(hù)細(xì)胞免于被雙氧水氧化損傷而死亡。如圖4 所示，300 μM 的雙氧水就可以導(dǎo)致細(xì)胞的顯著死亡，而4 μg·mL-1濃度的燕窩提取物就可以抑制HEPG2 細(xì)胞由于雙氧水氧化損傷導(dǎo)致的死亡。據(jù)報(bào)道，燕窩及其成分乳鐵蛋白（Lactoferrin，LF）和卵轉(zhuǎn)鐵蛋白（Ovotransferrin，OVF）可以通過(guò)增加清除活性來(lái)減少活性氧物種（ROS），從而對(duì)過(guò)氧化氫（H2O2）誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性產(chǎn)生保護(hù)作用[39]。此外，與H2O2處理組相比，燕窩處理組還可以誘導(dǎo)抗氧化相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄的顯著變化。燕窩可以增加總抗氧化能力，并降低非妊娠大鼠的氧化應(yīng)激水平[40]。它能夠通過(guò)維持抗氧化物質(zhì)-活性氧物種的平衡與調(diào)節(jié)相關(guān)基因的表達(dá)來(lái)保護(hù)和預(yù)防由醋酸鉛毒性引起的生殖系統(tǒng)組織形態(tài)學(xué)和功能的改變[41]。通過(guò)與珍珠粉的配伍，燕窩混合物可以顯著降低小鼠腦組織中脂質(zhì)的過(guò)氧化，提升大鼠血液中紅細(xì)胞超氧化物歧化酶的水平，從而延緩衰老[42]。

圖4 雙氧水與燕窩提取物處理后HEPG2 細(xì)胞的AOPI 染色熒光顯微成像圖[38]

2.3 抗病毒

有學(xué)者采用血凝抑制（HI 實(shí)驗(yàn)）和病毒中和實(shí)驗(yàn)，測(cè)定了不同濃度的燕窩提取物在Vero 細(xì)胞中對(duì)H5N1病毒的抗病毒活性[43]。結(jié)果表明，燕窩提取物在 12 μg·mL-1濃度下可抑制雞紅細(xì)胞中H5N1 病毒的血凝活性，其抑制H5N1 病毒感染的作用機(jī)制是抑制了病毒與細(xì)胞受體的結(jié)合。燕窩提取物可以中和流感病毒對(duì)MDCK 細(xì)胞的感染[44]，抑制流感病毒對(duì)紅細(xì)胞的血凝作用。蛋白質(zhì)印跡分析表明燕窩提取物可與流感病毒結(jié)合，防止其對(duì)宿主細(xì)胞的侵入，抑制流感病毒感染的能力。有趣的是，燕窩提取物還可以改善再生障礙性貧血（Aplastic Anemia，AA）小鼠的外周血常規(guī)和體重，提高感染了流感病毒AA 小鼠的存活率[45]。不同產(chǎn)地燕窩的抗病毒活性也不一樣，與其中乙?；僖核岬暮砍收嚓P(guān)[46]。

2.4 改善股骨強(qiáng)度

實(shí)驗(yàn)證明口服燕窩可以改善切除卵巢的大鼠股骨的強(qiáng)度和鈣含量[47]。與對(duì)照組相比，飼喂燕窩提取物的去卵巢大鼠的最終體重大，股骨鈣、磷和羥脯氨酸的濃度更高（P＜0.05），而且喂食高濃度燕窩提取物的實(shí)驗(yàn)組效果更好。燕窩提取物對(duì)體外人關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞（Human Articular Chondrocytes，HAC）的代謝活性也有影響[48]。燕窩提取物含量在0.50%～1.00%時(shí)能夠促進(jìn)HAC 的增殖。同時(shí)，燕窩提取物能夠降低培養(yǎng)的HAC 中分解代謝基因的表達(dá)，如基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP1 和MMP3）、白細(xì)胞介素1、6 和 8（IL-1、IL-6 和IL-8）、環(huán)氧合酶-2（COX-2）和誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）。該研究表明燕窩提取物在體外對(duì)人體關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞具有保護(hù)能力，它可以降低細(xì)胞分解代謝活動(dòng)并增加軟骨細(xì)胞外基質(zhì)的合成，是治療骨關(guān)節(jié)炎的潛在藥物。

2.5 保護(hù)神經(jīng)、改善記憶和認(rèn)知

燕窩中的糖蛋白（乳鐵蛋白和卵轉(zhuǎn)鐵蛋白）是具有神經(jīng)保護(hù)活性的功能性化合物[49]。燕窩含有的一個(gè)重要成分是芳香族氨基酸——酪氨酸，該氨基酸具有抗抑郁和鎮(zhèn)痛作用[1]。燕窩中存在的主要碳水化合物是唾液酸（N-乙酰神經(jīng)氨酸），含量約為10%。值得注意的是，唾液酸具有促進(jìn)神經(jīng)元生長(zhǎng)、突觸傳遞和大腦發(fā)育的功效[50]。新生兒的生長(zhǎng)發(fā)育需要極好的營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)，特別是大腦發(fā)育，任何食物缺乏都會(huì)對(duì)大腦的發(fā)育產(chǎn)生深遠(yuǎn)的影響。研究表明，唾液酸可以通過(guò)增強(qiáng)突觸通路和神經(jīng)節(jié)苷脂分布來(lái)改善兒童的智力和大腦功能[51]。當(dāng)唾液酸用作膳食補(bǔ)充劑時(shí)，生理系統(tǒng)中與認(rèn)知發(fā)育相關(guān)的幾個(gè)基因會(huì)上調(diào)[23]。腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（Brain-Derived Neurotrophic Factor，BDNF）是參與學(xué)習(xí)和記憶的關(guān)鍵分子，對(duì)海馬和海馬旁區(qū)域等記憶過(guò)程尤為重要[52]。有學(xué)者研究了燕窩母體給藥對(duì)小鼠乳仔學(xué)習(xí)記憶能力的影響，當(dāng)給孕婦和哺乳期雌鼠服用燕窩時(shí)，它會(huì)增加小鼠乳仔海馬中的BDNF 和唾液酸水平[53]，海馬CA1、CA2 和CA3 區(qū)域的神經(jīng)元細(xì)胞密度增加。燕窩可通過(guò)增加超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase，SOD）和膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶（Choline Acetyltransferase，ChAT）的活性來(lái)提高后代的學(xué)習(xí)和記憶能力。對(duì)小鼠母體喂食燕窩補(bǔ)充劑，對(duì)其第一代（F1）和第二代（F2）代小鼠學(xué)習(xí)和記憶功能均有促進(jìn)作用[54]。兩代動(dòng)物認(rèn)知能力的改善與GNE、ST8SiaIV、SLC17A5 和BDNF mRNA 表 達(dá)的上調(diào)有關(guān)，可明顯觀察到母體喂食燕窩組F1 和F2代小鼠腦組織突觸前末端突觸小泡的密度增高（圖5）。 在海馬區(qū)，BDNF 表達(dá)上調(diào)可促進(jìn)線粒體生物質(zhì)合成和神經(jīng)元可塑性，進(jìn)而促進(jìn)神經(jīng)組織增長(zhǎng)。燕窩亦可改善暴露于脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）誘導(dǎo)的神經(jīng)炎癥大鼠的記憶力和學(xué)習(xí)能力[24]。

圖5 小鼠海馬區(qū)突觸前后區(qū)的突觸小泡分布圖[54]

更年期是由于海馬神經(jīng)元的可塑性受損而導(dǎo)致的認(rèn)知功能障礙。而使用燕窩作為天然膳食補(bǔ)充劑可以緩解更年期認(rèn)知功能障礙[55]。研究顯示喂食燕窩可以減輕去卵巢大鼠的腦皮質(zhì)和海馬神經(jīng)變性[55]。燕窩補(bǔ)充劑可減少血清中的晚期糖基化終產(chǎn)物和下調(diào)與海馬和額葉皮層神經(jīng)變性和細(xì)胞凋亡相關(guān)的基因，進(jìn)而改善雌激素缺乏引起的神經(jīng)功能障礙。有學(xué)者研究了燕窩對(duì)海馬體SIRT1 表達(dá)以及對(duì)大鼠卵巢切除引起的記憶和認(rèn)知能力下降的影響[56]，發(fā)現(xiàn)喂食燕窩12 周可以明顯增強(qiáng)血清雌激素和海馬SIRT1 的表達(dá)，改善去卵巢雌性大鼠的認(rèn)知和記憶能力。并且，與雌激素組相比，燕窩組對(duì)肝臟的毒性更低。因此，在治療更年期引起的衰老相關(guān)問(wèn)題方面，燕窩治療可能是雌激素治療的有效替代方案，可將SH-SY5Y 細(xì)胞暴露于神經(jīng)毒素6-羥基多巴胺 （6-OHDA）來(lái)制備體外PD 細(xì)胞模型，使用MTT 法測(cè)試燕窩提取物對(duì)SH-SY5Y 細(xì)胞的細(xì)胞毒性。然后，進(jìn)行顯微形態(tài)學(xué)和核檢查、細(xì)胞活力測(cè)試和ROS 測(cè)定以評(píng)估燕窩提取物對(duì)6-OHDA 誘導(dǎo)的細(xì)胞損傷的保護(hù)作用[57]。結(jié)果表明燕窩粗提物在高達(dá)75 μg·mL-1的濃度下仍然不會(huì)引起SH-SY5Y 細(xì)胞死亡。形態(tài)學(xué)觀察和核染色表明燕窩降低了6-OHDA 誘導(dǎo)的SH-SY5Y 細(xì)胞凋亡的水平。圖6 顯示，100 μmol·L-1的6-OHDA 可誘導(dǎo)SH-SY5Y 細(xì)胞皺縮（B），Hoechst 33258 核染熒光顯微圖（F）可看見(jiàn)凋亡小體；而燕窩處理組則可以顯著保護(hù)6-OHDA 引起的細(xì)胞形態(tài)學(xué)變異（C、D）和凋亡（G、H）。燕窩水提取物在改善細(xì)胞ROS 積累、早期凋亡膜磷脂酰絲氨酸外化以及抑制caspase-3 裂解方面表現(xiàn)出更強(qiáng)的功效。因此，燕窩提取物對(duì)6-OHDA誘導(dǎo)的多巴胺能神經(jīng)元變性具有神經(jīng)保護(hù)作用。

圖6 燕窩提取物對(duì)暴露于6-羥基多巴胺的SH-SY5Y 細(xì)胞形態(tài)的影響圖[57]

燕窩中有多種化學(xué)成分，其中唾液酸是一個(gè)標(biāo)志性的組分，因此有學(xué)者專門利用從燕窩分離出來(lái)的唾液酸，探究了唾液酸對(duì)大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞（PC-12）和神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系人骨髓細(xì)胞（SH-SY5Y）和人腦細(xì)胞（SK-N-MC）活力的影響[58]。神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系是用于研究腦認(rèn)知功能表現(xiàn)和神經(jīng)元變性相關(guān)的神經(jīng)保護(hù)作用常用的細(xì)胞系。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明唾液酸濃度低于60 μg·mL-1時(shí)，對(duì)嗜鉻細(xì)胞瘤和神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系（PC-12、SH-SY5Y 和SK-N-MC） 均沒(méi)有細(xì)胞毒性作用。圖7 是Y-型動(dòng)物迷宮測(cè)試示意圖，用7 周大的雌性BALB/c 小鼠（n=40）進(jìn)行迷宮實(shí)驗(yàn)，測(cè)試前先進(jìn)行10 min 的第一次訓(xùn)練實(shí)驗(yàn)（T1，關(guān)閉新型迷宮臂）和5 min 第二次訓(xùn)練實(shí)驗(yàn)（T2，3個(gè)迷宮臂開(kāi)放）。60 min 后開(kāi)始T2 迷宮實(shí)驗(yàn)，用一個(gè)安裝在天花板上的攝像頭來(lái)記錄進(jìn)入各個(gè)迷宮臂的次數(shù)和在每個(gè)臂中花費(fèi)的時(shí)間，用進(jìn)入新型迷宮臂出來(lái)的次數(shù)和在新型臂中所花的時(shí)間來(lái)評(píng)估動(dòng)物的空間工作記憶能力。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，給予更高服用劑量唾液酸（0.6 mg·kg-1）的小鼠組，可以顯著改善其在Y-迷宮測(cè)試中的表現(xiàn)，進(jìn)入新型迷宮臂出來(lái)的次數(shù)（37.9 次） 和在新型臂中所花的時(shí)間（8.79 min）均比對(duì)照組 （27.7 次，5.66 min）顯著增強(qiáng)。

圖7 Y-迷宮測(cè)試的示意圖[58]

帕金森?。≒arkinson’s Disease，PD）是老年人群常見(jiàn)的神經(jīng)退行性疾病，主要表現(xiàn)為運(yùn)動(dòng)和認(rèn)知障礙。PD 是由于中腦多巴胺能神經(jīng)元的死亡而引起的，有證據(jù)表明氧化和亞硝化應(yīng)激在神經(jīng)退行性病變中起著核心作用。有學(xué)者研究了口服燕窩（20 mg·kg-1和100 mg·kg-1劑量）對(duì)6-羥基多巴胺（6-OHDA）誘導(dǎo)的PD 模型小鼠（C57BL/6J）的神經(jīng)保護(hù)作用[59]。結(jié)果發(fā)現(xiàn)28 d 的燕窩口服給藥可極大改善PD 小鼠在行進(jìn)距離和平衡方面的運(yùn)動(dòng)能力。燕窩還能保護(hù)多巴胺能神經(jīng)元對(duì)抗黑質(zhì)中的6-OHDA 誘導(dǎo)損傷，逆轉(zhuǎn)PD小鼠中抗氧化酶谷胱甘肽過(guò)氧化物酶1 表達(dá)的減少和抑制小膠質(zhì)細(xì)胞激活。GPX1 是谷胱甘肽過(guò)氧化物酶蛋白家族的成員，在過(guò)氧化氫的解毒中起重要作用，因此具有保護(hù)細(xì)胞免受氧化損傷的功能。它是最豐富的含硒抗氧化酶之一，幾乎在所有類型的哺乳動(dòng)物組織中都有表達(dá)。在人腦組織切片中，GPX1 酶的表達(dá)集中在黑質(zhì)中的多巴胺能神經(jīng)元周圍。因此，使用抗GPX1 抗體對(duì)GPX1 進(jìn)行免疫染色組織化學(xué)研究，可以對(duì)從PD 小鼠模型獲得的腦切片進(jìn)行抗氧化水平標(biāo)記。在免疫熒光研究中，可以在整個(gè)中腦切片中看到陽(yáng)性染色，但在黑質(zhì)區(qū)域觀察到更高的染色強(qiáng)度。腦組織切片左側(cè)6-OHDA 微注射手術(shù)部位，綠色熒光顯著變暗，而服用燕窩后，左右兩側(cè)熒光強(qiáng)度趨于相同，顯示服用燕窩后可以提高6-OHDA 誘導(dǎo)損傷黑質(zhì)中多巴胺神經(jīng)元的抗氧酶的表達(dá)水平。體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)顯示燕窩可有效減少SH-SY5Y 細(xì)胞中6-OHDA 誘導(dǎo)的一氧化氮形成和脂質(zhì)的過(guò)氧化，即燕窩可通過(guò)增強(qiáng)抗氧化酶活性和抑制PD 模型中的小膠質(zhì)細(xì)胞活化、一氧化氮形成和脂質(zhì)過(guò)氧化來(lái)發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。這一結(jié)果提示食用燕窩有神經(jīng)元神經(jīng)保護(hù)作用，有助于治療帕金森等疾病。盡管燕窩的神經(jīng)保護(hù)作用已有不少報(bào)道，但是其對(duì)學(xué)習(xí)和記憶控制的影響及其作為認(rèn)知增強(qiáng)藥物的潛在應(yīng)用仍然需要深入的研究[60]。

2.6 預(yù)防胰島素抵抗

小鼠實(shí)驗(yàn)證明高脂肪飲食（High Fat Diet，HFD）會(huì)使代謝指標(biāo)惡化，燕窩可防止因HFD 引起的胰島素信號(hào)基因的代謝指標(biāo)惡化和轉(zhuǎn)錄變化[61]。它是通過(guò)調(diào)節(jié)胰島素信號(hào)基因的轉(zhuǎn)錄而誘導(dǎo)胰島素抵抗的（圖8），表明燕窩可用作預(yù)防胰島素抵抗的功能性食品。用正常大鼠飼料、燕窩或雌激素喂養(yǎng)切除卵巢的雌性大鼠12 周，并與正常未切除卵巢的大鼠進(jìn)行比較。結(jié)果表明，卵巢切除術(shù)會(huì)惡化代謝指標(biāo)并破壞肝臟胰島素信號(hào)基因的正常轉(zhuǎn)錄。而喂食燕窩可以改善代謝指標(biāo)，并在肝臟胰島素信號(hào)基因中誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄變化[55]。這些變化會(huì)增強(qiáng)胰島素敏感性以及葡萄糖和脂質(zhì)穩(wěn)態(tài)，燕窩的作用效果甚至優(yōu)于雌激素。以上表明，燕窩能用于預(yù)防或輔助治療糖尿病。

圖8 燕窩（EBN）在胰島素信號(hào)通路中的作用圖[61]

2.7 抗癌活性

一般認(rèn)為，食用燕窩不會(huì)刺激腫瘤的生長(zhǎng)[62]。目前，直接應(yīng)用燕窩來(lái)抑制腫瘤細(xì)胞增殖或誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡的研究未見(jiàn)報(bào)道。唾液酸是燕窩的標(biāo)志性成分，而癌細(xì)胞表面的唾液酸卻可以作為有效的免疫調(diào)節(jié)劑，為腫瘤組織提供免疫抑制微環(huán)境和腫瘤的免疫逃逸[63]。因此，基于唾液酸為靶點(diǎn)的抗腫瘤藥物研究，是抗腫瘤藥物研究的重要方向。例如，唾液酸阻斷糖模擬物Ac53FaxNeu5Ac 能夠產(chǎn)生強(qiáng)大的腫瘤免疫反應(yīng)，唾液酸阻斷增強(qiáng)了自然殺傷細(xì)胞對(duì)腫瘤浸潤(rùn)性和細(xì)胞毒性CD8+T 細(xì)胞介導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞殺傷[64]。鑒于唾液酸受體在腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（Tumor-Associated Macrophage，TAM）表面有過(guò)表達(dá)，這種表達(dá)在腫瘤的進(jìn)展和轉(zhuǎn)移中起關(guān)鍵作用。表柔比星（Epirubicin，EPI）是一種抗生素類抗腫瘤藥物，將唾液酸-膽固醇偶聯(lián)物（SA-CH）修飾在負(fù)載EPI 的脂質(zhì)體（EPI-SAL）的表面上，就可以改善EPI 向TAM 傳遞的靶向性[65]。體外和體內(nèi)細(xì)胞攝取研究表明，EPI-SAL 增強(qiáng)了EPI在TAM 中的積累?？鼓[瘤研究表明，EPI-SAL 具有很強(qiáng)的抗腫瘤活性，誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡，荷瘤小鼠的存活率為83.3%。這些發(fā)現(xiàn)表明，基于唾液酸修飾的藥物遞送體系，是一種提高藥物抗腫瘤活性與靶向性的有效途徑，可以通過(guò)設(shè)計(jì)合成的唾液酸阻斷糖模擬物（P-3Fax-Neu5Ac）阻止癌癥轉(zhuǎn)移[66]。由于癌細(xì)胞表面的高唾液酸化可以保護(hù)其免于被免疫系統(tǒng)識(shí)別和根除，這就限制了癌癥免疫療法的效果。因此，唾液酸就成為增強(qiáng)癌癥免疫治療效果的重要靶點(diǎn)。用細(xì)菌唾液酸酶從癌細(xì)胞中去除細(xì)胞表面唾液酸，可增加它們?cè)诨旌狭馨图?xì)胞反應(yīng)中的免疫原性，促進(jìn)和誘導(dǎo)癌癥患者體內(nèi)的抗腫瘤免疫反應(yīng)[67]。唾液酸酶治療已經(jīng)被證明可以使小鼠模型中的癌細(xì)胞具有免疫反應(yīng)性，說(shuō)明阻斷或干擾唾液酸表達(dá)，可以使免疫系統(tǒng)根除癌細(xì)胞[68]。此外，也可以利用合成的唾液酸或化學(xué)修飾的唾液酸前驅(qū)體，作用于癌細(xì)胞，干預(yù)唾液酸生物合成途徑而產(chǎn)生抗腫瘤免疫[69]。非人類免疫原性唾液酸可“自然地”與癌細(xì)胞的表面唾液酸聚糖結(jié)合。研究者已經(jīng)發(fā)現(xiàn)一種非人類唾液酸Neu5Gc（N-羥乙酰神經(jīng)氨酸）能夠在幾種癌癥中表達(dá)。Neu5Gc 不能由人體細(xì)胞合成，而是從飲食中攝取，并被轉(zhuǎn)入正常細(xì)胞特別是癌細(xì)胞的表面唾液酸聚糖中。食用含有Neu5Gc的食物后，可以在大多數(shù)個(gè)體中檢測(cè)到針對(duì)這種非人類唾液酸的抗體，并可能用于癌癥免疫治療[70]。值得注意的是，在癌癥患者中，可以檢測(cè)到針對(duì)唾液酸聚糖的抗體，這表明所謂的腫瘤相關(guān)碳水化合物抗原（Tumor-Associated Carbone Antigens，TACA） 可 以被免疫系統(tǒng)識(shí)別為非自身的物質(zhì)，并誘導(dǎo)抗腫瘤免疫反應(yīng)[71]。因此，唾液酸類碳水化合物甚至可以作為抗腫瘤的疫苗[72]。針對(duì)特定腫瘤唾液酸聚糖的抗體在癌癥免疫治療中也表現(xiàn)出很好的抗腫瘤效果。例如，攜帶唾液糖脂SSEA-4（階段特異性胚胎抗原-4）的α-2,3 唾液酸在多形性腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤（GBM）中是高度特異性的TACA。在GBM 小鼠模型中，施用針對(duì)SSEA-4 的單克隆抗體可有效抑制腫瘤生長(zhǎng)[73]。

2.8 其他作用

大鼠實(shí)驗(yàn)表明，食用燕窩具有提高激素如睪酮（T）、雌二醇（E2）、黃體酮（P）、促黃體激素（LH）、促卵泡激素（FSH）和催乳素（PRL）水平的作用[74]。此外，燕窩還具有改善心血管疾病的作用。EBN 的不飽和脂肪酸與飽和脂肪酸的比例很高，有利于降低血清膽固醇和動(dòng)脈粥樣硬化，預(yù)防心臟?。豢梢詼p輕高脂飲食引起的高膽固醇血癥和凝血，并防止代謝指數(shù)惡化和胰島素信號(hào)基因的轉(zhuǎn)錄變化；前者的作用機(jī)制與辛伐他汀相似，部分是通過(guò)凝血相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控實(shí)現(xiàn)的[75]。

3 結(jié)語(yǔ)

綜上所述，燕窩中所含有的特殊糖蛋白和多肽類物質(zhì)具有重要的生理功效，在保健、醫(yī)學(xué)和美容方面都有重要的應(yīng)用價(jià)值。關(guān)于食用燕窩的生物學(xué)功能的研究仍然有待進(jìn)一步加強(qiáng)，其許多重要的生物學(xué)和藥用價(jià)值僅在中醫(yī)藥等出版物中有所記載，尚缺乏足夠的科學(xué)依據(jù)。例如，食用燕窩如何緩解哮喘，如何提高專注力，如何幫助腎功能以及特定功能有貢獻(xiàn)的特定成分的分析，都需要做大量的科研工作來(lái)闡釋相關(guān)功能的生物化學(xué)機(jī)制。目前，除燕窩唾液酸的分子結(jié)構(gòu)比較明確外，研究所用的燕窩提取物多數(shù)是混合物。因此，燕窩提取物的精細(xì)分離與組分的結(jié)構(gòu)鑒定、提取工藝與成分的關(guān)系，仍然是當(dāng)今燕窩生理功效研究的重要基礎(chǔ)課題。在燕窩產(chǎn)品應(yīng)用開(kāi)發(fā)方面，以下幾個(gè)研究方向是值得關(guān)注的。①促進(jìn)神經(jīng)發(fā)育與輔助治療帕金森病的燕窩特醫(yī)食品。②基于免疫響應(yīng)的腫瘤術(shù)后康復(fù)特醫(yī)食品。③提高免疫力的功能性保健食品。