宮敬禹 張 紅 舒盈盈 鄧全富 張 旻

（重慶登康口腔護理用品股份有限公司，重慶 400025）

從牙本質敏感的脫敏機理上看，通常有封堵牙本質小管和阻斷神經(jīng)傳遞兩種。脫敏糊劑主要是通過封閉牙本質小管，減少了液壓傳導從而脫敏，常見的活性成分包括氟化物、鍶鹽、羥基磷灰石、生物活性玻璃等。阻斷神經(jīng)傳遞的代表性成分是鉀鹽，其通過神經(jīng)去極化，降低神經(jīng)興奮性，從而起到緩解牙齒敏感的作用。

鍶鹽（氯化鍶或乙酸鍶）在治療牙本質過敏癥方面具有較好的效果。鍶鹽與牙本質和磷灰石具有很高的親和力，類似于用于治療過敏的鋅和錫等金屬。國內外同領域研究以高濃度添加鍶鹽為主[1]。Kuniko Saeki 等[2]研究發(fā)現(xiàn)，采用10%乙酸鍶溶液可顯著增加正常牙根的牙本質小管封堵，脫礦牙本質小管封堵程度較小，并增加脫礦牙本質的納米力學性能。刷牙比浸泡更有效地恢復脫礦牙本質，但兩種給藥方法在牙本質小管封堵方面無差異。王昕等[3]進行了10%乙酸鍶、50%氫氧化鈣、75%氟化鈉甘油治療牙本質敏感癥的臨床效果分析，研究結果表明：10%乙酸鍶的脫敏效果最明顯，隨著使用時間的延長，50%氫氧化鈣和75%氟化鈉甘油的效果可以提升。張欣等[4]研究顯示，極固寧脫敏劑（II 液含氯化鍶）在降低牙本質對于機械刺激的敏感方面優(yōu)于75%氟化鈉甘油。

本研究采用含鍶脫敏糊劑作為研究對象，運用掃描電鏡的方法，對其封堵效果進行研究；選用濾膜擴散法研究實驗樣品的細胞毒性，并對其極性和非極性浸提液進行口腔黏膜刺激反應和皮膚致敏反應評價。

1 材料和方法

1.1 材料

采用真空乳化制膏法制備含2% 氯化鍶（SrCl2·6H2O）的脫敏糊劑。其中，氯化鍶和硝酸鉀由重慶茂業(yè)化學試劑有限公司生產(chǎn)；基質選用二氧化硅（肇慶金三江硅材料有限公司生產(chǎn)）；表面活性劑選用十二烷基硫酸鈉（Sodium lauryl sulfate，SLS），由四川省億豐油脂化學有限責任公司生產(chǎn)。

人工唾液的配制：稱取0.381 g 的NaCl、0.213 的CaCl2·2H2Og、0.738 g 的K2HPO4·3H2O和1.114 g 的KCl，依次溶于900 mL 超純水中，用稀HCl（0.5 M）調節(jié)溶液的pH 至7.0，最后用超純水定容至1 000 mL。

1.2 牙本質小管封堵實驗

1.2.1牙本質片制備 選擇無齲壞或其他結構缺陷的牛下頜切牙樣本24 顆，制備牙本質片。用切片機垂直于牛牙長軸進行切割，獲得牙本質暴露區(qū)，平坦區(qū)約為8 mm×8 mm，厚度控制約2 mm，在水灌注的條件下拋光形成5 mm×5 mm 平面，去離子水超聲清洗，用40%的正磷酸腐蝕牛牙樣本去除模糊層，以去離子水清洗，用5.0% NaClO輕度腐蝕，再用去離子水超聲清洗。將前處理完成后的樣本用金相顯微鏡觀察，挑選牙本質暴露明顯，牙本質小管均勻的24 個樣本放入人工唾液中備用。

1.2.2實驗分組 樣本隨機分3 組（n=8）：實驗組為含2% SLS 和2%氯化鍶的脫敏糊劑（DS1），陰性對照組為普通含氟牙膏（氟含量0.11%，二氧化硅基質，佳潔士）；空白對照組為去離子水。

1.2.3 脫敏實驗 分別取適量實驗組和陰性對照組的脫敏糊劑膏體和超純水按1 ∶1 的比例配制樣品漿液，置于多工位攪拌器上攪拌均勻。將牙本質片分別放入各組樣品漿液中，用電動牙刷刷30 s，超純水清洗干凈后，放入人工唾液中，置于37 ℃的隔水式恒溫培養(yǎng)箱中保存。此過程上午、下午分別處理一次，連續(xù)處理7 d 后用掃描電子顯微鏡（SEM）觀察，隨機取三個觀察點（放大倍數(shù)為2 000 倍）。采用Image-Pro Plus 6.0 自動計算出牙本質小管未堵塞區(qū)域的面積，繼而求出各實驗組牙本質小管的封堵率。采用SPSS 軟件進行統(tǒng)計分析，檢驗水準α=0.05。

1.3 生物安全性測試

1.3.1 體外細胞毒性試驗 采用濾膜擴散法（GB/T 16886.5-2017）研究脫敏糊劑及市售產(chǎn)品的細胞毒性。使用φ5 mm 濾紙片飽和吸附樣品后置于濾膜上進行試驗。所制備的脫敏糊劑分別為含有2%的SLS 樣品（DS1）和不含SLS 樣品（DS2）。根據(jù)不同的活性成分，選取3 種典型市售含SLS 的脫敏產(chǎn)品進行比較，分別為含氟脫敏產(chǎn)品（DF，*福脫敏糊劑）、含鉀鹽脫敏產(chǎn)品（DK，*康牙齒脫敏糊劑）、含生物活性玻璃脫敏產(chǎn)品（DB，*仕牙齒脫敏劑）。

1.3.2 急性經(jīng)口毒性試驗 結合脫敏糊劑的特點，采用《化妝品安全技術規(guī)范》規(guī)定的一次限量法，研究DS1 的急性經(jīng)口毒性（LD50）。采用KM 小鼠10 只，雌雄各半，SPF 級。試驗前，實驗動物禁食過夜，不限制飲水。經(jīng)口灌胃口服樣品原液，給藥體積為10 mL/kg，給藥劑量為13 000 mg/kg，遠大于5 000 mg/kg 體重劑量。當未引起動物死亡，可考慮不再進行多個劑量的急性經(jīng)口毒性試驗。

1.3.3 口腔黏膜刺激和皮膚致敏試驗 分別對脫敏樣品（DS1）的極性和非極性浸提液進行口腔黏膜刺激試驗和皮膚致敏試驗（GB/T 16886.10-2017）。 按0.2 g/mL 的 比 例， 在37 ℃、72 h、60 rpm 制備浸提液。用無菌棉球浸透樣品極性浸提液（約1 mL）進行極性接觸。非極性試驗組采用非極性浸提液同法操作。根據(jù)GB/T 16886.10-2017 的方法進行皮膚致敏試驗，其皮內誘導、局部誘導、激發(fā)的浸提液制備同口腔黏膜刺激試驗。

2 結果

2.1 牙本質小管的封堵效果

SEM 研究結果表明，DS1 組的牙本質表面被沉積物所覆蓋，大部分牙本質小管被顆粒狀的沉積物所封堵，與牙本質表面緊密結合，分布相對均勻。陰性對照組雖然牙本質表面存有沉積物封堵，但結合不夠緊密。顆粒物與牙本質表面分離清晰，且有較多牙本質小管未被封堵?？瞻讓φ战M的牙本質小管完全開放且形態(tài)清晰，僅少量可見顆粒物沉積，顆粒物與牙本質表面邊緣清晰。詳見圖1。

采用圖像分析法計算牙本質小管封堵率（表1）。結果顯示，實驗組與陰性對照組的牙本質小管未封堵面積明顯小于空白對照組，實驗組的牙本質小管未封堵面積小于陰性對照組。其中，陰性對照組的封堵率為48.29%，實驗組的封堵率為70.97%。

表1 各組的牙本質小管封堵率

通過統(tǒng)計學分析可知：相比空白對照組，實驗組和陰性對照組均可使牙小管的未封堵面積明顯減少，且差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。實驗組的未封堵面積明顯減少，與陰性對照組之間的差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。

2.2 細胞毒性與急性經(jīng)口毒性結果

DS1 與市售3 種同類脫敏產(chǎn)品的細胞毒性研究結果顯示：添加有表面活性劑SLS 的樣品（DS1、DF、DK、DB）均呈現(xiàn)3 級細胞毒性，而DS2 呈現(xiàn)2 級細胞毒性（見表2）。

表2 不同試樣的細胞毒性

急性經(jīng)口毒性試驗結果顯示：動物未發(fā)現(xiàn)任何異常，動物體重、生命體征一切正常，肉眼觀察未發(fā)現(xiàn)任何異常。LD50大于5 000 mg/kg，結果為無毒。

2.3 口腔黏膜刺激與致敏反應結果

口腔黏膜刺激試驗結果顯示：試驗結束后24 h，肉眼觀察2 組浸提液組的動物兩側頰囊均未見異常改變，記分為0。組織學觀察結果顯示，極性浸提組的刺激指數(shù)為0.78，非極性浸提組的刺激指數(shù)為0.56。提示DS1 對口腔黏膜組織無刺激。

皮膚致敏試驗結果顯示：動物皮膚未見紅斑和水腫，動物皮膚紅斑和水腫等級小于1。在本次試驗條件下，DS1 無皮膚致敏反應。

3 討論

已有研究顯示[5]，鍶鹽的添加濃度為8% ～ 10%時，對于牙本質敏感的治療效果較好。然而，低濃度添加鍶鹽的脫敏糊劑對牙小管封堵作用的研究則相對較少。劉紅春等[6]研究了含2%氯化鍶和5%硝酸鉀的牙膏對治療牙本質敏感的效果，牙膏使用3 天后，能有效降低牙本質敏感。

根據(jù)歐盟EC1223[7]以及《牙膏用原料規(guī)范》（GB 22115-2008）的規(guī)定，氟和鍶作為日常使用的口腔用品原料，其安全的添加用量分別不得高于0.15%（以氟計）和3.5%（以鍶計）。本實驗中，添加2% SrCl2·6H2O 的脫敏糊劑，持續(xù)作用7 天后，實驗組對牙本質小管的封堵率為70.97%，陰性對照組為48.29%，表明含2%氯化鍶的脫敏糊劑對牙本質小管的封堵效果優(yōu)于普通含氟牙膏。這可能是由于日常使用牙膏產(chǎn)品中，氟添加濃度的受限，影響了其對牙本質小管的封堵作用。

鍶的原子半徑略大于鈣，很容易替代礦物以及骨骼中的鈣。在口腔環(huán)境中，鍶和鈣等其他二價陽離子類似，可以很容易替代羥基磷灰石晶格。由于化學相似性，鍶可以在牙齒表面沉淀，取代羥基磷灰石的鈣，并導致牙本質力學性能的微小變化，這可能是實驗組獲得較好封堵效果的原因之一。鍶可能存在牙本質吸收并形成鍶磷灰石，在對牙本質小管封堵效果較好的樣本進行EDX 分析時，存在無法檢測到鍶的現(xiàn)象[8]。因此，對于本研究中沉積物的化學組成，仍需通過進一步研究加以證實。

研究發(fā)現(xiàn)，十二烷基硫酸鈉（SLS）的添加，是導致脫敏糊劑細胞毒性的主要原因。SLS 是一種廣泛使用的陰離子表面活性劑，具有很強的表面活性，起泡力強，常用于制藥、化妝品、洗護等產(chǎn)品。SLS 的細胞毒性隨著濃度的增加，呈線性遞增。在口腔用品中，SLS 的添加量為1% ～ 3%。根據(jù)英敏特數(shù)據(jù)庫統(tǒng)計，2018 年，國內外新上市使用SLS 的牙膏高達1 500 余種。關于SLS 作為化妝品原料的使用，美國化妝品原料評估委員會（CIR）分別于1983 年和2005 年進行兩次評估[10-11]。報告指出：早在1981 年，SLS 就已應用于703 個化妝品配方。2002 年，SLS 已在1018 個配方中獲得應用，最高添加濃度為50%。其中，牙膏中最高添加量為8%?，F(xiàn)有的使用條件下，SLS 不會對人體健康造成傷害。

體外細胞毒性和急性經(jīng)口毒性試驗結果顯示，添加2%的SLS 是導致脫敏糊劑（DS1）產(chǎn)生細胞毒性的主要原因。脫敏糊劑（DS1）的LD50大于5 000 mg/kg，呈現(xiàn)實際無毒的結果。試驗及評估結果表明，細胞毒性反應能預示潛在的體內毒性，僅根據(jù)細胞毒性數(shù)據(jù)未必能確定某些產(chǎn)品不適合特定的臨床應用。SLS 應用于脫敏糊劑（DS1）是安全的。此外，在可預見的使用方式下，本研究中的脫敏糊劑（DS1）不會產(chǎn)生刺激和致敏反應。

4 結論

在 本 研 究 中， 含 有2% 的SLS 和2% 的SrCl2·6H2O 的脫敏糊劑具有良好的生物安全性，對牙本質小管的封堵效果較好。