李祖蓉 楊德鑫 黃學(xué)濤 楊燁鮮 劉暢

（齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院 黑龍江齊齊哈爾 161006）

卡托普利是血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制藥，通過減少血管緊張素Ⅱ的生成、減少緩激肽水解而降低血壓，并可通過擴(kuò)張小動(dòng)脈和小靜脈，減輕心臟前、后負(fù)荷，臨床可用于治療高血壓和心力衰竭［1］?？ㄍ衅绽锇胨テ诙?，普通制劑每天需給藥2～3次，作用時(shí)間僅維持6～8h，頻繁服藥給病人帶來不便。緩控釋制劑可通過改變藥物釋放速度，具有降低血藥濃度波動(dòng)，減少給藥次數(shù)，提高臨床用藥依從性等優(yōu)勢(shì)。其研究可以追溯到20世紀(jì)50年代［2］，現(xiàn)已成為普通劑型藥物必然的替代產(chǎn)品［3］。緩釋制劑的常見類型有骨架型緩釋制劑、膜控型緩釋制劑、滲透泵型制劑及雙重緩釋制劑等［3］，此外，膜劑［4］、納米技術(shù)［5］等也可達(dá)到緩慢釋放藥物的目的。緩釋制劑及其技術(shù)已廣泛引用在防治心血管疾?。?］、抗炎藥物［7］及藥物載體構(gòu)筑［8］中。在口服緩控釋制劑的制備技術(shù)中，通過包衣膜來控制藥物釋放是最常用、最有效的方法之一［9］。近年來，托普利的緩釋制劑研究不斷深入，如卡托普利緩釋片［10］、卡托普利生物粘附型緩釋膠囊［11］、卡托普利緩釋微丸［12］等。本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)卡托普利微孔膜包衣片，并對(duì)其釋放度進(jìn)測(cè)定，以期為卡托普利緩釋制劑的研究提供參考，有關(guān)此類制劑的研究未見報(bào)道。

1 儀器與材料

高效液相色譜儀（上海精密儀器儀表公司），78X-2型片劑四用測(cè)定儀（上海黃海藥檢儀器有限公司），單沖壓片機(jī)（北京國(guó)藥龍立科技有限公司），AE-240型電子天平（梅特勒—托利多上海有限公司），卡托普利（連云港恒錦藥業(yè)有限公司），可壓性淀粉（浙江千裕生物科技有限公司），PVP K30（武漢東康源科技有限公司），硬脂酸鎂（安徽山河藥用輔料股份有限公司），乙基纖維素（武漢拉那白醫(yī)藥化工有限公司），醋酸纖維素（武漢東康源科技有限公司），PEG 4000、PEG6000（天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所），95%乙醇、無(wú)水乙醇（天津市富宇精細(xì)化工有限公司）。所有試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 卡托普利微孔膜包衣片的制備

2.1.1 卡托普利片芯的制備

將卡托普利及輔料粉末分別過80 目篩，混勻，加黏合劑制軟材，過16目篩制粒，于55℃下干燥，18目篩整粒，加入硬脂酸鎂混勻，采用單沖壓片機(jī)壓制卡托普利片芯，每片含卡托普利37.5mg。

2.1.2 包衣液的配制

將處方量成膜材料溶于有機(jī)溶劑中，置于恒溫磁力攪拌器中攪拌，溶解完全后加入致孔劑、色素，混勻即可。

2.1.3 卡托普利微孔膜包衣片的制備

將卡托普利片芯置于包衣鍋，在片床溫度約40℃、包衣鍋轉(zhuǎn)速30r/min 的條件下包衣。待衣膜達(dá)到預(yù)定增重，取出，室溫固化6～8h，50℃下干燥12～24h，即得卡托普利微孔膜包衣片。

2.2 釋放度測(cè)定方法的建立

2.2.1 色譜條件

色譜柱C18柱（4.6mm×250mm，5μm），流動(dòng)相為0.01mol/L（磷酸二氫鈉：甲醇：乙腈=60：35：5，用磷酸調(diào)pH=3.0），流速為1.0mL/min，柱溫40℃。進(jìn)樣量為20μL，檢測(cè)波長(zhǎng)為205nm。

2.2.2 溶液的配制

（1）對(duì)照品溶液：精密稱取卡托普利對(duì)照品50mg，用脫氣后的流動(dòng)相稀釋，定容至100mL，制得0.5mg/mL的對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密吸取對(duì)照品儲(chǔ)備液2mL 置于50mL容量瓶中，流動(dòng)相定容得20μg/mL對(duì)照品溶液。

（2）供試品溶液：取制得的卡托普利微孔膜包衣片，釋放介質(zhì)為900mL 純化水，轉(zhuǎn)速75r/min，依法操作，釋放規(guī)定時(shí)間后，取釋放溶液5mL，過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

（3）空白輔料溶液：按處方量制得不含卡托普利的空白片，按2.2.2（2）項(xiàng)所述方法進(jìn)行釋放度試驗(yàn)，得空白輔料溶液。

2.2.3 專屬性試驗(yàn)

分別取2.2.2項(xiàng)對(duì)照品溶液、供試品溶液和空白輔料溶液，按相應(yīng)方法進(jìn)樣，色譜圖如圖1所示。結(jié)果顯示卡托普利保留時(shí)間為5.97min。在該色譜條件下，其他成分不干擾卡托普利的測(cè)定。

圖1 卡托普利高效液相色譜圖

2.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

精密稱取卡托普利對(duì)照品50mg，用脫氣后的流動(dòng)相稀釋，定容100mL，制得0.5mg/mL 的對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密吸取對(duì)照品儲(chǔ)備液1mL、2mL、4mL、6mL、8mL 分別置于50mL容量瓶中，流動(dòng)相定容，分別制得10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、60μg/mL、80μg/mL 系列濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液。按2.2.1項(xiàng)所述方法進(jìn)樣，記錄峰面積。以峰面積值（A）對(duì)濃度（C）進(jìn)行線性回歸，得卡托普利的標(biāo)準(zhǔn)曲線 方 程為Y=0.2199X+0.1424，R2=0.999，表明在10～80μg/mL范圍內(nèi)濃度與峰面積線性關(guān)系良好。

2.2.5 精密度試驗(yàn)

取10μg/mL、40μg/mL、80μg/mL濃度卡托普利對(duì)照品溶液。按2.2.1所述方法進(jìn)樣，記錄峰面積，帶入標(biāo)曲計(jì)算濃度，計(jì)算RSD值。一天內(nèi)測(cè)定5次，連續(xù)測(cè)定5d，得日內(nèi)及日間精密度。結(jié)果RSD在0.21%～0.63%，均小于2%，符合方法學(xué)要求。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取10μg/mL、40μg/mL、80μg/mL 濃度卡托普利對(duì)照品溶液及供試品溶液。于室溫下放置0h、1h、2h、4h、8h、24h。按2.2.1所述方法進(jìn)樣，記錄峰面積，計(jì)算濃度及RSD 值。結(jié)果RSD 在0.27%～1.37%，樣品在室溫放置條件下穩(wěn)定性良好。

2.2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取自制卡托普利微孔膜包衣片，按2.2.2（2）所述方法進(jìn)行釋放度試驗(yàn)，制備規(guī)定時(shí)間內(nèi)5 份供試品溶液，按2.2.1 所述方法進(jìn)樣，記錄峰面積，計(jì)算濃度及RSD值。結(jié)果RSD為0.96%，重復(fù)性良好。

2.2.8 回收率試驗(yàn)

取卡托普利儲(chǔ)備液適量，加入對(duì)應(yīng)處方量的輔料，配制濃度相當(dāng)于10%、60%、120%的樣品溶液。按2.2.1所述方法進(jìn)樣，記錄峰面積，計(jì)算濃度、平均回收率及RSD值。結(jié)果平均回收率為99.66%，RSD為0.22%。

2.3 釋放度測(cè)定方法

取自制卡托普利微孔膜包衣片6 片，參照釋放度測(cè)定法（中國(guó)藥典2020年版二部附錄XD，第一法（籃法）），以純化900mL 為釋放介質(zhì)，轉(zhuǎn)速7r/min，依法操作分別于1h、2h、4h、6h、8h、12h 取樣5mL，并立即補(bǔ)足釋放介質(zhì)5mL。樣品過濾后，按2.2.1 所述方法進(jìn)樣，記錄峰面積，計(jì)算濃度及各時(shí)間點(diǎn)的累計(jì)釋百分比。

2.4 片芯及包衣液的處方篩選

2.4.1 填充劑的篩選

在其他處方量不變的條件下，分別以可壓性淀粉、乳糖以及質(zhì)量比為7∶3的可壓性淀粉：乳糖作為填充劑，處方見表1。按2.1.1所述方法制備卡托普利片芯，每個(gè)處方壓制20片，以外觀為指標(biāo)考察填充劑種類，結(jié)果見表2。結(jié)果顯示，處方1及處方2的片芯表面光滑程度差，且有粉末脫落現(xiàn)象；處方3片芯表面光滑且無(wú)粉末脫落現(xiàn)象。選擇可壓性淀粉、乳糖合用（質(zhì)量比7∶3）作為填充劑。

表1 填充劑的篩選處方

表2 3 種填充劑制得卡托普利素片的外觀差異

2.4.2 黏合劑的篩選

在其他處方量不變的條件下，分別以15%淀粉漿、5%淀粉漿、10%PVP乙醇溶液作為黏合劑，處方見表3。按2.1.1所述方法制備卡托普利片芯，每個(gè)處方壓制20片，以硬度為指標(biāo)考察黏合劑。結(jié)果顯示處方5 的硬度符合要求，選擇5%淀粉漿作為黏合劑。

表3 黏合劑的篩選處方

2.4.3 包衣液成膜材料的篩選

微孔膜緩釋制劑通常是用于胃腸道不溶的聚合物：醋酸纖維素、乙基纖維素、乙烯-醋酸乙烯共聚物、丙烯酸樹脂等作為衣膜材料。本實(shí)驗(yàn)在其他處方量不變的條件下，以乙基纖維素乙醇包衣液、醋酸纖維素丙酮包衣液［13-14］。按2.1.3要求，制備卡托普利微孔膜包衣片，以釋放度為指標(biāo)考察成膜材料種類，處方見表4。結(jié)果處方7在12h內(nèi)累積釋放度為65.19%，處方8不足40%，釋放緩慢，故選擇乙基纖維素乙醇包衣液為成膜材料，釋放度結(jié)果見圖2。

圖2 不同包衣液成膜材料卡托普利微孔膜包衣片累計(jì)釋放曲線

表4 成膜材料的篩選處方

2.4.4 致孔劑種類的篩選

致孔劑的常用類型有PEG 類、PVP、PVA、十二烷基硫酸鈉、糖和鹽等水溶性物質(zhì)。本實(shí)驗(yàn)考察以PEG6000和PEG4000為致孔劑。在其他處方量不變的條件下分別配制PEG6000、PEG4000 的乙基纖維素乙醇包衣液，按2.1.3 要求制備卡托普利微孔膜包衣片，以釋放度為指標(biāo)考察致孔劑種類，處方見表5。結(jié)果PEG6000 作為致孔劑時(shí)，12h 內(nèi)累計(jì)釋放百分比為57.67%；而PE4000 作為致孔劑，12h 內(nèi)累計(jì)釋放百分比為39.32%，釋放較少。故選擇PEG-6000 作為致孔劑，釋放度結(jié)果見圖3。

表5 致孔劑種類篩選的處方

圖3 不同致孔劑卡托普利微孔膜包衣片累計(jì)釋放曲線

2.4.5 致孔劑用量的篩選

選用PEG6000 為致孔劑，在其他處方量不變的條件下，分別配制相當(dāng)于乙基纖維素重量的8%、16%、24%、32%的PEG6000乙基纖維素乙醇包衣液，按2.1.3要求制備卡托普利微孔膜包衣片，以釋放度為指標(biāo)考察致孔劑用量，處方見表6。結(jié)果包衣液中隨PEG6000用量的增加，釋藥速率逐漸加快。當(dāng)PEG6000 的用量為8%時(shí)，12h 的累計(jì)釋放度為57.75%；PEG6000 的用量為16%時(shí)，12h的累計(jì)釋放度為78.91%；當(dāng)PEG6000的用量為24%時(shí)，12h 的累計(jì)釋放度為81.70%；當(dāng)PEG6000 的用量為32%時(shí)，4h 累計(jì)釋放度已達(dá)到88.63%，之后便出現(xiàn)脫殼現(xiàn)象。故選擇相當(dāng)于乙基纖維素重量為24%的PEG6000作為致孔劑的最佳用量，釋放度結(jié)果見圖4。

圖4 不同用量的P E G 6000 制得的卡托普利微孔膜包衣片累計(jì)釋放曲線

表6 致孔劑用量篩選的處方

2.4.6 包衣增重的篩選

在包衣片中，衣膜的厚度主要以包衣增重率來表示，計(jì)算增重的公式如下：

式中，W1為包衣前的片重，W2為包衣后片重。

在其他處方量不變的條件下，按2.1.3中制備包衣增重分別為4%、5%、6%的卡托普利微孔膜包衣片，以釋放度作為指標(biāo)進(jìn)行包衣增重的考察，結(jié)果見圖5。隨著包衣增重的不斷增加，釋藥速率不斷減慢。其中4%包衣增重12h 內(nèi)累計(jì)釋放度為80.88%；5%包衣增重12h 內(nèi)累計(jì)釋放度為78.02%；6%包衣增重12h 內(nèi)累計(jì)釋放度僅為40.74%。綜上選擇包衣增重為4%。

圖5 不同包衣增重制得的卡托普利微孔膜包衣片累計(jì)釋放曲線

2.5 處方的確定及釋放度測(cè)定

綜上，片芯處方為：卡托普利3.75g，可壓性淀粉7g，乳糖3g，5%淀粉漿適量，硬脂酸鎂適量，制備片芯100 片。包衣液處方：乙基纖維素10g，PEG60002.4g，乙醇200mL。包衣增重為4%。

按最佳處方以制備三批次卡托普利微孔膜包衣片，對(duì)所制備的三批樣品的外觀及釋放度進(jìn)行考察，考察批間重現(xiàn)性。制得卡托普利微孔膜包衣片均為粉紅色片劑，片面光滑，色澤一致。體外釋放度批間重現(xiàn)性良好，釋放度結(jié)果見圖6。

圖6 三批卡托普利微孔膜包衣片釋放度結(jié)果

3 討論

本文建立卡托普微孔膜包衣片測(cè)定體外釋放度的HPLC 分析方法。依據(jù)文獻(xiàn)，以甲醇—四氫呋喃—0.1%磷酸溶液（30∶0.15∶70，pH=2.6～2.8）為流動(dòng)相時(shí)，考慮四氫呋喃的毒性問題，故選用磷酸二氫鈉溶液—甲醇—乙腈作為流動(dòng)相。通過對(duì)分離度考察發(fā)現(xiàn)，以磷酸二氫鈉溶液—甲醇—乙腈（75∶25∶10）時(shí)，二硫化物與卡托普利分離不達(dá)標(biāo)。當(dāng)比例為60∶35∶5 時(shí)，分離度符合要求。

在成膜材料的選擇上，由于醋酸纖維素溶于丙酮，考慮丙酮具有毒性，嘗試改為其他有機(jī)溶劑，但并未獲得理想的溶解效果。經(jīng)預(yù)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)以乙基纖維素作為成膜材料不僅具有較好的成膜性能，且12h 內(nèi)釋放度理想，故選用乙基纖維素乙醇溶液作為成膜材料。