宋文靜 宋瓊莉 陳小連 劉林秀 譚 佳 鄒志恒* 魏立民 熊平文 張 艷 孫瑞萍

(1.江西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，南昌 330200；2.海南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，海口 571100；3.海南省熱帶動(dòng)物繁育與疫病研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，海口 570203)

我國南方夏季濕熱，環(huán)境溫控設(shè)備降溫除濕效果有限，積極采用飼養(yǎng)管理和營養(yǎng)調(diào)控手段緩解家禽熱應(yīng)激、提高家禽養(yǎng)殖效益是當(dāng)前研究方向和熱點(diǎn)之一。山香圓屬植物來源于省沽油科，作為民間用藥歷史悠久，被收錄入2015年版《中國藥典》，山香圓葉為山香圓屬植物的主要藥用部位，其主要化學(xué)成分為黃酮類、酚酸類和多糖類，其性寒味苦，具有抗菌、消炎、鎮(zhèn)痛、抗氧化、增強(qiáng)免疫等藥理活性，能夠清熱解毒、利咽消腫、活血止痛，臨床上被用于咽喉炎、扁桃體炎、扁桃體膿腫、上呼吸道感染、氣管炎等治療系統(tǒng)[1-4]。研究表明，山香圓能夠提高小鼠的應(yīng)激適應(yīng)性(提高體表痛閾，抑制毛細(xì)血管通透性)，從而緩解人為應(yīng)激模型下小鼠的疼痛反應(yīng)和充血腫脹[5]。其有效成分山香圓葉黃酮等能夠調(diào)節(jié)小鼠的血清炎癥因子含量，緩解小鼠的炎癥反應(yīng)[6-7]，能夠調(diào)節(jié)T細(xì)胞亞群的比例，提高血清免疫球蛋白G(IgG)含量，從而提高小鼠的體液免疫功能[8]。此外，山香圓屬植物的抑菌效果非常顯著，可以有效降低小鼠腹腔感染金黃色葡萄球菌后的死亡率[9]。山香圓葉提取物(Turpiniaefoliumextract ,TFE)是將干燥山香圓葉提取純化后的產(chǎn)物，其活性成分含量高，添加劑量小[10-11]，藥用效果確切，但未見其在家禽生產(chǎn)，尤其是緩解家禽熱應(yīng)激方面的應(yīng)用研究。TFE作為潛在的抗應(yīng)激產(chǎn)品，在緩解文昌雞熱應(yīng)激上具有一定的研究價(jià)值和意義。因此，本試驗(yàn)旨在研究飼糧中添加TFE對夏季濕熱條件下文昌雞生長性能、屠宰性能、血清抗氧化和免疫功能、腸道組織形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)和腸道微生態(tài)的影響，為TFE在夏季文昌雞生產(chǎn)上的應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

山香圓葉采自江西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院高安基地，經(jīng)干燥粉碎后過80目篩，采用乙醇進(jìn)行提取(料液比為1∶50，提取時(shí)間為1.5 h，提取溫度為70 ℃)，濃縮，噴霧干燥(由西安某生物工程有限公司代提取加工)獲得淡黃褐色粉狀TFE，提取物含總黃酮119.75 mg/g，總多糖10.15 g/100 g，多酚100.90 mg/g。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與試驗(yàn)飼糧

選取同一飼養(yǎng)條件下飼養(yǎng)至84日齡的健康、體重接近的文昌雞母雞240羽，隨機(jī)分為4組，分別飼喂在基礎(chǔ)飼糧中添加0(對照)、0.02%、0.04%、0.08% TFE的飼糧，每組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10羽?；A(chǔ)飼糧參考《文昌雞飼養(yǎng)管理技術(shù)規(guī)程》(DB46/T 44—2011)[12]配制，其組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

1.3 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)在江西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所試驗(yàn)雞場進(jìn)行，開始于2021年7月2日，結(jié)束于2021年8月6日。試驗(yàn)雞采用網(wǎng)上分欄籠養(yǎng)，自由采食和飲水。雞舍自然通風(fēng)，試驗(yàn)雞嚴(yán)格按常規(guī)管理程序管理和正常免疫程序進(jìn)行免疫接種。每日記錄舍內(nèi)不同的4個(gè)位置(門口、舍內(nèi)、風(fēng)機(jī)、濕簾)的最低和最高溫度、濕度，記錄死亡雞只個(gè)數(shù)。試驗(yàn)期為35 d，試驗(yàn)期間雞舍溫度最高為38 ℃，相對濕度最高為94%，溫濕指數(shù)最高為90.12。試驗(yàn)期雞舍平均溫度為30.42 ℃、平均相對濕度為77.37%、平均溫濕指數(shù)為83.10。試驗(yàn)期間溫濕指數(shù)始終大于80，因此文昌雞均處于熱應(yīng)激狀態(tài)。試驗(yàn)期間雞舍溫度、濕度情況見圖1。

圖1 試驗(yàn)期間雞舍內(nèi)溫度和濕度

1.4 檢測指標(biāo)與方法

1.4.1 生長性能指標(biāo)

試驗(yàn)期間，每周以重復(fù)為單位記錄喂料量和剩料量。試驗(yàn)開始和結(jié)束時(shí)，文昌雞禁食12 h后進(jìn)行稱重，以此計(jì)算試驗(yàn)雞的平均日采食量(ADFI)、平均日增重(ADG)和料重比(F/G)。

1.4.2 血清生化指標(biāo)

試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，雞只禁食12 h，各重復(fù)挑選健康、體重接近平均體重的文昌雞2羽，翅靜脈采集5 mL血樣，3 000 r/min離心15 min制備血清，-20 ℃保存待測。

血清抗氧化指標(biāo)：血清中谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性，總抗氧化能力(T-AOC)和丙二醛(MDA)含量采用南京建成生物研究所的試劑盒測定，所用儀器為華衛(wèi)德朗DR-200BS酶標(biāo)儀(無錫華衛(wèi)德朗儀器有限公司)。

血清免疫指標(biāo)：血清免疫球蛋白A(IgA)、IgG、免疫球蛋白M(IgM)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)、白細(xì)胞介素-10(IL-10)、白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)含量采用南京建成生物研究所試劑盒測定，所用儀器為邁瑞B(yǎng)S-420全自動(dòng)生化分析儀(深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司)。血清熱應(yīng)激蛋白70(HSP70)和胰島素(INS)含量采用北京華英生物技術(shù)研究所試劑盒測定，所用儀器為華衛(wèi)德朗DR-200BS酶標(biāo)儀(無錫華衛(wèi)德朗儀器有限公司)。

其他血清生化指標(biāo)：血清中總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、葡萄糖(GLU)含量采用比色法進(jìn)行檢測，試驗(yàn)盒購自中生北控股份有限公司，所用儀器為邁瑞B(yǎng)S-420全自動(dòng)生化分析儀(深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司)。

1.4.3 屠宰性能指標(biāo)

屠宰前試驗(yàn)雞禁食12 h，只供飲水，從各重復(fù)隨機(jī)選取2只生長發(fā)育正常、體況健康、接近平均體重的試驗(yàn)雞進(jìn)行屠宰，宰前稱活重后放血，浸燙脫毛，洗凈瀝干，參照《家禽生產(chǎn)性能名詞術(shù)語和度量統(tǒng)計(jì)方法》(NY/T 823—2020)[13]計(jì)算屠體率、半凈膛率、全凈膛率、胸肌率、腿肌率、腹脂率。剝離肌胃、腺胃、心臟、脾臟、肺等器官，用濾紙吸去血液，剝離脂肪稱重，用1 mg靈敏度的電子稱重并計(jì)算器官指數(shù)。

器官指數(shù)(%)=100×器官重/宰前空腹體重。

1.4.4 腸道組織形態(tài)學(xué)指標(biāo)

試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，每重復(fù)選擇2只文昌雞屠宰，剖開腹部，分離出腸道，迅速截取3 cm左右空腸腸段用生理鹽水把腸道內(nèi)容物沖洗干凈，放到4%甲醛溶液中固定，經(jīng)過沖水、梯度酒精脫水、二甲苯透明、石蠟包埋等處理后，以5 μm的厚度切片，常規(guī)蘇木精-伊紅(HE)染色。用光學(xué)顯微鏡(Nikon Eclipse CI，Nikon公司)觀察絨毛形態(tài)，使用Image-pro plus 6.0軟件(Media Cybernetics公司)測量絨毛高度(VH)和隱窩深度(CD)，并計(jì)算絨毛高度與隱窩深度比值(VH/CD)。

1.4.5 腸道微生物區(qū)系

試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，每重復(fù)選擇2只文昌雞屠宰，剖開腹部，分離出腸道，用滅菌細(xì)線將盲腸結(jié)扎，確保腸道內(nèi)容物充足，剪下結(jié)扎的盲腸段，立即將內(nèi)容物轉(zhuǎn)入2 mL滅菌凍存管中，置于-80 ℃冰箱保存，待測。根據(jù)TruSeq?DNA PCR-Free Sample Preparation Kit(Illumina公司, 美國)試劑盒構(gòu)建文庫，用特異性引物(338F/806R)擴(kuò)增16S rDNA的V3～V4區(qū)。引物序列338F:5’-ACTCCTACGGGAGGCAGCAG-3’；806R:5’-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3’。文庫的質(zhì)量通過Qubit@ 2.0熒光計(jì)(Thermo Scientific)和安捷倫生物分析儀2100系統(tǒng)進(jìn)行評估。在Illumina NovaSeq平臺(tái)上對文庫進(jìn)行測序，得到250 bp的配對末端序列。建庫和測序工作由北京諾禾致源生物信息科技有限公司完成。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

用Excel 2013對數(shù)據(jù)進(jìn)行預(yù)處理，采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件對試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析和Duncan氏多重比較。以P<0.05作為差異顯著的判斷標(biāo)準(zhǔn)，以0.05≤P<0.10作為有顯著趨勢的判斷標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果以平均值(mean)和均值標(biāo)準(zhǔn)誤(SEM)表示。

2 結(jié) 果

2.1 TFE對文昌雞生長性能的影響

由表2可知，各組文昌雞初始體重?zé)o顯著差異(P>0.05)，經(jīng)過35 d的飼養(yǎng)試驗(yàn)，各組終末體重、ADFI無顯著差異(P>0.05)。與對照組相比，試驗(yàn)組F/G呈下降趨勢(0.05≤P<0.10)。TFE添加組ADG顯著高于對照組(P<0.05)，且隨著飼糧TFE添加水平的增加，呈顯著線性(P=0.004)和二次曲線(P=0.001)變化。

表2 TFE對文昌雞生長性能的影響

2.2 TFE對文昌雞血清代謝指標(biāo)的影響

由表3可知，與對照組相比，試驗(yàn)組血清TP含量呈上升趨勢(0.05≤P<0.10)。與對照組相比，飼糧添加0.04%和0.08%的TFE顯著降低了血清GLU含量(P<0.05)，且GLU含量與飼糧TFE添加水平呈線性(P=0.027)和二次曲線(P=0.014)相關(guān)。各組間血清ALB、GLB、TC、TG含量均無顯著差異(P>0.05)。

表3 TFE對文昌雞血清代謝指標(biāo)的影響

2.3 TFE對文昌雞血清免疫指標(biāo)的影響

由表4可知，隨著飼糧TFE添加水平的增加，血清IgA、IgG含量呈顯著線性(P=0.001,P=0.001)和二次曲線(P=0.006,P=0.001)變化。與對照組相比，試驗(yàn)組血清IgM含量呈升高趨勢(0.05≤P<0.10)。與對照組相比，飼糧添加0.04%和0.08%的TFE顯著提高了血清IgA、IgG含量(P<0.05)。

表4 TFE對文昌雞血清免疫指標(biāo)的影響

2.4 TFE對文昌雞血清炎癥因子含量的影響

由表5可知，隨著飼糧TFE添加水平的增加，血清IL-10含量呈顯著線性(P=0.002)和二次曲線(P=0.006)變化，血清IL-1β、IL-6和TNF-α含量呈顯著線性(P=0.004,P=0.005,P=0.011)和二次曲線(P=0.009,P=0.005,P=0.016)變化。與對照組相比，不同添加水平的TFE均顯著降低了血清IL-6含量(P<0.05)，0.04%和0.08%的TFE顯著提高了血清IL-10含量(P<0.05)，顯著降低了血清IL-1β、TNF-α含量(P<0.05)。

表5 TFE對文昌雞血清炎癥因子含量的影響

2.5 TFE對文昌雞血清抗氧化指標(biāo)的影響

由表6可知，隨著飼糧TFE添加水平的增加，血清T-AOC、SOD和GSH-Px活性呈顯著線性(P=0.006,P=0.015,P=0.010)和二次曲線(P=0.009,P=0.028,P=0.015)變化，血清MDA含量呈顯著線性(P=0.007)和二次曲線(P=0.010)變化。與對照組相比，飼糧添加0.04%和0.08%顯著提高血清T-AOC、SOD和GSH-Px活性(P<0.05)，顯著降低血清MDA含量(P<0.05)。

表6 TFE對文昌雞血清抗氧化指標(biāo)的影響

2.6 TFE對文昌雞血清熱應(yīng)激蛋白和胰島素含量的影響

由表7可知，隨著飼糧額TFE添加水平增加，血清HSP70含量呈顯著線性(P=0.009)和二次曲線(P=0.021)變化，血清INS含量呈線性上升趨勢(0.05≤P<0.10)。與對照組相比，飼糧添加0.04%和0.08%的TFE顯著降低血清HSP70含量(P<0.05)。

表7 TFE對文昌雞血清熱應(yīng)激蛋白和胰島素含量的影響

2.7 TFE對文昌雞屠宰性能的影響

由表8可知，各組間屠宰率、全凈膛率、半凈膛率、腹脂率、腿肌率、肌胃指數(shù)、腺胃指數(shù)、心臟指數(shù)、肝臟指數(shù)和肺指數(shù)無顯著差異(P>0.05)。不同添加水平的TFE均顯著提高了脾臟指數(shù)(P<0.05)，且隨飼糧TFE添加水平的增長，呈顯著二次曲線變化(P=0.043)。

表8 TFE對文昌雞屠宰性能的影響

2.8 TFE對文昌雞空腸組織形態(tài)的影響

由表9可知，隨著飼糧TFE添加水平的增加，空腸VH和VH/CD呈顯著線性(P=0.013,P=0.009)和二次曲線(P=0.015,P=0.010)變化。0.04%和0.08% TFE添加組空腸VH和VH/CD顯著高于對照組(P<0.05)。飼糧添加TFE對空腸CD無顯著影響(P>0.05)。

表9 TFE對文昌雞空腸組織形態(tài)的影響

2.9 TFE對文昌雞腸道微生態(tài)的影響

由表10可知，在門水平上，盲腸內(nèi)容物中微生物主要是擬桿菌門和厚壁菌門，占90%左右。隨著飼糧TFE添加水平的增加，盲腸變形菌門相對豐度呈顯著線性(P=0.016)和二次曲線(P=0.011)變化。與對照組相比，0.04%和0.08% TFE組的盲腸梭桿菌門相對豐度顯著下降(P<0.05)，飼糧添加0.08% TFE顯著提高了盲腸厚壁菌門相對豐度(P<0.05)。各組間盲腸中其他菌門相對豐度無顯著差異(P>0.05)。

表10 TFE對文昌雞盲腸菌群在門水平上的相對豐度的影響

由表11可知，盲腸內(nèi)容物菌群中主要菌屬為擬桿菌屬和理研菌科RC9腸道群，占盲腸內(nèi)容物屬水平相對豐度的50%左右，表中列出的為相對豐度較高的10個(gè)菌屬。與對照組相比，飼糧添加0.04%和0.08% TFE顯著降低了盲腸內(nèi)容物中普雷沃氏菌科_UCG-001的相對豐度(P<0.05)，0.08% TFE組盲腸乳酸菌屬相對豐度顯著高于其他各組(P<0.05)，試驗(yàn)組雙歧桿菌屬相對豐度呈增加趨勢(0.05≤P<0.10)。各組間盲腸中其他菌屬相對豐度無顯著差異(P>0.05)。

表11 TFE對文昌雞盲腸菌群在屬水平上相對豐度的影響

2.10 TFE在文昌雞飼糧中的最適添加水平

以TFE的添加水平為自變量X(0.00≤X≤0.80)，以ANOVA有顯著的指標(biāo)為因變量Y，進(jìn)行二次回歸分析，并計(jì)算TFE最適添加水平，結(jié)果如表12所示。選取上述指標(biāo)的最適添加水平的平均值0.067%作為84～119日齡夏季文昌雞飼糧中TFE的最適添加水平。

表12 基于回歸模型參數(shù)的胰島素最適添加水平

3 討 論

3.1 TFE對文昌雞生長和代謝的影響

文昌雞為中國海南省地方家禽品種，其體型短小，單位體重體表面積相對較大，加之海南省熱帶季風(fēng)島嶼氣候條件，使文昌雞對炎熱的適應(yīng)性和高溫耐受力較強(qiáng)[14]。整個(gè)試驗(yàn)期舍內(nèi)平均溫度在30 ℃以上，溫濕指數(shù)在80以上，文昌雞處于慢性熱應(yīng)激狀態(tài)。在熱應(yīng)激暴露過程中，家禽會(huì)改變行為(飲水和張口呼吸增加，采食和運(yùn)動(dòng)減少)和生理穩(wěn)態(tài)(如通過體液和神經(jīng)調(diào)節(jié)作用來抑制胰島素的分泌)來減少熱增耗和代謝產(chǎn)熱量，采食量減少導(dǎo)致生長所需營養(yǎng)物質(zhì)攝入不足，家禽需要消耗自身存儲(chǔ)的體脂、體蛋白質(zhì)等，增重隨之下降，飼料利用率降低[15]，INS含量的減少使機(jī)體血糖保持較高的水平，這些都是機(jī)體將能量由生長轉(zhuǎn)移用于生存，為適應(yīng)熱應(yīng)激而減少產(chǎn)熱的表現(xiàn)形式[16-17]。同時(shí)，熱應(yīng)激會(huì)降低雞腸道消化酶的活性，擾亂腸道微生態(tài)，導(dǎo)致肉雞消化和吸收功能下降，生長性能下降[18]。TFE中的活性成分黃酮、多糖、酚類等被證實(shí)具有提高動(dòng)物耐熱、生長和生產(chǎn)性能的效果[19-20]，本試驗(yàn)結(jié)果表明，TFE對ADFI無顯著影響，但能夠顯著提高文昌雞的ADG，與前人研究發(fā)現(xiàn)植物提取物能夠改善熱應(yīng)激引起的生長性能下降、提高熱應(yīng)激肉雞的試驗(yàn)?zāi)┲睾驮鲋氐慕Y(jié)果[21-22]基本一致，說明TFE對濕熱條件下文昌雞生長性能的改善不是通過增加攝入而是通過減少消耗、增加營養(yǎng)物質(zhì)沉積實(shí)現(xiàn)的。隨著飼糧AFE添加水平的增加，文昌雞血清TP含量呈增加趨勢，血清GLU含量顯著降低，血清INS含量升高。血清TP含量可以反映機(jī)體蛋白質(zhì)的吸收狀況，INS是蛋白質(zhì)、碳水化合物和脂肪代謝的關(guān)鍵激素，能刺激氨基酸和蛋白質(zhì)的合成，減少脂肪細(xì)胞的脂肪分解，增加脂肪酸的同化，增加GLU的利用[23]。這說明TFE能夠在一定程度上促進(jìn)蛋白質(zhì)沉積，減少脂肪分解，并通過調(diào)節(jié)血清INS含量降低糖異生途徑強(qiáng)度，減少能量消耗[24]，TFE對INS的調(diào)節(jié)機(jī)制尚不明確，有待進(jìn)一步研究。作為應(yīng)激反應(yīng)的一個(gè)標(biāo)志性元素，HSP70在熱應(yīng)激動(dòng)物體內(nèi)表達(dá)被激活，并大量釋放在血液中[25]。本試驗(yàn)條件下，TFE能夠顯著降低文昌雞血清HSP70含量，說明TFE能夠有效緩解文昌雞在濕熱條件下的應(yīng)激反應(yīng)，可能原因是TFE提高了文昌雞的耐熱性能。

在本試驗(yàn)中，TFE對文昌雞濕熱條件下生長性能的改善效果以及TFE對文昌雞血清免疫、抗氧化指標(biāo)和腸道微生物的影響均呈現(xiàn)線性和二次相關(guān)關(guān)系，并且以0.04%和0.08%添加水平效果更優(yōu)，說明TFE主要是通過提高文昌雞免疫功能，降低文昌雞氧化應(yīng)激，調(diào)節(jié)腸道菌群來保持文昌雞在濕熱條件下的健康狀態(tài)，從而促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)吸收和沉積。本實(shí)驗(yàn)室前期研究結(jié)果提示，在舍溫適宜條件下，0.03%～0.06% TFE可以顯著降低文昌雞F/G，而本試驗(yàn)條件下0.08% TFE在一定程度上降低F/G，與對照組無顯著差異，可見TFE在濕熱條件下發(fā)揮促生長效果需要的添加水平更高。

3.2 TFE對文昌雞血清免疫、抗氧化功能的影響

熱應(yīng)激能影響家禽的免疫器官和細(xì)胞因子，對家禽的體液免疫、細(xì)胞免疫和腸道免疫等免疫系統(tǒng)產(chǎn)生負(fù)面影響[26]。IgA、IgG和IgM是反映機(jī)體免疫應(yīng)答的重要指標(biāo)，其中以IgG在血清中含量最多，是機(jī)體主要的抗體，IgA在血清中含量僅次于IgG，IgM是體液免疫反應(yīng)中最早產(chǎn)生的免疫球蛋白，其含量較少，主要由脾臟和B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生[27]。家禽脾臟分布著大量的淋巴細(xì)胞及淋巴小體，是最大的淋巴器官和重要的外周免疫器官[28]。免疫器官指數(shù)是反映機(jī)體免疫狀況的重要參數(shù)，一般認(rèn)為免疫器官指數(shù)升高能夠增強(qiáng)免疫力，相反若是受免疫抑制如熱應(yīng)激等的影響，免疫器官指數(shù)則降低。本試驗(yàn)條件下，TFE顯著提高了血清IgA和IgG含量，與張磊等[8]研究的山香圓黃酮可以提高免疫低下小鼠血清IgG含量的結(jié)果基本一致，可見，TFE中的黃酮是發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)功能的主要活性成分。Lei等[29]研究表明，山香圓葉能夠促進(jìn)脾細(xì)胞增殖，從而提高動(dòng)物脾臟指數(shù)。本試驗(yàn)中文昌雞脾臟指數(shù)隨著飼糧中TFE添加水平的增加而增大，與呂夢云[30]研究結(jié)果基本一致。隨著飼糧TFE添加水平的增加，血清IgM含量呈增加趨勢，說明TFE在增加脾臟指數(shù)的同時(shí)也促進(jìn)了脾臟的分泌功能。本試驗(yàn)結(jié)果提示，TFE可通過提高血清免疫球蛋白含量和免疫器官指數(shù)改善濕熱條件下文昌雞免疫功能。

熱應(yīng)激情況下，氧自由基會(huì)攻擊腸絨毛和組織黏膜，誘發(fā)腸道和組織炎癥[31]。文昌雞為了散熱會(huì)加快呼吸頻率，容易引起呼吸道疾病(呼吸堿中毒)等，炎癥和疾病會(huì)引起機(jī)體免疫力進(jìn)一步下降，誘發(fā)機(jī)體釋放各種炎癥介質(zhì)，產(chǎn)生炎癥反應(yīng)。促炎癥細(xì)胞因子如IL-1β、IL-6和TNF-α是先天免疫應(yīng)答后引起代謝級聯(lián)改變的主要因子，在多種炎癥反應(yīng)中發(fā)揮重要作用，并與炎癥的嚴(yán)重程度密切相關(guān)，IL-10是一種細(xì)胞因子合成抑制因子，可下調(diào)炎癥反應(yīng)強(qiáng)度[32]。在本試驗(yàn)中，隨著飼糧添加TFE水平的增加，血清促炎因子IL-1β、IL-6和TNF-α含量降低，抗炎因子水平IL-10含量增加，與陳世華等[6]的研究結(jié)果基本一致。這說明TFE調(diào)節(jié)機(jī)體發(fā)生了反饋性的炎癥因子改變，減少了促炎因子分泌，提高了抗炎因子水平，緩解了濕熱環(huán)境對文昌雞機(jī)體造成的炎癥損傷。

熱應(yīng)激會(huì)引起畜禽代謝增強(qiáng)，破壞自由基平衡，導(dǎo)致活性氧的過量積累和細(xì)胞氧化損傷[33]，抑制線粒體呼吸鏈活動(dòng)，導(dǎo)致抗氧化酶體系活性降低，MDA大量生成[34]。體內(nèi)的抗氧化酶系統(tǒng)(T-AOC、SOD、GSH-Px)等可清除自由基，減少過氧化產(chǎn)物生成[35]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，TFE提高了文昌雞血清T-AOC、SOD、GSH-Px活性，降低了脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA含量，表明TFE能夠增強(qiáng)機(jī)體抗氧化酶系統(tǒng)活性，抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，有利于維持氧化還原平衡，緩解文昌雞在濕熱條件下的組織氧化應(yīng)激。黃酮、多酚等是一種天然的抗氧化劑，其苯環(huán)上的羥基能夠清除氧自由基，TFE的抗氧化效果可能得益于其豐富的黃酮和多酚含量[36]。

3.3 TFE對文昌雞屠宰性能的影響

屠宰性能的主要影響因素是動(dòng)物的品種和飼糧營養(yǎng)組成[37]。本試驗(yàn)中TFE添加水平與血清TG含量有一定線性關(guān)系，并且在一定程度上降低了文昌雞的腹脂率，但均無顯著差異，與周萍芳[38]報(bào)道的苜蓿黃酮提取物對麻雞的腹脂率有降低作用和呂夢云等[30]報(bào)道的葛藤黃酮提取物可降低肉雞的腹脂率結(jié)果不一致，可能是不同植物提取物總黃酮組成和含量不同以及禽品種和飼養(yǎng)周期不同的原因。

3.4 TFE對文昌雞腸道組織形態(tài)和菌群的影響

小腸上皮細(xì)胞隱窩和絨毛組成常用于反映腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)完整性及功能強(qiáng)弱。腸道極易受熱應(yīng)激影響，產(chǎn)生大量自由基并通過脂質(zhì)過氧化作用損害腸道上皮細(xì)胞，使腸道絨毛萎縮，VH降低，CD增加，VH/CD降低[39]，影響營養(yǎng)物質(zhì)的消化和吸收，導(dǎo)致生長性能下降。本試驗(yàn)中，TFE可增加文昌雞抗氧化酶系統(tǒng)活性，緩解腸道局部氧化應(yīng)激引起的腸道損傷，從而增加腸道VH和VH/CD，有利于維持腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)的完整性，促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)吸收，提高文昌雞生長性能。

腸道微生態(tài)平衡對于維持文昌雞腸道黏膜形態(tài)和正常生理功能具有重要意義。熱應(yīng)激會(huì)影響文昌雞腸道菌群結(jié)構(gòu)，降低文昌雞腸道內(nèi)乳酸桿菌和雙歧桿菌的數(shù)量，提高大腸桿菌和梭桿菌的數(shù)量[40]。盲腸是微生物定植幾率最高的腸道部位[25]，因此本試驗(yàn)研究了TFE對文昌雞盲腸微生物的影響，結(jié)果表明，文昌雞盲腸微生物結(jié)構(gòu)在門水平上主要以擬桿菌門、厚壁菌門、變形菌門、互養(yǎng)菌門為主，相對豐度占90%以上，為絕對優(yōu)勢菌群。TFE提高了文昌雞盲腸厚壁菌門、乳酸菌屬的相對豐度，雙歧桿菌屬相對豐度隨著飼糧TFE添加水平的增加呈上升趨勢。厚壁菌門發(fā)酵能力較強(qiáng)，可以促進(jìn)機(jī)體脂肪的沉積，能夠發(fā)酵產(chǎn)生短鏈脂肪酸用，于維持機(jī)體腸道健康[41-42]。乳酸菌屬和雙歧桿菌屬是動(dòng)物腸道的有益菌屬，菌體內(nèi)含有大量的消化酶和SOD，能促進(jìn)機(jī)體營養(yǎng)物質(zhì)的消化，增強(qiáng)腸道宿主的抗氧化能力，同時(shí)參與多種維生素的合成、吸收和利用，發(fā)酵單糖或者雙糖產(chǎn)生乳酸和乙酸等降低腸道pH，通過生物拮抗作用調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)[43-45]，維持動(dòng)物機(jī)體健康和免疫調(diào)節(jié)功能。TFE降低了變形菌門、梭桿菌門和普雷沃氏菌科_UCG-001相對豐度。變形菌門相對豐度與消化不良有一定關(guān)系[46]，梭桿菌門為條件性致病菌，可導(dǎo)致潰瘍性結(jié)腸炎，潰瘍性腸道中變形菌門和梭桿菌門相對豐度均處于較高水平[47]。普雷沃氏菌科_UCG-001為條件致病菌，與機(jī)體促炎功能有關(guān)，它的定植會(huì)導(dǎo)致微生物群代謝變化，使腸道通透性增加從而加劇腸道炎癥[48]。因此，本試驗(yàn)結(jié)果提示，TFE能夠通過促進(jìn)文昌雞腸道有益菌的增殖，抑制有害菌或條件治病菌生長來調(diào)節(jié)腸道微生物菌群，改善腸道形態(tài)，緩解濕熱環(huán)境導(dǎo)致的文昌雞腸道菌群失調(diào)。

4 結(jié) 論

① 飼糧中添加TFE能提高ADG，改善濕熱條件下文昌雞生長性能。

② 飼糧中添加TFE有助于提高濕熱條件下文昌雞免疫和抗氧化功能，緩解機(jī)體炎癥反應(yīng)。

③ 飼糧中添加TFE提高了文昌雞腸道VH和VH/CD，增加了腸道有益菌相對豐度，降低了有害菌和條件致病菌相對豐度，有利于維持腸道絨毛結(jié)構(gòu)完整性，調(diào)節(jié)腸道微生物菌群。

④ 在本試驗(yàn)條件下，文昌雞飼糧中TFE的最適添加水平為0.067%。