黃 娟，岳晶晶，馮 璇，王立增，褚蘭玲，解文靜，張佳靚，呂奕文

（1.常熟理工學(xué)院生物與食品工程學(xué)院，江蘇 常熟 215500；2.南京林業(yè)大學(xué)輕工與食品學(xué)院，江蘇 南京 210037；3.宏勝飲料集團(tuán)有限公司，浙江 杭州 311200）

二氫楊梅素廣泛存在于葡萄科、杜鵑科、楊梅科、大戟科、藤黃科及柳科等植物中，生理活性廣泛且安全性好，具有抗氧化、抗炎、抗腫瘤、解酒保肝、抗病原微生物及調(diào)血脂等多方面的藥理作用，并在減少動(dòng)脈粥樣硬化病變方面也有顯著效果。另外，二氫楊梅素可能具有預(yù)防斑塊破裂和隨后的血栓性閉塞的潛在作用。

然而，由于二氫楊梅素含有鄰三酚羥基結(jié)構(gòu)，分子穩(wěn)定性不高，在加工、運(yùn)輸及儲(chǔ)存過(guò)程中，易被氧化，穩(wěn)定性較差。pH值、溫度和金屬離子等變化均對(duì)其穩(wěn)定性有一定的負(fù)面影響。此外，二氫楊梅素在常溫和冷水中溶解度較低，導(dǎo)致其在消化過(guò)程中難以被人體吸收。由于其溶解性低、穩(wěn)定性差，二氫楊梅素通常在體內(nèi)的半衰期較短，代謝過(guò)快，導(dǎo)致其生物利用度低，難以在食品中得到有效利用。

自微乳是由藥物、助乳化劑、親水性乳化劑和油相組成的各向同性混合物，具有熱力學(xué)穩(wěn)定性，在胃腸蠕動(dòng)或環(huán)境溫度適宜的溫和攪拌下能自發(fā)形成透明或半透明水包油型分散體系。自微乳可以增加藥物的溶解度和溶出速率，避免受到酶的降解，增加在胃腸道的吸收，最終提高生物利用度。然而，自微乳雖有制備工藝簡(jiǎn)單、適合規(guī)模化生產(chǎn)的優(yōu)點(diǎn)，但由于液體制劑存在劑型較為單一、制劑難以隨身攜帶、活性成分與膠囊材料間易發(fā)生相互作用、成本相對(duì)較高、貯存過(guò)程中易出現(xiàn)結(jié)晶析出或分層現(xiàn)象等問(wèn)題，使其仍難以在實(shí)際生產(chǎn)中大量應(yīng)用。自微乳目前僅在藥物方面有相關(guān)報(bào)道，而在功能食品領(lǐng)域基本處于空白。因此，將液體自微乳固體化并應(yīng)用于功能食品中具有重大意義。

二氧化硅性質(zhì)穩(wěn)定，不與一般酸反應(yīng)，可用于食品領(lǐng)域，是較為理想的吸附材料。本實(shí)驗(yàn)創(chuàng)新地采用食品級(jí)原料制備二氫楊梅素自微乳，使用二氧化硅吸附，得到固體化的二氫楊梅素自微乳。同時(shí)對(duì)該固體自微乳進(jìn)行理化性質(zhì)、紅外光譜、X射線衍射、體外釋放和體外模擬消化的分析，以期改善二氫楊梅素穩(wěn)定性差、溶解度差的問(wèn)題，提高生物利用度，使其能夠廣泛應(yīng)用于食品工業(yè)中。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

二氫楊梅素（純度≥99%） 西安綠如泉生物科技有限公司；辛酸癸酸甘油三酯（octyl and decyl glycerate，ODO） 上海上德化工有限公司；吐溫60廣東潤(rùn)華化工有限公司；十聚甘油單油酸酯 濟(jì)南東潤(rùn)精化科技有限公司；聚甘油蓖麻醇酯 上海佑創(chuàng)實(shí)業(yè)有限公司；二氧化硅 鄭州佳味源實(shí)業(yè)有限公司；胃蛋白酶、胰酶、膽酸鹽 上海阿達(dá)瑪斯試劑有限公司；固體自微乳配方中的原料均為食品級(jí)，其他試劑均為分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

ME503T電子天平 梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司；HCJ-8D磁力攪拌水浴鍋 常州朗越儀器制造有限公司；HJ-6磁力攪拌器 常州市億能實(shí)驗(yàn)儀器廠；Centrifuge 5424高速離心機(jī) 德國(guó)Eppendorf公司；ZS90粒度儀 英國(guó)馬爾文儀器有限公司；a-1900PC紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì) 上海浦元儀器有限公司；Ultra Plus掃描電子顯微鏡（scanning electron microscope，SEM）德國(guó)Zeiss公司；Nicolet IS5傅里葉變換紅外光譜儀美國(guó)Thermo Scientific公司；D8-Discover X射線衍射儀德國(guó)Bruker公司。

1.3 方法

1.3.1 樣品的制備

1.3.1.1 液體自微乳的制備

稱取0.6 g二氫楊梅素，加入到39.4 g ODO中，置于磁力攪拌器上，200 r/min攪拌至二氫楊梅素完全溶解。向混合物中加入24 g吐溫60、24 g十聚甘油單油酸酯和12 g聚甘油蓖麻醇酯，置于磁力攪拌器上，200 r/min攪拌10 min，得到二氫楊梅素液體自微乳。

1.3.1.2 固體自微乳的制備

稱取適量二氫楊梅素液體自微乳，并加入一定量的二氧化硅粉末，攪拌混合均勻，得到二氫楊梅素固體自微乳。

1.3.1.3 待測(cè)樣品的制備

簡(jiǎn)單混合物：按1.3.1.1節(jié)和1.3.1.2節(jié)的配方量，分別按順序稱取二氫楊梅素、二氧化硅、ODO、吐溫60、十聚甘油單油酸酯和聚甘油蓖麻醇酯，攪拌混合均勻。

液體自微乳水分散液：稱取0.5 g液體自微乳加入到10 mL去離子水中，200 r/min下攪拌30 min即得。

固體自微乳水分散液：稱取0.5 g固體自微乳加入到10 mL去離子水中，200 r/min下攪拌30 min即得。

混懸液：稱取0.001 5 g二氫楊梅素和0.5 g羧甲基纖維素鈉，加入去離子水10 mL，3 000 r/min下攪拌2 h即得。

1.3.2 二氧化硅添加比例篩選

通過(guò)測(cè)定休止角、豪斯納比（Hausner ratio，HR）以及卡爾指數(shù)（Carr’s index，CI）評(píng)價(jià)不同質(zhì)量比的二氧化硅與二氫楊梅素液體自微乳（0.2、0.4、0.6和0.8）對(duì)固體自微乳粉末的流動(dòng)性及壓縮度的影響。

1.3.2.1 休止角測(cè)定

將漏斗固定在鐵架臺(tái)上，使其尖端在特定高度（）。將混勻的固體自微乳粉末倒入漏斗，待其形成的椎體粉末尖端與漏斗尖端剛好觸碰，記錄此時(shí)粉堆的半徑（），計(jì)算休止角：

1.3.2.2 豪斯納比和卡爾指數(shù)測(cè)定

取2 g的固體自微乳粉末（），置于20 mL量筒中，將粉末輕輕按壓至體積不再變化。記錄按壓前后的體積，分別記為和，計(jì)算HR：

固體自微乳粉末的堆密度（）計(jì)算如下：

固體自微乳粉末的振實(shí)密度（）的計(jì)算如下：

根據(jù)式（3）～（4），計(jì)算CI：

1.3.3 微觀結(jié)構(gòu)測(cè)定

將樣品置于雙面碳導(dǎo)電膠布上，并固定于干凈的載玻片上，加速電壓為20 kV，采用SEM，分別放大20 000 倍和50 000 倍后，觀察二氧化硅和固體自微乳整體及表面的微觀結(jié)構(gòu)。

1.3.4 X射線衍射測(cè)定

將二氫楊梅素、二氧化硅、簡(jiǎn)單混合物和固體自微乳樣品分別于X射線衍射儀進(jìn)行測(cè)試。測(cè)試條件：銅靶Kα射線源，電流40 mA，電壓40 kV，掃描范圍5°～60°，步長(zhǎng)0.02°，掃描速率10°/min。

1.3.5 傅里葉變換紅外光譜測(cè)定

分別對(duì)二氫楊梅素、二氧化硅、固體自微乳和簡(jiǎn)單混合物進(jìn)行紅外光譜分析。取少量樣品，與溴化鉀按照質(zhì)量比1∶100均勻混合，15 MPa條件下使用電動(dòng)壓片機(jī)壓片30 s。對(duì)壓片后得到的透明薄層樣品在4 000～400 cm范圍內(nèi)進(jìn)行紅外光譜掃描，分辨率為4 cm，測(cè)試過(guò)程中累計(jì)16 次掃描信號(hào)得到樣品紅外光譜圖。

1.3.6 二氫楊梅素含量測(cè)定

使用電子天平準(zhǔn)確稱取8 mg二氫楊梅素標(biāo)準(zhǔn)品，置于100 mL容量瓶中，用無(wú)水乙醇稀釋定容，得二氫楊梅素的母液。分別取0.25、0.5、0.75、1.0、1.25、1.5 mL母液，置于10 mL容量瓶中，用無(wú)水乙醇稀釋定容，得二氫楊梅素標(biāo)準(zhǔn)液。將不同質(zhì)量濃度的二氫楊梅素標(biāo)準(zhǔn)液于290 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，記錄數(shù)據(jù)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

取0.5 g液體自微乳樣品，置于50 mL容量瓶中，用無(wú)水乙醇稀釋定容。于290 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算樣品中二氫楊梅素含量。

取0.075 g固體自微乳樣品，置于25 mL容量瓶中，用無(wú)水乙醇稀釋定容。3 000 r/min離心10 min，取上清液于290 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算樣品中二氫楊梅素含量。

1.3.7 體外釋放

采用透析袋法（截留分子質(zhì)量為14 kDa）進(jìn)行體外釋放研究。為保證漏槽條件，釋放介質(zhì)為無(wú)水乙醇和pH 6.8的磷酸鹽緩沖液（30∶70，/）。將2 mg二氫楊梅素（）溶于5 mL無(wú)水乙醇中，得到二氫楊梅素乙醇溶液。將二氫楊梅素乙醇溶液、液體自微乳和固體自微乳裝入透析袋中，置于200 mL的釋放介質(zhì)中，100 r/min下攪拌，溫度37 ℃。釋放過(guò)程中分別于15、30、60、120、180、240、360、480、600 min取3 mL樣品用于分析檢測(cè)，同時(shí)補(bǔ)充等體積新鮮的釋放介質(zhì)。用紫外分光光度計(jì)于290 nm波長(zhǎng)處測(cè)定樣品的吸光度，對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算二氫楊梅素的質(zhì)量濃度（）。根據(jù)下式計(jì)算二氫楊梅素的累積釋放率，繪制二氫楊梅素的體外釋放曲線。

1.3.8 體外模擬胃消化

取8.33 mL 11.8 mol/L濃鹽酸加入去離子水中，得到1 L pH 1.2鹽酸溶液。分別準(zhǔn)確稱取2 mg的二氫楊梅素、液體自微乳和固體自微乳，加入12.5 mL pH 1.2鹽酸溶液中。隨后加入1.6 mL胃蛋白酶溶液（25 000 U/mL）和5 μL 0.3 mol/L氯化鈣溶液。最后使用1 mol/L鹽酸溶液將溶液的pH值調(diào)整為1.2，并加入pH 1.2鹽酸溶液，使胃消化液總體積為20 mL。置于37 ℃恒溫水浴鍋中，100 r/min孵育2 h后，得到胃消化階段待測(cè)樣品。

1.3.9 體外模擬小腸消化

向模擬胃消化后的溶液中加入依據(jù)藥典配制好的11 mL pH 6.8的磷酸鹽緩沖溶液中，再加入2.5 mL配制好的69 mg/mL膽酸鹽溶液和40 μL 0.3 mol/L氯化鈣溶液。使用1 mol/L氫氧化鈉溶液將樣品pH值調(diào)整為6.8，加入5 mL胰酶溶液（800 U/mL），置于37 ℃恒溫水浴鍋中，100 r/min孵育2 h。在孵育過(guò)程中不斷加入0.5 mol/L氫氧化鈉溶液，使樣品pH值保持在6.8。孵育結(jié)束后，用量筒測(cè)量腸消化液總體積。取少量腸消化液，3 000 r/min離心10 min，取上層液體作為腸消化階段待測(cè)樣品。

1.3.10 平均粒徑測(cè)定

分別取少量未經(jīng)消化的液體自微乳水分散液和固體自微乳水分散液、含液體自微乳和固體自微乳的胃消化液和腸消化液，采用動(dòng)態(tài)光散射技術(shù)分別測(cè)定其平均粒徑。為防止多重散射現(xiàn)象，測(cè)定前樣品需用去離子水稀釋100 倍。檢測(cè)波長(zhǎng)633 nm，溫度25 ℃，角度90。

1.3.11 生物可給率測(cè)定

分別取1 mL含二氫楊梅素、液體自微乳和固體自微乳的腸消化液，用無(wú)水乙醇稀釋后于紫外分光光度計(jì)290 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算二氫楊梅素的質(zhì)量濃度，按下式計(jì)算二氫楊梅素的生物可給率。

1.3.12 加速穩(wěn)定性考察

為了評(píng)估二氫楊梅素的化學(xué)穩(wěn)定性，將混懸液、液體自微乳水分散液、液體自微乳和固體自微乳置于帶蓋的樣品瓶中，于50 ℃恒溫箱中貯存12 d，在不同的時(shí)間間隔測(cè)定二氫楊梅素的保留率。

1.4 數(shù)據(jù)處理

2 結(jié)果與分析

2.1 不同二氧化硅添加比例的固體自微乳粉末流動(dòng)性及壓縮度分析

固體自微乳粉末的流動(dòng)性和壓縮度是決定生產(chǎn)過(guò)程能否順利進(jìn)行的關(guān)鍵因素。普遍認(rèn)為，粉末的休止角不超過(guò)30°，流動(dòng)性較好；CI＜21、HR＜1.25時(shí)，粉末的可壓縮性較小，可用于工業(yè)生產(chǎn)。如表1所示，二氧化硅與液體自微乳的質(zhì)量比≥0.6時(shí)，固體自微乳粉末的休止角＜30°，CI＜21，HR＜1.25，表明此比例的固體自微乳粉末具有較好的流動(dòng)性，較小的壓縮性，可用于工業(yè)化生產(chǎn)；隨著二氧化硅的添加量越多，固體自微乳的休止角、CI和HR越小，表明粉末的流動(dòng)性越好，可壓縮性越小。綜合經(jīng)濟(jì)成本，認(rèn)為二氧化硅和液體自微乳的質(zhì)量比為0.6時(shí)，不僅擁有較好的流動(dòng)相和可壓縮性，且較為經(jīng)濟(jì)、合理。

表1 不同比例二氧化硅制備的固體自微乳粉末的外觀、流動(dòng)性和壓縮度Table 1 Appearance, flowability and compressibility of solid selfemulsifying delivery system prepared with different silica contents

2.2 固體自微乳外觀及微觀結(jié)構(gòu)分析

如圖1所示，液體自微乳呈琥珀色，為油性液體，澄清無(wú)沉淀，具有較好的均一性；固體自微乳為白色酥松粉末；固體自微乳水分散液放置2 h后，外觀基本不變，穩(wěn)定性良好。

固體吸附材料的吸附能力通常與其微觀下的形貌特征有著密切的關(guān)系。如圖2所示，未吸附的二氧化硅的微觀形態(tài)類似球形顆粒，表面有類似絨毛的結(jié)構(gòu)與孔道結(jié)構(gòu)，為二氧化硅增加了比表面積，使其對(duì)材料（尤其是液體材料）的吸附能力更強(qiáng)，適合作為液體自微乳的吸附材料。在吸附液體自微乳后（圖3），二氧化硅顆粒表面的類絨毛結(jié)構(gòu)與孔道結(jié)構(gòu)消失，顆粒整體略微膨大，表面粗糙且不平整，這表明液體自微乳已被吸附在二氧化硅顆粒內(nèi)部的孔道之中，展現(xiàn)了其優(yōu)秀的吸附能力。

圖1 液體自微乳（A）、固體自微乳（B）、固體自微乳水分散液（C）的外觀Fig. 1 Appearance of liquid self-emulsifying delivery system (A) , solid self-emulsifying delivery system (B) , and aqueous dispersion formed by solid self-emulsifying delivery system (C)

圖2 20 000 倍（A）和50 000 倍（B）下二氧化硅的SEM圖Fig. 2 SEM images of silica particles at × 20 000 (A) and× 50 000 (B) magnification

圖3 20 000 倍（A）和50 000 倍（B）下固體自微乳的SEM圖Fig. 3 SEM images of solid self-emulsifying delivery system at× 20 000 (A) and × 50 000 (B) magnification

2.3 二氧化硅與不同二氫楊梅素樣品的X射線衍射分析

圖4 二氫楊梅素（A）、二氧化硅（B）、簡(jiǎn)單混合物（C）和固體自微乳（D）的X射線衍射圖譜Fig. 4 X-ray diffraction patterns of dihydromyricetin (A), silicon dioxide (B),simple mixture (C) and solid self-emulsifying delivery system (D)

如圖4A所示，二氫楊梅素的X射線衍射分析圖中有較多尖銳的特征峰，且多數(shù)尖銳峰集中在210°～30°間。與文獻(xiàn)對(duì)比發(fā)現(xiàn)，213.20°、16.56°、27.34°等處的特征峰為結(jié)晶態(tài)的二氫楊梅素，表明二氫楊梅素原料具有特定的晶型。由圖4C可知，二氫楊梅素與二氧化硅簡(jiǎn)單混合物的特征峰并不明顯但仍然存在，表明在簡(jiǎn)單混合物中同樣存在結(jié)晶態(tài)的二氫楊梅素，簡(jiǎn)單的物理混合并不會(huì)改變二氫楊梅素的晶型。而固體自微乳與二氧化硅的X射線衍射曲線相似（圖4D與4B），無(wú)法觀察到二氫楊梅素的尖銳特征峰，僅觀察到二氧化硅的吸收峰（221.8°），表明在固體自微乳中二氫楊梅素的晶型發(fā)生變化。二氫楊梅素溶解于液體自微乳的油脂中，主要以無(wú)定形或者溶解態(tài)存在。結(jié)晶態(tài)的物質(zhì)較難溶于水，同時(shí)難以被人體吸收，這也是二氫楊梅素難以應(yīng)用的原因之一。因此，將二氫楊梅素制成固體自微乳，使結(jié)晶態(tài)的二氫楊梅素以無(wú)定形或溶解態(tài)存在，便于人體吸收，得以在食品中應(yīng)用。

2.4 二氧化硅和不同二氫楊梅素樣品的紅外光譜分析

圖5 二氫楊梅素（A）、二氧化硅（B）、簡(jiǎn)單混合物（C）和固體自微乳（D）的紅外光譜Fig. 5 Fourier transform infrared spectra of dihydromyricetin (A) ,silicon dioxide (B) , simple mixture (C) and solid self-emulsifying delivery system (D)

通過(guò)紅外光譜分析考察固體自微乳的制備過(guò)程及輔料對(duì)二氫楊梅素化學(xué)性質(zhì)的影響。二氫楊梅素的紅外光譜中（圖5A），在1 638.02、3 345.14、3 504.12 cm處有特征吸收峰。根據(jù)文獻(xiàn)[24]，這3 個(gè)特征吸收峰對(duì)應(yīng)酚羥基、羰基的伸縮振動(dòng)，為二氫楊梅素保持活性的功能基團(tuán)。與圖5A相比，簡(jiǎn)單混合物與固體自微乳的紅外光譜中（圖5C、D）這3 個(gè)特征峰相對(duì)不明顯，但仍然存在，這與二氫楊梅素在固體自微乳中含量較少有關(guān)。對(duì)比固體自微乳與簡(jiǎn)單混合物的紅外光譜，發(fā)現(xiàn)二者的吸收峰幾乎一致，固體自微乳沒(méi)有新的吸收峰?？梢缘贸?，在固體自微乳的制備過(guò)程中，二氧化硅及其他成分未與二氫楊梅素發(fā)生額外反應(yīng)，沒(méi)有新的化學(xué)鍵生成，制備過(guò)程也未對(duì)二氫楊梅素的化學(xué)性質(zhì)產(chǎn)生影響，保持二氫楊梅素活性的功能基團(tuán)仍然存在。此外，二氧化硅的紅外光譜中（圖5B），在1 098.88、470.72 cm處有特征吸收峰，而簡(jiǎn)單混合物和固體自微乳的分析圖譜中都存在二氧化硅的特征吸收峰，證明二氧化硅也并未發(fā)生反應(yīng)，而是將其他成分物理吸附在自身的孔徑內(nèi)。

2.5 自微乳中二氫楊梅素的含量分析

二氫楊梅素的標(biāo)準(zhǔn)曲線為＝0.078 9－0.003 9，線性相關(guān)系數(shù)為0.999 1，二氫楊梅素在2～12 μg/mL質(zhì)量濃度范圍內(nèi)呈線性相關(guān)。

液體自微乳和固體自微乳中二氫楊梅素質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別（0.64±0.05）%和（0.30±0.03）%，測(cè)得的二氫楊梅素的含量皆趨近于理論值（液體自微乳和固體自微乳中二氫楊梅素理論值分別為0.6%和0.375%），表明二氫楊梅素未與其他成分進(jìn)行任何化學(xué)反應(yīng)，仍然保持其活性。

2.6 不同二氫楊梅素樣品的體外釋放分析

圖6 二氫楊梅素乙醇溶液、液體自微乳和固體自微乳的體外釋放曲線Fig. 6 In vitro release curves of dihydromyricetin in ethanol solution,liquid and solid self-emulsifying delivery system

如圖6所示，二氫楊梅素乙醇溶液在釋放介質(zhì)中釋放速率較快，在2 h內(nèi)基本釋放，累積釋放率約為90%。液體自微乳與固體自微乳在釋放介質(zhì)中有明顯的緩釋作用，二者皆能夠持續(xù)釋放8 h以上。其中，液體自微乳的釋放速率和累積釋放率都高于固體自微乳，推測(cè)是由于固體自微乳中液體自微乳被吸附在二氧化硅的孔徑內(nèi)，溶出時(shí)需從二氧化硅孔洞中釋放，毛細(xì)力和虹吸特征延長(zhǎng)釋放時(shí)間，減緩溶出速率。

2.7 不同二氫楊梅素樣品的體外模擬胃腸消化分析

如圖7所示，未經(jīng)消化的液體和固體自微乳水分散液的平均粒徑分別為（30.2±1）nm和（30.5±0.8）nm；模擬胃部消化后，液體和固體自微乳的平均粒徑僅有小幅度的增加，分別為（35.6±1.5）nm和（36.0±1.2）nm，表明這兩種自微乳都可以自發(fā)形成乳液，且該乳液能在模擬胃消化環(huán)境中保持一定的穩(wěn)定性，使其形態(tài)和結(jié)構(gòu)都相對(duì)完整，避免被胃部的酶類提前降解，從而降低吸收效果。模擬腸消化后，液體和固體自微乳的粒徑都明顯增大，增大至（282.3±2）nm和（284.1±1.9）nm，能夠推斷出兩種自微乳都在模擬腸道消化時(shí)開(kāi)始進(jìn)入消化過(guò)程，被腸道吸收。自微乳成分中的吐溫60、ODO和聚甘油蓖麻醇酯等脂質(zhì)類物質(zhì)能夠增加二氫楊梅素的溶解度和溶出速率，促進(jìn)自微乳在膽酸鹽和胰脂肪酶的作用下加速水解。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，脂解產(chǎn)物（游離脂肪酸、表面活性劑和溶解的生物活性物質(zhì)）、膽鹽和磷脂被組裝成混合膠束和囊泡，運(yùn)輸?shù)侥c道并被腸道細(xì)胞吸收。

圖7 體外模擬胃腸消化前后液體和固體自微乳的平均粒徑Fig. 7 Average particle sizes of dihydromyricetin-loaded liquid and solid self-emulsifying delivery systems before and after in vitro simulated gastrointestinal digestion

圖8 經(jīng)模擬胃腸消化后二氫楊梅素、液體自微乳和固體自微乳的生物可給率Fig. 8 Bioaccessibility of dihydromyricetin-loaded liquid and solid selfemulsifying delivery systems

經(jīng)模擬胃腸消化后，溶解在消化介質(zhì)中的二氫楊梅素為被腸道吸收的活性物，與生物可給率有關(guān)。如圖8所示，經(jīng)模擬胃腸消化后，二氫楊梅素的生物可給率為（34.01±1.1）%，液體與固體自微乳的生物可給率高于二氫楊梅素，分別為（88.31±1.1）%和（71.58±0.9）%。其中，液體自微乳的生物可給率較固體自微乳更高，其原因可能與體外釋放相同，是由于固體自微乳中液體自微乳被二氧化硅吸附，釋放時(shí)不能及時(shí)溶出導(dǎo)致的。因此，在實(shí)際應(yīng)用中，與二氫楊梅素和其液體自微乳相比，其固體自微乳制劑可以長(zhǎng)時(shí)間進(jìn)行釋放，延長(zhǎng)二氫楊梅素胃腸道消化吸收時(shí)間，有效提高生物利用度。

2.8 不同二氫楊梅素樣品的加速穩(wěn)定性分析

如圖9所示，二氫楊梅素在混懸液中的保留率急劇下降，這與水中存在大量活性氧有關(guān)。與混懸液相比，液體自微乳水分散液中二氫楊梅素的保留率有一定提高，這是因?yàn)橐后w自微乳水分散液形成的乳液中乳化劑和助乳化劑界面膜的保護(hù)和隔離作用。但由于乳液中油滴和水接觸的比表面積很大，加之乳液中復(fù)雜的液體環(huán)境，加速12 d后液體自微乳水分散液中二氫楊梅素的保留率僅在32%左右，表明乳化劑和助乳化劑界面膜對(duì)二氫楊梅素的保護(hù)能力不足。由圖9可知，與液體自微乳水分散液相比，液體自微乳中二氫楊梅素的保留率明顯增大。這是由于非水的環(huán)境，液體自微乳內(nèi)部沒(méi)有大量的活性氧，氧化僅發(fā)生在液體自微乳和空氣接觸的表面，有限的表面使液體自微乳中二氫楊梅素的穩(wěn)定性較好。將液體自微乳固體化后，液體自微乳封裝于二氧化硅的孔穴中。相較于液體狀態(tài)，雖然增大了活性氧和二氫楊梅素接觸的比表面積，但由于二氧化硅的封裝作用，在加速氧化過(guò)程中，固體自微乳中二氫楊梅素的保留率與液體自微乳相比僅出現(xiàn)了輕微下降，且下降趨勢(shì)不明顯。這些結(jié)果表明，固體自微乳可以改善二氫楊梅素的貯存穩(wěn)定性。

圖9 混懸液、液體自微乳水分散液、液體和固體自微乳的二氫楊梅素保留率Fig. 9 Retention rates of dihydromyricetin in suspension, aqueous dispersion formed by liquid self-emulsifying delivery system, and liquid and solid self-emulsifying delivery systems

3 結(jié) 論

本實(shí)驗(yàn)旨在構(gòu)建負(fù)載二氫楊梅素的固體自微乳，提高二氫楊梅素的水溶解性和生物利用度。采用二氫楊梅素液體自微乳和二氧化硅介孔材料物理混合的方式制備二氫楊梅素固體自微乳。二氧化硅和液體自微乳質(zhì)量比不小于0.6時(shí)，可制備出外觀疏松且流動(dòng)性好的固體粉末。制備得到的二氫楊梅素液體自微乳和固體自微乳分別為琥珀色透明液體和白色粉末。X射線衍射分析結(jié)果表明固體自微乳中二氫楊梅素以無(wú)定型或者溶解態(tài)形式存在。制備固體自微乳的過(guò)程中，二氫楊梅素并未與其他成分產(chǎn)生不需要的化學(xué)反應(yīng)，沒(méi)有新的化學(xué)鍵生成，仍保持活性。體外釋放時(shí)，液體和固體自微乳釋放時(shí)間較長(zhǎng)，表明將二氫楊梅素自微乳化對(duì)其釋放起到了控制和減緩釋放的作用，使其在制成口服用的制劑時(shí)能夠進(jìn)一步提高生物利用度。相比于液體自微乳，由于二氧化硅的阻礙作用，固體自微乳中的二氫楊梅素釋放更為緩慢，更能適應(yīng)口服制劑的要求。體外模擬消化結(jié)果表明二氫楊梅素液體和固體自微乳在模擬腸消化液中粒徑變化較大，表明主要在模擬腸消化液中消化降解。自微乳可以提高二氫楊梅素的生物可給率，二氧化硅在一定程度上可延長(zhǎng)二氫楊梅素的胃腸消化吸收時(shí)間。固體自微乳可改善二氫楊梅素的化學(xué)穩(wěn)定性。本研究為二氫楊梅素的載體化提供了一種新穎而有效的策略，為今后在功能性食品開(kāi)發(fā)中的應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。但固體自微乳體系仍然存在固體吸附劑選擇的局限性，開(kāi)發(fā)新型、安全且高效的固體吸附劑將是該領(lǐng)域未來(lái)的研究方向。