張國維，秦 勇，高祥云，王劍周，張崇信

（1.甘肅省漁業(yè)技術推廣總站，甘肅 蘭州 730030；2.天水市漁業(yè)技術推廣站，甘肅 天水 741000；3.張家川馬鹿秦嶺細鱗鮭馴養(yǎng)繁殖場，甘肅 天水 741020）

秦嶺細鱗鮭（Brachymystax lenoktsinlingensis）屬魚綱、鮭形目、鮭科、細鱗鮭屬，是我國秦嶺西端所特有的魚類物種，列入我國國家Ⅱ級保護野生動物。近幾十年以來秦嶺細鱗鮭資源量急劇減少，目前其野生種群僅分布于甘肅省渭河上游及其支流流域和陜西省漢水北側支流湑水河、子午河的上游溪流中[1-3]。秦嶺細鱗鮭是冷水性魚類，生活在海拔900～2 300 m的山澗河流深潭中，最適生長水溫13～16 ℃，生存水溫范圍為1～19 ℃[4-5]。本文總結研究了秦嶺細鱗鮭親魚人工馴養(yǎng)繁殖和受精卵孵化的關鍵技術，以期為秦嶺細鱗鮭相關研究提供參考。

1 秦嶺細鱗鮭的人工馴養(yǎng)

1.1 人工馴養(yǎng)環(huán)境的構建

模擬秦嶺細鱗鮭自然生存環(huán)境，修建人工仿生態(tài)水泥流水馴養(yǎng)池。單個水泥池長10～20 m、寬2～3 m、高1.2～1.5 m，水位保持在0.8～1.2 m，并排并聯(lián)建造多組，池壁光滑整潔，池體末端搭建遮陽網(wǎng)，外部搭建立體防護網(wǎng)以防飛禽捕食親魚和幼魚。水源為地下泉水或山溪河流的冷流水，水質(zhì)優(yōu)良無污染，水質(zhì)符合GB 11607-1989《漁業(yè)水質(zhì)標準》要求，水溫范圍4～18 ℃，溶解氧含量7.0～10.0 mg/L，pH值7.0～7.8。山區(qū)的流水池塘應設置防洪防泥石流設施，構建沉淀池和應急水源，避免雨季持續(xù)性的山洪影響。

1.2 人工馴食方法

野生秦嶺細鱗鮭屬肉食性魚類，主要攝食水生昆蟲（牛虻、蜉蝣、飛蟻以及蜻蜓等）的幼蟲和成蟲、蝦類、林蛙及小型魚類等鮮活動物餌料[6]。在人工馴養(yǎng)的生長條件下，可采用人工馴食方法，使其轉變食性逐步適應并完全攝食人工配合顆粒飼料，克服在自然生長狀態(tài)下喜食鮮活動物餌料的習慣。馴食前期，可使用黃粉蟲活蟲，按魚體重2%的日投餌量每天投喂2次（早、晚），持續(xù)20～30 d；馴食中期，用水浸泡處理10 min殺死的黃粉蟲和人工配合顆粒飼料按1∶1的重量比混合投喂，以增強飼料的誘食性，日投餌量為魚體重的2%～3%，每天投喂2次（早、晚），持續(xù)30～60 d；馴食后期，完全使用人工配合顆粒飼料投喂，日投餌量為魚體重的2%～3%，每天投喂3次（早、中、晚），完成從天然活餌到人工飼料的食性轉變，之后可長期使用飼料飼養(yǎng)。

1.3 馴養(yǎng)技術和日常管理

人工餌料以黃粉蟲和顆粒飼料為主，并輔助黑光燈誘蟲補充外源性餌料。采用“四定”原則（定位、定時、定量、定質(zhì)）投喂優(yōu)質(zhì)餌料。日投餌量根據(jù)秦嶺細鱗鮭攝食實際情況進行調(diào)整，具體以投餌后10 min內(nèi)吃完、池底無殘餌為宜。定期巡塘，監(jiān)測水質(zhì)，檢查馴養(yǎng)環(huán)境，防止野生飛禽捕食。

2 秦嶺細鱗鮭的人工繁殖

2.1 親魚的強化培育

2.1.1 親魚篩選和集中培育 因為秦嶺細鱗鮭雌魚懷卵量較少，一般為500～2 000粒，親魚的品質(zhì)不良會影響魚卵的質(zhì)量和數(shù)量，降低人工繁殖成功率。在繁殖季節(jié)前（2月下旬），篩選個體大、體型好、無傷病、成熟度高的3～5齡且體重在0.25 kg以上的種魚作為繁殖用親魚。按體型大小分組，轉至繁育車間的流水孵化缸暫養(yǎng)培育，雌雄比為1∶（2～3），放養(yǎng)密度20～30尾/m3，水深0.5～0.7 m，進水管管口落差高度0.5 m以上，并加強流水刺激促進親魚性腺發(fā)育。周圍用黑色遮光網(wǎng)圈圍，防止親魚跳池死亡。3月中下旬水溫接近9 ℃提前將雌雄親魚分開培育，以免雌魚自行排卵，水溫到9～12 ℃時可進行人工催產(chǎn)[7]。

2.1.2 親魚的營養(yǎng)強化 野生秦嶺細鱗鮭生活習性特殊，棲息環(huán)境條件要求苛刻，在人工馴養(yǎng)繁殖條件下要對親魚進行仿生態(tài)模擬強化培育，并人工調(diào)控親魚的性腺發(fā)育。在繁殖前期加強親魚的營養(yǎng)，投喂黃粉蟲成蟲+高蛋白顆粒飼料，日投餌量為親魚體重的2%，分2次投喂，開展人工繁殖前5 d停食。

2.2 人工繁殖

2.2.1 全人工繁殖方法 通過注射催產(chǎn)素人工催產(chǎn)、人工孵化受精卵的方法為全人工繁殖。人工誘導親魚性腺成熟、發(fā)情，并產(chǎn)卵或排精，短期內(nèi)獲得大量發(fā)育和生長同步的受精卵，有助于苗種規(guī)?；嘤?，縮短親魚繁殖周期，提升繁殖效率。

2.2.1.1 人工催產(chǎn)。3月底至4月中旬，挑選發(fā)育狀況良好符合人工繁殖條件的親魚，經(jīng)丁香酚麻醉劑麻醉后，注射催產(chǎn)激素進行催產(chǎn)，注射激素種類為DOM、LRH-A2和HCG混合使用，注射劑量一般按1 kg雌魚親魚注射DOM 2～4 mg+LRH－A210 μg+HCG 1 000 IU，24～48 h 注射第二針，注射劑量減半；雄魚一般情況可通過自然發(fā)育順利性成熟，在人工授精時可直接取出精液，也可直接在雌魚注射后第二天再注射相同的催產(chǎn)素，注射劑量為雌魚的一半，注射部位均為胸腔。通過人工催產(chǎn)的調(diào)控技術，使雌魚、雄魚的性腺發(fā)育基本同步，可達到雌雄親魚同步排卵排精的效果。

2.2.1.2 人工授精。注射催產(chǎn)素后，雌雄親本分養(yǎng)在不同流水孵化缸中，加大親魚檢查頻率，觀察到雌魚腹部呈白色且膨大柔軟，生殖孔紅腫外漏，取出雌魚采用腹部節(jié)律擠壓的方法活體采集魚卵并盛于已消毒的瓷盆中，獲得的魚卵為半黏性沉性卵，要用生理鹽水輕輕漂洗2～3次進行脫黏，同時取出雄魚采用干法人工授精將精液擠至魚卵表面，并立即加入少量清水激活精子，用雞毛輕柔攪拌精液和魚卵1～2 min，使卵子與精液充分混合受精，再將受精卵用清水清洗2～3次，將清洗干凈的受精卵緩慢倒入孵化框中孵化。

2.2.2 半人工繁殖方法 半人工繁殖是采用親魚自然發(fā)育，不使用催產(chǎn)素，待親魚自然性成熟，人工采卵取精進行人工授精，獲得受精卵的方法。將雌魚和雄魚按1∶1的比例搭配暫養(yǎng)，加大水流量用流水刺激親魚發(fā)情。一般情況，雌魚排卵時間為4月中下旬，及時觀察親魚性成熟狀態(tài)，性成熟親魚表現(xiàn)為活動頻繁，性情暴躁不安，沿進水口處上躥，對聲音刺激敏感緊張，對即將排卵的雌性親魚及時取出進行人工擠卵，排卵后立即將雄性親魚的精液擠出對卵子進行人工授精。人工授精方法與全人工繁殖人工授精方法一致。

3 受精卵的人工孵化

3.1 孵化設施

在室內(nèi)孵化車間孵化，全過程避免強光直射，保持孵化環(huán)境安靜。由于秦嶺細鱗鮭卵為沉性卵，在流水孵化缸（或孵化槽）中放置孵化框，將受精卵均勻鋪放在孵化框底部進行孵化。孵化設施保持微流水，孵化期間水流量控制在0.002～0.005 m3/s，確保日換水量大于200%。水體流速要適宜，水流太小會導致受精卵缺氧死亡或發(fā)育不良，水流過大會形成較大沖擊力震動受精卵，影響正常的胚胎發(fā)育。在進水口處設置2層濾網(wǎng)，過濾水體雜物及小型水生生物；孵化裝置上游掛置鹽瓶（帶有5～10個針孔的塑料瓶中加入粗鹽），使水體保持較低鹽度預防水霉滋生，有條件的情況下可在進水口處加裝紫外消毒燈對孵化用水消毒殺菌處理，最大限度殺滅水體有害微生物。

3.2 人工孵化

按孵化框表面積計算孵化密度為0.5～1.0萬粒/m2。溫度恒定有助于受精卵的發(fā)育，受精卵在恒溫地下泉水（水溫10 ℃）條件下孵化時，15 d左右受精卵出現(xiàn)眼點進入發(fā)眼期，18～20 d胚體擺動明顯，孵化全程共需200～220個累積溫度（度日），20～22 d仔魚成型出膜并分布于孵化框底部。魚苗孵化出膜9 d后，開始出現(xiàn)口裂，體色逐漸變深，出現(xiàn)沖游，出膜13 d左右卵黃囊開始消失，魚苗上浮開口攝食外來餌料，營養(yǎng)由內(nèi)源性轉為外源性[8-9]。從受精卵到上浮平游開口需35 d左右，上浮開口期可使用雞蛋黃、豐年蟲、魚苗專用粉末飼料開口馴食7 d左右；90%魚苗出現(xiàn)沖游行為后，移出孵化框，移至仔魚培育孵化缸流水培育。秦嶺細鱗鮭受精卵孵化發(fā)育不同階段的積溫和天數(shù)見表1。

表1 秦嶺細鱗鮭受精卵孵化發(fā)育不同階段的積溫和時間

3.3 孵化管理

3.3.1 孵化環(huán)境控制 秦嶺細鱗鮭受精卵胚胎發(fā)育和孵化出膜率受環(huán)境因子影響較大，主要因子有水溫、溶氧、光照及病原微生物等，孵化精細化管理是提高孵化率的關鍵技術。一是光線控制。發(fā)眼卵和剛出膜的仔魚對光線敏感，有懼光現(xiàn)象，強光直射會顯著降低發(fā)眼卵的孵化率和仔魚的成活率，孵化室內(nèi)的孵化設施采取遮光處理，避免強光直射。二是環(huán)境控制。受精卵胚胎發(fā)育過程中對環(huán)境刺激極為敏感，物理性震動和強烈的噪音會延滯發(fā)育甚至死亡，要保持安靜、穩(wěn)定的孵化環(huán)境。三是孵化管理。每天早晚巡查3～6次，包括繁育池、孵化缸、培育池、引水渠、進水口、出水口、其他設施，及時打撈水源通路淤積的腐枝樹葉、泥沙、雜物，保證水路通暢，做好水質(zhì)監(jiān)測記錄。

3.3.2 受精卵發(fā)育控制 正常的受精卵呈淡黃色，發(fā)育過程中因各種原因不可避免會產(chǎn)生一些死卵、未受精的卵，一般呈白色，要及時用塑料吸管吸除，以免形成水霉病害感染其他健康卵。定時清理進水口濾網(wǎng)和孵化裝置的沉淀雜物，以免破壞水質(zhì)。不同批次的受精卵，仔魚出膜時間和個體的大小規(guī)格也不一致，由于秦嶺細鱗鮭魚苗食性偏肉食性且有種間相殘的習性，因此應及時區(qū)分不同規(guī)格批次的仔稚魚，進行分池培育，提高苗種數(shù)量和成活率。

4 結語

秦嶺細鱗鮭人工馴養(yǎng)繁殖及受精卵孵化技術的應用是人為干預條件下保護該物種種質(zhì)資源的重要途徑。張家川馬鹿秦嶺細鱗鮭馴養(yǎng)繁殖場自2012年至今連續(xù)多年開展秦嶺細鱗鮭人工馴養(yǎng)繁殖及受精卵孵化工作，通過多年實踐探索，采用人工調(diào)控等技術方法可實現(xiàn)人工馴養(yǎng)和雌雄親魚性腺同步發(fā)育，保證人工繁殖和受精卵孵化順利進行，有效提高馴養(yǎng)成活率、受精率、孵化率，并連續(xù)多年提供苗種用于渭河上游秦嶺細鱗鮭增殖放流活動，對秦嶺細鱗鮭種質(zhì)資源的養(yǎng)護和野外種群數(shù)量的恢復有積極意義。