康健穎，李金霞，鄭彩杏，賴麗娜，劉旺華，周小青

（湖南中醫(yī)藥大學(xué)，中醫(yī)診斷學(xué)湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖南 長(zhǎng)沙 410208）

中醫(yī)學(xué)強(qiáng)調(diào)證同而治同，證異則治異，理、法、方、藥的有機(jī)統(tǒng)一是辨證論治的理論基礎(chǔ)，從理論上講，一個(gè)特定的證應(yīng)對(duì)應(yīng)唯一的治法，達(dá)到最佳治療效果的方劑也只有一個(gè)［1］。但臨床上存在“同證異方”現(xiàn)象，治療某一病證的方劑常有多首，不同醫(yī)生針對(duì)同一患者也可能開(kāi)出不同的方劑，但都可獲得一定的療效［2-3］?！巴C異方”現(xiàn)象的存在提示同病同證存在以多種方藥治愈的可能，但同時(shí)也反映出中醫(yī)診斷及處方的客觀化、標(biāo)準(zhǔn)化、精細(xì)化仍有待完善。

血瘀證是動(dòng)脈粥樣硬化、冠心病等人類重大心血管疾病的主要證型，且常貫穿疾病始終［4］?；钛鍪侵委熝鲎C的基本治法，活血化瘀中藥又有和血、活血、破血、逐瘀等作用程度之別，還有行氣活血、益氣活血、溫經(jīng)活血、活血止痛等小法，體現(xiàn)出功效的差異。但臨床上活血化瘀方劑眾多，醫(yī)家多有混用，復(fù)雜的證治關(guān)系網(wǎng)不利于臨床精準(zhǔn)選方，也不利于中藥復(fù)方的科學(xué)性解釋與推廣應(yīng)用，因此有必要對(duì)這些方劑進(jìn)行生物學(xué)定義，理清其作用機(jī)制及作用力差異，以提高血瘀證臨床處方用藥的針對(duì)性［5］。

課題組前期邀請(qǐng)方劑學(xué)專家論證，從活血化瘀經(jīng)典方劑中選取單純活血化瘀，佐助治法不明顯的丹參飲、血府逐瘀湯、失笑散、活絡(luò)效靈丹和桃紅四物湯作為研究對(duì)象［6］，以網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法預(yù)測(cè)五首活血化瘀方治療血瘀證的作用靶點(diǎn)，發(fā)現(xiàn)五首活血化瘀方擁有232 個(gè)共同的作用靶點(diǎn)，均可作用于“流體切應(yīng)力與動(dòng)脈粥樣硬化”這一生物過(guò)程，由此從機(jī)制上證實(shí)了五首活血化瘀方共同治療血瘀證的可能性機(jī)理；且五首方又分別有其特異性的作用靶點(diǎn)及通路，其治療血瘀證的作用機(jī)制和而不同［7］，療效差異仍需進(jìn)一步明確。本研究應(yīng)用饑餓+ 高脂+ 腎上腺素復(fù)合造模方法構(gòu)建兔血瘀證模型，以五首活血化瘀方進(jìn)行干預(yù)，觀察干預(yù)后家兔血瘀體征、血常規(guī)、血脂、血液流變學(xué)、球結(jié)膜微循環(huán)及主動(dòng)脈病理學(xué)變化，揭示五首活血化瘀方改善家兔血瘀狀態(tài)的作用力差異，進(jìn)一步闡釋血瘀證“同證異方”內(nèi)涵，同時(shí)為臨床精準(zhǔn)選方提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料

1.1 動(dòng)物

同批次清潔級(jí)新西蘭家兔70 只，雄性，體質(zhì)量2.0～2.5 kg，購(gòu)自湖南太平生物科技有限公司，合格證號(hào)：1107302011000864。飼養(yǎng)于湖南中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，單籠飼養(yǎng)，室溫（20 ± 5）℃，相對(duì)濕度（60±10）%，自由飲水，每隔12 h開(kāi)燈照明。本實(shí)驗(yàn)過(guò)程經(jīng)湖南中醫(yī)藥大學(xué)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，倫理編號(hào)：LLBH－202006020001。

1.2 藥品及試劑

組方［8］：丹參飲（丹參30 g，檀香6 g，砂仁6 g）；血府逐瘀湯（桃仁12 g，紅花9 g，當(dāng)歸9 g，生地黃9 g，川芎5 g，赤芍6 g，牛膝9 g，柴胡3 g，桔梗5 g，枳殼6 g，甘草3 g）；失笑散（五靈脂6 g，蒲黃6 g）；活絡(luò)效靈丹（當(dāng)歸15 g，丹參15 g，醋乳香15 g，醋沒(méi)藥15 g）；桃紅四物湯（熟地黃12 g，當(dāng)歸15 g，白芍9 g，川芎6 g，桃仁9 g，紅花6 g）。以上藥物均購(gòu)于湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，經(jīng)湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥食同源食品工程中心進(jìn)行質(zhì)量控制檢測(cè)。

高脂飼料（北京科澳協(xié)力飼料有限公司）；腎上腺素（上海陶素生化科技有限公司，批號(hào)：20190128）；總膽固醇測(cè)定試劑盒（南京建成生物科技有限公司，批號(hào)：A111－1）；甘油三酯測(cè)定試劑盒（南京建成生物科技有限公司，批號(hào)：A110－1）；高密度脂蛋白膽固醇試劑盒（南京建成生物科技有限公司，批號(hào)：A112－1）；低密度脂蛋白膽固醇試劑盒（南京建成生物科技有限公司，批號(hào)：A113－1）。

1.3 儀器

USB 顯微放大鏡（深圳inskam 公司）；SA－6600 型全自動(dòng)血液流變測(cè)試儀（北京賽科希德科技股份有限公司）；MC－6200VET 型全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀（深圳MAXCOM 公司）；BA400 型顯微鏡（廈門麥克奧迪實(shí)業(yè)集團(tuán)公司）；3K18離心機(jī)（美國(guó)Sigma公司）。

2 方法

2.1 藥液制備

五首活血化瘀方按照上述劑量分別進(jìn)行煎煮液制備，冷水浸泡30 min 后煎煮2 次，頭煎煮沸時(shí)間為2 h，二煎為1 h，將2 次煎煮濾液混合濃縮后各方藥液濃度分別為：丹參飲0.5 g/mL、血府逐瘀湯1 g/mL、失笑散0.25 g/mL、活絡(luò)效靈丹1 g/mL、桃紅四物湯1 g/mL，所得藥液存放于4 ℃冰箱保存?zhèn)溆茫?］。

2.2 模型建立

參照文獻(xiàn)［10］和文獻(xiàn)［11］方法，采用“饑餓+ 高脂+腎上腺素”方法制備家兔血瘀證模型。造模家兔適應(yīng)性喂養(yǎng)1 周后，以90 g/d 劑量飼喂高脂飼料（60%正常進(jìn)食量，10%蛋黃粉，5%豬油，1%膽固醇，0.2%丙基硫氧嘧啶），共40 d；實(shí)驗(yàn)第2 天開(kāi)始隔日皮下注射腎上腺素0.1 mg/kg，共20 次。造模期間每7 d 稱量1 次體質(zhì)量，并根據(jù)體質(zhì)量變化調(diào)整腎上腺素注射量。造模結(jié)束進(jìn)行球結(jié)膜微循環(huán)、血液流變學(xué)和血脂檢測(cè)，指標(biāo)較正常組明顯增高則為造模成功。

2.3 分組及給藥

依據(jù)隨機(jī)數(shù)字表將家兔隨機(jī)分為正常組6 只和造模組64只，造模期間死亡7只，成模57只，造模成功后的家兔隨機(jī)分為模型組、血府組、桃紅組、丹參組、活絡(luò)組和失笑組，每組9～10只。正常組及模型組給予同等劑量生理鹽水灌胃，血府組、桃紅組、丹參組、活絡(luò)組和失笑組分別給予五首活血化瘀方連續(xù)灌胃治療30 d。灌胃劑量根據(jù)人與家兔體表面積折算系數(shù)計(jì)算［12］，由于是五首方對(duì)比研究，因此各組均采用臨床等效劑量。血府組：3.55 g/（kg·d）；桃紅組：2.66 g/（kg·d）；丹參組：1.962 g/（kg·d）；活絡(luò)組：2.80 g/（kg·d）；失笑組：0.56 g/（kg·d）。給藥期間死亡13 只。

家兔劑量=成人劑量/70 kg×3.27

2.4 血瘀證體征積分計(jì)算

參照李凈等［13］制定的《血瘀證體征量表》對(duì)家兔血瘀體征進(jìn)行量化。①精神狀態(tài)：精神委頓（3 分），倦怠嗜睡（5 分），對(duì)抗性、攻擊性完全消失（7 分）；②毛發(fā)：毛發(fā)枯黃無(wú)潤(rùn)澤（3 分），毛發(fā)結(jié)穗打卷（5 分），毛發(fā)稀疏脫落（7 分）；③大便：輕度稀便（3 分），中度稀便（5 分），重度稀便或黃綠褐色黏臭便（7 分）［14］；④局部腫塊：有腫塊（5 分）；⑤唇周：暗紅（3 分），紫暗（5 分）；⑥眼球：眼球由淡紅轉(zhuǎn)為深紅（3 分），轉(zhuǎn)為暗紅（5 分）；⑦耳廓：暗紅（3 分），紫暗（5 分）；⑧爪甲：爪甲尾部紫暗（3分），爪甲紫暗脫落（5分）。

2.5 球結(jié)膜微循環(huán)檢測(cè)

將家兔在清醒的狀態(tài)下置于兔固定盒內(nèi)，把兩耳及頭部露出，以眼科開(kāi)瞼器將上下眼瞼撐開(kāi)，充分暴露出球結(jié)膜血管，排除結(jié)膜刺激的情況下，在USB顯微放大鏡下觀察并記錄家兔球結(jié)膜微血管，參考李國(guó)賢［15］提出的血瘀證目征積分方法，根據(jù)血管扭曲條數(shù)、增粗條數(shù)、血管瘤、網(wǎng)狀畸形、新鮮出血、陳舊性出血、損傷點(diǎn)、血管色調(diào)，并結(jié)合眼周皮膚色調(diào)進(jìn)行積分判斷血瘀證及其輕重程度，具體賦值見(jiàn)表1［16］。

表1 血瘀證目征計(jì)分表

2.6 血脂檢測(cè)

末次灌胃24 h 后，所有家兔以戊巴比妥鈉按40 mg/kg 劑量耳緣靜脈注射麻醉，腹主動(dòng)脈取血，常溫放置1 h 后于4 ℃下3 000 r/min 離心15 min 分離血清，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行總膽固醇（CHO）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL－C）和低密度脂蛋白膽固醇（LDL－C）檢測(cè)。

2.7 血液流變性及紅細(xì)胞檢測(cè)

腹主動(dòng)脈血5 mL，采用枸櫞酸鈉抗凝，4 h 內(nèi)血液流變儀測(cè)定全血黏度（切變率1、50、200 1/s）、紅細(xì)胞聚集率及卡松黏度。腹主動(dòng)脈血2 mL，采用EDTA 抗凝，2 h 內(nèi)血細(xì)胞分析儀測(cè)定紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（RBC）、紅細(xì)胞壓積（HCT）、平均紅細(xì)胞體積（MCV）、血紅蛋白（HGB）、平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量（MCH）及平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度（MCHC）。

2.8 HE染色觀察主動(dòng)脈病理學(xué)變化

剝離胸主動(dòng)脈，包埋切片后行常規(guī)HE 染色：60 ℃烘箱中烤片30 min；梯度酒精脫蠟、水化，滴加蘇木素染液染色2 min；流水沖洗，滴加1%鹽酸酒精分化3 s；流 水沖洗30 s，滴 加1% 伊紅 染色液200 μL，染 色3 min；梯度酒精脫水、透明，中性樹(shù)膠封片，晾干后于200×光鏡下觀察各樣品病理變化。

2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)均采用SPSS 19.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，各組計(jì)量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用單因素方差分析法考查顯著性，方差齊時(shí)組間兩兩比較采用LSD 檢驗(yàn)，方差不齊則采用Tamhane's T2 檢驗(yàn)。以P<0.05代表差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 各組家兔體質(zhì)量及一般情況的比較

正常組家兔精神良好，食欲佳，毛色平整有光澤，大便柔軟成型；造模期間出現(xiàn)精神倦怠嗜睡，毛發(fā)色黃無(wú)光澤，稀疏脫落，個(gè)別出現(xiàn)皮下腫塊，甚至潰爛，進(jìn)食減少，造模期間死亡7 只；給藥期間由于家兔性情膽小易驚，脆弱敏感，灌胃對(duì)其刺激較大，精神狀態(tài)未見(jiàn)明顯改善，給藥期間死亡13 只，總病死率28.57%。每周記錄各組家兔體質(zhì)量，模型組較正常組體質(zhì)量增加，除丹參組外，其余各給藥組體質(zhì)量較模型組有所減輕，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見(jiàn)表2。

表2 各組家兔體質(zhì)量增長(zhǎng)情況比較（±s，kg）

表2 各組家兔體質(zhì)量增長(zhǎng)情況比較（±s，kg）

組別正常組模型組血府組丹參組活絡(luò)組失笑組桃紅組n 6 9 7 6 7 8 7第1周2.32±0.17 2.52±0.19 2.56±0.17 2.69±0.16 2.51±0.13 2.49±0.11 2.48±0.08第2周2.55±0.16 2.66±0.23 2.68±0.17 2.84±0.17 2.64±0.19 2.61±0.17 2.57±0.11第3周2.78±0.12 2.75±0.25 2.78±0.19 2.75±0.26 2.72±0.20 2.60±0.17 2.61±0.17第4周2.85±0.13 2.80±0.20 2.70±0.22 2.96±0.17 2.76±0.23 2.69±0.20 2.74±0.11第5周2.89±0.14 2.91±0.20 2.84±0.33 3.09±0.13 2.83±0.21 2.87±0.15 2.72±0.35第6周2.96±0.22 2.96±0.22 2.88±0.34 3.11±0.15 2.73±0.27 2.86±0.12 2.73±0.26第7周2.95±0.21 3.04±0.24 2.89±0.32 3.11±0.23 2.77±0.21 2.86±0.12 2.76±0.27第8周2.85±0.14 3.03±0.27 3.00±0.39 3.18±0.17 2.72±0.14 2.89±0.20 2.86±0.22第9周2.78±0.11 2.96±0.28 2.96±0.39 3.20±0.17 2.66±0.20 2.90±0.22 2.90±0.30

3.2 各組家兔臟器大體觀的比較

造模后家兔心肺出現(xiàn)明顯的病理改變，胸腔積液、腹水形成，心包大量積液，心臟脂肪沉積，主動(dòng)脈粥樣斑塊形成，肺部出血點(diǎn)或肺實(shí)變，肝臟充血。對(duì)出現(xiàn)病理改變的例數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，可知模型組超過(guò)半數(shù)出現(xiàn)胸腔積液、腹水及心包積液，2 例發(fā)現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的動(dòng)脈斑塊；各治療組的病理改變例數(shù)較模型組有所減少，未見(jiàn)動(dòng)脈斑塊形成。見(jiàn)圖1、表3。

表3 各組家兔臟器病理情況比較［例（%）］

圖1 血瘀證家兔造模前后心肺大體情況

3.3 各組家兔血瘀體征積分的比較

體征表現(xiàn)是判斷血瘀證形成與程度的核心，只有動(dòng)物被誘導(dǎo)出與血瘀證相同的體表特征，如局部腫痛、眼結(jié)膜血管擴(kuò)張充血、唇周發(fā)黑、耳廓唇周暗紅、爪甲尾部紫暗、舌暗紅等，才可以判定為血瘀證動(dòng)物模型［17］。參考《血瘀證體征量表》對(duì)各組家兔血瘀體征進(jìn)行定量分析，模型組精神、毛發(fā)、腫塊、眼球、唇周、耳廓、爪甲積分均較正常組顯著升高（P<0.01），大便無(wú)顯著變化；與模型組相比，五首活血化瘀方均可不同程度降低各項(xiàng)血瘀體征積分，其中以改善腫塊、眼球的病理表現(xiàn)為主，血府逐瘀湯效果最為顯著（P<0.01）。對(duì)血瘀體征積分進(jìn)行總計(jì)，與正常組相比，模型組的總積分顯著升高（P< 0.01）；與模型組相比，血府組、丹參組、失笑組、桃紅組總積分顯著降低（P<0.01），四首方之間作用差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P >0.05）。此外，血府組、活絡(luò)組、桃紅組出現(xiàn)不同程度的大便溏稀，大便積分升高，這可能與其中含有潤(rùn)腸的當(dāng)歸有關(guān)。見(jiàn)表4。

表4 各組家兔血瘀證體征積分比較（± s，分）

表4 各組家兔血瘀證體征積分比較（± s，分）

注：與正常組比較，2）P<0.01；與模型組比較，3）P<0.05，4）P<0.01。

組別正常組模型組血府組丹參組活絡(luò)組失笑組桃紅組n6 9 7 6 7 8 7精神0.00 4.78±0.672）4.14±1.07 4.67±1.51 4.71±1.38 4.25±1.49 4.71±0.76毛發(fā)0.00 5.89±1.452）4.14±1.573）5.67±1.03 5.00±2.00 4.00±1.073）5.29±1.80腫塊0.00 2.78±2.642）0.00±0.004）0.83±2.043）0.71±1.893）0.00±0.004）0.00±0.004）眼球0.00 5.00±0.002）1.43±2.444）3.33±2.58 2.86±2.67 2.50±2.673）1.43±2.444）唇周0.00 4.11±1.052）2.43±1.814）3.17±1.83 3.86±1.07 3.50±0.93 3.86±1.07耳廓0.00 4.11±1.052）3.86±1.07 2.50±1.55 3.29±2.36 3.88±1.81 3.29±2.36爪甲0.00 2.67±1.002）1.71±1.60 1.00±1.553）2.43±1.81 1.50±1.60 0.86±1.463）大便0.00 0.00±0.00 0.71±1.89 0.00±0.00 1.86±2.673）0.00±0.00 1.29±1.60總分0.00 29.33±5.122）18.43±6.134）20.67±6.023）24.71±9.183）20.00±7.054）20.71±5.154）

3.4 各組家兔球結(jié)膜微循環(huán)的比較

正常組家兔球結(jié)膜血管充盈，形態(tài)均勻流暢，球結(jié)膜呈淡紅色；造模后血管怒張，甚則呈瘤狀，血管形態(tài)扭曲或呈波浪形，微小血管出現(xiàn)網(wǎng)狀畸形，血管充盈不佳，球結(jié)膜呈淡紫色，甚者可見(jiàn)出血點(diǎn)。對(duì)目征進(jìn)行賦值，與正常組相比，模型組血瘀目征積分顯著升高（P<0.01）；與模型組相比，除血府組外，其余各組積分顯著降低（P<0.05，P<0.01），各組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表5、圖2。

圖2 各組家兔球結(jié)膜微循環(huán)情況

表5 各組家兔血瘀目征總積分比較（± s，分）

表5 各組家兔血瘀目征總積分比較（± s，分）

注：與正常組比較，2）P < 0.01；與模型組比較，3）P < 0.05，4）P <0.01。

組別正常組模型組血府組丹參組活絡(luò)組失笑組桃紅組n6 9 7 6 7 8 7血瘀目征積分2.00±2.00 22.14±8.812）20.63±9.16 10.00±3.544）12.00±5.103）8.33±3.734）9.00±3.744）

3.5 各組家兔血脂的比較

兔對(duì)高脂飲食較為敏感，且血脂升高也是引起血液黏稠度增加的原因之一，對(duì)各組家兔血清進(jìn)行血脂檢測(cè)，與正常組相比，模型組的CHO、TG、LDL－C 均顯著升高（P<0.01）；與模型組相比，失笑組的CHO、TG、LDL－C 水平均降低（P<0.05），表現(xiàn)出較好的降脂效果；血府組、丹參組亦表現(xiàn)出降低TG 的作用（P<0.05）。見(jiàn)表6。

表6 各組家兔血脂情況比較（± s）

表6 各組家兔血脂情況比較（± s）

注：與正常組比較，2）P<0.01；與模型組比較，3）P<0.05。

組別正常組模型組血府組丹參組活絡(luò)組失笑組桃紅組n 6 9 7 6 7 8 7 LDL-C（mmol/L）0.65±0.24 20.91±7.322）15.68±6.96 18.47±6.24 15.25±10.40 10.91±2.113）21.26±6.87 TG（mmol/L）0.77±0.22 8.99±5.542）4.79±1.463）5.60±2.063）8.97±2.06 5.49±1.073）6.68±3.24 CHO（mmol/L）4.83±0.97 65.92±9.572）50.52±11.92 60.71±17.71 53.88±18.31 48.29±10.913）52.86±16.49

3.6 各組家兔血液流變學(xué)的比較

與正常組相比，模型組全血黏度（切變率1、50、200 1/s）、紅細(xì)胞聚集指數(shù)及卡松黏度均顯著升高（P<0.01）；與模型組相比，五首活血化瘀方組的全血黏度（切變率1、50、200 1/s）和紅細(xì)胞聚集指數(shù)均顯著降低（P<0.01），其中在降低低切血黏度和紅細(xì)胞聚集指數(shù)方面，失笑組療效最好，與其余四組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），在降低中切與高切血黏度上，失笑組與丹參組療效俱佳，優(yōu)于血府組及活絡(luò)組，桃紅組最差，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；在卡松黏度方面，除桃紅組外，其余四組均可顯著降低血瘀證家兔卡松黏度（P<0.01），四組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表7。

表7 各組家兔血液流變學(xué)情況比較（± s）

表7 各組家兔血液流變學(xué)情況比較（± s）

注：與正常組比較，1）P<0.05，2）P<0.01；與模型組比較，4）P<0.01；與失笑組比較，6）P<0.05，7）P<0.01；與桃紅組比較，8）P<0.05。

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3.7 各組家兔紅細(xì)胞及血紅蛋白的比較

與正常組相比，模型組紅細(xì)胞計(jì)數(shù)顯著下降，紅細(xì)胞內(nèi)血紅蛋白含量及濃度代償性升高，紅細(xì)胞體積顯著增大，但總的血紅蛋白濃度仍較正常組顯著減少，紅細(xì)胞壓積顯著降低（P< 0.01）；與模型組相比，除失笑組和活絡(luò)組外，其余三首活血化瘀方均可有效增加紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（P< 0.05，P< 0.01），其中桃紅組的效果最佳（P< 0.01），但紅細(xì)胞內(nèi)血紅蛋白含量及濃度較模型組降低（P< 0.05），總的血紅蛋白含量未能得到改善（P>0.05）；在紅細(xì)胞壓積方面，僅有桃紅組紅細(xì)胞壓積升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P< 0.05）。見(jiàn)表8。

表8 各組家兔紅細(xì)胞及血紅蛋白情況比較（± s）

表8 各組家兔紅細(xì)胞及血紅蛋白情況比較（± s）

注：與正常組比較，1）P<0.05；與模型組比較，3）P<0.05，4）P<0.01。

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3.8 各組家兔主動(dòng)脈病理改變的比較

正常組主動(dòng)脈結(jié)構(gòu)正常，內(nèi)膜、中膜、外膜結(jié)構(gòu)清晰，內(nèi)皮細(xì)胞完整，內(nèi)彈力板光滑、連續(xù)、平滑，中膜中的彈性膜平行排列，層次清晰，平滑肌細(xì)胞及彈力纖維形態(tài)一致，排列規(guī)則。模型組血管結(jié)構(gòu)紊亂，可見(jiàn)粥樣斑塊形成，內(nèi)皮細(xì)胞脫落，纖維帽突出管腔，內(nèi)有大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，中膜大量膠原纖維及平滑肌增生，排列紊亂，中膜彈力膜大量缺失、斷裂，外膜結(jié)締組織增生。各治療組壁結(jié)構(gòu)較為清晰，見(jiàn)大量膠原纖維及平滑肌增生，厚薄不一，內(nèi)皮細(xì)胞紊亂，炎性浸潤(rùn)較模型組顯著減少，斑塊突出程度較輕，彈力膜缺失斷裂較少。見(jiàn)圖3。

圖3 各組家兔主動(dòng)脈病理?yè)p傷情況（HE，×200）

4 討論

血瘀證存在“同證異方”現(xiàn)象，針對(duì)臨床血瘀證如何精準(zhǔn)選方的問(wèn)題，課題組選取常用的五首活血化瘀方劑——血府逐瘀湯、丹參飲、活絡(luò)效靈丹、失笑散、桃紅四物湯作為研究對(duì)象。五首方均可專注于發(fā)揮活血化瘀作用且佐助治法不明顯，具有較好的可比性，且其活血化瘀作用又略有層次的不同。丹參飲以丹參為主藥，配合檀香、砂仁行氣，藥性平和以和血［18］；活絡(luò)效靈丹以丹參、當(dāng)歸為主，佐以乳香、沒(méi)藥，長(zhǎng)于散瘀消腫止痛，為傷科要藥［19］；失笑散使用蒲黃、五靈脂，長(zhǎng)于化瘀止痛［20］；桃紅四物湯在養(yǎng)血和血的四物湯基礎(chǔ)上加桃仁、紅花，破血逐瘀［21］；血府逐瘀湯又在桃紅四物湯基礎(chǔ)上合四逆散，破血的同時(shí)輔以行氣，進(jìn)一步增強(qiáng)活血化瘀之功［22］。

本實(shí)驗(yàn)采用“饑餓+ 高脂+ 腎上腺素”復(fù)合造模方法，饑餓構(gòu)成氣虛因素，減緩血液運(yùn)行；高脂以增加血液黏稠度，促進(jìn)斑塊形成；腎上腺素可收縮血管，加重血液瘀阻。參考《實(shí)用血瘀證診斷標(biāo)準(zhǔn)》［23］，可見(jiàn)造模后家兔出現(xiàn)皮下腫塊，耳廓唇周暗紅，爪甲尾部紫暗等血瘀體征，血瘀體征積分顯著升高（P<0.01）；球結(jié)膜微血管怒張、扭曲，血管充盈不佳，甚則出血，血瘀目征積分顯著升高（P< 0.01）；心肺出現(xiàn)明顯的病理改變，如胸腔積液、腹水、心包積液、主動(dòng)脈粥樣斑塊形成等；同時(shí)血脂、血液流變學(xué)指標(biāo)均顯著升高，而紅細(xì)胞計(jì)數(shù)及血紅蛋白顯著下降（P< 0.01），可知復(fù)合造模法成功復(fù)制了血瘀證家兔模型。實(shí)驗(yàn)期間總病死率為28.57%，與家兔膽小易驚、腸胃較為敏感有關(guān)，存活樣本量仍可滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)要求。

應(yīng)用五首活血化瘀方分別進(jìn)行干預(yù)，在體征方面，血府組腫塊、眼球、唇周積分顯著降低（P< 0.01），療效較好，丹參組、失笑組、桃紅組次之，而活絡(luò)效靈丹未表現(xiàn)出明顯的療效。血府組、活絡(luò)組、桃紅組出現(xiàn)不同程度的大便溏稀，這可能與其中含有潤(rùn)腸的當(dāng)歸有關(guān)。在改善球結(jié)膜微循環(huán)方面，除血府組外，其余四組積分顯著降低（P<0.05）。各治療組心肺大體病變及病理學(xué)損傷均減輕，未見(jiàn)動(dòng)脈斑塊形成。在調(diào)脂方面，失笑組的CHO、TG、LDL-C 水平均降低（P<0.05），表現(xiàn)出較好的降脂效果；血府組、丹參組TG 水平降低（P<0.05），桃紅組及活絡(luò)組未見(jiàn)明顯改善。在改善血液流變方面，五首活血化瘀方的全血黏度和紅細(xì)胞聚集指數(shù)均顯著降低（P<0.01）；在作用力方面，失笑散>丹參飲>血府逐瘀湯、活絡(luò)效靈丹>桃紅四物湯。在紅細(xì)胞檢測(cè)方面，除失笑組和活絡(luò)組外，其余三首活血化瘀方均可有效增加紅細(xì)胞計(jì)數(shù)，桃紅組療效最佳（P<0.05）。

由此可知，五首活血化瘀方均可有效改善血瘀證家兔血瘀體征及球結(jié)膜微循環(huán)，調(diào)節(jié)血脂及血液流變，增加紅細(xì)胞含量，減輕心肺及主動(dòng)脈病理?yè)p傷，由此證實(shí)了多首活血化瘀方同時(shí)治療血瘀證，即血瘀證“同證異方”的可能性機(jī)理，且五首方的作用環(huán)節(jié)又各有側(cè)重，可為臨床血瘀證的精準(zhǔn)選方提供一定參考。血府逐瘀湯行氣活血，可較好改善家兔全身血瘀體征，但對(duì)局部微循環(huán)的改善作用不顯著，適于治療全身及心胸部大血管的瘀阻；失笑散在調(diào)脂、改善血液流變方面表現(xiàn)最優(yōu)，可用于高脂血癥血瘀證的治療；桃紅四物湯長(zhǎng)于養(yǎng)血、活血，而調(diào)脂、改善血液流變的作用較差，但在增加紅細(xì)胞上療效較好，充分體現(xiàn)了瘀血不去則新血不生的治法，與前人研究結(jié)果一致［24-25］；丹參飲在各方面的表現(xiàn)較為平均，與丹參藥性較為平和有關(guān)；活絡(luò)效靈丹則療效較差，未能明顯調(diào)脂及改善血瘀體征，但活絡(luò)效靈丹長(zhǎng)于定痛，通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)無(wú)法測(cè)知。此外發(fā)現(xiàn)，應(yīng)用血府逐瘀湯、活絡(luò)效靈丹和桃紅四物湯后家兔出現(xiàn)便溏，這可能與其中含有潤(rùn)腸的當(dāng)歸有關(guān)。