張 凱，林怡靜，厲晨陽(yáng)，劉芳玲，沈銘浩，鄭善堅(jiān)

1. 浙江師范大學(xué) 化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院，浙江 金華 321004

2. 浙江省野生動(dòng)物生物技術(shù)與保護(hù)利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江 金華 321004

生物絮團(tuán)技術(shù) (Biofloc technology, BFT) 是一種低成本、可持續(xù)且環(huán)境友好的水產(chǎn)養(yǎng)殖技術(shù)[1-2]；通過(guò)添加外部碳源調(diào)控水體中的碳氮比，促進(jìn)形成含有細(xì)菌、真菌、原生動(dòng)物、微藻等的生物凝絮物，并利用系統(tǒng)中自養(yǎng)細(xì)菌和異氧細(xì)菌等微生物的處理作用，從水產(chǎn)養(yǎng)殖廢水中吸收有害氮組分以改善水質(zhì)，同時(shí)可產(chǎn)生微生物蛋白，直接作為水產(chǎn)動(dòng)物的飼料[3-5]。生物絮團(tuán)技術(shù)不僅可為水產(chǎn)動(dòng)物提供必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，最大限度地減少了水體交換，同時(shí)可在一定程度上減少飼料供給。目前該技術(shù)已在蝦類(lèi)養(yǎng)殖中廣泛應(yīng)用[6-8]，在其他水產(chǎn)動(dòng)物上的研究、應(yīng)用也越來(lái)越多，如草魚(yú) (Ctenopharyngodon idella)[9-10]、鯉 (Cyprinus carpio)[11-12]、尼羅羅非魚(yú) (Oreochromis niloticus)[13-14]、團(tuán)頭魴 (Megalobrama amblycephala)[15-16]等。

中華草龜 (Chinemys reevesii) 是龜鱉目中的常見(jiàn)種類(lèi)，具有繁殖率高、抗逆性強(qiáng)、生長(zhǎng)快等諸多優(yōu)勢(shì)，兼具較高的食用、藥用和觀賞價(jià)值，已成為我國(guó)產(chǎn)量最高的經(jīng)濟(jì)龜類(lèi)[17]。目前中華草龜?shù)娜斯ゐB(yǎng)殖技術(shù)主要為溫室養(yǎng)殖，該技術(shù)雖可大幅提高其生長(zhǎng)速度，縮短養(yǎng)殖周期，增加養(yǎng)殖產(chǎn)量和經(jīng)濟(jì)效益[18]，但存在水質(zhì)調(diào)控成本高、高蛋白飼料投喂量大等高投入、高污染的問(wèn)題[19]。養(yǎng)殖過(guò)程中大量高蛋白飼料投喂會(huì)引起水體化學(xué)需氧量 (COD)、總氮和總磷指標(biāo)偏高，養(yǎng)殖廢水對(duì)外界環(huán)境造成巨大壓力。隨著環(huán)保意識(shí)的提高，養(yǎng)殖廢水的控制與處理成為中華草龜溫室養(yǎng)殖中亟待解決的問(wèn)題。目前龜鱉養(yǎng)殖廢水處理的相關(guān)研究較少，主要集中在化學(xué)絮凝法[20]和生物改良[21-22]等方式，王芬等[23]通過(guò)藕鱉共作的生態(tài)養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)中華鱉的成活率、特定生長(zhǎng)率和飼料轉(zhuǎn)化率相較于傳統(tǒng)養(yǎng)殖模式均有較大提升，水體中氨氮、COD等指標(biāo)顯著降低，蓮藕產(chǎn)量也得到了提高。許明宸[24]利用微生物制劑結(jié)合濕地的方式處理養(yǎng)殖尾水，建立快速而穩(wěn)定的尾水凈化系統(tǒng)，實(shí)現(xiàn)養(yǎng)殖尾水零排放。溫室龜鱉養(yǎng)殖的高密度和高投入導(dǎo)致養(yǎng)殖用水的嚴(yán)重污染，而現(xiàn)有的龜鱉尾水處理方式顯然無(wú)法與溫室養(yǎng)殖有機(jī)結(jié)合。生物絮團(tuán)作為一種新型水產(chǎn)養(yǎng)殖技術(shù)，其充分利用微生物的水質(zhì)高效處理作用，使其在高密度養(yǎng)殖中備受青睞[25-26]。因此本研究通過(guò)調(diào)控水體碳氮比，探討碳源添加量對(duì)中華草龜溫室養(yǎng)殖過(guò)程中生物絮團(tuán)形成及水質(zhì)的影響，研究建立并維持生物絮團(tuán)的最佳條件，以期實(shí)現(xiàn)中華草龜溫室養(yǎng)殖水體零排放的目的。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

中華草龜幼龜取自金華市綠和生態(tài)水產(chǎn)養(yǎng)殖公司，平均體質(zhì)量為 (76.66±9.83) g，體質(zhì)健康，飼養(yǎng)15 d后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

實(shí)驗(yàn)在溫室內(nèi) 70 cm×50 cm×40 cm 的實(shí)驗(yàn)池中進(jìn)行，每個(gè)實(shí)驗(yàn)池養(yǎng)殖中華草龜6只。使用經(jīng)曝氣后的自來(lái)水蓄水20 cm，養(yǎng)殖水溫采用自動(dòng)加熱棒控溫在 (31.4±0.7) ℃，實(shí)驗(yàn)期間使用充氧泵 (森森牌CT-404，8 W) 對(duì)水體進(jìn)行曝氣，每個(gè)實(shí)驗(yàn)池設(shè)1個(gè)氣石。不進(jìn)行換水和排污，但定期補(bǔ)充系統(tǒng)運(yùn)行蒸發(fā)和采樣失水。每天07:00投喂烏龜專(zhuān)用膨化飼料 (mC∶mN=6∶1，北京大北農(nóng)科技集團(tuán)股份有限公司) 1次，日投喂量為龜體質(zhì)量的1%。設(shè)3個(gè)實(shí)驗(yàn)組，利用Avnimelech[1]的方法計(jì)算出調(diào)控不同碳氮比所要投放的蔗糖質(zhì)量，實(shí)驗(yàn)中的碳氮比指添加物質(zhì) (飼料和蔗糖) 的碳元素與氮元素的質(zhì)量比，計(jì)算公式如下：

式中：mC為碳質(zhì)量；mCH為所需碳水化合物的添加量；Wc/ch為碳水化合物中碳的質(zhì)量分?jǐn)?shù)；mN為氮質(zhì)量；mF為 投喂的飼料量；WN/F為飼料中氮的質(zhì)量分?jǐn)?shù)；WN/ex為排泄物中氮的質(zhì)量分?jǐn)?shù)；ANremoved和NITremoved分別為氨氮和亞硝酸鹽的去除率；CG為對(duì)照組；EG為實(shí)驗(yàn)組。

將蔗糖溶于水中，在投飼后的水體中添加，使水體碳氮質(zhì)量比分別為10∶1 (CN-10)、15∶1(CN-15)和20∶1 (CN-20)，每組3個(gè)平行，同時(shí)設(shè)1個(gè)對(duì)照組CG。對(duì)照組僅投喂飼料，全程未添加蔗糖。

實(shí)驗(yàn)期間每日進(jìn)行水質(zhì)檢測(cè)，其中溶氧、pH、溫度采用電極法測(cè)定，氨氮、亞硝酸鹽、總氮使用Clever Chem 380全自動(dòng)間斷化學(xué)分析儀測(cè)定，通過(guò)公式(3)、(4)計(jì)算氨氮、亞硝酸鹽(NO2-N) 的去除率，整個(gè)實(shí)驗(yàn)周期 40 d。

1.3 生物絮團(tuán)體積與形態(tài)觀察

通過(guò)使用 Imhoff管 (1000-0010, Nalgene) 進(jìn)行生物絮團(tuán)沉積量 (BFV) 的測(cè)定，每7 d進(jìn)行一次取樣，樣品體積為1 L，經(jīng)30 min沉降后記錄沉積物的體積量，每組取3個(gè)平行的平均值。采用徠卡DM2500全自動(dòng)顯微鏡拍照記錄生物絮團(tuán)的粒徑，實(shí)驗(yàn)具體步驟參照陳鵬飛[27]的研究方法。

1.4 生物絮團(tuán)基因組 DNA 提取

對(duì)采集的CN-15實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的水樣2 L用0.22 μm濾膜進(jìn)行真空抽濾，將濾膜置入5 mL無(wú)菌袋，于?80 ℃保存，絮團(tuán)DNA采用Ezup柱式細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒 (上海生工生物工程股份有限公司) 進(jìn)行提取，對(duì)提取后的DNA經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)其質(zhì)量和完整性，所有DNA均在?20 ℃下保存。

1.5 高通量測(cè)序

將提取的絮團(tuán)基因組DNA進(jìn)行16S rDNA可變區(qū)擴(kuò)增、純化與構(gòu)建測(cè)序文庫(kù)，并進(jìn)行Illumina MiSeq測(cè)序。對(duì)測(cè)序獲得的有效序列進(jìn)行OTU聚類(lèi)分析，使用RDP classifier 貝葉斯算法對(duì)97%相似水平的OTU代表序列進(jìn)行分類(lèi)學(xué)分析，并在各個(gè)水平統(tǒng)計(jì)每個(gè)樣本的群落組成。

2 結(jié)果

2.1 生物絮團(tuán)沉積量及其形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察

對(duì)照組的生物絮團(tuán)沉積量在整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間保持在 2 mL·L?1以下 (圖1)。實(shí)驗(yàn)組水體中的生物絮團(tuán)沉積量呈上升趨勢(shì)，14 d后均高于對(duì)照組且差異顯著 (P<0.05)；28 d 后基本保持穩(wěn)定，為 4～7 mL·L?1。在顯微鏡下 (400×) 觀察，生物絮團(tuán)平均直徑約100～300 μm，絮團(tuán)中充滿(mǎn)較多的絲狀體和細(xì)微顆粒 (圖2)。

圖1 實(shí)驗(yàn)期不同處理組的生物絮團(tuán)沉積量動(dòng)態(tài)變化Fig. 1 Dynamic changes of biofloc deposits in different groups during experimental period

圖2 生物絮團(tuán)的形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察圖Fig. 2 Morphology of biofloc under microscope

2.2 碳氮比對(duì)水質(zhì)因子的調(diào)控

水質(zhì)檢測(cè)結(jié)果顯示，對(duì)照組的溶解氧質(zhì)量濃度和pH均高于實(shí)驗(yàn)組且存在顯著差異 (P<0.05)，其中 CN-20 組的溶解氧僅為 0.21 mg·L?1，pH 為 7.01(表1)。表明添加碳源可以顯著降低養(yǎng)殖水體中的氨氮濃度 (P<0.05)，在實(shí)驗(yàn)第1—第18天，各組氨氮濃度均先升高后降低，養(yǎng)殖20 d后，各實(shí)驗(yàn)組的氨氮濃度顯著低于對(duì)照組并處于較低水平，40 d后 CN-15 組的氨氮水平最低，僅為 0.52 mg·L?1，氨氮去除率為76.7%；實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組的亞硝酸鹽濃度在養(yǎng)殖15 d后差異顯著，實(shí)驗(yàn)組顯著低于對(duì)照組 (P<0.05)，其中 CN-15和 CN-20組在 35 d后顯著下降，并維持在 0.48 和 0.42 mg·L?1，亞硝酸鹽去除率分別為64.4%和68.9%；添加碳源對(duì)總氮的影響較小，對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組總氮濃度無(wú)顯著差異(P>0.05，圖3)。在養(yǎng)殖期的第11—第25天，實(shí)驗(yàn)組的氨氮和亞硝酸鹽濃度大幅降低，這也再一次佐證通過(guò)添加碳源生成生物絮團(tuán)對(duì)養(yǎng)殖水體具有顯著的凈化效果。

表1 實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)不同處理組養(yǎng)殖水體的水質(zhì)參數(shù)Table 1 Water quality of aquaculture water bodies in different groups at the end of test

圖3 實(shí)驗(yàn)期不同處理組氨氮、亞硝酸鹽和總氮的動(dòng)態(tài)變化Fig. 3 Dynamic changes of mass concentration of ammonia-N,nitrite-N and total nitrogen in different groups during experimental period

2.3 細(xì)菌菌落結(jié)構(gòu)分析

對(duì)CN-15實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組進(jìn)行高通量測(cè)序。對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組中微生物群落在門(mén)水平上的分布情況見(jiàn)圖4。兩組樣品細(xì)菌共隸屬于15個(gè)菌門(mén)，其中變形菌門(mén)、擬桿菌門(mén)、放線菌門(mén)、綠彎菌門(mén)和Patescibacteria為優(yōu)勢(shì)菌門(mén)。其中變形菌門(mén)占比最多，在對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組中分別占43.58%和50.78%。對(duì)照組中的擬桿菌門(mén)、綠彎菌門(mén)、厚壁菌門(mén)、梭桿菌門(mén)和Dependentiae占比高于實(shí)驗(yàn)組，分別高出14.86%、1.88%、2.6%、2.13%和2.36%；而實(shí)驗(yàn)組 (CN-15) 中的變形菌門(mén)、放線菌門(mén)和Patescibacteria的占比高于對(duì)照組，分別高出7.2%、11.29%和5.73%。除纖維桿菌門(mén)和藍(lán)菌門(mén)只存在于對(duì)照組中 (占比0.34%)，其余菌門(mén)在兩組中均有一定占比。

圖4 對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組 (CN-15) 細(xì)菌門(mén)水平的分布情況Fig. 4 Distribution of bacterial phylum levels in control group and experimental group (CN-15)

在綱水平上，兩組樣品細(xì)菌主要隸屬于32個(gè)菌綱，其主要優(yōu)勢(shì)菌綱為γ-變形菌綱和擬桿菌綱，在對(duì)照組中分別占38.88%和35.38%，在實(shí)驗(yàn)組中分別占47.78%和19.53% (圖5)。此外，放線菌綱、厭氧繩菌綱、δ-變形菌綱在實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組中為次要優(yōu)勢(shì)菌綱。實(shí)驗(yàn)組中γ-變形菌綱、放線菌綱、纖細(xì)菌綱、Parcubacteria、綠彎菌綱的豐度顯著高于對(duì)照組，且Gracilibacteria、Parcubacteria、綠彎菌綱均為實(shí)驗(yàn)組特有菌綱；而對(duì)照組中的擬桿菌綱、厭氧繩菌綱、梭桿菌、Babeliae、α-變形菌綱、梭菌綱、芽孢桿菌綱和纖維桿菌綱高于實(shí)驗(yàn)組，纖維桿菌綱為對(duì)照組特有菌綱。

圖5 對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組 (CN-15) 細(xì)菌綱水平的分布情況Fig. 5 Distribution of bacterial class levels in control group and experimental group (CN-15)

屬水平上，兩組樣品共檢測(cè)出113個(gè)菌屬，實(shí)驗(yàn)組中主要可鑒定優(yōu)勢(shì)菌群為多核桿菌屬和沉積物桿狀菌屬，而對(duì)照組為腐敗螺旋菌屬、噬幾丁質(zhì)菌屬和擬桿菌屬。實(shí)驗(yàn)組中Ambiguous、多核桿菌屬、沉積物桿狀菌屬、Terrimonas、Nitrospira顯著高于對(duì)照組。對(duì)照組中擬桿菌屬、分支桿菌屬、海洋桿菌屬、Azospira、Permianibacter、Hypnocyclicus、Bacteriovorax、Bdellovibrio、Streptococcus等含量高于實(shí)驗(yàn)組，Parasutterella和Mucilaginibac-ter是對(duì)照組特有菌屬；而多核桿菌屬、Terrimonas、Haliscomenobacter和Leucobacter在實(shí)驗(yàn)組中含量較高 (圖6、圖7)。

圖6 對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組 (CN-15) 細(xì)菌屬水平的分布情況Fig. 6 Distribution of bacterial genus levels in control group and experimental group (CN-15)

圖7 對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組 (CN-15) 部分細(xì)菌屬水平差異圖Fig. 7 Difference of bacterial genus level between control group and experimental group (CN-15)

3 討論

3.1 不同碳氮比下溫室中華草龜池生物絮團(tuán)形成與水質(zhì)調(diào)控

生物絮體是由有機(jī)物和微生物組成的非均勻顆粒的聚集基質(zhì)[28]，通過(guò)添加碳源以增加碳氮比，刺激異養(yǎng)細(xì)菌的生長(zhǎng)，并使其利用總氮作為氮源以產(chǎn)生細(xì)菌蛋白[29]。隨著碳氮比的增加，生物絮團(tuán)形成并逐漸穩(wěn)定，并開(kāi)始進(jìn)行同步硝化、反硝化作用 (SND) 和除磷作用以調(diào)節(jié)水質(zhì)，將水體中的含氮化合物直接以氮氧化物或氮?dú)獾男问脚懦鯷30]。當(dāng)mC∶mN=15∶1時(shí)，對(duì)總氮、硝酸鹽和磷酸鹽的去除效果最佳[31]。同時(shí)，生物絮團(tuán)還具有促進(jìn)水產(chǎn)動(dòng)物生長(zhǎng)[32]、增強(qiáng)抗氧化功能[33]及降低飼料系數(shù)[34]等諸多功效，甚至可以增強(qiáng)水產(chǎn)動(dòng)物對(duì)常見(jiàn)水產(chǎn)致病菌的抗病性[35]，這使得生物絮團(tuán)技術(shù)在水產(chǎn)養(yǎng)殖行業(yè)得到了廣泛應(yīng)用。本研究同樣發(fā)現(xiàn)當(dāng)mC∶mN≥15時(shí)，對(duì)中華草龜池的水質(zhì)調(diào)控效果最佳，在mC∶mN≥10時(shí)能形成穩(wěn)定的生物絮團(tuán)，生物絮團(tuán)生成量隨碳氮比的增大而增多，當(dāng)碳氮比達(dá)到20∶1時(shí)生物絮團(tuán)的生成量與碳氮比為15∶1時(shí)差異不顯著(P>0.05)，但水面產(chǎn)生較多泡沫，溶解氧和pH更低。因此，可推斷當(dāng)碳氮比為15∶1時(shí)，溫室中華草龜池水體中形成了較為穩(wěn)定的生物絮團(tuán)，水體中氨氮、亞硝酸鹽含量較低。這與盧炳國(guó)等[9]對(duì)草魚(yú)池生物絮團(tuán)形成的研究結(jié)果類(lèi)似，而鄧吉朋等[36]發(fā)現(xiàn)：保持水體碳氮比為20∶1 時(shí)有利于斑節(jié)對(duì)蝦 (Penaeus monodon) 池生物絮團(tuán)的形成；孫盛明等[15]研究發(fā)現(xiàn)團(tuán)頭魴養(yǎng)殖水體中生物絮團(tuán)的碳氮比大于16時(shí)可有效調(diào)節(jié)水質(zhì)；Zhe 等[37]發(fā)現(xiàn)當(dāng)碳氮比為20時(shí)，生物絮團(tuán)能有效凈化水質(zhì)，促進(jìn)黃金鯽 (Carassius auratus) 生長(zhǎng)，提高飼料利用率，增強(qiáng)消化酶活力；國(guó)外針對(duì)生物絮團(tuán)中添加碳源以控制碳氮比使其達(dá)到最佳效果的研究同樣非常多，但針對(duì)不同物種，其最適比例也存在明顯差異。Mirzakhani等[38]發(fā)現(xiàn)當(dāng)碳氮比為15∶1時(shí)，生物絮團(tuán)系統(tǒng)對(duì)尼羅羅非魚(yú)的生長(zhǎng)性能、腸道組織結(jié)構(gòu)和免疫應(yīng)答最佳。由此可見(jiàn)，合理的碳氮比是形成生物絮團(tuán)并發(fā)揮其最佳效果的必要條件[27,39]。除碳氮比外，增氧曝氣也是生物絮團(tuán)形成的必要條件，人工曝氣的主要目的是維持生物絮團(tuán)的懸浮和微生物供氧所需。隨著實(shí)驗(yàn)進(jìn)行，水體中的溶氧量維持在較低水平，僅為 0.2～0.4 mg·L?1。這既與增氧泵功率較小有關(guān)，也與生物絮團(tuán)中大量微生物的耗氧有關(guān)。雖然人工曝氣量較小，但由于實(shí)驗(yàn)池水位較淺，加上中華草龜自身的爬行攪動(dòng)，使得生物絮團(tuán)始終能維持一定的懸浮狀態(tài)而未發(fā)生崩解。

3.2 中華草龜養(yǎng)殖水體生物絮團(tuán)細(xì)菌菌群結(jié)構(gòu)分析

高通量測(cè)序是一種低成本、更準(zhǔn)確的新一代測(cè)序技術(shù)，可以同時(shí)對(duì)含多種生物的微生物群落進(jìn)行鑒定[40-42]。本實(shí)驗(yàn)對(duì)碳氮比為15∶1的實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組的中華草龜養(yǎng)殖水體中生物絮團(tuán)的細(xì)菌組成進(jìn)行高通量測(cè)序。結(jié)果顯示，在門(mén)水平上，主要為變形菌門(mén)和擬桿菌門(mén)，這與日本對(duì)蝦 (P. japonicus) 養(yǎng)殖過(guò)程中生物絮團(tuán)微生物多樣性的結(jié)果類(lèi)似[43]。生物絮團(tuán)是一個(gè)以異養(yǎng)微生物為主體的團(tuán)聚物，因此其中有許多異養(yǎng)細(xì)菌在發(fā)揮作用，并在生物絮團(tuán)凈化水質(zhì)方面起主導(dǎo)作用，主要為變形菌門(mén)、擬桿菌門(mén)和放線菌門(mén)。養(yǎng)殖水體中變形菌門(mén)的種類(lèi)大都是共生細(xì)菌，主要功能是清除污水中的有機(jī)物，在養(yǎng)殖尾水以及一些廢水處理中發(fā)揮重要作用[44-47]。作為一種應(yīng)用廣泛的益生菌，擬桿菌 (Bacteroides) 可產(chǎn)生促進(jìn)養(yǎng)殖生物生長(zhǎng)的益生素[48]。放線菌門(mén)是一種常見(jiàn)的益生菌，王俊華等[49]研究發(fā)現(xiàn)放線菌可有效去除黑臭水體中的氨氮、磷酸鹽等污染物，有利于水生生物的生長(zhǎng)發(fā)育；同時(shí)，放線菌為分支狀菌絲體，其菌絲可以伸展到絮團(tuán)以外，從而形成生物絮團(tuán)的主要骨架結(jié)構(gòu)，在生物絮團(tuán)形成過(guò)程中發(fā)揮重要功能[1]；這也是實(shí)驗(yàn)組的生物絮團(tuán)生成量高于對(duì)照組的原因之一。除幾種主要優(yōu)勢(shì)菌門(mén)外，厚壁菌門(mén)也有一定占比，包括梭菌綱和芽孢桿菌綱，且對(duì)照組含量顯著高于實(shí)驗(yàn)組。在綱水平上，主要優(yōu)勢(shì)菌綱為變形菌綱、擬桿菌綱，其次是放線菌綱、厭氧繩菌綱。中華草龜養(yǎng)殖水體的生物絮團(tuán)中，變形菌在數(shù)量上占主導(dǎo)地位。已有研究表明，污水處理系統(tǒng)的生物絮團(tuán)中，變形菌綱占支配地位[50-51]，變形菌具有清除污水中有機(jī)物的作用[46]，能有效調(diào)節(jié)養(yǎng)殖水質(zhì)。與對(duì)照相比，實(shí)驗(yàn)組 (CN-15)放線菌綱的占比較大，這與放線菌組成生物絮團(tuán)的基本結(jié)構(gòu)這一特性有關(guān)。Gracilibacteria為實(shí)驗(yàn)組特有菌綱，隸屬于芽單胞菌門(mén)，在廢水處理中有一定的除磷功效[52]。在屬水平上，不動(dòng)桿菌屬和氣單胞菌屬是水產(chǎn)養(yǎng)殖中常見(jiàn)的條件致病菌，在實(shí)驗(yàn)組(CN-15) 的生物絮團(tuán)水體中，不動(dòng)桿菌屬占比為0.02%，氣單胞菌屬占比為0.09%，均小于對(duì)照組的0.65%和0.53%。Bacteroides和Azospira在對(duì)照組中的占比顯著高于實(shí)驗(yàn)組，Bacteroides是一類(lèi)以有機(jī)物為最終電子受體的細(xì)菌，該菌可利用水體中的多種有機(jī)物碳源進(jìn)行異養(yǎng)代謝反應(yīng)，產(chǎn)生琥珀酸、乙酸、甲酸、乳酸和丙酸等。Azospira是一類(lèi)兼性厭氧細(xì)菌，能利用水體中的多種碳源和氮源進(jìn)行代謝，進(jìn)行異化性硝酸鹽還原作用，在不良環(huán)境下形成胞素，同時(shí)分泌大量多糖，在水體中進(jìn)行反硝化作用。

總體來(lái)看，在中華草龜養(yǎng)殖中，添加碳源對(duì)草龜池生物絮團(tuán)的菌群結(jié)構(gòu)有一定影響，包括變形菌門(mén)、放線菌門(mén)和放線菌門(mén)等的占比，同時(shí)降低了假交替單胞菌屬 (Pseudoalteromonas) 和弧菌屬(Vibrio) 等條件致病菌的比例；生物絮團(tuán)菌群結(jié)構(gòu)隨碳氮比的不同會(huì)發(fā)生一定變化，關(guān)于不同微生物對(duì)水質(zhì)的調(diào)節(jié)機(jī)理、有益菌和致病菌的比例等系列問(wèn)題還需進(jìn)一步研究。