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低溫?;钸\(yùn)輸對海鱸魚應(yīng)激及品質(zhì)的影響

2022-08-17 05:56琪,梅俊,謝晶*
中國食品學(xué)報 2022年7期
關(guān)鍵詞:糖原溶解氧鱸魚

王 琪,梅 俊,謝 晶*

(1 上海海洋大學(xué)食品學(xué)院 上海 201306 2 食品科學(xué)與工程國家級實(shí)驗(yàn)教學(xué)示范中心(上海海洋大學(xué)) 上海 201306 3 上海水產(chǎn)品加工及貯藏工程技術(shù)中心(上海海洋大學(xué)) 上海 201306)

海鱸魚(Lateolabrax maculatus),屬硬骨魚綱、鱸形目、鱸魚種、鮨科,花鱸屬,是我國養(yǎng)殖海水鱸魚的主要品種[1]?;铘~運(yùn)輸時海鱸魚應(yīng)激性強(qiáng),在?;钸\(yùn)輸過程中受到環(huán)境脅迫會出現(xiàn)跳躍、撞擊、浮頭、側(cè)翻以及呼吸困難等行為,且其性兇猛、自身鱗片粗糙、背部鰭極其鋒利,極易造成個體間相互碰撞、引發(fā)機(jī)械損傷,從而使其生理代謝和免疫系統(tǒng)功能下降,導(dǎo)致運(yùn)輸存活率較低[2],限制了活魚銷售的市場規(guī)模。目前對于大菱鲆[3]、石斑魚[4]、大西洋鱈魚[5]等魚類的?;钸\(yùn)輸已有研究,而海鱸魚保活運(yùn)輸?shù)难芯繄蟮垒^少。

在魚類?;钸\(yùn)輸中,溫度是整個運(yùn)輸過程中重要的條件之一,適宜的運(yùn)輸溫度可以減少魚類對環(huán)境脅迫所引起的應(yīng)激反應(yīng)。目前研究表明,海鱸魚在低溫條件下會降低體內(nèi)酶的活性和新陳代謝速率,使其處于低溫休眠狀態(tài)后進(jìn)行短途(8 h)無水?;钸\(yùn)輸,可以提高魚的短途運(yùn)輸存活率[6]。范秀萍等[7]在珍珠龍膽石斑魚的?;钸\(yùn)輸中發(fā)現(xiàn),低溫有水運(yùn)輸可以減緩石斑魚在環(huán)境脅迫誘發(fā)的應(yīng)激反應(yīng),降低體內(nèi)轉(zhuǎn)氨酶的活性和血液中的激素水平,延長保活運(yùn)輸時間。為了實(shí)現(xiàn)海鱸魚長途運(yùn)輸?shù)漠a(chǎn)業(yè)需求,本研究考察低溫長時間有水保活運(yùn)輸對海鱸魚血液生化指標(biāo)和肌肉理化性質(zhì)的影響,以得出最佳有水?;罟に嚕瑸楹w|魚的?;钸\(yùn)輸提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

海鱸魚,購自上海當(dāng)?shù)厮a(chǎn)品市場。挑選體質(zhì)健康、無外傷、大小基本一致,平均體長約(39±1)cm,平均體重約(500±120)g 的鮮活海鱸魚。

1.2 設(shè)備與儀器

HS28A 全自動循環(huán)冷水機(jī),廣東海利集團(tuán);LX-100VTR 模擬運(yùn)輸振動臺,上海魯軒儀器設(shè)備廠;F2640 型多點(diǎn)溫度采集儀,美國Fluke 公司;Biophotometer RS-232 分光光度儀,德國EPPENDORF 公司;JPSJ-605F 溶解氧測定儀,上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司;GL-200 氨氮檢測儀,山東格林凱瑞精密儀器有限公司;S230 電導(dǎo)率儀,梅特勒-托利多METTLER。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 運(yùn)輸條件對海鱸魚運(yùn)輸存活率的影響

1.3.1.1 水溫對海鱸魚運(yùn)輸存活率的影響 選取大小、呼吸頻率一致的海鱸魚,將其禁食暫養(yǎng)24 h 后以3 ℃/h 的降溫速率緩慢降溫至7 個運(yùn)輸溫度(4,8,12,16,20,24,28 ℃),在鹽度15‰(海水鹽度)、溶解氧4~6 mg/L、pH 7.5~8.5、魚水比1∶10的條件下模擬運(yùn)輸72 h,測定存活率。

1.3.1.2 鹽度對海鱸魚運(yùn)輸存活率的影響 選取大小、呼吸頻率一致的海鱸魚,將其禁食暫養(yǎng)24 h 后以3 ℃/h 的降溫速率緩慢降溫至12 ℃,將海鱸魚轉(zhuǎn)移至7 個鹽度 (6‰,10‰,14‰,16‰,18‰,22‰,26‰)的水體中,在溶解氧4~6 mg/L、pH 7.5~8.5、魚水比1∶10 的條件下模擬運(yùn)輸72 h,測定存活率。

1.3.1.3 密度對海鱸魚運(yùn)輸存活率的影響 選取大小、呼吸頻率一致的海鱸魚,將其禁食暫養(yǎng)24 h 后以3 ℃/h 的降溫速率緩慢降溫至12 ℃,在鹽度16‰、溶解氧4~6 mg/L、pH 7.5~8.5 的條件下按照不同密度(魚水比分別為1∶2,1∶4,1∶6,1∶8,1∶10)模擬運(yùn)輸72 h,測定存活率。

1.3.1.4 暫養(yǎng)時間對海鱸魚運(yùn)輸存活率的影響選取大小、呼吸頻率一致的海鱸魚,分別暫養(yǎng)(0,12,24,36,48,60 h)后,以3 ℃/h 的降溫速率緩慢降溫至12 ℃,在鹽度16‰、魚水比1∶10~1∶8、溶解氧4~6 mg/L、pH 7.5~8.5 的條件下模擬運(yùn)輸72 h,測定存活率。

1.3.2 海鱸魚的包裝與運(yùn)輸 海鱸魚的禁食暫養(yǎng)時間為36 h,暫養(yǎng)期間魚水比1∶50,水溫20~22℃、鹽度16‰、溶解氧4~6 mg/L、pH 7.5~8.5。暫養(yǎng)后冷馴化,設(shè)置冷水機(jī)以3 ℃/h 速率將暫養(yǎng)池中水溫從20~22 ℃分別降至3 個運(yùn)輸溫度12,16 ℃和20 ℃,在魚水比1∶10~1∶8、鹽度16‰的條件下將海鱸魚裝入塑料袋,然后曝氣機(jī)空氣曝氣、扎緊袋口,置于振動臺上的大保溫箱內(nèi),室內(nèi)曝氣模擬運(yùn)輸72 h。以室溫下不運(yùn)輸?shù)暮w|魚作為對照組。運(yùn)輸過程[8]:B 級路面(80 km/h)1 h→A 級路面(100 km/h)3 h→B 級路面(80 km/h)1 h,分別在模擬運(yùn)輸?shù)?2,24,36,48,60,72 h 和運(yùn)輸結(jié)束恢復(fù)12 h 后隨機(jī)選取3 尾海鱸魚取樣,測定相關(guān)指標(biāo)。

1.4 指標(biāo)測定

1.4.1 水質(zhì)指標(biāo)測定 在運(yùn)輸?shù)拿總€測試點(diǎn)用離心管取100 mL 運(yùn)輸水體,測定水質(zhì)指標(biāo)。pH 值采用pH 計檢測;電導(dǎo)率采用電導(dǎo)率儀測定;總氨氮的測定采用納氏試劑法(GB 3097-1997 海水水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn));溶解氧使用溶解氧測定儀測定(單位為mg/L)。

1.4.2 血液生化指標(biāo)測定 取血方法:海鱸魚經(jīng)木棒敲擊致死,尾部靜脈取血后4 ℃靜置2 h,4℃,10 000 r/min 離心5 min,上清液即制備的血清,存放于-80 ℃冰箱,用于血液生化指標(biāo)的測定。

1.4.2.1 皮質(zhì)醇、應(yīng)激蛋白質(zhì)量濃度 采用魚皮質(zhì)醇(Cortisol,COR)和魚熱應(yīng)激蛋白(Heat shock proteins,HSP)ELISA 試劑盒(南京建成生物工程研究所)測定。

1.4.2.2 血糖、谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶和乳酸脫氫酶 分別采用葡萄糖(Glucose,GLU)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(Aspartate aminotransferase,AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(Alanine aminotransferase,ALT) 和乳酸脫氫酶(Lactate dehydrogenase,LDH)試劑盒(南京建成生物工程研究所)測定。

1.4.3 肌肉理化指標(biāo)測定 取背部肌肉,用蒸餾水沖洗干凈,濾紙吸干肌肉表面水分,用于肌肉指標(biāo)的測定。

1.4.3.1 總蛋白、乳酸和肌糖原 分別采用總蛋白(Total protein,TP)、乳酸(Lactate,LD)和糖原(Glycogen,Gly)試劑盒(南京建成生物工程研究所)測定。

1.4.3.2 質(zhì)構(gòu) 選取海鱸魚背部肌肉 (20 mm×15 mm×10 mm),用質(zhì)構(gòu)儀分析其硬度、彈性和咀嚼性。測試條件:測試前速率3 mm/s,測試速率1 mm/s,測試后速率1 mm/s;壓縮程度50%;停留間隔5 s;探針類型P/5。隨機(jī)挑選2 尾海鱸魚,每條魚取背部肌肉3 塊,每塊重復(fù)測量1 次,取平均值。

1.4.3.3 持水力 取5 g 魚肉塊(M,g),用濾紙包裹后置離心管中,6 000 r/min 離心5 min,瀝干表面水分稱量(m,g),重復(fù)3 次,取平均值。

1.4.3.4 pH 值 準(zhǔn)確稱量2 g 魚肉于燒杯中,加0.85%生理鹽水18 mL,均質(zhì)后5 000 r/min 離心2 min,上清液pH 值使用pH 計測定。

1.5 數(shù)據(jù)處理

應(yīng)用SPSS 19.0 軟件對試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理,采用Origin 軟件作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 溫度、鹽度、魚水比和暫養(yǎng)時間對海鱸魚運(yùn)輸存活率的影響

不同運(yùn)輸條件對海鱸魚運(yùn)輸存活率的影響見圖1。

圖1 溫度(a)、鹽度(b)、魚水比(c)和暫養(yǎng)時間(d)對海鱸魚運(yùn)輸存活率的影響Fig.1 Effects of temperature (a),salinity (b),fish to water ratio (c) and temporary culture time (d)on transport survival rate of sea bass

水溫較高時魚體新陳代謝旺盛,容易產(chǎn)生有害代謝物;水溫過低時影響其生命活動相關(guān)酶的活性[9-10]。海鱸魚在溫度12 ℃的水中進(jìn)行模擬運(yùn)輸時,?;?2 h 的存活率為100%,即運(yùn)輸成活率最高(圖1a)。4 ℃和28 ℃條件下運(yùn)輸24 h 的存活率分別為20%和35%,出現(xiàn)大批量死亡,表明過高或過低的溫度均影響海鱸魚生命活動。水溫4~8 ℃時,海鱸魚新陳代謝較低,呼吸頻率較低,建議采用無水?;疃掏具\(yùn)輸[6]。長途運(yùn)輸?shù)倪m宜水溫為12~20 ℃,最佳運(yùn)輸溫度為12 ℃。

當(dāng)鹽度過高或過低時,海鱸魚出現(xiàn)劇烈游動、撞擊、掙扎等應(yīng)激反應(yīng),若在此狀態(tài)下繼續(xù)模擬運(yùn)輸,應(yīng)激程度超出海鱸魚機(jī)體所承受的閾值,機(jī)體發(fā)生咧腮死亡,說明海鱸魚對高鹽和低鹽的耐受力不強(qiáng)。用鹽度16‰的水體運(yùn)輸,72 h 時存活率為98%,此時存活率最高(圖1b)。在鹽度為14‰和18‰時,模擬運(yùn)輸,72 h 時存活率為95%。說明海鱸魚最佳運(yùn)輸鹽度為16‰。

由圖1可知,模擬?;钸\(yùn)輸至12 h 時,魚水比為1∶6,1∶8 和1∶10 的存活率均為100%。魚水比為1∶10 的運(yùn)輸條件下模擬運(yùn)輸至72 h,存活率為98%。運(yùn)輸結(jié)束恢復(fù)12 h 后,存活率為95%(圖1c)。海鱸魚的運(yùn)輸存活率隨魚水比的減小而升高。運(yùn)輸結(jié)束后海鱸魚在新鮮海水中恢復(fù)時,有個體出現(xiàn)死亡,可能是因海鱸魚運(yùn)輸過程中受到機(jī)械損傷,加劇其應(yīng)激反應(yīng),導(dǎo)致運(yùn)輸存活率下降[2]。也可能是魚水比大,導(dǎo)致水體中的氨氮等代謝物過高,對魚鰓及肝臟造成不可逆損傷,導(dǎo)致魚類氨氮中毒而亡[11]。

由圖1可知,暫養(yǎng)時間從0 h 延長至36 h,海鱸魚的運(yùn)輸存活率逐漸升高。暫養(yǎng)時間從36 h 延長至60 h 時,海鱸魚的運(yùn)輸存活率開始逐漸下降,海鱸魚適宜的暫養(yǎng)時間為36 h(圖1d)。適當(dāng)延長暫養(yǎng)時間可以使海鱸魚排泄出體內(nèi)大量的代謝物質(zhì)[12],從而減緩后續(xù)運(yùn)輸過程中水質(zhì)的惡化。暫養(yǎng)時間的過度延長,因禁食暫養(yǎng)而導(dǎo)致魚體能量攝入不足,機(jī)體免疫能力下降,存活率下降。

2.2 低溫?;钸\(yùn)輸對水質(zhì)指標(biāo)的影響

隨保活時間的延長,水質(zhì)逐漸惡化,海鱸魚在低溫運(yùn)輸條件下對水體指標(biāo)的影響見圖2。

圖2 溫度對保活運(yùn)輸水體中pH 值(a)、溶解氧(b)、總氨氮(c)與電導(dǎo)率(d)的影響Fig.2 Effects of temperature on pH value(a),dissolved oxygen (b),total ammonia nitrogen (c)and electrical conductivity (d) in water for keeping alive transportation

如圖2a 所示,整個?;钸\(yùn)輸過程中,水體中的pH 值維持在7.4~8.0 之間,呈先降低后升高的趨勢。12 ℃與16 ℃組無顯著性變化(P>0.05)。

有研究表明,水體中的溶解氧是影響水產(chǎn)品新陳代謝中有氧代謝的主要限制因素[13]。隨著?;钸\(yùn)輸時間的延長,溶解氧水平逐漸下降,?;钸\(yùn)輸至72 h 時,水體中溶解氧在3.7~4.1 mg/L (圖2b)。Sun 等[14]研究表明大口黑鱸在溶解氧含量過低的環(huán)境下加速其肝臟的氧化應(yīng)激,甚至導(dǎo)致機(jī)體死亡。12 ℃組中水體溶解氧水平略高于其它兩組,無顯著性差異變化。

溫度作為影響魚類生命活動及代謝程度的最主要因素之一[7],與魚體代謝能力成正比。隨著保活時間的延長,魚體排泄物和其體表分泌的蛋白黏液增加,導(dǎo)致水體中氨氮水平過高,容易引起魚類氨氮中毒[15-16],由圖2c 可明顯看出隨著?;钸\(yùn)輸時間的延長,水體中氨氮水平顯著升高。運(yùn)輸72 h 后,12 ℃的水體中氨氮水平最低。

電導(dǎo)率主要反映水體中的離子濃度,12~20℃運(yùn)輸條件下水體中電導(dǎo)率呈現(xiàn)緩慢上升趨勢(圖2d),且無顯著性差異。其中在20 ℃的水體中離子濃度增加的最快,說明溫度越高,?;钸\(yùn)輸水體中的離子濃度越高,魚體的新陳代謝越快。

2.3 低溫保活運(yùn)輸對海鱸魚應(yīng)激的影響

血液生化指標(biāo)的變化反映動物應(yīng)激程度。低溫?;钸\(yùn)輸對海鱸魚COR、GLU、HSP、LDH、ALT和AST 的影響見表1。

12復(fù)恢ABf 192.33±5.31 Bc 216.66±7.03 BCb 204.33±4.64 Ab 3.56±0.04 Bb 3.06±0.01 Ch 1.43±0.01 Ab 232.66±2.05 Ab 259.16±1.43 Ab 261.66±3.09 Aa 273.36±5.92 Bg 934.97±7.76 Ch 706.47±2.81 Aa 50.33±1.24 BCa 53.83±1.31 Cb 59.07±0.89 Ab 106.17±1.43 Bb 97.6±1.97 Cbc 119.33±4.11化變的標(biāo)指化生清血、后前輸運(yùn)活保下件條溫低在魚鱸海1表The changes of blood biochemical indexes of Lateolabrax maculatus before and after transportation at low temperatures Table 1 /h間時輸運(yùn)活保別組72 60 48 36 24 12組照對Ag 348.33±18.73 Ac 267.66±9.39 Ae 216.33±2.86 Aef 197.67±6.18 Ad 236.17±9.05 Ab 288.06±3.01 a 165.67±8.58 12 ℃Af 317.06±16.17 Bf 299.33±6.18 Ab 198.33±6.94 Bd 261.66±2.05 Be 279.66±7.93 Bg 337.16±4.32 16 ℃Ae 338.33±4.78 Bd 306.66±5.43 Ab 210.66±10.62 Cc 288.66±5.73 Ce 324.06±3.65 Cf 365.03±7.84 20 ℃Ad 5.26±0.05 Af 6.92±0.05 Ag 7.84±0.03 Ae 6.17±0.01 Af 6.89±0.04 Ac 4.78±0.02 a 1.31±0.02 12 ℃Bc 4.51±0.02 Bh 6.14±0.04 Bg 7.06±0.01 Bf 6.47±0.02 Be 6.37±0.01 Bd 5.16±0.01 16 ℃Cg 1.66±0.08 Cf 1.95±0.01 Ce 3.24±0.04 Cd 7.86±0.01 Cc 5.24±0.03 Cb 5.58±0.01 20 ℃Ac 262.33±3.39 Ad 307.66±3.09 Ah 412.66±2.86 Ag 394.2±2.26 Af 381.33±2.05 Ae 329.33±2.49 a 223.33±7.93 12 ℃Bc 281.33±3.39 Bf 418.16±1.84 Bc 282.06±3.03 Be 402.66±3.29 Bf 425.33±4.02 Bd 352.33±2.62 16 ℃Bb 280.33±2.05 Cc 393.16±1.92 Cd 463.66±2.05 Ce 502.1±3.08 Bd 431.66±2.49 Cc 387.33±2.49 20 ℃Ac 582.80±4.85 Abc 530.25±0.73 Ac 552.38±1.75 Ab 422.30±1.68 Ac 636.19±3.72 Ab 529.66±4.64 a 283.07±5.62 12 ℃Bf 1147.92±29.53 Bb 481.66±3.08 Be 440.90±4.78 Bd 901.47±5.48 Bc 838.04±2.49 Ab 498.64±2.03 16 ℃Cg 891.94±2.86 Cf 723.36±3.33 Ce 1029.47±4.67 Cd 618.33±5.31 Cc 978.77±3.44 Bb 755.80±3.84 20 ℃Acd 66.5±1.77 Ab 62.66±1.24 Ad 72.26±5.34 Abc 65.34±2.86 Acd 67.07±1.55 Abc 64.07±0.74 a 51.83±0.84 12 ℃Ab 63.46±1.11 Ba 53.33±1.24 Bb 63.73±1.31 Bd 74.33±1.69 Ac 69.33±2.05 Ab 65.2±0.99 16 ℃Be 76.06±2.13 Ba 50.5±1.22 Cbc 59.66±1.69 Ac 62.06±0.73 Ad 65.33±1.24 Bb 59.17±0.85 20 ℃Ae 145.33±2.05 Af 178.33±1.69 Ab 106.17±0.62 Ac 116.2±2.35 Ae 146.26±0.89 Ad 140.33±1.24 a 91.71±2.10 12 ℃Af 150.66±3.09 Be 160.66±3.39 Bb 99.66±3.85 Bc 125.13±0.83 Bd 139.16±0.62 Bc 124.06±2.06 16 ℃Bf 161.66±2.86 Ce 150.66±4.49 Cc 124.06±0.89 Ab 115.66±2.05 Cd 132.66±4.10 Cb 115.3±2.87 20 ℃。同)。下(P<0.05著顯異差示表母字同不注標(biāo)標(biāo)上列一),同(P<0.05著顯異差示表母字同不注標(biāo)標(biāo)上行一”,同差準(zhǔn)標(biāo)±數(shù)均標(biāo)指-1 COR/ng·L-1·L GLU/mmol-1·L HSP/ng-1·L LDH/U-1·L ALT/U-1·L AST/U“平為示表據(jù):數(shù)注

當(dāng)魚類受到環(huán)境脅迫時會出現(xiàn)一系列應(yīng)激反應(yīng),首先是神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)作出初級反應(yīng),通過下丘腦-垂體-腎間組織軸促進(jìn)腎上腺皮質(zhì)激素的合成及釋放,此時皮質(zhì)醇(COR)水平迅速上升[17],因此血清COR 水平常作為應(yīng)激反應(yīng)的靈敏指標(biāo)之一[18]。由表1可知,在整個?;钸\(yùn)輸過程中,與對照組相比,隨著?;顣r間的延長,海鱸魚的血清COR 水平顯著升高(P<0.05),其中在運(yùn)輸12 h 和72 h 后其血清COR 處于最高水平,可能是由于機(jī)體不適應(yīng)環(huán)境的改變以及運(yùn)輸過程中的機(jī)械損傷誘發(fā)的應(yīng)激反應(yīng),這與Nie 等[3]和Vanderzwalmen等[19]的研究結(jié)果相一致。運(yùn)輸結(jié)束恢復(fù)12 h 后,血清COR 顯著下降 (P<0.05),未恢復(fù)至對照組狀態(tài),可能是由于保活運(yùn)輸結(jié)束后恢復(fù)時間太短,魚體應(yīng)激反應(yīng)未完全恢復(fù)[19]。劉驍?shù)萚20]研究團(tuán)頭魴在無水保活條件下血清COR 水平顯著升高,?;罱Y(jié)束24 h 后未降至對照組狀態(tài),與本試驗(yàn)結(jié)果相似。在12,16 ℃和20 ℃3 個處理組中,較高溫組的血清COR 水平顯著高于較低溫組(P<0.05),這可能是由于較高溫組的機(jī)體新陳代謝較旺盛,水質(zhì)惡化較快,對環(huán)境及水質(zhì)的敏感度較高,因此其COR 水平高于較低溫組[7]。有研究發(fā)現(xiàn)COR 的分泌能夠促進(jìn)糖原的生成和脂肪的降解,釋放氨基酸、葡萄糖及脂肪酸,同時伴有能量的生成,供給機(jī)體能量的消耗,從而減緩魚類在環(huán)境脅迫誘導(dǎo)下的應(yīng)激反應(yīng)[21]。

魚類在出現(xiàn)應(yīng)激反應(yīng)時,可以通過糖異生作用提高體內(nèi)的葡萄糖(GLU)水平,從而維持體內(nèi)的GLU 平衡[22]。在?;钸\(yùn)輸過程中,血清GLU 水平呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢,運(yùn)輸結(jié)束恢復(fù)12 h后未回至對照組狀態(tài),其中溫度12 ℃下?;钸\(yùn)輸結(jié)束恢復(fù)12 h 后的GLU 水平最高 (為對照組的2.72 倍),這可能是海鱸魚在較低溫條件下其代謝水平和能量消耗較低,從而導(dǎo)致血清GLU 處于較高的水平,也可能是由于在機(jī)體受到刺激后,COR水平升高,導(dǎo)致機(jī)體對葡萄糖的利用率下降[22],加之COR 的分泌促進(jìn)糖原的生成,從而使其血液中GLU 水平升高。隨著?;顣r間的延長,12,16 ℃和20 ℃3 個處理組中,20 ℃組的海鱸魚血清GLU水平顯著低于12 ℃(P<0.05),可能是保活過程中由于運(yùn)輸中的機(jī)械損傷、饑餓以及水體質(zhì)量的下降,導(dǎo)致魚體出現(xiàn)脅迫應(yīng)激,其體內(nèi)能量代謝增強(qiáng),且溫度越高魚體代謝速率和能量消耗越高,糖原的分解及消耗使其GLU 水平在運(yùn)輸60 h 時出現(xiàn)下降,這與范秀萍等[7]對珍珠龍膽石斑魚的代謝研究結(jié)果一致。然而,有研究發(fā)現(xiàn),由于魚種類的不同,其體內(nèi)的代謝機(jī)制和對環(huán)境脅迫程度的適應(yīng)性存在差異,無水?;詈笈c保活過程中相對比,魚類體內(nèi)的GLU 水平顯著降低[23]。

魚類在非應(yīng)激狀態(tài)時,機(jī)體內(nèi)的應(yīng)激蛋白(HSP)常保持一定水平,當(dāng)發(fā)生應(yīng)激反應(yīng)時,應(yīng)激蛋白是魚類機(jī)體自身誘導(dǎo)產(chǎn)生的具有保護(hù)細(xì)胞免受機(jī)體組織和器官受損的一類蛋白質(zhì),可以激活超氧化物歧化酶、過氧化氫酶等,抑制線粒體膜的去極化以減緩細(xì)胞的損傷[9]。由表1可知,在整個保活運(yùn)輸過程中,海鱸魚體內(nèi)HSP 合成量呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢,這與吳波等[24]對石斑魚溫度及鹽度的優(yōu)化結(jié)果一致。12,16 ℃和20 ℃3 個?;钸\(yùn)輸溫度處理組間的HSP 水平差異性顯著(P<0.05),溫度越高其體內(nèi)合成量越高。在保活運(yùn)輸結(jié)束恢復(fù)12 h 后其體內(nèi)HSP 水平顯著下降 (P<0.05),12 ℃組恢復(fù)至對照組水平,其余兩組均未恢復(fù),可能是由于海鱸魚肝臟細(xì)胞的自身保護(hù)機(jī)制受損,短期無法恢復(fù)至正常狀態(tài),這可能是導(dǎo)致較高溫組運(yùn)輸存活率下降的原因之一[20]。

乳酸脫氫酶(LDH)是糖代謝中催化丙酮酸轉(zhuǎn)化成乳酸的一類酶,當(dāng)海鱸魚運(yùn)輸至72 h 時,體內(nèi)的LDH 活性顯著升高(P<0.05),說明在?;钸\(yùn)輸期間機(jī)體參與無氧呼吸,這與尤宏爭等[25]研究結(jié)果一致。12,16 ℃和20 ℃3 個處理組中,溫度越高,與之相對應(yīng)的LDH 活性越高。運(yùn)輸結(jié)束恢復(fù)12 h 后,在水溫12 ℃的運(yùn)輸條件下恢復(fù)至對照組狀態(tài),其余兩組均顯著高于對照組(P<0.05),說明水溫12 ℃進(jìn)行?;钸\(yùn)輸時,對海鱸魚的心肌功能影響較小,可正常有氧呼吸,這與朱乾峰等[12]的研究結(jié)果一致。

谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)是魚類重要的轉(zhuǎn)氨酶,正常情況下這兩種轉(zhuǎn)氨酶的活性較低且較穩(wěn)定,當(dāng)肝臟、心臟等器官受到損傷或病變時,血液中的ALT 和AST 含量顯著升高[18,26]。在?;钸\(yùn)輸前期,海鱸魚血清ALT 和AST 顯著上升(P<0.05)。在?;钸\(yùn)輸中期(12~60 h)變化相對較平穩(wěn),ALT 水平在?;钸\(yùn)輸72 h 達(dá)到最高值,AST 水平在保活運(yùn)輸60 h 達(dá)到最高值,表明運(yùn)輸過程中的脅迫應(yīng)激對魚的肝臟有一定程度損傷[27]。?;钸\(yùn)輸至72 h、水溫12 ℃和16 ℃的低溫條件下酶活性降低,顯著低于20 ℃組(P<0.05)。?;钸\(yùn)輸結(jié)束恢復(fù)12 h 后兩種轉(zhuǎn)氨酶活性顯著下降(P<0.05)。除20 ℃組外,其余兩組ALT 和AST 均恢復(fù)至對照組水平,這表明12~16 ℃低溫?;钸\(yùn)輸不會給機(jī)體造成肝臟組織損傷,較低溫?;钸\(yùn)輸比高溫?;钸\(yùn)輸存活率高。

2.4 低溫?;钸\(yùn)輸對海鱸魚品質(zhì)的影響

保活運(yùn)輸過程中魚類因受到環(huán)境脅所誘發(fā)的應(yīng)激反應(yīng)而對其肌肉品質(zhì)產(chǎn)生一定的影響[28]。低溫?;钸\(yùn)輸中海鱸魚肌肉理化指標(biāo)的變化見表2。在?;钸\(yùn)輸前期,肌肉中總蛋白(TP)和乳酸(LD)水平顯著上升,糖原(Gly)顯著下降(P<0.05),之后隨著?;顣r間的延長乳酸緩慢變化,總蛋白和肌糖原水平顯著降低(P<0.05),這與王學(xué)娟等[29]對波紋巴非蛤的研究結(jié)論一致。在運(yùn)輸結(jié)束恢復(fù)12 h 后,3 個處理組的乳酸恢復(fù)至對照組狀態(tài)且無顯著性差異(P>0.05),16 ℃和20 ℃兩個處理組總蛋白和糖原含量均恢復(fù)至對照組狀態(tài),12 ℃組未恢復(fù)至對照組狀態(tài)。保活運(yùn)輸前、后海鱸魚肌肉pH 值、保水性和彈性無顯著性變化(P>0.05),且不同溫度處理組在恢復(fù)12 h 后無顯著性差異。在運(yùn)輸結(jié)束恢復(fù)12 h 后硬度和咀嚼性顯著降低(P<0.05)。

12復(fù)恢Ag 506.06±1.02 Bh 525.14±4.27 Ch 550.83±2.11 Ad 1.55±0.02 Bb 1.60±0.01 Ba 1.62±0.01 Aa 0.51±0.007 Aa 0.51±0.002 Ab 0.52±0.004 ABab 6.52±0.01 Bab 6.54±0.01 Aa 6.49±0.02 Aabc 5.75±0.10 Bab 5.39±0.19 Aa 5.86±0.36 Acd 8 093±47 Abc 8 240±117 Abc 8 271±67 Aa 0.52±0.04 Abcd 0.54±0.01 Bcd 0.66±0.03 ABc 1 341±65 Ac 1 221±33 Bc 1 461±122化變的標(biāo)指化理肉肌、后前輸運(yùn)活保下件條溫低在魚鱸海2表The changes of physicochemical indexes of Lateolabrax maculatus muscle before and after transportation at low temperatures Table 2 間/h時輸運(yùn)活保別組標(biāo)指72 60 48 36 24 12組照對Af 450.97±0.51 Ae 486.50±1.78 Ad 514.77±2.94 Aa 538.03±2.44 Ac 567.74±1.08 Ab 572.82±1.77 a 540.14±1.03 12 ℃-1·mL TP/μg Bg 334.31±3.42 Bf 472.15±1.06 Be 493.43±2.31 Bd 506.76±1.78 Ac 563.70±4.25 Bb 606.40±2.45 16 ℃Cg 503.06±2.88 Cf 515.39±2.57 Ce 526.07±4.04 Cd 576.12±2.91 Bc 588.60±2.22 Cb 631.81±2.29 20 ℃Af 1.26±0.02 Ac 1.17±0.03 Ad 1.54±0.03 Ac 1.16±0.01 Ab 0.86±0.01 Ae 1.06±0.02 a 1.65±0.19 12 ℃-1 Gly/mg·g Bd 1.40±0.03 Bf 1.13±0.03 Bd 1.43±0.02 Be 1.32±0.01 Bc 1.52±0.02 Bb 1.59±0.02 16 ℃Bb 1.44±0.04 Cf 1.05±0.01 Ce 1.26±0.02 Cd 1.07±0.03 Cc 1.38±0.0 1 Cb 1.44±0.01 20 ℃Aa 0.53±0.009 Ac 0.52±0.003 Ac 0.48±0.008 Ad 0.48±0.005 Ac 0.49±0.001 Ab 0.56±0.001 a 0.51±0.007 12 ℃白-1 蛋·g LD/mmol Be 0.50±0.002 Bf 0.49±0.004 Be 0.50±0.003 Bd 0.54±0.003 Bc 0.56±0.002 Bb 0.65±0.001 16 ℃Cf 0.49±0.018 Ce 0.46±0.016 Cd 0.58±0.06 Cd 0.58±0.004 Cc 0.60±0..095 Cb 0.53±0.036 20 ℃Acd 6.64±0.02 Acd 6.69±0.01 Acd 6.67±0.02 Ad 6.66±0.01 Abcd 6.60±0.09 Aabc 6.59±0.03 a 6.51±0.04 12 ℃pH 值Bd 6.77±0.03 Ad 6.72±0.01 Ac 6.62±0.01 Aabc 6.57±0.04 Abc 6.55±0.03 Bd 6.72±0.01 16 ℃Bb 6.75±0.01 Ba 6.51±0.07 Aab 6.60±0.17 Aab 6.63±0.06 Aa 6.45±0.11 Aa 6.54±0.07 20 ℃Aab 5.95±0.24 Ad 8.86±0.16 Abc 6.67±0.79 Ac 7.22±0.73 Aab 6.04±0.19 Aa 5.65±0.18 a 5.66±0.23 12 ℃/%力水持Bc 9.41±0.76 Bc 9.95±0.18 Abc 8.28±0.73 Ac 10.11±2.28 Bbc 8.75±0.25 Bd 12.17±0.20 16 ℃Aab 6.60±0.33 Acd 8.44±0.24 Aab 6.85±0.47 Abc 7.27±1.09 Bcd 7.98±0.91 Cd 8.77±0.16 20 ℃Acd 8 029±205 Acd 8 140±110 Ad 7 821±282 Ac 8 267±112 Ab 8 689±163 Ab 8 617±99 a 9 256±45 12 ℃度硬Ad 7 910±89 Abc 8 340±163 Abcd 8 169±132 Ad 8 035±69 Abc 8 344±255 Ab 8 363±113 16 ℃Abc 8 290±302 Abc 8 375±421 Ac 7 846±175 Abc 8 088±116 Abc 8 143±251 Ab 8 599±218 20 ℃Aa 0.51±0.02 Ab 0.74±0.05 Aa 0.55±0.04 Ab 0.73±0.05 Aa 0.53±0.04 Aa 0.48±0.03 abc 0.51±0.02 12 ℃性彈Aab 0.49±0.01 Bd 0.58±0.04 Acd 0.57±0.01 Ae 0.71±0.02 Aab 0.49±0.02 Aa 0.47±0.04 16 ℃Aab 0.56±0.05 Bbc 0.60±0.01 Abc 0.60±0.03 Ad 0.67±0.01 Bd 0.68±0.02 Aa 0.50±0.06 20 ℃Ac 1 269±22 Ab 1 589±51 Aa 1 793±115 Ab 1 551±132 Ab 1 530±93 Ac 1 301±106 a 1 892±25 12 ℃性嚼咀Abc 1 331±96 Aab 1 634±283 ABab 1 597±49 Aab 1 623±168 Aab 1 597±125 ABc 1 262±60 16 ℃Ab 1 163±121 Ac 1 494±148 Bc 1 477±133 Ac 15 557±59 Ac 1 539±162 Bb 1 065±68 20 ℃

海鱸魚在饑餓條件下?;钸\(yùn)輸時,機(jī)體為了維持體內(nèi)能量代謝平衡,主要靠分解體內(nèi)儲存的糖原、脂肪及蛋白質(zhì)獲得能量[30]。在?;钸\(yùn)輸初期,由于低溫條件下魚體需要分解糖原抵御寒冷,較低溫組的肌糖原比較高溫組下降更顯著。隨著?;顣r間的延長,較高溫組的海鱸魚因應(yīng)激反應(yīng)較強(qiáng)烈,其體內(nèi)糖原被分解時機(jī)體無氧呼吸導(dǎo)致乳酸水平上升,糖原被分解為葡萄糖,葡萄糖可繼續(xù)被分解為水和二氧化碳,導(dǎo)致肌肉中的水分含量增加,從而降低魚肉的硬度和咀嚼性[31]。隨著機(jī)體內(nèi)糖原逐漸被消耗,肌肉中蛋白質(zhì)含量出現(xiàn)下降趨勢[32]。機(jī)體在較低溫條件下(12 ℃)代謝程度較低,能量的消耗比較高溫組小[33],這也是較低溫條件可延長?;顣r間的原因之一。持水力是指肌肉對水的保持能力,主要與機(jī)體蛋白質(zhì)的三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)和變性程度相關(guān)[34]。低溫?;钸\(yùn)輸前、后海鱸魚持水力無顯著性變化,表明海鱸魚肌肉中的蛋白質(zhì)網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)未被破壞,不會發(fā)生蛋白降解,這與劉驍?shù)萚20]的研究結(jié)果相一致。

3 結(jié)論

整個保活運(yùn)輸過程中,保活運(yùn)輸溫度越高,氨氮濃度越高,水體溶解氧水平越低。本試驗(yàn)中,12℃組水質(zhì)惡化程度最小。20 ℃?;钸\(yùn)輸組海鱸魚的機(jī)體活躍程度較高,呼吸代謝旺盛,導(dǎo)致其應(yīng)激響應(yīng)程度最高,然而,海鱸魚體內(nèi)激素水平過高會造成生理代謝和免疫系統(tǒng)紊亂,導(dǎo)致運(yùn)輸存活率下降。與對照組相比,20 ℃組在運(yùn)輸結(jié)束恢復(fù)12 h 后,血清HSP 水平以及ALT、AST 和LDH 酶活性顯著上升。12 ℃組在運(yùn)輸結(jié)束恢復(fù)12 h 后海鱸魚血清HSP 水平以及ALT、AST 和LDH 酶活性無顯著性變化,這表明機(jī)體應(yīng)激響應(yīng)基本消除。海鱸魚在12 ℃低溫條件下代謝較低,對環(huán)境脅迫應(yīng)激的耐受力較強(qiáng),運(yùn)輸存活率最高,且運(yùn)輸前、后血清生化和肌肉理化指標(biāo)基本恢復(fù)至未處理組狀態(tài)。?;钸\(yùn)輸結(jié)束恢復(fù)12 h 后各組與對照組相比,除硬度和咀嚼性出現(xiàn)下降,總蛋白、肌糖原、乳酸、pH 值、持水力和彈性均無顯著性變化。綜上,海鱸魚長途?;钸\(yùn)輸?shù)耐扑]工藝為:在?;钸\(yùn)輸前禁食暫養(yǎng)36 h,以3 ℃/h 的降溫速率將運(yùn)輸水溫降至運(yùn)輸溫度12 ℃,在鹽度16‰,魚水比1∶10~1∶8 的條件下?;钸\(yùn)輸至72 h,海鱸魚存活率為100%,恢復(fù)12 h 后的存活率為98%。

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