李楚翹, 王天宇, 尹 穎, 陳安良, 張心齊*,, 陳旭華

(1. 浙江農(nóng)林大學(xué) 浙江省綠色農(nóng)藥 2011 協(xié)同創(chuàng)新中心，杭州 311300；2. 浙江省樂清市自然資源和規(guī)劃局森林病蟲防治中心，浙江 樂清 325600)

土壤鹽害是威脅全球農(nóng)林業(yè)生產(chǎn)的最主要的非傳染性病害之一[1-2]。目前，全球已有約20%(6.2×107hm2) 的耕地受到鹽害影響，并以每年1%～2%的速度遞增[3-4]。可溶性鹽的積累可改變土壤的物理結(jié)構(gòu)、生化性質(zhì)和營養(yǎng)組成，在短時間內(nèi)即對植物形成滲透脅迫、離子脅迫和氧化脅迫，同時抑制根際有益微生物的多樣性和活性，造成植物生產(chǎn)能力下降或生態(tài)功能喪失[2-7]。相比于物理浸提、化學(xué)中和以及抗性選育等方法，耐鹽生防菌被認為是提升鹽土地力，協(xié)助植物抵御病害和鹽害多重脅迫，促進植物生長最經(jīng)濟有效的工具[3-7]。其中，鹽生植物的根際細菌，兼具耐鹽和生防活性，近年來逐漸受到關(guān)注[7-8]。據(jù)報道，在鹽脅迫條件下，耐鹽植物根際土壤中的微生物量會隨著種植時間的延長而增加，并顯著高于非根際土壤，而有益微生物在根際和根內(nèi)的富集和定殖是鹽生植物適應(yīng)鹽脅迫的主要機制之一，因此，鹽生植物的根被認為是分離耐鹽生防菌的天然菌種庫[7,9]。然而，鹽生植物雖然占到全球植物多樣性的1%，但進行根際細菌資源挖掘的鹽生植物種類較少，主要集中在藜科、禾本科、蝶形花亞科等鹽地優(yōu)勢類群[7]。而木麻黃Casuarinaspp.是一種在熱帶和亞熱帶沿海地區(qū)被廣泛栽種的防護林、用材林以及土壤修復(fù)樹種，其根部與弗蘭克氏菌Frankiaspp.、叢枝菌根真菌的共生關(guān)系，以及與自由生活的根際細菌的互作關(guān)系被認為是其耐鹽速生特性的重要基礎(chǔ)，但目前對后者的研究報道還很少[10]?；谏鲜霰尘?，本文從海岸帶短枝木麻黃Casuarina equisetifoliaL.植株根部分離獲得了1 株新的生防細菌B268，在多相分類鑒定的基礎(chǔ)上，對其嗜鹽和生防活性的相關(guān)性，及其提高作物耐鹽性等特性進行評估，旨在拓展耐鹽生防菌的種質(zhì)資源和使用范圍，為研發(fā)適用于鹽土環(huán)境的新型菌劑奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試菌株及黃瓜種子 菌株B268 分離自浙江省樂清市木麻黃海防林的根際土壤樣品 (Na+含量為每克干土7.119 mg)，保藏號CGMCC No.13225。青枯病菌Ralstonia pseudosolanacearumYQ 分離自相同木麻黃林的染病植株木質(zhì)部，由實驗室自行保藏。蘋果樹腐爛病菌Valsa malivar.mali、番茄早疫病菌Alternaria solani、膠孢炭疽菌Colletotrichum gloeosporioides、交替鏈格孢Alternaria alternata、尖孢鐮刀菌Fusarium oxysporum、灰葡萄孢Botrytis cinerea、禾谷鐮刀菌Fusarium graminearum、茶藨子葡萄座腔菌Botryosphaeria dothidea均為實驗室保藏菌種。

供試黃瓜Cucumis sativusL.為馳譽?518號，購自天津科潤黃瓜研究所。

1.1.2 培養(yǎng)基及培養(yǎng)液

鑒定培養(yǎng)基：Marine 2216 改良培養(yǎng)基[11]，用于底物水解、甲基紅試驗、 Voges-Prauskauer(VP) 試驗、產(chǎn)硫化氫分析和抗生素敏感性試驗。

YTGB 培養(yǎng)基 (W/V)：酵母粉 (yeast extract,BD) 0.05%、胰蛋白胨 (trypticase peptone, BD)0.5%、葡萄糖1%、牛肉粉0.3%，pH 7.0，用于RNA 抽提的細胞培養(yǎng)、適鹽性分析、病原細菌拮抗活性分析、吲哚和吲哚乙酸 (indole-3-acetic acid,IAA) 合成分析。

改良PDA 培養(yǎng)基 (W/V)：馬鈴薯20%，葡萄糖1%，胰蛋白胨 (trypticase peptone, BD) 0.5%，酵母粉 (yeast extract, BD) 0.1%，pH 7.0，用于病原真菌拮抗活性分析。

嗜鐵素檢測培養(yǎng)基：LNM 缺鐵培養(yǎng)基[12]。

溶磷培養(yǎng)基 (W/V)：蒙金娜有機磷 (0.1%植酸鈣) 培養(yǎng)基[13]；NBRIP 無機磷 (0.1%磷酸鈣) 培養(yǎng)基[14]。

黃瓜苗水培液：0.5 × Hoagland 營養(yǎng)液。

1.2 菌株鑒定

1.2.1 形態(tài)及生長特征分析 細胞和菌落形態(tài)觀察，底物水解、甲基紅試驗、VP 試驗、產(chǎn)硫化氫、過氧化氫酶、抗生素敏感性分析參照文獻方法[11]，運動性觀察參照文獻方法[15]，其余生理生化特征分析采用API ZYM、API 20NE、API 32GN (bioMérieux) 試劑盒。以0～20% NaCl (間隔1%，W/V) 梯度下的培養(yǎng)液OD600值分析最適和極限生長鹽濃度。所有培養(yǎng)物均于28 ℃、140 r/min或28 ℃靜置培養(yǎng)。

1.2.2 系統(tǒng)發(fā)育樹分析 利用Genome BLAST Distance Phylogeny (GBDP) 方法，基于Type (strain) Genome Server 基因組數(shù)據(jù)庫 (http://tygs.dsmz.de/) 構(gòu)建基因組系統(tǒng)發(fā)育樹[16]，B268 基因組序列登錄號為CP053764。

1.2.3 比較基因組分析 以O(shè)rthoANIu algorithm法 (https://www.ezbiocloud.net/) 進行平均核苷酸相似性 (average nucleotide identity, ANI) 分析[17]；以genome-based distance matrix calculator (http://enveomics.ce.gatech.edu/g) 進行平均氨基酸相似性(average amino acid identity, AAI) 分析[18]；以genometo-genome distance calculator (GGDC) 2.1 (http://ggdc.dsmz.de/ggdc.php) 進行模擬DNA 雜交率 (in silicoDNA-DNA hybridization,isDDH) 分析[19]；以JSpeciesWS (http://jspecies.ribohost.com/jspeciesws/) 進行四核苷酸特征相關(guān)性指數(shù) (tetranucleotide signature correlation index, TETRA) 分析[20]。

1.3 生防活性分析

1.3.1 抑菌活性 細菌抑制活性采用活菌計數(shù)法。菌株B268、YQ 分別于28 ℃、140 r/min 下活化培養(yǎng)48 h。B268 菌液制備成無細胞上清液[21]，并補加等體積的YTGB 空白培養(yǎng)基混合，再按8.5% (V/V) 接種青枯病原菌YQ 菌液或YTGB 空白培養(yǎng)基 (對照)，繼續(xù)于28 ℃、140 r/min 下培養(yǎng)4、8 及12 h，分別取樣涂布平板以及透鏡電鏡(Hitachi H-7 650) 觀察。

真菌抑制活性參照文獻方法[22]，同時以掃描電鏡 (Hitachi SU-8 010) 觀察菌絲形態(tài)。

1.3.2 適鹽促生活性分析 分別在0～7% NaCl (間隔1%，W/V) 梯度下對B268 培養(yǎng)液的 IAA 濃度[21]、嗜鐵素相對含量[12]以及平板溶磷指數(shù) (phosphate solubilizing index, PSI)[23]進行分析。

1.4 功能基因分析

采用RAST Server v2.0 (https://rast.nmpdr.org/)進行功能基因預(yù)測[24]；采用antiSMASH v6.0.1 (https://antismash.secondarymetabolites.org/#!/start) 進行次級代謝產(chǎn)物合成基因 (簇) 預(yù)測[25]。對預(yù)測的IAA 合成關(guān)鍵基因dhaS、嗜鐵素合成關(guān)鍵基因dhbC及植酸酶基因phyC設(shè)計引物 (表1)，進行NaCl 濃度梯度下的差異表達分析。采用RNAiso Plus (TaKaRa) 抽提RNA，PrimeScriptTMRT reagent kit with gDNA eraser (TaKaRa) 制備cDNA， TB Green?Premix Ex Taq? (TaKaRa) 進行反轉(zhuǎn)錄熒光定量PCR (RT-qPCR)，具體操作參照各試劑盒說明書。程序：95 ℃，5 min；95 ℃，5 s；55 ℃，30 s；72 ℃，30 s；40 個循環(huán)。以16S rRNA 基因為內(nèi)參，以0% NaCl 梯度為對照，采用2-ΔΔCt法進行數(shù)據(jù)分析[26]。

表1 生防功能基因擴增引物Table 1 Amplification primers of biocontrol-related functional genes

1.5 促植物耐鹽性分析

泥炭土 (德國維特) 經(jīng)121 ℃ × 20 min 滅菌兩次后加入育苗盤中，黃瓜種子經(jīng)體積分數(shù)為70% 乙醇4 min，0.1% 氯化汞30 s，70% 乙醇1 min 消毒后播種，待長出第5 片真葉時轉(zhuǎn)水培：共12 個水培箱，每個水培箱加8 L 營養(yǎng)液，12 株苗，24 h 曝氣，4 d 更換營養(yǎng)液1 次，于28 ℃、相對濕度50%～60%、光照14 h (6：00 至20：00)條件下培養(yǎng)。緩苗后，將12 個水培箱隨機分成4 組，分別進行以下處理：①新鮮的B268 培養(yǎng)液離心收集細胞，無菌水漂洗后以0.75 × Hoagland 營養(yǎng)液重懸 (OD600=1)，按每個水培箱1 L 菌懸液、7 L營養(yǎng)液的比例接種；②以含640 mmol/L NaCl 的0.75 × Hoagland營養(yǎng)液替代①中的菌懸液接種，NaCl 終濃度為80 mmol/L；③以含640 mmol/L NaCl 的0.75 × Hoagland 營養(yǎng)液制備菌懸液后接種；④對照 (不處理)，以空白的0.75 × Hoagland營養(yǎng)液接種。于處理后的第4 天更換營養(yǎng)液前，每個水培箱隨機選取6 株苗，采集從上往下第2 片真葉，于 -80 ℃保存，備用。更換營養(yǎng)液的同時重新接種B268 和鹽脅迫 (終濃度120 mmol/L)，并于二次處理后的第4 天相同時間點，采集剩下苗株的真葉保存?zhèn)溆?，取樣方法同上。最后對所有樣本進行丙二醛和可溶性糖含量的分析[27]。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

所有數(shù)據(jù)均采用SPSS Statistics 26.0 進行方差分析及差異顯著性檢驗 (P＜0.05)。

2 結(jié)果與分析

2.1 分類鑒定

2.1.1 形態(tài)及生長特征 菌株B268 的細胞為革蘭氏陽性，桿狀，1.8～2.0 μm × 0.6 μm，形成近端生、不膨大的柱狀芽孢 (圖1-A)，同時具有單端叢生鞭毛 (圖1-B)，進行群聚運動 (swarming)。B268在YTGB 平板上形成平整延展狀生物膜，在Marine 2216 改良平板上形成褶皺收斂狀生物膜。在含0～15%NaCl (W/V) 的YTGB 液體培養(yǎng)基中均能生長，最適生長NaCl 為3%。

圖1 菌株B268 的細胞形態(tài)Fig. 1 Cell morphology of strain B268

2.1.2 生理生化特征 菌株B268 能夠利用D-葡萄糖、D-核糖、L-阿拉伯糖、D-甘露糖、D-麥芽糖、D-甘露醇、N-乙酰葡萄糖胺、糖原、乙酸鹽、丙二酸鹽、3-羥基丁酸鹽、戊酸鹽、葡萄糖酸鹽、2-酮基葡萄糖酸鹽、5-酮基葡萄糖酸鹽、檸檬酸鹽、蘋果酸鹽、DL-乳酸鹽、3-羥基苯甲酸鹽、4-羥基苯甲酸鹽、L-丙氨酸、組氨酸、L-脯氨酸作為單一碳源和能源。水解七葉苷、酪蛋白、脫脂牛奶、羧甲基纖維素鈉、淀粉、木聚糖、明膠和吐溫20、40、60，不水解幾丁質(zhì)、果膠、葡聚糖和吐溫80。硝酸鹽還原、VP 試驗、產(chǎn)吲哚和硫化氫陽性，甲基紅試驗陰性。過氧化氫酶、氧化酶、脲酶、堿性磷酸酶、酸性磷酸酶、萘酚雙磷酸水解酶、C4 酯酶、C8 酯酶陽性。對復(fù)方新諾明、青霉素G、羧芐青霉素、氨芐青霉素、萬古霉素、卡那霉素、慶大霉素、米諾環(huán)素、頭孢噻吩、氯霉素、紅霉素、新生霉素、新霉素、諾氟沙星和氧氟沙星敏感，對鏈霉素、四環(huán)素、多粘菌素、阿莫西林、林可霉素不敏感。未列舉的API ZYM、API 20NE、API 32GN 試劑盒分析結(jié)果均為陰性。

2.1.3 系統(tǒng)發(fā)育地位及基因型特征 基于基因組序列的系統(tǒng)發(fā)育分析結(jié)果表明 (圖2)：菌株B268 屬于枯草芽孢桿菌復(fù)合種 (Bacillus subtiliscomplex species) 內(nèi)的解淀粉芽孢桿菌世系(Bacillus amyloliquefaciensclade)，在同種貝萊斯芽孢桿菌群 (conspecificB. velezensisgroup) 中形成一個分支最早、相對獨立的單系支 (monophyletic branch)。

圖2 枯草芽孢桿菌復(fù)合種的基因組系統(tǒng)發(fā)育樹Fig. 2 Phylogenomic tree of Bacilus subtilis species complex

比較基因組分析結(jié)果表明 (表2)：B268 與同種貝萊斯芽孢桿菌群內(nèi)所有標株間的ANI (97.7%～97.83%)、isDDH (80.3%～81.4%)、AAI (98.19%～98.21%) 和TETRA (0.999 2～0.999 63) 值均高于菌群外標株，進一步證明B268 與該菌群為同種關(guān)系。其次，B268 與菌群內(nèi)標株間的ANI 值 (97.7%～97.83%) 低于原核微生物亞種的劃分閾值 (ANI＞98%)，而isDDH 值 (80.3%～81.4%) 高于亞種劃分閾值 (isDDH＞79%～80%)，表明B268 為同種貝萊斯芽孢桿菌群內(nèi)的一個新種系型，基于目前分類標準，還不能確定是否為一個新亞種。

表2 解淀粉芽孢桿菌世系內(nèi)的比較基因組分析Table 2 Comparative genome analysis within Bacillus amyloliquefaciens clade

綜合上述多相分類結(jié)果以及芽孢桿菌分類現(xiàn)狀，將菌株B268 鑒定為同種貝萊斯芽孢桿菌群成員，與FZB42T等經(jīng)典生防菌株為同種關(guān)系。

2.2 生防活性

2.2.1 病原細菌拮抗活性 在含有B268 無細胞上清液的體系中，培養(yǎng)4 h 時，青枯病原菌YQ 開始出現(xiàn)細胞變形死亡現(xiàn)象 (圖3-B，箭頭)，但此時的細胞繁殖速度仍高于死亡速度，因此總的活細胞數(shù)緩慢增加 (圖4)；培養(yǎng)至8 h 時，活細胞數(shù)達到最高，之后細胞死亡速度開始高于生長速度；至12 h 時，絕大多數(shù)細胞出現(xiàn)變形 (圖3-C，箭頭)，表明B268 具有較強的拮抗活性。

圖3 B268 無細胞上清液中R. pseudosolanacearum YQ 的細胞形態(tài)Fig. 3 Cell morphology of R. pseudosolanacearum YQ in the cell-free supernatant of B268

圖4 B268 無細胞上清液中R. pseudosolanacearum YQ 的活細胞數(shù)變化Fig. 4 Change of living cell numbers of R. pseudosolanacearum YQ in the cell-free supernatant of B268

2.2.2 病原真菌拮抗活性 平板對峙結(jié)果表明(表3)：菌株B268 對8 種常見植物病原真菌均有拮抗活性，對其中6 種的抑制率高于50%。同時，掃描電鏡結(jié)果顯示，在B268 拮抗作用下，菌絲普遍呈現(xiàn)干癟、皺縮或粘連狀 (圖5-A)，而膠孢炭疽菌產(chǎn)生了大量的孢子 (圖5-C，箭頭)。

表3 B268 對病原真菌的拮抗活性Table 3 Antagonistic activities of B268 against pathogenic fungi (n=7)

圖5 B268 抑制作用下病原真菌的菌絲形態(tài)Fig. 5 Hypha morphology of pathogenic fungi antagonized by strain B268

2.2.3 適鹽促生活性 菌株B268 在0～6% NaCl梯度下均能合成IAA，最適梯度在3%～4%，培養(yǎng)5 d時胞外IAA 濃度達到最高 (圖6)。其中，6% NaCl下的IAA 合成出現(xiàn)延滯，培養(yǎng)3 d 時仍接近于零，但隨著培養(yǎng)時間的延長，5 d 時4%～6% NaCl 下的IAA 濃度均明顯提高，且增幅大于0～2%梯度。

圖6 B268 吲哚乙酸合成活性的鹽相關(guān)性Fig. 6 The correlation of indole acetic acid production with salinity in strain B268

圖7 顯示B268 的嗜鐵素合成有明顯的鹽相關(guān)性，不同培養(yǎng)時間下均在1%NaCl時相對含量最高，其次為0%NaCl，而2%～6%梯度時相對含量在較低水平上波動。

圖7 B268 嗜鐵素合成活性的鹽相關(guān)性Fig. 7 The correlation of siderophore production with salinity in strain B268

平板溶磷結(jié)果 (圖8) 表明：B268 兼有溶解有機磷和無機磷的活性，3%～4%NaCl 時溶磷指數(shù)相對較高，在0～7%NaCl 梯度下總體保持穩(wěn)定。

圖8 B268 溶磷活性的鹽相關(guān)性Fig. 8 The correlation of phosphate solubilizing activity with salinity in strain B268

2.3 生防功能基因

基于RAST 分析結(jié)果，在B268 基因組 (CP 053764) 中發(fā)現(xiàn)了IPyA 型IAA 合成途徑、兒茶酚型嗜鐵素 (bacillibactin) 合成途徑以及單個植酸酶(phytase) 基因。其中，前兩個途徑中的吲哚3-乙酰乙醛脫氫酶 (indol 3-acet-aldehyde dehydrogenase)基因dhaS、異分支酸合成酶 (isochorismate synthase) 基因dhbC以及植酸酶基因phyC在NaCl 梯度培養(yǎng)條件下的轉(zhuǎn)錄活性同相應(yīng)的表觀活性類似，也呈現(xiàn)出鹽相關(guān)性，分別在1%或3%NaCl下轉(zhuǎn)錄水平最高 (圖9)。

圖9 B268 生防功能基因轉(zhuǎn)錄活性的鹽相關(guān)性Fig. 9 The correlation of transcriptional activity of biocontrol-related genes with salinity in strain B268

基于antiSMASH 分析結(jié)果，在B268 基因組中發(fā)現(xiàn)了13 個抗菌物質(zhì)合成基因簇 (表4)，其中7 個為同種貝萊斯芽孢桿菌群標株的共有基因簇，而rhizocticin 和plantazolicin 分別僅在B268 和B.amyloliquefacienssubsp.plantarumFZB42T預(yù)測到，mersacidin 僅在B268 和B. velezensisNRRL B-41580T預(yù)測到。結(jié)合表觀抗菌活性分析結(jié)果，進一步表明B268 具有廣譜抗菌的潛力，以及不同的抑菌譜。

表4 同種貝萊斯芽孢桿菌群內(nèi)的次級代謝基因簇比較Table 4 Comparison of the secondary metabolic gene clusters within conspecific B. velezensis group

2.4 促植物耐鹽活性

以葉組織中的丙二醛 (MDA) 和可溶性糖含量變化為表征，對不同程度鹽脅迫下，B268 促進黃瓜耐鹽性的效果進行了評估。結(jié)果 (圖10) 表明：在低鹽 (80 mmol/L) 脅迫下，未接種B268 的苗株，可溶性糖含量比對照增長52.5%，且MDA含量沒有明顯增加，表明該鹽度下，黃瓜能夠自主地積累滲透保護物質(zhì)來避免鹽害；同時，接種B268 的苗株，可溶性糖含量比未接種苗株低23%，而MDA 含量同樣沒有明顯增加，表明B268 能夠降低黃瓜對低鹽脅迫的敏感性。在高鹽 (120 mmol/L)脅迫下，未接種B268 的苗株，可溶性糖含量比對照增長123.6%，但MDA 含量也比對照提高76.7%，表明該鹽度下，黃瓜的自主滲透保護已無法有效抵抗鹽害；而接種B268 的苗株，可溶性糖含量僅比未接種的苗株高46.4%，而MDA 含量則比未接種的苗株低67.2%，與對照相近 (僅比對照高5.7%)，表明接種B268 能夠調(diào)節(jié)滲透保護物質(zhì)的積累，有效降低鹽害所造成的細胞損傷，提高黃瓜的耐鹽性。

圖10 不同程度鹽脅迫下B268 對黃瓜葉片中可溶性糖及丙二醛含量的影響Fig. 10 Influence of B268 on the soluble sugar content and MDA content in cucumber leaves under different salt stresses

3 討論

Dunlap 等在2016 年建議將親緣關(guān)系相近的原B. velezensis與B. amyloliquefacienssubsp.plantarum、B. methylotrophicus合并為新B.velezensis[28]。而Fan 等在2017 年提出同種概念，即由上述3 個 (亞) 種組成同種貝萊斯芽孢桿菌群[29]。根據(jù)基因組比較分析結(jié)果可以確定，B268屬于同種貝萊斯芽孢桿菌群，同時，與群內(nèi)各標株間的ANI 值低于原核微生物亞種的劃分閾值[29]，因此認為其為貝萊斯芽孢桿菌群的一個新種系型。

近10 年間，貝萊斯芽孢桿菌成為繼枯草芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌B.licheniformis之后，又一個被重點挖掘的具有多領(lǐng)域應(yīng)用潛力的芽孢桿菌種，尤其在生物防治和促生增產(chǎn)方面潛力巨大[30]。與同類群的FZB42T等經(jīng)典生防芽孢桿菌一樣，B268 具有合成IAA、嗜鐵素和溶磷等促生活性，以及廣譜的抗菌能力。不同的是，B268 分離自鹽生植物根際。目前，來自于鹽生植物根際環(huán)境的貝萊斯芽孢桿菌報道較少，僅B. velezensisXT1 (分離自鹽土燈心草根際)[31]，B. velezensisMBY2 (分離自駝蹄瓣屬根際)[32]等少量菌株，而不同的鹽生植物具有不同的根際群落，形成特異的微生物-植物互作機制[8]，因此，B268 也表現(xiàn)出一些新性狀，如生防活性的鹽響應(yīng)性。B268 所在的采樣點受海水倒灌影響而重度鹽漬化，因而具有嗜鹽生長的特征 (最適生長3% NaCl，生長范圍0～15% NaCl)。相應(yīng)地，B268 的IAA、嗜鐵素合成和溶磷活性在基因轉(zhuǎn)錄水平以及生理水平上也都表現(xiàn)出適鹽性 (最適NaCl＞ 0%)。眾所周知，芽孢桿菌是目前抗逆性最強的生防菌種類，Upadhyay 等的研究表明，在鹽脅迫下，僅有18%的小麥根際細菌仍能表現(xiàn)出生防活性，其中芽孢桿菌及其相近屬占80%，但與B268 不同的是，這些產(chǎn)芽孢細菌的生防活性隨著培養(yǎng)基鹽度的升高而下降，即沒有鹽響應(yīng)性[33]。由此可見，鹽脅迫下不同芽孢桿菌的表現(xiàn)不同，而B268 融合了嗜鹽性和生防活性。依據(jù)Etesami和Arora 等的觀點，耐鹽生防菌的壓力響應(yīng)特性不僅作用于自身抗逆，也可能有助于其對植物的抗逆保護，但具體機制目前仍知之甚少[4,7]，而B268 在這方面具有一定的研究價值。

水培試驗中，在黃瓜苗可耐受的鹽脅迫程度下 (80 mmol/L NaCl)，接種B268 可降低植株的鹽反應(yīng)，而在高鹽脅迫 (120 mmol/L) 下，接種B268 可提高植株的鹽保護水平，形成一定的鹽耐受性，表明B268 能在短時間內(nèi) (4 d) 與植物形成有效的抗鹽互作。此外，B268 還具有一定的次生代謝潛力。據(jù)報道，貝萊斯芽孢桿菌的次級代謝產(chǎn)物合成具有菌株特異性[34]，而在B268 的基因組中發(fā)現(xiàn)了在同種貝萊斯芽孢桿菌群中出現(xiàn)頻率較低(12%) 的mersacidin 基因簇[35]，以及多個目前尚未解析的活性物質(zhì)合成基因簇，包括萜烯類(terpene)、三型聚酮合酶類 (T3PKS) 等。因此，在鹽害及病害防治方面，B268 也具有一定的挖掘潛力。

目前，我國鹽漬土面積已達3.69×107hm2，且分布廣闊、類型多樣，因此，鹽漬土的修復(fù)和資源化利用已成為我國農(nóng)林業(yè)發(fā)展和生態(tài)環(huán)境保護的重要內(nèi)容[36]。而耐鹽生防菌在提高鹽土肥力、促進植物健康方面具有不可替代的作用，是土壤鹽漬化防治體系中的重要一環(huán)。B. velezensisB268對鹽具有響應(yīng)特性，可助力鹽害的綠色治理。