戴瑜來(lái)，謝楠，戴楊鑫，許寶青，林啟存，王宇希

（杭州市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，浙江 杭州 310024）

異育銀鯽“中科3 號(hào)”（Carassius auratus gibelio“CASⅢ”）是中國(guó)科學(xué)院水生生物研究所培育的鯽品種，因其具有生長(zhǎng)快、抗病力強(qiáng)、出肉率高、營(yíng)養(yǎng)豐富、養(yǎng)殖效益好等特點(diǎn)，深受養(yǎng)殖者和消費(fèi)者歡迎。但高密度、集約化養(yǎng)殖會(huì)增加其疾病發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)，研究發(fā)現(xiàn)，苗種培育期是異育銀鯽“中科3號(hào)”的疾病易發(fā)期。目前，關(guān)于異育銀鯽“中科3 號(hào)”對(duì)于藥物敏感性方面的研究鮮見(jiàn)報(bào)道?，F(xiàn)采用靜態(tài)急性毒性試驗(yàn)法，開(kāi)展了銅鐵合劑、敵百蟲(chóng)、甲醛和聚維酮碘對(duì)異育銀鯽“中科3 號(hào)”的急性毒性試驗(yàn)，分析異育銀鯽“中科3 號(hào)”對(duì)藥物的敏感性，旨在為異育銀鯽“中科3 號(hào)”苗種養(yǎng)殖期間的病害防治和科學(xué)用藥提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

試驗(yàn)所用異育銀鯽“中科3 號(hào)”（以下簡(jiǎn)稱(chēng)試驗(yàn)魚(yú)）來(lái)自杭州市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院水產(chǎn)研究所，體格健康，體表無(wú)損，體長(zhǎng)為（3.2±0.16）cm，體質(zhì)量為（0.8±0.22）g。

1.2 試驗(yàn)藥物

銅鐵合劑[純度99.0%，m（硫酸銅）∶m（硫酸亞鐵）=5∶2，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司]；敵百蟲(chóng)（含量≥90%，南通江山農(nóng)業(yè)化工股份有限公司）；聚維酮碘（有效含量10%，武漢九州神農(nóng)藥業(yè)有限公司）；甲醛（純度37.0%～40.0%，西隴化工股份有限公司）。

1.3 試驗(yàn)條件

每種藥物準(zhǔn)備15 個(gè)玻璃缸（96.5 cm×47.5 cm×49 cm），另設(shè)一個(gè)對(duì)照缸，每個(gè)玻璃缸水體積均為150 L，試驗(yàn)用水為經(jīng)存放并曝氣處理24 h 的自來(lái)水，pH 值6.98～7.80，ρ（溶解氧）6.7～7.25 mg/L，水溫（25.5±0.5）℃，每個(gè)缸各設(shè)一個(gè)充氣頭，投放20 尾試驗(yàn)魚(yú)。

1.4 試驗(yàn)方法

試驗(yàn)前，將試驗(yàn)魚(yú)暫養(yǎng)于玻璃缸中1 周，正常投飼，待其適應(yīng)實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境后，采用靜態(tài)急性毒性試驗(yàn)法進(jìn)行試驗(yàn)。先進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)，每個(gè)藥物分別設(shè)置5 個(gè)濃度梯度組（Ⅰ—Ⅴ）和1 個(gè)對(duì)照組（對(duì)照組為不含藥物的曝氣自來(lái)水，其他條件均相同），濃度梯度按照等對(duì)數(shù)間距設(shè)置，同時(shí)設(shè)2 個(gè)平行，見(jiàn)表1。

表1 試驗(yàn)魚(yú)用藥濃度 mg/L

試驗(yàn)藥物先配置成高濃度母液，現(xiàn)配現(xiàn)用。用藥后，8 h 內(nèi)連續(xù)觀(guān)察試驗(yàn)魚(yú)中毒癥狀和死亡情況，8 h 后按用藥后24，48，96 h 記錄試驗(yàn)死亡魚(yú)數(shù)量，其間及時(shí)撈除死亡個(gè)體（以喪失游泳能力，觸碰無(wú)反應(yīng)為準(zhǔn)）。試驗(yàn)期間不投飼，且以對(duì)照組不出現(xiàn)死魚(yú)為本試驗(yàn)進(jìn)行的必要條件。

1.5 半致死濃度和安全濃度的計(jì)算

根據(jù)24，48，96 h 不同藥物、濃度條件下受試魚(yú)的死亡率數(shù)據(jù)，采用改進(jìn)寇氏法計(jì)算24，48，96 h 的半致死濃度（LC。

標(biāo)準(zhǔn)誤差（S）=i（Σp（1-p）/n）1/2，

LC的95%置信區(qū)間=lg（lg LC±1.96S lg LC）。

式中：X——試驗(yàn)組最大劑量的對(duì)數(shù)；

i——相鄰組濃度對(duì)數(shù)之差；

p——各組的死亡率，%；

∑p——各組死亡率的總和，%；

n——每組受試魚(yú)數(shù)量，尾。

安全濃度（SC）根據(jù)24 h 和48 h 的半致死量濃度求得。

SC=48 h LC×0.3/（24 h LC/48 h LC）。

2 結(jié)果與分析

2.1 銅鐵合劑的毒性試驗(yàn)

將銅鐵合劑母液按試驗(yàn)濃度要求，稀釋后潑灑在養(yǎng)殖試驗(yàn)魚(yú)的玻璃缸中。經(jīng)觀(guān)察發(fā)現(xiàn)，各缸中的試驗(yàn)魚(yú)起初均未有明顯反應(yīng)，1 h 后可見(jiàn)高濃度組（9.06 和15.00 mg/L）試驗(yàn)魚(yú)的平衡能力明顯受到影響，游動(dòng)無(wú)力。受藥物影響，魚(yú)體色變淺，體表黏液增多，并有白色絮狀黏附物，2 h 后死亡。銅鐵合劑對(duì)試驗(yàn)魚(yú)的毒性試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 銅鐵合劑對(duì)試驗(yàn)魚(yú)的毒性試驗(yàn)結(jié)果

2.2 敵百蟲(chóng)的毒性試驗(yàn)

將敵百蟲(chóng)母液按試驗(yàn)濃度要求，稀釋后潑灑到養(yǎng)有試驗(yàn)魚(yú)的玻璃缸中。2.5 h 后試驗(yàn)魚(yú)出現(xiàn)異常，6 h 后死亡。受藥物影響，魚(yú)體扭曲，翻轉(zhuǎn)側(cè)游，死魚(yú)體表發(fā)白，魚(yú)體僵硬，鰓絲發(fā)紫。敵百蟲(chóng)對(duì)試驗(yàn)魚(yú)的毒性試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 敵百蟲(chóng)對(duì)試驗(yàn)魚(yú)的毒性試驗(yàn)結(jié)果

續(xù)表

2.3 甲醛的毒性試驗(yàn)

將甲醛母液按試驗(yàn)濃度要求，稀釋后潑灑在養(yǎng)殖試驗(yàn)魚(yú)的玻璃缸中。3 h 后試驗(yàn)魚(yú)出現(xiàn)異常，8 h 后死亡。受藥物影響，試驗(yàn)魚(yú)出現(xiàn)急速旋轉(zhuǎn)、焦躁不安、上下竄游、來(lái)回游動(dòng)的現(xiàn)象，不久后沉入缸底，對(duì)刺激反應(yīng)敏感。甲醛對(duì)試驗(yàn)魚(yú)的毒性試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 甲醛對(duì)試驗(yàn)魚(yú)的毒性試驗(yàn)結(jié)果

2.4 聚維酮碘的毒性試驗(yàn)

將聚維酮碘母液按試驗(yàn)濃度要求，潑灑到養(yǎng)有試驗(yàn)魚(yú)的玻璃缸中。發(fā)現(xiàn)試驗(yàn)魚(yú)最高濃度組（200.0 mg/L）在用藥后10 min 時(shí)，出現(xiàn)亂竄、打轉(zhuǎn)，不久后失去平衡，呼吸緩慢，浮于水面或沉入水底；在30 min 時(shí)，死亡。聚維酮碘對(duì)試驗(yàn)魚(yú)的毒性試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 聚維酮碘對(duì)試驗(yàn)魚(yú)的毒性試驗(yàn)結(jié)果

3 討論

3.1 4 種漁藥對(duì)試驗(yàn)魚(yú)的毒性強(qiáng)度

藥物對(duì)試驗(yàn)魚(yú)毒性的大小常用LC來(lái)衡量。本試驗(yàn)結(jié)果表明，藥物對(duì)異育銀鯽“中科3 號(hào)”毒性由強(qiáng)到弱依次為：銅鐵合劑、敵百蟲(chóng)、甲醛、聚維酮碘。參照《危險(xiǎn)化學(xué)品魚(yú)類(lèi)急性毒性分級(jí)試驗(yàn)方法》（GB/T 21281—2007），96 h LC≤1 mg/L 時(shí)為急性毒性Ⅰ級(jí)，1 mg/L<96 h LC≤10 mg/L 為急性毒性Ⅱ級(jí)，10 mg/L<96 h LC≤100 mg/L 為急性毒性Ⅲ級(jí)。4 種藥物對(duì)試驗(yàn)魚(yú)的毒性分類(lèi)為：銅鐵合劑和敵百蟲(chóng)為急性毒性Ⅱ級(jí)；甲醛為急性毒性Ⅲ級(jí)，而聚維酮碘則不在急性毒性Ⅰ級(jí)至Ⅲ級(jí)范圍內(nèi)。

3.2 用藥注意事項(xiàng)

硫酸銅與硫酸亞鐵合劑在生產(chǎn)上主要用于殺滅中華鳋、車(chē)輪蟲(chóng)、斜管蟲(chóng)、舌杯蟲(chóng)、水網(wǎng)藻和青苔等，其對(duì)魚(yú)類(lèi)的毒性受水中溶解氧、pH 值、有機(jī)物含量、鹽度等影響。本研究發(fā)現(xiàn)，硫酸銅對(duì)試驗(yàn)魚(yú)的SC 是0.68 mg/L，高于淇河鯽（0.16 mg/L），低于異育銀鯽“中科5 號(hào)”（0.94 mg/L），相比較銅鐵合劑常用濃度（0.7～1.0 mg/L）要低。因此，本規(guī)格試驗(yàn)魚(yú)在使用銅鐵合劑時(shí)要注意藥物使用安全。

敵百蟲(chóng)是一種廣譜性有機(jī)磷類(lèi)殺蟲(chóng)劑，主要用于殺滅體表的中華鳋、魚(yú)鲺、錨頭鳋、指環(huán)蟲(chóng)和三代蟲(chóng)等。本試驗(yàn)中，敵百蟲(chóng)對(duì)試驗(yàn)魚(yú)幼魚(yú)的SC 是2.04 mg/L，遠(yuǎn)高于異育銀鯽的SC（0.016 mg/L），高于敵百蟲(chóng)的常用濃度（0.3～0.7 mg/L）。因此，敵百蟲(chóng)對(duì)于本規(guī)格試驗(yàn)魚(yú)而言是一種較為安全的藥物。

甲醛是一種有刺激性臭味的化學(xué)試劑，可凝固蛋白和溶解類(lèi)脂，在氣態(tài)或液態(tài)下，均具有強(qiáng)烈的殺菌作用，是一類(lèi)廣譜的殺菌劑。本研究中甲醛對(duì)于試驗(yàn)魚(yú)的SC 是10.98 mg/L，低于彩鯽的SC（21 mg/L），也較甲醛的常用浸泡濃度（30～40 mg/L）要低，但從試驗(yàn)魚(yú)試驗(yàn)濃度（25 和39.13 mg/L）組的死亡情況，以及浸泡方法接觸藥物時(shí)間較短來(lái)分析，甲醛可安全用于該規(guī)格試驗(yàn)魚(yú)的浸泡。而甲醛在生產(chǎn)上作為遍灑藥物因用量大而導(dǎo)致其應(yīng)用受到一定的限制。

聚維酮碘是聚乙烯吡咯烷酮與碘的絡(luò)合物，對(duì)大部分細(xì)菌、真菌、真菌孢子及部分病毒均有一定的殺滅作用。本試驗(yàn)結(jié)果中，聚維酮碘的SC 為28.83 mg/L，高于異育銀鯽（7.48 mg/L），遠(yuǎn)高于常用濃度（0.2～0.5 mg/L）。因此，聚維酮碘對(duì)于本研究規(guī)格的試驗(yàn)魚(yú)是一種較為安全的藥物。