袁麗紅 ，柳成東

（1.云南農業(yè)大學，云南 昆明 650201；2.福建傲農生物科技集團股份有限公司，福建 漳州 363000；3.福建傲農生物科技集團股份有限公司福建省生豬營養(yǎng)與飼料重點實驗室，福建 漳州 363000）

斷奶仔豬高腹瀉率、高死亡率的產生往往與飼料的營養(yǎng)水平、飼養(yǎng)管理和疾病密切相關，其中，斷奶仔豬的高腹瀉的發(fā)生也會受到外界環(huán)境中病源微生物大腸桿菌的影響，造成斷奶仔豬死亡率增加。大量研究表明，在斷奶仔豬飼糧中補充枯草芽孢桿菌，能夠降低其腸道的有害菌大腸桿菌的數(shù)量，增加仔豬腸道中的有益菌乳酸桿菌的數(shù)量，進而改善仔豬的生長性能?；趧游镲曫B(yǎng)試驗的不穩(wěn)定性和難重復性，難以快速評估出飼用的益生菌的益生效果的問題；因此，借鑒以往在飼糧中添加抗生素通過抑菌效果去改善仔豬腹瀉情況，提高仔豬生長的實際運用。文章通過建立體外抑菌實驗初步評估益生菌的抑菌性能，在此基礎上，開展動物飼養(yǎng)試驗再驗證其運用效果。

體外抑菌實驗能夠科學和高效地評估飼用益生菌的抑菌效果。有研究表明，通過體外抑菌評估和體內動物飼養(yǎng)試驗兩方面結合評估，能夠共同表明該評估體系運用到飼用益生菌的效果驗證。鑒于此，本研究前期通過體外抑菌實驗評估枯草芽孢桿菌的抑菌性能后，開展動物飼養(yǎng)試驗，希望在已有的報道基礎上進一步驗證體外和體內雙向評估的科學性和準確性。

1 材料與方法

1.1 菌株

本課題組前期從白羽肉雞糞便中分析出一株芽孢桿菌，經16 s RNA基因鑒定為枯草芽孢桿菌，分離純化后命名為枯草芽孢桿菌-Ⅱ。用于本次動物飼喂試驗。

畜禽腸道有害菌：大腸桿 菌K88（Escherichia coliCGMCC1.2385）、豬 霍 亂 沙 門氏 菌（Salmonella choleraesuisBNCC186354）、雞 白 痢 沙 門氏 菌（Salmonella pullorumBNCC124693），均購買于北納創(chuàng)聯(lián)生物科技有限公司。

畜禽腸道有益菌：羅伊氏乳 酸 桿 菌（Lactobacillu reutreriATCC55730），購買于北納創(chuàng)聯(lián)生物科技有限公司。

1.2 抑菌評估

前期對該株枯草芽孢桿菌的抑菌性能參照柳成東等（2021）報道，采用體外牛津杯法評估該株枯草芽孢桿菌對腸道有害菌和腸道有益菌抑菌效果。

1.3 試驗動物

將66頭28日齡的健康斷奶仔豬按照體重一致的原則，分成2個處理組，每個處理組3個欄，每欄11頭斷奶仔豬。處理組設計如下：處理組1（A組）飼喂基礎日糧；處理組2（B組）在基礎日糧的基礎上添加500 g /t的枯草芽孢桿菌制劑（活菌數(shù)：1×1010cfu/g）。飼喂周期7 d。

1.4 試驗飼糧

試驗飼糧配方參照NRC（2012）豬營養(yǎng)需要量標準配制基礎飼糧，配方組成及營養(yǎng)水平見表1，基礎飼糧中不添加任飼用何抗生素和飼用益生菌。

1.5 飼養(yǎng)管理

試驗期間保持產房溫度在23~27℃，保證仔豬每天充足的飲水和光照；每天定時進行3次飼喂，滿足仔豬自由采食。飼喂期間，隨時關注仔豬健康狀況，及時進行治療和做好記錄。

1.6 指標測定

1.6.1 生長性能

試驗第8天早上9時對所有試驗豬進行稱重，統(tǒng)計斷奶仔豬平均日增重、平均日采食量、料重比和腹瀉率。

1.6.2 腸道菌群

試驗第7天下午17時觀察每頭試驗豬的排糞情況，及時采集新鮮的糞便，用于檢測大腸桿菌和乳酸桿菌的數(shù)量。

注：（1）礦物質和維生素預混料為每 kg飼糧提供：維生素A 2 200 IU，維生素D3 220 IU，維生素E 16.0 IU，維生素K3 0.5 mg，維生素B1 1.0 mg，維生素B2 3.5 mg，維生素B6 7.0 mg，維生素B12 0.018 mg，煙酸30 mg，泛酸10 mg，鐵100 mg，銅6 mg，鋅100 mg，錳4 mg，碘0.14 mg，硒0.30 mg。（2）營養(yǎng)成分中的消化能為計算值，其余為實測值。

1.7 統(tǒng)計方法

生長性能、腸道菌群等數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析，對其進行T-test數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析，枯草芽孢桿菌的抑菌圈數(shù)據(jù)采用單因素方差分析和 Duncan，s多重比較。P≤0.05表示顯著差異，0.05＜P≤0.1表示有差異的趨勢。

2 結果

2.1 枯草芽孢桿菌抑菌性能的評估

由表2和圖1可知，該株枯草芽孢桿菌對大腸桿菌K88、豬霍亂沙門氏菌和雞白痢沙門氏菌都有抑菌效果，且抑菌作用差異顯著（P＜0.05）。同時，枯草芽孢桿菌對雞白痢沙門氏菌的抑菌效果最佳。此外，枯草芽孢桿菌對羅伊氏乳酸桿菌無抑制作用。

表2 枯草芽孢桿菌對畜禽腸道有害菌的抑菌效果（抑菌圈直徑） mm

圖1 枯草芽孢桿菌對腸道有益菌羅伊氏乳酸桿菌的抑制作用

2.2 枯草芽孢桿菌對斷奶仔豬生長性能的影響

由表3可知，飼料中添加枯草芽孢桿菌能夠顯著增加（P＜0.05）斷奶仔豬末重、平均增重，和顯著降低料重比和腹瀉率（P＜0.05）；但對平均日采食量無明顯差異（P＞0.05）。

表3 枯草芽孢桿菌對斷奶仔豬生長性能的影響

2.3 枯草芽孢桿菌對斷奶仔豬腸道菌群的影響

由表4可知，飼糧中添加枯草芽孢桿菌能夠顯著降低（P＜0.05）斷奶仔豬腸道中大腸桿菌的數(shù)量；斷奶仔豬腸道中乳酸桿菌的數(shù)量顯著增加（P＜0.05）。

表4 枯草芽孢桿菌對斷奶仔豬腸道菌群的影響 （ l o g10 cfu/g）

3 討論

3.1 枯草芽孢桿菌抑菌性能的評估

枯草芽孢桿菌作為我國飼料添加劑的使用規(guī)范（《飼料添加劑品種目錄》2013）34種中的其中1種；具有耐高溫、耐酸和耐膽鹽的菌株特性，同時能夠產生多種消化酶，改善畜禽生長性能。研究結果顯示，該株枯草芽孢桿菌對畜禽腸道中的主要致病菌大腸桿菌K88、豬霍亂沙門氏菌和雞白痢沙門氏菌具有較好的抑菌效果，這一結果與前人研究一致。

與此同時，該株枯草芽孢桿菌對畜禽腸道中的主要有益菌羅伊氏乳酸桿菌無抑制作用，李先磊等（2019）通過混合培養(yǎng)的抑菌方法，評估枯草芽孢桿菌對乳酸桿菌的抑制作用，實驗結果顯示枯草芽孢桿菌對腸道有益菌乳酸桿菌無抑制作用，這一結果與本試驗結果基本一致。

3.2 枯草芽孢桿菌對斷奶仔豬生長性能的影響

陳遠兵（2104）和何正偉（2016）研究表明，斷奶仔豬腹瀉率高峰期的一般發(fā)生在斷奶后第7天，導致斷奶仔豬生長速度減緩，嚴重的會導致仔豬死亡。因此，針對這一現(xiàn)象，本試驗研究枯草芽孢桿菌對仔豬斷奶7天后的生長性能是否會產生影響。結果顯示，在飼糧中添加枯草芽孢桿菌能夠顯著增加仔豬末重、平均日增重；顯著降低仔豬料重比和腹瀉率，這一結果與前人報道基本一致。這也說明，在斷奶仔豬飼糧中添加具有抑菌效果（見表2）的飼用益生菌能夠改善斷奶仔豬的生長，提高養(yǎng)殖經濟效益。

3.3 枯草芽孢桿菌對斷奶仔豬腸道菌群的影響

腸道菌群平衡是改善仔豬生長性能的機制之一，往往以具有代表性的畜禽腸道有害菌大腸桿菌數(shù)量和腸道為主有益菌乳酸桿菌數(shù)量作為研究的主要依據(jù)。本試驗結果表明，飼糧中添加枯草芽孢桿菌，能夠顯著降低斷奶仔豬腸道中有害菌大腸桿菌的數(shù)量，顯著增加斷奶仔豬腸道中的有益菌乳酸桿菌的數(shù)量，這一結果與前人報道一致。這一結果也與體外評估該株枯草芽孢桿菌能夠抑制畜禽腸道有害菌，以及對畜禽腸道有益菌乳酸桿菌無抑制作用的結果（表2）相呼應，從而改善斷奶仔豬生長（表3）。

4 結論

本研究從體外實驗采用牛津杯法評估枯草芽孢桿菌的抑菌性能，結合在飼糧中添加枯草芽孢桿菌改善斷奶仔豬生長性能的試驗結果，共同表明，該株枯草芽孢桿菌能夠運用在飼料、飼料添加劑和畜禽實際養(yǎng)殖中，以改善仔豬生長性能。同時，試驗也為飼用益生菌的運用評估建立一套科學、高效的研究依據(jù)。