鄧?yán)蜴?，孔少敏，劉慧慧，何健榮，沈松英，李宇思，林珊珊，邱 琇

(1.廣州醫(yī)科大學(xué)附屬?gòu)V州市婦女兒童醫(yī)療中心出生隊(duì)列研究室，廣東 廣州 510623；2.廣州醫(yī)科大學(xué)附屬?gòu)V州市婦女兒童醫(yī)療中心婦女保健部 廣東省高水平臨床重點(diǎn)?？?婦幼保健)，廣東 廣州 510623)

濕疹常在嬰兒期開(kāi)始發(fā)生，是兒童早期最常見(jiàn)的過(guò)敏性疾病。有研究報(bào)道濕疹與其他過(guò)敏性疾病的發(fā)展有關(guān)，Van Der Hulst等[1]發(fā)現(xiàn)約有1/3的濕疹患者會(huì)發(fā)展為哮喘，Dharmage等[2]提出2/3的濕疹患者會(huì)發(fā)展為過(guò)敏性鼻炎。健康與疾病發(fā)育起源(DOHaD)假說(shuō)的研究證據(jù)驗(yàn)證了生命早期暴露可能對(duì)個(gè)體疾病的易感性產(chǎn)生影響。產(chǎn)前細(xì)胞因子對(duì)胎兒免疫系統(tǒng)功能成熟起著重要作用，影響出生后機(jī)體的免疫反應(yīng)[3]。嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子(Eotaxin)可以趨化和激活嗜酸粒細(xì)胞和某些T細(xì)胞亞群，與炎癥和免疫反應(yīng)密切相關(guān)。目前大多數(shù)研究關(guān)注于濕疹患兒皮膚或外周血中Eotaxin與濕疹的關(guān)聯(lián)，而關(guān)于孕期母體外周血Eotaxin與嬰兒濕疹關(guān)聯(lián)的研究較少。因此，本研究擬采用前瞻性隊(duì)列研究設(shè)計(jì)探討孕期母體外周血Eotaxin與嬰兒濕疹發(fā)生的關(guān)聯(lián)，為預(yù)防嬰兒濕疹提供依據(jù)。

1研究對(duì)象與方法

1.1研究對(duì)象

2015年1月至2016年12月在廣州市婦女兒童醫(yī)療中心分娩并簽署了書面知情同意書，加入廣州出生隊(duì)列研究的孕婦及其子代作為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：①入組時(shí)孕周<20周；②在廣州市婦女兒童醫(yī)療中心進(jìn)行產(chǎn)前檢查并分娩；③嬰兒隨訪時(shí)間≥1年。排除標(biāo)準(zhǔn)：①孕婦在懷孕前被診斷為甲狀腺功能障礙、1型/2型糖尿病、高血壓、腎臟疾病和病毒性肝炎；②缺乏孕婦基線特征信息；③無(wú)法在妊娠14～27周獲得孕婦的血液樣本；④雙胎或多胎；⑤兒童死亡。最終共有890對(duì)母子被納入本研究。

1.2資料收集

入組時(shí)，采用研究對(duì)象結(jié)構(gòu)式自填問(wèn)卷收集孕婦的社會(huì)人口學(xué)特征、吸煙情況、既往病史等信息。采用改編的國(guó)際兒童哮喘和過(guò)敏性疾病研究(International Study of Asthma and Allergies in Childhood，ISAAC)問(wèn)卷，由兒童保健醫(yī)生在兒童出生42天、6月齡、12月齡隨訪時(shí)收集嬰兒濕疹的結(jié)局信息。以任何一次隨訪父母回答“孩子是否被醫(yī)生診斷患過(guò)濕疹？”這一問(wèn)題為“是”判定為嬰兒濕疹。由經(jīng)過(guò)統(tǒng)一培訓(xùn)的調(diào)查員當(dāng)面核查后收集問(wèn)卷，使用EpiData軟件進(jìn)行問(wèn)卷錄入。本研究獲得廣州市婦女兒童醫(yī)療中心倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。

1.3標(biāo)本采集與Eotaxin檢測(cè)

在孕14～27周內(nèi)由醫(yī)護(hù)人員采集7mL孕婦空腹外周靜脈血，低溫運(yùn)送至生物庫(kù)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室處理，包括在4℃下離心，采用凍存管對(duì)非抗凝管血樣的血清、血凝塊按成分進(jìn)行分裝，最后放置在-80℃的冰箱里進(jìn)行保存。采用懸浮液態(tài)芯片系統(tǒng)檢測(cè)懷孕14～27周孕婦外周血清趨化因子Eotaxin的水平。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2結(jié)果

2.1孕期母體外周血Eotaxin分布及影響因素

890名孕婦的平均年齡為(29.73±3.40)歲，教育水平集中在本科及大專(78.54%)，其次為碩士及以上(15.85%)，初中及以下占1.12%。大部分為初產(chǎn)婦(79.33%)。孕期母體外周血Eotaxin在人群中呈偏態(tài)分布，Eotaxin水平在9.68(4.41～15.06)pg/mL，見(jiàn)圖1。

將Eotaxin水平進(jìn)行對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后分析發(fā)現(xiàn)，不同孕前BMI水平及有無(wú)妊娠期高血壓疾病的孕婦外周血Eotaxin水平差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而產(chǎn)次、孕期煙草暴露情況、孕婦過(guò)敏史、妊娠期糖尿病對(duì)孕期母血Eotaxin水平的影響無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表1。

表1 孕期母血Eotaxin水平的影響因素

2.2孕期母血Eotaxin與嬰兒濕疹的關(guān)系

由于Eotaxin在人群中呈偏態(tài)分布，因此進(jìn)行對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后采用限制性立方樣條分析(restricted cubic spline)對(duì)孕期母體外周血log10Eotaxin與子代1歲內(nèi)濕疹的關(guān)聯(lián)進(jìn)行曲線擬合，調(diào)整妊娠期糖尿病、妊娠期高血壓、孕前BMI、孕婦過(guò)敏史、孕期煙草暴露等變量后，發(fā)現(xiàn)當(dāng)孕期母體外周血log10Eotaxin與子代1歲內(nèi)濕疹的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)存在非線性關(guān)聯(lián)(非線性P=0.021)，見(jiàn)圖2。

表2 孕期母血Eotaxin與子代1歲內(nèi)發(fā)生濕疹的關(guān)系(n=890)

3討論

本研究基于廣州出生隊(duì)列研究，探討了孕期母血Eotaxin水平與嬰兒濕疹發(fā)生的關(guān)系。采用Log-binomial回歸分析，在校正了妊娠期糖尿病、妊娠期高血壓、孕前BMI、孕期煙草暴露及孕婦過(guò)敏史后，發(fā)現(xiàn)孕期母血Eotaxin水平與嬰兒濕疹發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)有關(guān)。

3.1 Eotaxin與濕疹

Eotaxin屬于CC趨化因子家族，它的主要受體是CCR3(CC chemokine receptor 3)。Eotaxin被認(rèn)為主要是嗜酸性粒細(xì)胞的趨化劑，Spergel[4]研究發(fā)現(xiàn)被Eotaxin特異性激活的細(xì)胞與過(guò)敏性疾病(如特應(yīng)性皮炎、過(guò)敏性鼻炎和哮喘等)的發(fā)生有關(guān)。目前大多數(shù)研究都是評(píng)估過(guò)敏性疾病如哮喘[5]、嗜酸性食管炎[6]和慢性鼻-鼻竇炎[7]患者血漿、血清或組織中Eotaxin濃度的變化，而將Eotaxin作為濕疹標(biāo)志物的研究卻很少，如Hossny等人[8]檢測(cè)了78名兒童外周血的血清Eotaxin水平，發(fā)現(xiàn)濕疹兒童的Eotaxin水平顯著高于健康對(duì)照組，提示血清Eotaxin水平可能是代表濕疹病變活動(dòng)的生物標(biāo)志物。

3.2孕期母體外周血Eotaxin水平的影響因素

關(guān)于影響孕期母體外周血Eotaxin水平的因素有很多，在本研究中發(fā)現(xiàn)，不同孕前BMI水平的孕婦，其血液中的Eotaxin水平有差異。肥胖是一種炎癥狀態(tài)，脂肪量增加會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞因子和趨化因子增加，Vasudevan等[9]研究發(fā)現(xiàn)在小鼠和人類中，肥胖者的內(nèi)臟脂肪組織和血液循環(huán)中的Eotaxin和Eotaxin 的信使核糖核酸(messenger RNA，mRNA)水平增加。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)妊娠期高血壓也會(huì)對(duì)孕期母血的Eotaxin水平產(chǎn)生影響，妊娠期高血壓是機(jī)體在多種因素共同作用下發(fā)生的妊娠期嚴(yán)重的并發(fā)癥[10]，Redman等[11]報(bào)道妊娠期高血壓疾病的特征是母體的炎癥反應(yīng)過(guò)度，涉及從應(yīng)激細(xì)胞和受損組織釋放的復(fù)雜細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)，Eotaxin參與輔助型T細(xì)胞2(T helper 2,Th2)型炎癥反應(yīng)，Adela等[12]研究提示與健康孕婦相比，妊娠期高血壓孕婦的Eotaxin水平升高，這與本研究觀察到的結(jié)果一致。本研究在分析過(guò)程中對(duì)混雜因素如妊娠期糖尿病、妊娠期高血壓、孕前BMI、孕期煙草暴露、孕婦過(guò)敏史等因素進(jìn)行了調(diào)整，進(jìn)一步控制了混雜因素對(duì)研究結(jié)果的影響。

3.3孕期母體外周血Eotaxin水平影響嬰兒濕疹的機(jī)制

目前尚不清楚孕期母體血低Eotaxin水平與嬰兒濕疹發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)升高有關(guān)的具體機(jī)制。孕期母體免疫的第一大特點(diǎn)是Th2免疫偏倚，即Th2細(xì)胞因子較輔助型T細(xì)胞1(T helper 1，Th1)型細(xì)胞因子占優(yōu)勢(shì)。正常情況下，新生兒出生時(shí)都有微弱的Th2免疫偏倚，出生后迅速下調(diào)，但環(huán)境或遺傳易感性的作用可能會(huì)加劇這種正常的Th2傾斜的可能性，從而進(jìn)一步促進(jìn)新生兒Th2偏倚的持續(xù)存在，這種更長(zhǎng)時(shí)間的Th2傾斜與促進(jìn)特應(yīng)性過(guò)敏發(fā)展的傾向有關(guān)，可能導(dǎo)致特應(yīng)性疾病的流行增加[13]。而母體慢性低度炎癥可能會(huì)引起胎兒T細(xì)胞分化失衡，從而影響子代過(guò)敏性疾病的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。袁群霞等[14]研究發(fā)現(xiàn)血液中Eotaxin水平的升高，會(huì)導(dǎo)致嗜酸性粒細(xì)胞釋放白細(xì)胞介素-4(IL-4)，并且促進(jìn)嗜堿性粒細(xì)胞釋放Th2類細(xì)胞因子(如IL-4)，從而引起Th1/Th2免疫的失衡，導(dǎo)致形成以Th2免疫占優(yōu)勢(shì)為特點(diǎn)的免疫失衡狀態(tài)。濕疹患者表現(xiàn)為以Th2占優(yōu)勢(shì)的免疫狀態(tài)[15]，Allam等[16]研究發(fā)現(xiàn)與健康者相比，濕疹患者病變皮膚上Eotaxin水平及體內(nèi)的Eotaxin基因表達(dá)較高，濕疹患兒外周血中的Eotaxin水平也升高。本研究發(fā)現(xiàn)，與孕期母血Eotaxin高水平相比，Eotaxin較低水平是子代1歲內(nèi)發(fā)生濕疹的危險(xiǎn)因素，雖然目前尚未清楚其中的具體機(jī)制，但是從孕期母血Eotaxin低水平的子代1歲內(nèi)濕疹發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)增高，而患兒外周血Eotaxin水平與濕疹嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，這兩者關(guān)聯(lián)方向不一致來(lái)看，這提示孕期母血Eotaxin水平與子代濕疹之間的關(guān)聯(lián)可能不是直接的因果關(guān)聯(lián)，可能存在其他潛在的影響因素。下一步可以考慮進(jìn)行細(xì)胞實(shí)驗(yàn)或動(dòng)物實(shí)驗(yàn)來(lái)進(jìn)一步探索其中的機(jī)制。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)與孕期母血Eotaxin高水平相比，孕期母血水平較低與嬰兒濕疹發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)升高有關(guān)。探討孕期Eotaxin水平對(duì)嬰兒濕疹的影響，不僅有利于探索濕疹的發(fā)病機(jī)制，并且有利于早期監(jiān)測(cè)濕疹的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，早期采取干預(yù)措施，減少子代濕疹的發(fā)生。由于孕期母體免疫的特點(diǎn)是促炎和抗炎特征會(huì)隨著孕期的進(jìn)程而發(fā)生轉(zhuǎn)變，母體內(nèi)的細(xì)胞因子水平也會(huì)發(fā)生改變，本研究選取的是孕婦孕14～27周外周血Eotaxin水平，可能并不能全面地代表孕期母體的炎癥狀態(tài)。此外，濕疹是一種病因復(fù)雜的疾病，受遺傳、環(huán)境和營(yíng)養(yǎng)等多種因素的影響，可能在研究過(guò)程中存在某些尚未被識(shí)別的混雜因素，會(huì)導(dǎo)致未能全面觀察到其中的關(guān)聯(lián)。關(guān)于孕期趨化因子水平與子代濕疹的關(guān)系仍需進(jìn)一步在不同妊娠階段或臍帶血中開(kāi)展研究，或者通過(guò)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)探討其中的病理機(jī)制，使研究結(jié)果更具有普遍性和指導(dǎo)意義。