李澤建 劉萌萌 牛耕耘 魏美才

(1.浙江省麗水市林業(yè)局 華東藥用植物園科研管理中心 省級(jí)博士后科研工作站 麗水 323000；2.麗水學(xué)院生態(tài)學(xué)院 麗水 323000； 3.江西師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 南昌 330022)

鵝掌楸(Liriodendronchinense)是木蘭科(Magnoliaceae)重要珍貴樹種，被列入《世界自然保護(hù)聯(lián)盟瀕危物種紅色名錄》的近危(NT)種類(IUCN， 2012)，也是中國國家二級(jí)重點(diǎn)珍稀瀕危保護(hù)植物。該種分布于中國中南部和越南北部。國內(nèi)散見于陜西秦嶺、安徽大別山以南和四川、云南以東地區(qū)(吳征鎰等， 2003)。歐陽貴明等(1993)最早發(fā)現(xiàn)并研究報(bào)道了鵝掌楸葉蜂及其生物學(xué)習(xí)性。同年，蕭剛?cè)?1993)報(bào)道了一新種： 鵝掌楸葉蜂(MegabelesesliriodendrovoraxG. Xiao, 1993)。

巨基葉蜂屬M(fèi)egabelesesTakeuchi, 1952隸屬于膜翅目(Hymenoptera)、葉蜂亞目(Tenthredinomorpha)、葉蜂科(Tenthredinidae)、巨基葉蜂亞科(Megabelesinae)，模式種為M.crassitarsisTakeuchi, 1952(Takeuchi, 1952)。Wei(2010)厘訂了本屬世界種類，描述了5種，其中中國分布3種： 鵝掌楸巨基葉蜂M.liriodendrovoraxG. Xiao, 1993、木蘭巨基葉蜂M.magnoliaeWei, 2010、肖氏巨基葉蜂M.xiaoiWei, 2010； 日本分布2種：M.crassitarsisTakeuchi, 1952、M.tsurugiensisTogashi, 2008(Togashi, 2008)。Hara(2016)報(bào)道了M.crassitarsis的幼蟲生物學(xué)特性，并將M.tsurugiensisTogashi降為M.crassitarsisTakeuchi的次異名，但該次異名的處理尚缺少直接支持證據(jù)，需要后續(xù)進(jìn)一步研究確定。

本文報(bào)道新種鳳陽巨基葉蜂M.fengyangshanaLi, Liu & Wei, sp. nov.，其幼蟲取食鵝掌楸的葉片，當(dāng)蟲口密度較大時(shí)，可將寄主葉片蠶食殆盡，影響植株生長，對(duì)寄主造成嚴(yán)重危害。

1 材料與方法

1.1 材料

新種模式標(biāo)本采自浙江麗水龍泉市鳳陽山。正模標(biāo)本和部分副模標(biāo)本保存于亞洲葉蜂博物館(ASMN，江西南昌)，部分副模標(biāo)本保存于華東藥用植物園科研管理中心模式標(biāo)本室(formerly LSAF，浙江麗水)。

1.2 術(shù)語和縮寫

構(gòu)造描述術(shù)語采用Ross(1945)和Niu等(2010)。正文中使用術(shù)語縮寫目錄如下： POL(postocellar line)： 側(cè)單眼距，2個(gè)側(cè)單眼內(nèi)緣之間的距離； OOL(ocular-ocellar line)： 復(fù)眼單眼距，即側(cè)單眼與復(fù)眼之間的距離； OCL(ocellar-occipital carina line)： 單眼后頭距，側(cè)單眼與后頭邊緣之間的距離。

1.3 圖片拍攝和處理

本研究使用體視顯微鏡Motic-SMZ-171對(duì)針插標(biāo)本進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察； 成蟲的圖片通過尼康相機(jī)D700拍攝獲得，局部特征圖片由徠卡Z16APO圖像采集系統(tǒng)拍攝。所有圖片經(jīng)由合成軟件Helicon Focus和修圖軟件Adobe Photoshop CS 6.0進(jìn)行處理。幼蟲和寄主植物照片使用蘋果8plus手機(jī)拍攝。

1.4 線粒體基因組序列測(cè)序和分析

本研究使用二代測(cè)序獲得了鳳陽巨基葉蜂新種(CSCS-Hym-MC0236，雄蟲)的基因組。樣品采集自浙江龍泉鳳陽山鳳陽湖(119.180°E，27.877°N，1 549 m， 2017.V.19，李澤建，劉萌萌，高凱文，LSAF17072)，標(biāo)本鑒定人為魏美才。樣品殘?bào)w保存于亞洲葉蜂博物館。

試驗(yàn)樣品均取胸部肌肉組織，采用Qiagen試劑盒(DNeasy Blood & Tissue Kit)提取基因組DNA。使用Illumina Hiseq 4000 platform進(jìn)行二代測(cè)序。原始數(shù)據(jù)經(jīng)質(zhì)檢、修剪后獲得clean reads。分別利用MitoZ軟件(Mengetal.， 2019)進(jìn)行無參組裝，利用Geneious(https:∥www.geneious.com)軟件使用近緣種作為參考序列進(jìn)行組裝，對(duì)無參組裝結(jié)果進(jìn)行檢驗(yàn)。利用MITOS Web Server(http:∥mitos.bioinf.uni-leipzig.de/index.py)對(duì)tRNA進(jìn)行注釋，根據(jù)與近緣種的比較研究，確定蛋白質(zhì)編碼基因(PCG)和rRNA的起止位置。

1.5 基因組比較分析研究

使用MEGA7計(jì)算鵝掌楸巨基葉蜂、木蘭巨基葉蜂和鳳陽巨基葉蜂的遺傳距離。選取巨基葉蜂屬的姊妹群枝膜葉蜂屬(Cladiucha)的3個(gè)種作為外群，使用TranslatorX (Abascaletal.， 2010)對(duì)蛋白質(zhì)編碼基因進(jìn)行比對(duì)，應(yīng)用IQtree軟件(Nguyenetal., 2015)基于最大似然法對(duì)聯(lián)合數(shù)據(jù)集進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系推斷，參數(shù)設(shè)置為默認(rèn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 鳳陽巨基葉蜂Megabeleses fengyangshana Li, Liu & Wei, sp. nov.(圖1)

雄： 體長8～8.5 mm(圖1a)； 體黑色，具弱金屬藍(lán)色光澤，后足基節(jié)外側(cè)下部具1個(gè)大白斑； 前中足股節(jié)前側(cè)大部、前中足跗節(jié)和脛節(jié)端距淺褐色，口須中部污褐色。體毛銀色； 翅端半部弱煙褐色，翅痣和翅脈黑色。

頭部背側(cè)光澤強(qiáng)烈，額區(qū)、內(nèi)眶中部和唇基刻點(diǎn)粗大密集，間隙狹窄(圖1b)； 單眼后區(qū)中部、后眶大部區(qū)域和后眶下部具稀疏大刻點(diǎn)； 前胸背板前角大部光滑，前胸背板除前角外和中胸背板具明顯小刻點(diǎn)，刻點(diǎn)間隙具細(xì)弱刻紋； 中胸小盾片前側(cè)區(qū)域光滑，幾乎無刻點(diǎn)，小盾片側(cè)緣、后緣和附片中央大部區(qū)域具密集刻點(diǎn)，刻點(diǎn)間隙具明顯刻紋； 中胸前側(cè)片刻點(diǎn)十分密集，刻點(diǎn)間幾乎無光滑間隙； 中胸后上側(cè)片無明顯大刻點(diǎn)，刻紋細(xì)密； 中胸后下側(cè)片前后緣光滑，無刻紋，刻點(diǎn)稀疏，中部區(qū)域具致密刻紋； 后胸前側(cè)片上部刻紋和刻點(diǎn)粗密，中下部刻點(diǎn)十分稀疏，刻紋細(xì)弱； 后胸后側(cè)片前半部刻點(diǎn)稀疏，大部光滑，后半部具粗大刻點(diǎn)，刻紋粗糙(圖1g)； 后足基節(jié)外側(cè)刻點(diǎn)較為密集，刻點(diǎn)間隙等寬于刻點(diǎn)直徑，腹側(cè)刻點(diǎn)較為稀疏，刻點(diǎn)間隙寬于刻點(diǎn)直徑，刻紋細(xì)弱； 腹部第1背板兩側(cè)條形區(qū)域高度光滑，其余區(qū)域刻點(diǎn)較密集，其余背板刻點(diǎn)較第1背板稀疏，刻點(diǎn)間隙光滑，無明顯刻紋(圖1e)； 腹板刻點(diǎn)較密集(圖1f)。

營改增的政策執(zhí)行以來，極大增加了企業(yè)對(duì)財(cái)務(wù)的管理風(fēng)險(xiǎn)。營改增涉及的企業(yè)財(cái)務(wù)管理內(nèi)容需要進(jìn)行調(diào)整，然而，相當(dāng)數(shù)量的企業(yè)財(cái)務(wù)人員囿于自身水平粗淺且沒有對(duì)營改增的內(nèi)容進(jìn)行充分的系統(tǒng)化的業(yè)務(wù)學(xué)習(xí)，使得他們并不能對(duì)營改增政策的指定初衷有明確的認(rèn)知，由此便無法知曉營改增政策的相關(guān)內(nèi)容和細(xì)節(jié)，從而無法利用好營改增的政策利好為企業(yè)發(fā)展帶來的紅利，反而會(huì)由于對(duì)營改增的不了解容易造成在企業(yè)財(cái)務(wù)管理中的風(fēng)險(xiǎn)。

唇基前緣缺口淺弧形，深度約為唇基1/8～1/10長(圖1c)； 顎眼距寬線狀，約0.3倍于中單眼直徑； 觸角窩間距幾乎等寬于觸角窩至復(fù)眼間距(32∶ 30)； 中窩寬深，側(cè)窩窄淺； 額脊寬，稍隆起； 單眼后區(qū)中部微弱隆起，寬長比約為1.5； 單眼后溝細(xì)淺，側(cè)溝寬淺，向后弱分歧； 背面觀后頭短于復(fù)眼1/2長，側(cè)緣向后稍收窄(圖1b)； 觸角明顯長于腹部(25∶ 17)，短于頭、胸及腹部之和(25∶ 35)，第3節(jié)等長于第4節(jié)，第3～9節(jié)長度之比為31∶ 31∶ 30∶ 28∶ 21∶ 15∶ 11(圖1 d)； 中胸小盾片寬約等于長，前緣三角形突出，后緣橫脊明顯，后緣兩側(cè)角稍突出； 淡漠區(qū)間距約2.5倍于淡漠區(qū)寬； 腹部第1背板內(nèi)緣長度約為外緣長度的1/2； 后足基節(jié)端部伸達(dá)第5腹板； 后足脛節(jié)外側(cè)具淺弱長縱溝，內(nèi)端距約1/4倍于后足基跗節(jié)長； 后足基跗節(jié)約等長于其后4跗分節(jié)之和，爪內(nèi)齒長于外齒(圖1 h)； 前翅cu-a脈與1 M室基部不頂接，2r脈交于2Rs室近中部，2 m-cu與1r-m脈頂接，1Rs和2Rs室內(nèi)均具明顯翅疤； 后翅臀室柄約等長于cu-a脈的1/5長(圖1a)； 下生殖板寬近等于長，端部圓鈍(圖1f)； 生殖鋏如圖1i，抱器長明顯大于寬，內(nèi)緣中部凹； 陽莖瓣(圖1j)頭葉長大于寬，背頂角稍突出，無缺口，中脊較寬，腹側(cè)淡色區(qū)短于深色區(qū)。

雌： 未見。

分布： 中國(浙江)。

寄主： 木蘭科的鵝掌楸(俗名馬褂木)。幼蟲取食狀見圖2。

圖2 鳳陽巨基葉蜂，新種Megabeleses fengyangshana Li, Liu & Wei, sp. nov. 幼蟲取食鵝掌楸葉片F(xiàn)ig. 2 Larva of Megabeleses fengyangshana Li, Liu & Wei, sp. nov. feeding on leaves of Liriodendron chinense

詞源： 新種模式產(chǎn)地為浙江麗水龍泉市鳳陽山，特以新種模式產(chǎn)地命名。

鑒別特征： 本新種與鵝掌楸巨基葉蜂M.liriodendrovoraxG. Xiao, 1993在外部形態(tài)構(gòu)造方面十分近似，除陽莖瓣構(gòu)造細(xì)節(jié)有差別外，只有前翅2Rs室具明顯的翅疤、中胸前側(cè)片刻點(diǎn)較密集等與之不同，但本種在線粒體基因組各編碼基因序列上均與后者差異顯著，其中K2P最小差距為5.2%，最大差距為13.6%，可以確認(rèn)二者非同種(參見2.2節(jié))。

2.2 鳳陽巨基葉蜂線粒體基因組及比較

二代測(cè)序產(chǎn)出原始reads共計(jì)16 G。MitoZ獲得組裝序列1條，經(jīng)驗(yàn)證獲得線粒體基因組序列1條，包含37個(gè)基因(Genbank號(hào)是MW617897)。參考鵝掌楸巨基葉蜂和木蘭巨基葉蜂以及其他葉蜂科種類，完成蛋白質(zhì)編碼基因的注釋。分別對(duì)13個(gè)蛋白質(zhì)編碼基因進(jìn)行比對(duì)，并對(duì)巨基葉蜂屬內(nèi)3個(gè)種類進(jìn)行兩兩遺傳距離測(cè)算，結(jié)果見表1。以每個(gè)蛋白質(zhì)編碼間的P距離作為樣本繪制雷達(dá)圖(圖3)，巨基葉蜂屬內(nèi)蛋白質(zhì)編碼基因的遺傳距離為5.15%(nad4l:M.liriodendrovorax/M.fengyangshana)到20.75%(atp8:M.liriodendrovorax/M.magnoliae)之間。其中兩兩差異的最大值均為atp8的遺傳距離。鳳陽巨基葉蜂和鵝掌楸巨基葉蜂間的蛋白質(zhì)編碼基因P距離(均值=8.29)低于木蘭巨基葉蜂與其二者的差距(均值分別為12.28和12.73)，這與各種間形態(tài)差異程度一致(參見分種檢索表)。

將比對(duì)后的13個(gè)蛋白質(zhì)編碼基因串聯(lián)后獲得總序列長度為11 235 bp的6種類數(shù)據(jù)集。基于最大似然法獲得系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系分支圖(圖4)，所有分支支持度均為100。該結(jié)果顯示： 巨基葉蜂屬3種構(gòu)成單系群，其中鵝掌楸巨基葉蜂和鳳陽巨基葉蜂關(guān)系更近，二者是姊妹種，然后再與木蘭巨基葉蜂組成單系群； 外群枝膜葉蜂屬3種構(gòu)成單系群。

2.3 巨基葉蜂屬已知種分種檢索表

1 體無金屬光澤； 腹部背板無刻點(diǎn)，具密集細(xì)刻紋； 小盾片的附片白色，后足股節(jié)基半部白色； 后足基跗節(jié)明顯膨大，長寬比約等于4～4.5； 腹部第1背板后緣缺口很深，中部長約為側(cè)緣長的1/3； 后胸前側(cè)片背葉莖部十分狹窄，長寬比大于5； 鋸背片懸膜窄于鋸背片中部寬； 陽莖瓣頭葉背頂角具顯著缺口； 寄主木蘭屬M(fèi)agnolia植物。M.crassitarsis種團(tuán)

2

表1 基于蛋白質(zhì)編碼基因的3種巨基葉蜂的P距離Tab.1 P-distance of 3 Megabeleses species based on 13 PCGs

圖3 基于13個(gè)蛋白質(zhì)編碼基因的3種巨基葉蜂的P距離雷達(dá)圖Fig. 3 Radar chart of P-distance of 13 PCGs among 3 Megabeleses species

圖4 使用最大似然法構(gòu)建3種巨基葉蜂蛋白質(zhì)編碼基因序列的進(jìn)化樹Fig. 4 Phylogenetic tree inferred from PCGs sequence of 3 Megabeleses species using ML method

-至少腹部具弱藍(lán)色金屬光澤； 腹部背板具顯著刻點(diǎn)，無明顯微細(xì)刻紋； 小盾片的附片黑色，后足股節(jié)黑色，或背側(cè)具白色條斑； 后足基跗節(jié)較細(xì)，長寬比等于6～7； 腹部第1背板后緣中部缺口較淺，中部長約為側(cè)緣長的1/2； 后胸前側(cè)片背葉短寬，莖部長寬比小于3； 鋸背片懸膜不窄于鋸背片中部寬； 陽莖瓣頭葉背頂角突出，無缺口； 寄主鵝掌楸屬Liriodendron植物。M.liriodendrovorax種團(tuán)

4

2 前胸背板后緣寬邊、翅基片、腹部第1背板后側(cè)3/4、后足脛節(jié)除端部外、后足跗節(jié)全部黃白色； 后足基跗節(jié)等長于其后4跗分節(jié)之和； 背面觀兩性后頭兩側(cè)不膨大； 中胸小盾片后緣圓弧形強(qiáng)烈隆起； 產(chǎn)卵器短于中足脛節(jié)，中部鋸刃具20～25個(gè)細(xì)小亞基齒。中國(安徽、浙江)

木蘭巨基葉蜂M.magnoliaeWei, 2010

- 前胸背板、翅基片、腹部第1背板、后足脛節(jié)和跗節(jié)全部黑色； 后足基跗節(jié)長于其后4跗分節(jié)之和； 雌蟲后頭兩側(cè)明顯膨大； 后胸小盾片后緣截型，平坦或低鈍橫脊?fàn)盥∑穑?產(chǎn)卵器長于中足脛節(jié)，中部鋸刃具20～30個(gè)細(xì)小亞基齒

3

3 后足基跗節(jié)強(qiáng)烈膨大，兩端明顯收窄，外側(cè)具明顯中縱溝，長1.3倍于2～4跗分節(jié)之和； 中胸小盾片微弱隆起，具寬淺中縱溝，后緣脊模糊； 唇基前緣缺口角狀，深達(dá)唇基1/6長； 鋸鞘端部窄圓，鋸腹片中部鋸刃具20個(gè)左右的亞基齒。日本…M.tsurugiensisTogashi, 2008

- 后足基跗節(jié)膨大程度較弱，基部明顯收窄，端部不明顯收窄，外側(cè)無中縱溝，長1.1倍于其后跗分節(jié)之和； 中胸小盾片平坦，具細(xì)弱中縱脊，后緣脊顯著； 唇基前緣缺口弧形，深達(dá)唇基1/8長； 鋸鞘端部窄圓，鋸腹片中部鋸刃具30個(gè)左右的亞基齒。日本

M.crassitarsisTakeuchi, 1952

4 頭胸部具強(qiáng)藍(lán)色金屬光澤； 腹部第1背板黑色，兩側(cè)無白斑； 雌蟲后足股節(jié)背側(cè)具白色條斑； 中胸小盾片寬大于長，前緣鈍弧形突出，后緣橫脊銳利，附片具中縱脊； 中胸前側(cè)片刻點(diǎn)粗密，間隙狹窄并具微細(xì)刻紋； 產(chǎn)卵器等長于中足脛節(jié)，背面觀鋸鞘基部等寬于尾須； 翅均勻煙灰色； 陽莖瓣頭葉粗短，長幾乎等于寬。中國(湖南)

肖氏巨基葉蜂M.xiaoiWei, 2010

- 頭胸部金屬藍(lán)色光澤微弱或缺如，腹部第1背板兩側(cè)具明顯白斑，兩性后足股節(jié)全部黑色； 中胸小盾片長等于寬，前緣三角形突出，后緣橫脊低弱模糊，附片無中縱脊； 產(chǎn)卵器明顯長于中足脛節(jié)，背面觀鋸鞘基部寬2倍于尾須寬； 前翅端部煙褐色，基部透明

5

5 前翅2Rs室無翅疤； 中胸前側(cè)片刻點(diǎn)較稀疏，表面光滑； 陽莖瓣中脊較窄，腹側(cè)下部的淡色區(qū)域明顯長于上部的深色區(qū)域。中國(安徽、重慶、湖南、江西、浙江)

鵝掌楸巨基葉蜂M.liriodendrovoraxXiao, 1993

- 前翅2Rs室具明顯翅疤； 中胸前側(cè)片刻點(diǎn)較密集，表面具弱刻紋； 陽莖瓣中脊較寬，腹側(cè)下部的淡色區(qū)域明顯短于上部的深色區(qū)域。中國(浙江)

鳳陽巨基葉蜂M.fengyangshanasp. nov.