洪濤 陶逸然 樸松哲 柯莽

溫州醫(yī)科大學(xué)附屬臺(tái)州醫(yī)院泌尿外科，浙江臺(tái)州 317000

腺性膀胱炎是一種以膀胱黏膜與黏膜上尿路上皮腺上皮化為特征的惡性疾病，在我國(guó)，腺性膀胱炎發(fā)病率為0.9%～1.9%。腺性膀胱炎主要表現(xiàn)為血尿、尿失禁等癥狀。環(huán)氧化酶2（cyclooxygenase2，COX-2）屬于完整膜結(jié)合蛋白，是花生四烯酸合成前列腺素過程中生成的限速酶。組胺是一種炎癥介質(zhì)，由左旋組氨酸脫去羧基后生成，其生成后儲(chǔ)存在嗜堿性粒細(xì)胞中，在嗜堿性粒細(xì)胞中以肝素結(jié)合形式存在，當(dāng)釋放到細(xì)胞外時(shí)，組胺與肝素分離后發(fā)揮活性作用。過氧化物合酶2（peroxide synthase 2，PTGS2）是機(jī)體內(nèi)花生四烯酸合成前列腺素酶的前提。本文旨在研究COX-2、HRH1、PTGS2 在腺性膀胱炎中的表達(dá)及其臨床意義，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

整群隨機(jī)化法選取2019 年1 月～2021 年1 月溫州醫(yī)科大學(xué)附屬臺(tái)州醫(yī)院收治的腺性膀胱炎患者88例為腺性膀胱炎組，同期選取膀胱炎患者88 例為對(duì)照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《腺性膀胱炎臨床診斷和治療中國(guó)專家共識(shí)》診斷標(biāo)準(zhǔn)；②無嚴(yán)重心肺臟器功能不全者；③無精神疾病、意識(shí)障礙者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他腫瘤放化療者；②合并其他嚴(yán)重臟器疾病者；③有藥物過敏史者。兩組的臨床基線資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。見表1。本研究經(jīng)溫州醫(yī)科大學(xué)附屬臺(tái)州醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者及家屬均知情并簽署知情同意書。

表1 兩組臨床基線資料比較

1.2 方法

抽取兩組患者靜脈血5 ml，2000 r/min 離心處理5 min，-20℃保存于低溫箱中待檢。

1.2.1 檢測(cè)兩組患者的COX-2、HRH1 水平 免疫組化染色法檢測(cè)COX-2、HRH1 水平。免疫組化方法：二甲苯脫蠟2 次，100%、90%和80%乙醇梯度水化，蒸餾水、PBS 浸泡，微波修復(fù)抗原20 min，自然冷卻后置于3%溶液以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶活性，PBS 清洗3次，滴加抗體GRP94、AKR1B10 置于濕盒內(nèi)4℃中孵育過夜，PBS 洗3 次，滴加IgC 二抗，溫室孵育30 min，加鏈霉素生物素蛋白-過氧化物，PBS 洗3 次，DAB 顯色鏡下觀察顯色結(jié)果，適時(shí)終止反應(yīng)，使用蘇木素進(jìn)行復(fù)染，80%、90%、100%乙醇梯度脫水、晾干，二甲苯透明，封片。觀察統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)并記錄。

1.2.2 檢測(cè)兩組患者的PTGS2 水平 實(shí)時(shí)熒光定量法PCR 檢測(cè)兩組的PTGS2 水平。采集兩組的外周血核細(xì)胞，Trizol 試劑提取總RNA，將總RNA 通過逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA。配制樣本液反應(yīng)體系主要包括使用2.5μl RNA 樣本液，RT、5RT 緩沖液為0.8 μl，dntps、mmlv 各為2.2 μl、4.3 μl，以上溶液相互反應(yīng)25 min，溫度保持在15℃。建立RT-PCR 反應(yīng)檢測(cè)體系cDNA、無核酸酶水均為1.36 μl，探針混合物、通用混合物各為7.59 μl、0.12 ml，肌動(dòng)蛋白用作內(nèi)參基因。PTGS2上游引物：5′-GATGTGTATCCTCAGAGCTTTG-3′，下游引物：5′-CGATGACAGAGATATCCCAG-3′；PTGS2上游引物：5′-ACACTCCAGCTGGGATCA CATTG -CCAGG-3′，下游引物：5′-CTCAACTGGTGTGCGTGGAG-TCGGCAATTCAGTTGAGGGTAATCC-3′，在92℃下進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)，持續(xù)時(shí)間20 min，之后62℃下反應(yīng)3 min，重復(fù)36 次，PTGS2 表達(dá)量用2計(jì)算得到。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 兩組的COX-2、HRH1、PTGS2 水平比較

兩組的COX-2、HRH1、PTGS2 水平比較，腺性膀胱炎組均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。見表2。

表2 兩組的COX-2、HRH1、PTGS2 比較（）

2.2 腺性膀胱炎患者的COX-2、HRH1、PTGS2 與臨床特征關(guān)系

COX-2、HRH1、PTGS2 指標(biāo)水平與腺性膀胱炎患者的性別、年齡（31～90 歲）無關(guān)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）；COX-2、HRH1、PTGS2 指標(biāo)表達(dá)水平與腺性膀胱炎患者的梗阻、感染、結(jié)石有關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）；有梗阻患者的COX-2、HRH1、PTGS2 水平高于無梗阻患者，有感染患者的COX-2、HRH1、PTGS2 水平高于無感染患者，有結(jié)石患者的COX-2、HRH1、PTGS2 水平高于無結(jié)石患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。見表3。

表3 腺性膀胱炎患者的COX-2、HRH1、PTGS2 與臨床特征關(guān)系（n=88，）

2.3 COX-2、HRH1、PTGS2 對(duì)腺性膀胱炎的診斷價(jià)值

ROC 分析COX-2、HRH1、PTGS2 診斷腺性膀胱炎的曲線下面積低于三項(xiàng)聯(lián)合，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）；三項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)的敏感度、準(zhǔn)確度高于COX-2、HRH1、PTGS2 表達(dá)單一檢測(cè)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。見表4。

表4 COX-2、HRH1、PTGS2 對(duì)腺性膀胱炎的診斷價(jià)值[%（n/N）]

3 討論

腺性膀胱炎屬于常見炎癥疾病，其發(fā)病機(jī)制尚不明確，多認(rèn)為是膀胱尿路上皮受長(zhǎng)期慢性刺激所導(dǎo)致。也被認(rèn)為是在慢性炎癥、梗阻、結(jié)石等刺激因素作用下，經(jīng)歷腺體形成等系列變化進(jìn)而導(dǎo)致腺性膀胱炎出現(xiàn)。當(dāng)下臨床中缺乏對(duì)腺性膀胱炎的研究，因此本研究旨在探討COX-2、HRH1、PTGS2 在腺性膀胱炎中的表達(dá)及聯(lián)合檢測(cè)的意義。

圖1 COX-2、HRH1、PTGS2 對(duì)腺性膀胱炎的診斷價(jià)值

COX-2 具有抑制免疫細(xì)胞凋亡的功能。研究顯示COX-2 水平升高可導(dǎo)致機(jī)體免疫細(xì)胞表達(dá)降低，增加疾病發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。本研究結(jié)果提示腺性膀胱炎患者的COX-2 呈現(xiàn)高度表達(dá)，可用于預(yù)測(cè)腺性膀胱炎。HRH1 以異染性顆粒形式存儲(chǔ)在機(jī)體肥大細(xì)胞內(nèi)，組胺在表皮或基膜中表達(dá)能使機(jī)體產(chǎn)生瘙癢感，而當(dāng)組胺在真皮層中則可使機(jī)體產(chǎn)生疼痛，造成血管性水腫等癥狀。本研究對(duì)腺性膀胱炎、膀胱炎患者體內(nèi)的HRH1 水平進(jìn)行分析，結(jié)果顯示腺性膀胱炎患者體內(nèi)的HRH1 水平高于膀胱炎患者，提示腺性膀胱炎患者的HRH1 水平普遍較高，HRH1 可作為腺性膀胱炎早期診斷的輔助標(biāo)志物。

研究指出，PTGS2 在腺性膀胱炎中水平顯著升高，提示腺性膀胱炎中PTGS2 表達(dá)呈現(xiàn)較高水平，其參與腺性膀胱炎的發(fā)展，PTGS2 在腺性膀胱炎中的作用機(jī)制：通過炎性細(xì)胞激活刺激血管平滑肌細(xì)胞遷移與增殖，增加血管通透性并發(fā)揮作用。本研究結(jié)果顯示，三項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)腺性膀胱炎的敏感度、準(zhǔn)確度均高于單一檢測(cè)，說明聯(lián)合檢測(cè)比單項(xiàng)檢測(cè)的應(yīng)用價(jià)值更高，能有效提高診斷準(zhǔn)確度與敏感度，對(duì)腺性膀胱炎患者的治療及預(yù)后具有重要診斷價(jià)值。

綜上所述，COX-2、HRH1、PTGS2 表達(dá)異常與梗阻、感染、結(jié)石相關(guān)，且三者聯(lián)合檢測(cè)對(duì)腺性膀胱炎診斷價(jià)值更高，為腺性膀胱炎早期診斷提供借鑒指導(dǎo)。