戚青林，彭 潔，王 晶

江西省萍鄉(xiāng)市婦幼保健院生殖健康科，江西萍鄉(xiāng) 337000

乙型肝炎(簡稱乙肝)作為一種由乙肝病毒(HBV)感染所導(dǎo)致的傳染性疾病，給人民的身體健康帶來嚴(yán)重威脅[1]。有研究表明，HBV可以自由通過血睪屏障侵入到男性生殖細(xì)胞核中整合在宿主染色質(zhì)中，對男性生殖功能造成不同程度損傷，影響其精子質(zhì)量[2]。目前，對HBV感染影響精子質(zhì)量的程度及發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，且僅研究HBV對精液常規(guī)、精子畸形率等精液基本參數(shù)的影響[3]。本研究對HBV感染男性患者精液常規(guī)參數(shù)、抗精子混合球蛋白試驗(yàn)結(jié)合率(R)、精子存活率、精子自發(fā)性頂體反應(yīng)率、精子正常形態(tài)率及精子DNA碎片率變化情況，以及HBV感染與精子運(yùn)動、精子表面結(jié)合抗體水平、精子頂體反應(yīng)潛能、精子形態(tài)功能及精子染色體完整性的關(guān)系進(jìn)行分析比較，綜合探討HBV感染與男性精液參數(shù)及相關(guān)功能的相關(guān)性，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2019年1月至2021年9月來本院生殖健康科就診的HBV感染男性患者50例作為研究對象，根據(jù)HBV感染情況分為小三陽組(乙肝表面抗原、乙肝e抗體、乙肝核心抗體陽性)和大三陽組(乙肝表面抗原、乙肝e抗原、乙肝核心抗體陽性)，每組各25例。另選取同期HBV未感染男性患者50例作為對照組。所有患者年齡20～46歲，平均 (33.54±5.52 )歲；沒有采取任何避孕措施患者夫妻雙方性生活正常1年以上未孕，未感染其他病原微生物，排除睪丸附睪等異常。本研究獲得本院倫理委員會批準(zhǔn)同意。

1.2 參數(shù)及檢測方法 所有患者取精液前禁欲2～7 d，采用手淫法取精液，將精液全部射入取精液杯中，置于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中，精液完全液化后按照《WHO人類精液檢查與處理實(shí)驗(yàn)室手冊》(第 5 版)標(biāo)準(zhǔn)對所有精液標(biāo)本進(jìn)行精液常規(guī)、R、精子存活率、精子自發(fā)性頂體反應(yīng)率、精子正常形態(tài)率及精子DNA碎片率等檢測。

1.2.1 精液常規(guī) 采用上海北昂彩色精子質(zhì)量檢測分析儀進(jìn)行精液常規(guī)分析并計(jì)算精液量、精子濃度、精子活力[包括前向運(yùn)動精子比率(PR)、非前向運(yùn)動精子比率、不動精子比率3個(gè)級別]。

1.2.2 R 采用安徽安科生物工程(集團(tuán))股份有限公司抗精子結(jié)合抗體檢測試劑盒(混合抗球蛋白凝集法)進(jìn)行R檢測，參照《WHO人類精液檢查與處理實(shí)驗(yàn)室手冊》(第 5 版)標(biāo)準(zhǔn)，R=黏附于膠乳顆粒的活動精子數(shù)/計(jì)數(shù)的總活動精子數(shù)×100%，R>50%為抗精子抗體(AsAb)陽性，R≤50%為AsAb陰性。

1.2.3 精子存活率 采用伊紅染色法檢測精子存活率，精子存活率≥58.00%為正常，<58.00%為異常。精子存活率檢測試劑盒購于安徽安科生物工程(集團(tuán))股份有限公司。

1.2.4 精子自發(fā)性頂體反應(yīng)率 采用精子頂體染色試劑盒(PSA-FITC染色法)檢測精子自發(fā)性頂體反應(yīng)率，精子自發(fā)性頂體反應(yīng)率≥10%為陽性,<10%為陰性。精子頂體染色試劑盒購于安徽安科生物工程(集團(tuán))股份有限公司。

1.2.5 精子正常形態(tài)率 采用改良巴氏染色法檢測精子正常形態(tài)率，精子正常形態(tài)率≥4%為正常，<4%為異常。精子正常形態(tài)率檢測試劑購于珠海貝索生物技術(shù)有限公司。

1.2.6 精子DNA碎片率 采用染色質(zhì)擴(kuò)散法檢測精子DNA碎片率，精子DNA碎片率≤15%為正常，>15%為陽性。精子 DNA 碎片率檢測染色試劑盒購于安徽安科生物工程(集團(tuán))股份有限公司。

2 結(jié) 果

2.1 3組患者年齡和精液常規(guī)參數(shù)比較 對照組、小三陽組、大三陽組患者年齡和精液量比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與對照組比較，小三陽組和大三陽組患者精子濃度、PR、精子活力均有不同程度降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與小三陽組比較，大三陽組患者精子濃度有所下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；大三陽組患者PR、精子活力雖稍有變化，但差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 3組患者年齡和精液常規(guī)參數(shù)比較

2.2 3組患者R和AsAb陽性結(jié)果比較 與對照組比較，小三陽組和大三陽組患者R雖稍有變化,但差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；與小三陽組比較，大三陽組患者R雖稍有降低，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。3組患者AsAb陽性均為0例，AsAb陽性率比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表2 3組患者R和AsAb陽性結(jié)果比較

2.3 3組患者精子存活率比較 與對照組比較，小三陽組和大三陽組患者精子存活率均有不同程度降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與小三陽組比較，大三陽組患者精子存活率雖有所升高，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。對照組、小三陽組、大三陽組患者精子存活陽性率(精子存活率<58.00%)分別為14.00%、56.00%、36.00%，小三陽組和大三陽組均高于對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；但小三陽組和大三陽組患者精子存活陽性率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表3。

表3 3組患者精子存活率比較

2.4 3組患者精子自發(fā)性頂體反應(yīng)率比較 與對照組比較，小三陽組患者精子自發(fā)性頂體反應(yīng)率雖有所降低，大三陽組患者雖有所升高，但差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與小三陽組比較，大三陽組患者精子自發(fā)性頂體反應(yīng)率雖稍有升高，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。對照組、小三陽組和大三陽組患者精子自發(fā)性頂體反應(yīng)陽性患者均為0例，3組患者精子自發(fā)性頂體反應(yīng)陽性率比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表4。

表4 3組患者精子自發(fā)性頂體反應(yīng)率比較

2.5 3組患者精子正常形態(tài)率比較 與對照組比較，小三陽組和大三陽組患者精子正常形態(tài)率均有不同程度降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與小三陽組比較，大三陽組患者精子正常形態(tài)率雖有所降低，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。對照組、小三陽組、大三陽組患者精子異常形態(tài)陽性率分別為20.00%、56.00%、40.00%，小三陽組和大三陽組患者精子異常形態(tài)陽性率均高于對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；但小三陽組和大三陽組患者精子異常形態(tài)陽性率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表5。

表5 3組患者精子正常形態(tài)率比較

2.6 3組患者精子DNA碎片率比較 與對照組比較，小三陽組和大三陽組患者精子DNA碎片率均有不同程度升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與小三陽組比較，大三陽組患者精子DNA碎片率雖有所升高，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。對照組、小三陽組、大三陽組患者精子DNA碎片陽性率分別為8.00%、56.00%、36.00%，小三陽組和大三陽組均高于對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；但小三陽組和大三陽組患者精子DNA碎片率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表6。

表6 3組患者精子DNA碎片率比較

3 討 論

近年來，隨著不育人群數(shù)量增多，對其不育的影響的研究也越來越廣泛[4]。有研究發(fā)現(xiàn)，病毒感染是導(dǎo)致人類生育力降低的重要原因之一[5]。HBV不但可以自由通過血睪屏障進(jìn)入到男性睪丸生殖細(xì)胞中，而且還可以通過整合到男性生殖細(xì)胞的染色體上垂直傳給后代，并導(dǎo)致男性自身精子功能降低[6]。

關(guān)于HBV感染對男性精液質(zhì)量影響的報(bào)道不多，且大部分相關(guān)研究僅籠統(tǒng)將HBV感染患者作為試驗(yàn)組，未將其進(jìn)一步細(xì)化分為小三陽和大三陽進(jìn)行研究。對于HBV感染后是否會對男性造成免疫性不育，是否會影響精子功能，是否會導(dǎo)致精子染色質(zhì)異常的研究目前國內(nèi)外報(bào)道甚少。相關(guān)研究僅探討了HBV感染對精液常規(guī)、精子畸形率等精液基本參數(shù)的影響，且各研究結(jié)果不一致[7]。有研究表明,HBV感染使男性患者精液常規(guī)各參數(shù)(如精液量、精子濃度、精子活力)降低[8]。最近有研究分析發(fā)現(xiàn)，HBV陽性組和陰性組精液量、精子濃度比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，但是陽性組精子活率明顯低于陰性組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)[9]。本研究結(jié)果顯示，3組患者年齡和精液量比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與對照組比較，小三陽組和大三陽組患者精子濃度、PR、精子活力均有不同程度降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。本研究證實(shí)，HBV感染對男性患者精子濃度、精子活力均產(chǎn)生負(fù)面影響。本研究發(fā)現(xiàn)，與小三陽組比較，大三陽組患者精子濃度有所下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，表明HBV處于復(fù)制活躍期對精子濃度的負(fù)面影響更大。

監(jiān)測精子表面結(jié)合抗體水平是診斷男性免疫性不育的重要指標(biāo)，其中最常用的檢測方法為混合抗球蛋白凝集法[10]。本研究結(jié)果顯示，與對照組比較，小三陽組和大三陽組患者R雖稍有變化,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與小三陽組比較，大三陽組患者R雖稍有降低，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本研究結(jié)果表明，HBV感染不會引起男性患者精子表面AsAb發(fā)生明顯變化，不會導(dǎo)致男性免疫性不育。

精子存活率能夠間接反映男性精子受精能力[11]。本研究發(fā)現(xiàn)，與對照組比較，小三陽組和大三陽組患者精子存活率均有不同程度降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與小三陽組比較，大三陽組患者精子存活率雖有所升高，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本研究結(jié)果表明，HBV感染會導(dǎo)致男性患者精子活力降低，這與相關(guān)研究結(jié)果一致[12]。

精子發(fā)生頂體反應(yīng)，使精子頂體酶溶解卵子透明帶，幫助精子穿越卵子透明帶實(shí)現(xiàn)精子和卵子結(jié)合，進(jìn)而完成受精[13]。有研究表明，HBV感染會影響精子頂體酶活性，使精子頂體酶活性明顯降低[14]。本研究發(fā)現(xiàn)，與對照組比較，小三陽組患者精子自發(fā)性頂體反應(yīng)率雖有所降低，大三陽組患者精子自發(fā)性頂體反應(yīng)率雖有所升高,但差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與小三陽組比較，大三陽組患者精子自發(fā)性頂體反應(yīng)率雖稍有升高，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本研究結(jié)果表明，HBV感染不會影響精子頂體反應(yīng)功能，推測HBV感染可能只導(dǎo)致了精子質(zhì)膜破損，并未對頂體結(jié)構(gòu)本身造成損傷。

男性精子形態(tài)學(xué)觀察是不育診斷的主要指標(biāo)，畸形精子比率過高會導(dǎo)致精子體外受精成功率降低，從而降低男性的生育能力[15]。有研究報(bào)道發(fā)現(xiàn)，HBV感染會導(dǎo)致男性精子形態(tài)率降低[16]。本研究發(fā)現(xiàn)，與對照組比較，小三陽組和大三陽組患者精子正常形態(tài)率均有不同程度降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。本研究結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了HBV感染會影響精子形態(tài)，使精子正常形態(tài)率降低。

精子DNA完整性對維持男性精子功能正常起重要作用[17]。有研究結(jié)果表明，HBV感染會降低精子染色體結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性，導(dǎo)致精子非整倍體增加，從而加重精子DNA損傷，使精子DNA碎片增加[18]。本研究發(fā)現(xiàn)，與對照組比較，小三陽組和大三陽組患者精子DNA碎片率均有不同程度升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與小三陽組比較，大三陽組患者精子DNA碎片率雖有所升高，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本研究結(jié)果表明，HBV感染會增加男性患者精子DNA損傷，使精子DNA碎片率增加，這與相關(guān)研究結(jié)果一致[19]。

綜上所述，HBV感染不僅會對精子濃度、PR、精子活力、精子畸形率等精液常規(guī)參數(shù)造成負(fù)面影響，并且還會影響精子染色體結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性，導(dǎo)致精子DNA碎片率增加，從而降低男性生育力。因此，臨床醫(yī)生應(yīng)該對HBV感染男性患者進(jìn)行積極治療，對改善其精子質(zhì)量起重要作用。