曾燕紅，玉新愛，蘇榮軍

（1.廣西玉林農(nóng)業(yè)學(xué)校，廣西 玉林 537000；2.玉林市農(nóng)業(yè)科學(xué)院，廣西 玉林 537000）

蝴蝶蘭屬蘭科蝴蝶蘭屬?；w輕盈美麗，花形奇特，花色艷麗，花期長(zhǎng)，被稱為“洋蘭皇后”（圖1）。由于其觀賞和經(jīng)濟(jì)價(jià)值高，深受國(guó)內(nèi)外花卉市場(chǎng)的青睞。蝴蝶蘭屬單莖氣生蘭，極少數(shù)側(cè)枝。所以，在大規(guī)模生產(chǎn)中，采用分株繁殖是非常困難的。此外，由于大部分的種子尚未完全成熟，而且種子中沒有胚乳，因此發(fā)芽速度較慢，難以通過播種技術(shù)進(jìn)行有性生殖。組織培養(yǎng)技術(shù)具有快速的生長(zhǎng)速度和較高的繁殖能力；具有年生產(chǎn)能力高的優(yōu)點(diǎn)，是目前工廠式育苗的主要技術(shù)途徑。目前，國(guó)內(nèi)外關(guān)于蝴蝶蘭的組培技術(shù)已較為成熟，但由于品種之間的誘導(dǎo)率差異大、增殖系數(shù)低、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的種類和濃度比例不確定等原因，其技術(shù)水平也有差異。所以，開發(fā)適合于特殊品種的組培快繁技術(shù)系統(tǒng)具有十分重要的現(xiàn)實(shí)意義。因此，本文選擇了蝴蝶蘭“火鳳凰”的莖稈作為實(shí)驗(yàn)材料，通過對(duì)蝴蝶蘭“火鳳凰”的不定芽誘導(dǎo)、增殖和生根等各個(gè)階段的影響進(jìn)行了研究，確定了“火鳳凰”組培快繁的最佳培養(yǎng)條件，使其快速繁殖技術(shù)系統(tǒng)得到優(yōu)化，為其工業(yè)化、規(guī)?；a(chǎn)提供技術(shù)支撐[1]。

圖1 蝴蝶蘭

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

加入不同比例的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑。用8.00 g/L的瓊脂對(duì)所有的載體進(jìn)行了固化，并且在25 g/L的蔗糖和5.6的 pH值下進(jìn)行了固化。加入0.50 g/L的活性碳（AC）以防爆炸褐化，然后在121℃下進(jìn)行30 min的殺菌，如圖2所示。

圖2 蝴蝶蘭組織培養(yǎng)（一）

1.2 材料選擇和滅菌

開花期間，從花卉市場(chǎng)購買蝴蝶蘭“火鳳凰”，應(yīng)選擇生長(zhǎng)旺盛、無病蟲害、無變異的母株為外植體。在收集前對(duì)外植體進(jìn)行預(yù)處理（在收獲前5～7 d向母株噴灑菌劑），能有效地預(yù)防和降低內(nèi)源污染，增加誘變成功率。外植體的最佳選擇是蝴蝶蘭第一芽開花的帶腋芽花梗。將其切成5 cm左右的小段，小鑷子去除腋芽外部苞片，放入燒杯中，如圖3所示。

圖3 蝴蝶蘭組織培養(yǎng)（二）

在燒杯中滴入幾滴洗滌劑，用自來水沖洗6～8 h，再用無菌水沖洗，然后在無菌工作臺(tái)上消毒表面。表面用75% 酒精消毒30 s，用無菌水沖洗3次，然后用0.1% HgCl2溶液浸泡花梗10 min，繼續(xù)搖動(dòng)，用無菌水清洗4～5次；用消毒過的濾紙將物料表面的濕氣吹干，然后進(jìn)行接種。無菌材料是蝴蝶蘭組織培養(yǎng)的一個(gè)重要條件和保障，而滅菌是一種行之有效的方法。采用表面消毒方法，將表面的細(xì)菌殺死，使其在最大程度上維持其活性。所以，在蝴蝶蘭的組織培養(yǎng)中，殺菌是一個(gè)非常關(guān)鍵的環(huán)節(jié)（注：消毒時(shí)間取決于外植體的種類或成熟度）。

1.3 方法

首先是對(duì)疫苗室和操作臺(tái)進(jìn)行清潔和消毒，然后是酒精燈；消毒器、接種刀、鑷子等接種器具的準(zhǔn)備；隨后完成接種。

將蝴蝶蘭的花梗兩端切去，將帶腋芽的花梗節(jié)切成1～2 cm的小段，根據(jù)生長(zhǎng)極性插入培養(yǎng)基中。每個(gè)處理接種30個(gè)外植體，重復(fù)3次。注意嚴(yán)格規(guī)范無菌操作，盡可能減少因操作不當(dāng)而引起的污染；嚴(yán)格消毒器具，減少與病毒的交叉感染；切取外植體時(shí)要用銳利的刀具和快速的切割，同時(shí)要避免互相擠壓，以免損傷材料；所有的外植體取刀時(shí)，刀口的尺寸和切點(diǎn)都要合理、正確（例如：切花梗的下端為45°切口，上端為平面）；為了確保所需的養(yǎng)分和光照，外植體應(yīng)在培養(yǎng)皿中均勻地分布。

以MS+花寶1號(hào)+花寶2號(hào)為基質(zhì)，添加不同比例的6-BA和NAA。各培養(yǎng)基上分別接種帶有腋芽的蝴蝶蘭花梗小段，每處理均為20個(gè)花梗段，重復(fù)3次，30 d后統(tǒng)計(jì)各處理誘導(dǎo)率。

采用MS+花寶1號(hào)作為基質(zhì)，添加了6-BA、NAA等不同比例的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑。將初代培養(yǎng)30 d左右的蝴蝶蘭不定芽轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基中。每次處理20個(gè)不定芽，重復(fù)3次，培養(yǎng)30 d左右時(shí)，統(tǒng)計(jì)新的不定芽的發(fā)生情況，計(jì)算增殖系數(shù)。

以1/2 MS、MS為基質(zhì)，添加不同比例的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑IBA和NAA。選擇發(fā)育均勻的蝴蝶蘭，將其接種于不同的發(fā)芽基中進(jìn)行生根實(shí)驗(yàn)。每次處理20株，3次重復(fù)，約45 d后統(tǒng)計(jì)各處理出根情況。

適宜的溫度為25～28℃，環(huán)境濕度為60% ～80% 。在黑暗中培育7～9 d，防止褐變，光照強(qiáng)度為2 000～2 500 Lx，光照時(shí)間為每天11～13 h。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同基本培養(yǎng)基對(duì)腋芽萌發(fā)誘導(dǎo)的影響

將消毒后的“火鳳凰”花梗接種到不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，14 d左右開始萌發(fā)不定芽。添加不同的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑配比，雖然對(duì)“火鳳凰”花梗誘導(dǎo)率不同，但添加一定濃度的6-BA和NAA都有利于“火鳳凰”不定芽的誘導(dǎo)。在9組處理中，處理5的誘導(dǎo)率最高，達(dá)到86.7% ，即最佳的不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+花寶1號(hào)+花寶2號(hào)+3.00 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA培養(yǎng)基。

誘導(dǎo)率=萌發(fā)的外植體數(shù)/接種的總外植體數(shù)×100% 。

2.2 不同培養(yǎng)基對(duì)不定芽增殖的影響

將不定芽從花梗中分離出來，在15 d后，不定芽基部開始生長(zhǎng)出原球莖，25 d左右逐漸長(zhǎng)出葉片。當(dāng)植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑NAA濃度相同時(shí)，蝴蝶蘭“火鳳凰”的不定芽增殖系數(shù)隨著6-BA的濃度升高而升高。但增殖系數(shù)大時(shí)，葉片顏色淡、生長(zhǎng)玻璃化、脆嫩。綜合增殖系數(shù)和幼苗長(zhǎng)勢(shì)，增殖培養(yǎng)基最優(yōu)的組合是處理6：MS+花寶1號(hào)+5.00 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA，增殖系數(shù)達(dá)到3.9。

增殖系數(shù)=增殖不定芽總數(shù)/增殖不定芽外植體數(shù)。

2.3 不同生根培養(yǎng)基對(duì)幼苗生根的影響

在引種蝴蝶蘭的基本培養(yǎng)基中，1/2 MS培養(yǎng)基的生根率均高于 MS，而1/2 MS+1.0 mg/L IBA+0.5 mg/L NAA的9號(hào)培養(yǎng)基，其生根率達(dá)86.7% 。結(jié)果表明，最適宜的培養(yǎng)基是1/2 MS+1.0 mg/L IBA+0.5 mg/L NAA。

3 結(jié)論與討論

蝴蝶蘭的組織培養(yǎng)是影響組織培養(yǎng)成敗的重要因素。不同品種的蝴蝶蘭，不同的栽培材料，不同的生長(zhǎng)時(shí)期，不同的栽培材料對(duì)培養(yǎng)基的需求也不同。因此，對(duì)蝴蝶蘭的培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，既是蝴蝶蘭組織培養(yǎng)的基礎(chǔ)，又是其重要的一步。

在誘導(dǎo)蝴蝶蘭“火鳳凰”花梗腋芽萌發(fā)的實(shí)驗(yàn)中，添加一定濃度的6-BA和NAA都有利于“火鳳凰”不定芽的誘導(dǎo)，這和高壯壯等[2]的試驗(yàn)結(jié)果一致。本試驗(yàn)中最佳的不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+花寶1號(hào)+花寶2號(hào)+3.00 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA培養(yǎng)基。

細(xì)胞分裂素對(duì)蝴蝶蘭不定芽增殖的試驗(yàn)中，6-BA對(duì)增殖效果的影響強(qiáng)于 NAA；且濃度5.00 mg/L 6-BA比濃度3.00 mg/L 6-BA的增殖效果要更優(yōu)。當(dāng)6-BA濃度為5.00 mg/L時(shí)，NAA濃度為1.0 mg/L時(shí)的增殖系數(shù)比0.50 mg/L增殖效果更高，但幼苗長(zhǎng)勢(shì)受到影響。所以MS作為不定芽增殖的基本培養(yǎng)基，在不同植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑濃度配比下，5.00 mg/L 6-BA+0.50 mg/L NAA最適合不定芽增殖生長(zhǎng)。這個(gè)試驗(yàn)結(jié)果與陳春等[3-6]的試驗(yàn)結(jié)論相似，表明蝴蝶蘭增殖時(shí)要同時(shí)增殖系數(shù)和幼苗生長(zhǎng)狀態(tài)。

而在誘導(dǎo)蝴蝶蘭生根的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，1/2 MS培養(yǎng)基的生根率總體優(yōu)于MS培養(yǎng)基，其中生根率最高的是1/2 MS+1.0 mg/L IBA+0.5 mg/L NAA的9號(hào)培養(yǎng)基，其生根率為86.7% 。由此可知，誘導(dǎo)蝴蝶蘭生根的最適培養(yǎng)基配方為1/2 MS+1.0 mg/L IBA+0.5 mg/L NAA。