姚文娟

【摘要】新型嚴(yán)重急性呼吸系統(tǒng)綜合癥冠狀病毒2（SARS-CoV-2）感染人體后引起新型冠狀病毒肺炎（COVID-19），目前在全球大范圍流行，對(duì)人類(lèi)健康造成巨大的威脅。因?yàn)樵摬《臼荝NA正鏈病毒，在傳播過(guò)程非常容易變異，目前流行的奧密克戎突變株，大多是無(wú)癥狀感染者，具有傳播隱秘的特點(diǎn)，因此找到快速，準(zhǔn)確，高效診斷該病毒的檢測(cè)手段非常重要。本文就目前新冠病毒檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行匯總分析，旨在為保障公共衛(wèi)生安全，預(yù)防和控制感染傳播提供診斷支持與幫助。

【關(guān)鍵詞】新冠病毒;檢測(cè)技術(shù);研究

【中圖分類(lèi)號(hào)】R51 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】2026-5328（2022）04--01

新型嚴(yán)重急性呼吸系統(tǒng)綜合癥冠狀病毒2（SARS-CoV-2）從2019年流行開(kāi)后，一直以非?？斓乃俣葌鞑ィ瑥淖畛醯囊吧筒《静粩嗤蛔冞M(jìn)化成現(xiàn)在的奧密克戎突變株，目前全世界累計(jì)感染人數(shù)520405719人，現(xiàn)有確診人數(shù)22282379人，最近流行的奧密克戎突變株，傳播力度強(qiáng)，無(wú)癥狀感染者居多。想要快速控制疫情的傳播，需要找到快速，準(zhǔn)確，高效診斷該病毒的檢測(cè)手段。目前檢測(cè)新冠病毒的方法有逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)法（RT-PCR）達(dá)到擴(kuò)增病原體的核酸（RNA），檢測(cè)病毒的蛋白即抗原檢測(cè)，檢測(cè)病毒感染后產(chǎn)生的抗體即抗體檢測(cè)[1]，本文就目前新冠病毒檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行匯總分析，旨在為保障公共衛(wèi)生安全，預(yù)防和控制感染傳播提供診斷支持與幫助。

1. 核酸檢測(cè)

隨著SARS-CoV-2基因組測(cè)序解析工作的完成，解碼該病毒序列結(jié)構(gòu)，此病毒具有大概29000個(gè)堿基，12個(gè)個(gè)蛋白編碼區(qū)/開(kāi)放讀碼框（ORF），開(kāi)放閱讀框ORF 1ab 與SARS病毒有著明顯的不同，而且這個(gè)區(qū)域相對(duì)保守，變異性較小，因此成為檢測(cè)SARS-CoV-2的一個(gè)生物靶標(biāo)[2]。此外，N和E蛋白的基因也能作為檢測(cè)的序列。目前常用的檢測(cè)技術(shù)有實(shí)時(shí)熒光逆轉(zhuǎn)錄PCR 法，國(guó)內(nèi)使用該技術(shù)一般會(huì)同時(shí)檢測(cè)ORF1ab 基因和N 基因，這個(gè)檢測(cè)技術(shù)具有檢測(cè)速度較快、成本相對(duì)低廉的特點(diǎn)，不過(guò)需要設(shè)計(jì)出靈敏度好、特異性強(qiáng)的PCR 引物和熒光探針來(lái)提高擴(kuò)增效率，減少假陽(yáng)性率出現(xiàn)，常用的RT-PCR方法，提取23分鐘，擴(kuò)增90分鐘;此外還有恒溫?cái)U(kuò)增-實(shí)時(shí)熒光法（RT-LAMP），該技術(shù)具有靈敏度高，反應(yīng)速度快的特點(diǎn)，很適合在邊境口岸進(jìn)行快速檢測(cè);RNA捕獲探針?lè)?，這種方法檢測(cè)病毒的靈敏度和特異性都很強(qiáng)，實(shí)現(xiàn)高通量檢測(cè)，排除人為誤差。

2. 抗原檢測(cè)

SARS-CoV-2冠狀病毒是β屬含有包膜的單個(gè)正義鏈RNA病毒，大小為直徑60 ～140 nm，呈現(xiàn)為圓形或橢圓形的顆粒，病毒的包膜蛋白能夠向四周延伸的凸起，所以像刺突一樣，因此也稱(chēng)為冠狀病毒。SARS-CoV-2冠狀病毒的構(gòu)成主要是以下幾個(gè)蛋白：核衣殼蛋白（ nucleocapsid protein ，N），刺突表面糖蛋白（spike protein ，S），包膜蛋白（envelope protein，E），基質(zhì)蛋白（ matrix protein ， M），其中S蛋白上的RBD受體能夠和人體的ACE2受體結(jié)合侵入細(xì)胞，因?yàn)镾蛋白位于病毒表面，容易被免疫系統(tǒng)識(shí)別，N蛋白在包裝病毒基因組RNA，在病毒復(fù)制、組裝、釋放和干擾宿主細(xì)胞的過(guò)程中有著重要的作用[3]，所以這兩種蛋白常作為檢測(cè)靶標(biāo)。SARS-CoV-2抗原檢測(cè)能夠在大規(guī)模篩查中起到重要作用，在RT-PCR檢測(cè)不太方便或者結(jié)果出具較慢的時(shí)候，可以快速識(shí)別感染SARS-CoV-2的患者，通過(guò)這種檢測(cè)能夠有效防止病毒傳播，對(duì)患者進(jìn)行及時(shí)的治療，第九版新冠診療指南提出使用抗原檢測(cè)，抗原檢測(cè)不需要專(zhuān)業(yè)人士進(jìn)行操作，普通人在家就能進(jìn)行檢測(cè)，上海疫情期間很多居民都是采用抗原檢測(cè)進(jìn)行自測(cè)，極大的提高檢測(cè)效率，減少病毒傳播的風(fēng)險(xiǎn)。目前使用最多的是膠體金免疫層析法（GICA法），該方法是基于抗原抗體的特異性結(jié)合和顯色原理，通過(guò)人源化特異性的N蛋白和S蛋白的抗體來(lái)檢測(cè)是否含有病毒抗原，目前常用的是卡條形式，通過(guò)采取鼻拭子樣品與稀釋液混合，之后用滴瓶加樣到上樣孔中，等待10～15分鐘即可出結(jié)果，通過(guò)看T線和C線來(lái)判斷結(jié)果，操作簡(jiǎn)便，出結(jié)果快捷，成本低廉、不需要專(zhuān)業(yè)設(shè)備，適合大范圍篩查。不過(guò)，快速抗原檢測(cè)技術(shù)沒(méi)有RT-PCR檢測(cè)敏感，只有在病毒載量很高時(shí)，抗原檢測(cè)的靈敏度和特異性才較好?？傮w來(lái)說(shuō)，抗原檢測(cè)的靈敏度相對(duì)不高，即使檢測(cè)陰性也不能完全排除感染病毒的可能性，會(huì)有假陰性存在。

3. 抗體檢測(cè)

人體感染新冠病毒后，外膜結(jié)構(gòu)蛋白就會(huì)刺激體內(nèi)免疫細(xì)胞產(chǎn)生特異抗體，分為IgM或IgG二類(lèi)抗體，IgM抗體出現(xiàn)較早，IgG抗體出現(xiàn)較晚[4]。目前常用的檢測(cè)技術(shù)有膠體金免疫層析法、酶聯(lián)免疫法、磁微粒化學(xué)發(fā)光法、上轉(zhuǎn)發(fā)光免疫層析法、量子點(diǎn)熒光免疫層析、化學(xué)發(fā)光法、直接化學(xué)發(fā)光法和等。使用較多的還是膠體金免疫層析法（GICA法），該方法是基于抗原抗體的特異性結(jié)合和顯色原理，通過(guò)膠體金標(biāo)記的S和N蛋白結(jié)合鼠IgG，C線是羊抗鼠的IgG抗體，T線是鼠抗人的IgM和IgG抗體，通過(guò)采取靜脈全血、血清或血漿樣品與稀釋液混合，之后用滴瓶加樣到上樣孔中，等待10～15分鐘即可出結(jié)果，通過(guò)看T線和C線來(lái)判斷結(jié)果，操作簡(jiǎn)便，出結(jié)果快捷，成本低廉、不需要專(zhuān)業(yè)設(shè)備。酶聯(lián)免疫法也可以檢測(cè)抗體，包括中和抗體，總抗體，總的來(lái)說(shuō)，IgA的ELISA 檢測(cè)的靈敏度更高，IgG的ELISA檢測(cè)特異性更高[5]。

4. 小結(jié)

抗體血清學(xué)相比，核酸檢測(cè)能夠檢測(cè)到處于窗口期的患者，及早發(fā)現(xiàn)感染者，是新型冠狀病毒檢測(cè)的“金標(biāo)準(zhǔn)”，但是對(duì)檢測(cè)設(shè)備或平臺(tái)要求較高，高靈敏度的RT-PCR儀器價(jià)格昂貴，對(duì)實(shí)驗(yàn)室的潔凈度和操作人員要求也較高。此外，核酸檢測(cè)耗時(shí)較長(zhǎng)，考慮到樣本運(yùn)輸、樣本積壓的情況，通常最快4小時(shí)才可以報(bào)告結(jié)果?？乖蚩贵w檢測(cè)時(shí)間較短，但是特異性和靈敏度不如核酸檢測(cè)。

參考文獻(xiàn)：

[1] 王淑燕，李娜，張欣悅，等.新冠病毒 SARS-CoV-2檢測(cè)方法研究進(jìn)展[J].實(shí)驗(yàn)室研究與探索，2020，39（5）：1-7.

[2] 武英，周洪彬，張玨，等.新冠肺炎病毒SARS-CoV-2國(guó)內(nèi)檢測(cè)方法匯總[J]. 國(guó)外醫(yī)藥抗生素分冊(cè)，2020，41（4）：296-301.

[3] 魯雙艷，吳琳，劉成宇，等. 新型冠狀病毒特異性抗體IgM、IgG的臨床意義[J].中國(guó)輸血雜志，2021，34（8）：861-864.

[4] 余靜怡，余方友. 新冠病毒實(shí)驗(yàn)室常見(jiàn)檢測(cè)方法[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2022，32（4）：635-640.

[5] 黃紅艷. 新型冠狀病毒檢測(cè)技術(shù)專(zhuān)利分析[J].廣東化工，2022，49（6）：177-179.