牛 浩，李靜浩，李鵬程，孫光偉，白 濤，陳振國(guó)，宋朝鵬，王 濤

（1. 河南農(nóng)業(yè)大學(xué)煙草學(xué)院，河南 鄭州 450002；2. 云南省煙草公司曲靖市公司，云南 曲靖 655000；3. 湖北省煙草科學(xué)研究院，湖北 武漢 430030）

顏色是烤煙外觀質(zhì)量評(píng)價(jià)中的重要指標(biāo)，也在一定程度上反映煙葉的內(nèi)在品質(zhì)[1]。唐宇等[2]研究發(fā)現(xiàn)，煙葉顏色與總氮、煙堿、淀粉等化學(xué)成分呈極顯著的相關(guān)關(guān)系，與煙氣濃度，香氣質(zhì)、甜度等感官指標(biāo)呈顯著的相關(guān)關(guān)系。梁太波等[3]研究發(fā)現(xiàn)，煙葉的多酚含量與顏色特征值L*呈顯著的正相關(guān)關(guān)系，與顏色特征值a*呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。烘烤是決定煙葉外觀品質(zhì)和工業(yè)可用性的重要環(huán)節(jié)，其本質(zhì)是煙葉脫水干燥的物理過(guò)程與生物化學(xué)變化過(guò)程的統(tǒng)一，注重?zé)熑~脫水與變黃相協(xié)調(diào)。但在生產(chǎn)實(shí)踐中，由于對(duì)煙葉的變黃變褐特征把握不準(zhǔn)確，造成烘烤中煙葉變黃與脫水不協(xié)調(diào)，經(jīng)常會(huì)烤壞煙?？緣臒熢谕庥^上表現(xiàn)為烤青、掛灰、蒸片、黑糟、烤紅等類(lèi)型。這類(lèi)煙葉化學(xué)成分不協(xié)調(diào)，工業(yè)可用性差，在實(shí)際生產(chǎn)中常常不予收購(gòu)，給煙農(nóng)帶來(lái)了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。

著生部位是影響采后煙葉變黃變褐特征的重要因素之一[4]，一般認(rèn)為，隨著部位的提升，煙葉的耐烤性變好而易烤性變差，同時(shí)煙葉失水難度也逐漸提升[5]?；糸_(kāi)玲等[6]研究發(fā)現(xiàn)，煙葉的著生部位影響并決定了煙葉成熟時(shí)的素質(zhì)，包括葉片的薄厚、干物質(zhì)含量、葉肉細(xì)胞的致密程度等，可能是其變黃失水過(guò)程差異的原因。近年來(lái)，在對(duì)果蔬作物的研究中發(fā)現(xiàn)，果蔬采后衰老褐變與能量代謝活動(dòng)密切相關(guān)。LIU等[7]研究發(fā)現(xiàn)，外源ATP處理能夠有效控制荔枝果皮細(xì)胞的膜脂過(guò)氧化發(fā)展，延緩了褐變過(guò)程。董栓泉等[8]研究發(fā)現(xiàn)，外源蔗糖處理通過(guò)維持能量水平延緩了青花菜采后黃化過(guò)程。程順昌等[9]的研究結(jié)果表明，1-甲基環(huán)丙烯（1-MCP）處理和CO2充氣包裝處理均可以通過(guò)影響南果梨果實(shí)的能量代謝特性從而延緩采后果實(shí)的衰老褐變進(jìn)程。然而在煙草領(lǐng)域，鮮有學(xué)者對(duì)煙葉顏色變化與能量代謝的關(guān)系開(kāi)展研究?；诖?，以烤煙品種云煙87為研究對(duì)象，采用暗箱試驗(yàn)的方式研究了不同部位煙葉采后黃化褐變的發(fā)展過(guò)程，通過(guò)測(cè)定試驗(yàn)期間煙葉的變黃變褐程度、丙二醛（MDA）含量、糖（總糖、還原糖、淀粉）含量、能量相關(guān)物質(zhì)（ATP、ADP、AMP）含量、能荷（EC）以及細(xì)胞色素氧化酶（CCO）、琥珀酸脫氫酶（SDH）等呼吸代謝相關(guān)酶的活性變化，探討不同部位煙葉顏色變化差異及其能量代謝機(jī)制，以期為提升煙葉生產(chǎn)水平，合理制定烘烤工藝提供參考。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)于2020—2021 年在河南農(nóng)業(yè)大學(xué)試驗(yàn)基地（河南許昌，N113°48′25″，E34°8′22″）進(jìn)行，供試煙葉品種為云煙87。栽培時(shí)田間管理均按照當(dāng)?shù)貎?yōu)質(zhì)煙葉生產(chǎn)方法進(jìn)行。在當(dāng)?shù)責(zé)熑~適熟季節(jié)，采收葉片變黃約30%、主脈變白約50%的下部葉（第5—8 葉位）、中部葉（第10—13 葉位）、上部葉（第15—18 葉位）各200 片。采收后的煙葉立刻送回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行暗箱試驗(yàn)。在暗箱試驗(yàn)期間，每隔24 h 觀察變黃變褐情況；每隔48 h隨機(jī)選取3片煙葉，去除主脈后，混合第6 至第7 支脈葉肉，用液氮速凍后置于超低溫冰箱中保存（-80 ℃）。待試驗(yàn)結(jié)束后測(cè)定生理指標(biāo)，各項(xiàng)生理指標(biāo)均重復(fù)測(cè)定3 次。試驗(yàn)開(kāi)始當(dāng)天記為0 d，進(jìn)行至所有煙葉變褐程度達(dá)到30%時(shí)結(jié)束。

1.2 測(cè)定指標(biāo)及方法

1.2.1 變黃變褐程度測(cè)定 參考文獻(xiàn)[10]的方法進(jìn)行暗箱試驗(yàn)。每隔24 h 觀察并記錄煙葉的變黃變褐程度，直至所有煙葉變黃變褐程度均達(dá)到30%為止。計(jì)算變黃指數(shù)（Yellowing index，YI）和變褐指數(shù)（Browning index，BI）。

其中，n為統(tǒng)計(jì)次數(shù)，Y為各次觀察時(shí)的煙葉變黃比例，B為各次觀察時(shí)煙葉的變褐比例。

1.2.2 MDA 含量和浸出液電導(dǎo)率測(cè)定 參考文獻(xiàn)[11]的方法測(cè)定MDA 含量。準(zhǔn)確稱(chēng)取0.5 g 煙葉置于4 ℃預(yù)冷研缽中，加入2 mL 磷酸緩沖液（0.05 mol/L，pH 值7.8）冰浴研磨，將勻漿轉(zhuǎn)移到EP管中，定容至5 mL。隨后，使用冷凍離心機(jī)，將勻漿在4 ℃條件下離心10 min（4 500 r/min）。取離心后的上清液2 mL 轉(zhuǎn)移到試管中，向其中加入3 mL 質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的TBA 溶液混勻，沸水浴條件下精確反應(yīng)10 min 后，立即冰水浴使其冷卻。冷卻后，再次在4 ℃條件下離心10 min（4 500 r/min）。取離心后的上清液，分別測(cè)定其在532 nm 和600 nm 波長(zhǎng)處的吸光度。

浸出液電導(dǎo)率的測(cè)定參考文獻(xiàn)[12]中的方法。準(zhǔn)確稱(chēng)取0.1 g 煙葉樣品，用去離子水沖洗5 次，之后用濾紙吸干葉片表面水分。取15 mL 玻璃試管，用去離子水反復(fù)沖洗后加入10 mL蒸餾水。將吸干水分的煙草葉片放入試管中，使其全部浸入液面以下。充分浸泡3 h 后，使用DDS-11A 型電導(dǎo)儀測(cè)定浸出液的電導(dǎo)率。

1.2.3 總糖、還原糖和淀粉含量測(cè)定 總糖、還原糖含量的測(cè)定采用連續(xù)流動(dòng)分析法[13]。稱(chēng)取0.5 g煙草樣品置于50 mL 三角瓶中，加入25 mL 冰醋酸，用封口膜封口后振蕩萃取30 min。萃取液用定性濾紙過(guò)濾后，用連續(xù)流動(dòng)化學(xué)分析儀（AAⅢ型，德國(guó)BRAN+LUEBBE 公司）測(cè)定總糖和還原糖含量。淀粉含量測(cè)定采用蒽酮比色法[14]。

1.2.4 ATP、ADP、AMP 含量和EC 測(cè)定 采用高效液相色譜法測(cè)定ATP、ADP 和AMP 含量[15]。準(zhǔn)確稱(chēng)取2.0 g 煙葉置于潔凈的研缽中，液氮研磨后加入1 mL高氯酸溶液（0.4 mol/L）繼續(xù)研磨20 min。研磨后的勻漿在4 ℃條件下離心10 min（14 000 r/min）。棄取沉淀，留上清液，調(diào)pH 值至6.5～6.8 后定容至5 mL，隨后使用微孔濾膜過(guò)濾（孔徑為0.45 μm）。使用Agilent 1260 型高相液相色譜儀對(duì)濾液進(jìn)行測(cè)定，使用的色譜柱為Diamonsil C18（2）（250 mm×4.6 mm×5 μm），流動(dòng)相為20 mmol/L、pH 值6.5 的磷酸鹽緩沖液-乙腈水溶液（99∶1，體積比），流速設(shè)定為1 mL/min，柱溫設(shè)定為30 ℃。檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm。進(jìn)樣量為10μL，重復(fù)3次。EC計(jì)算公式如下。

1.2.5 煙草葉片線粒體提取 采用差速離心法提取煙草葉片線粒體[15]。準(zhǔn)確稱(chēng)取1 g煙葉樣品，用蒸餾水沖洗干凈后擦干表面水分，置于干凈的預(yù)冷研缽之中。加入10 mL 50 mmol/L、pH 值為7.5的Tris-HCl 緩沖液（內(nèi)含0.3 mol/L 甘露醇、1 mmol/L EDTA-Na2、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%的PVP），在4 ℃條件下勻漿。隨后，使用4 層紗布過(guò)濾勻漿，濾液在4 ℃條件下離心分離10 min（4 000×g）；將上清液在4 ℃條件下再次離心20 min（14 000×g），離心后丟棄上清液，向沉淀中加入上述緩沖液，用毛刷小心地使沉淀溶解；接著再次在4 ℃條件下離心分離20 min（14 000×g），得到線粒體沉淀。將沉淀用1.5 mL 上述緩沖溶液溶解。

1.2.6 線粒體SDH 活性測(cè)定 SDH 活性采用南京建成科技生產(chǎn)的試劑盒進(jìn)行測(cè)定，以2，6-二氯酚靛酚在600 nm波長(zhǎng)處還原速度表示SDH活性。

1.2.7 線粒體CCO 活性測(cè)定 參考KAN 等[16]的方法測(cè)定CCO 的活性。向工作液（內(nèi)含0.2 mL 0.04%細(xì)胞色素C水溶液和2 mL 蒸餾水）中加入0.1 mL的上述線粒體溶液?；靹蚝?，加入0.5 mL 0.4%的二甲基對(duì)苯二胺溶液，以細(xì)胞色素C 在540 nm 波長(zhǎng)處被氧化的速度表示CCO活性。

1.3 數(shù)據(jù)分析

采用Excel 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)整理分析，利用Origin 7.5 軟件作圖，采用SPSS 17.0 軟件進(jìn)行方差分析和顯著性檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同部位采后煙葉黃化褐變的發(fā)展

不同部位煙葉的變黃變褐情況如圖1 所示，變黃變褐程度和變黃變褐指數(shù)如圖2 所示。從圖1 可以看出，隨著部位的提高，煙葉的變黃變褐速度逐漸放緩。在變黃情況方面，下、中、上部葉分別在采后4 d、5 d 和6 d 達(dá)到十成黃（圖2A）；下部葉的變黃指數(shù)最高，為7.56，相較中、上部葉分別高6.95%和17.14%（圖2B）。在變褐方面，下、中、上部葉在采后6 d、8 d 和10 d 褐變程度分別達(dá)到30%（圖2A）；下部葉的變褐指數(shù)最高，為5.5，相較中、上部葉分別高出140.63%和381.25%（圖2B）。

圖1 不同部位煙葉變黃變褐情況Fig.1 Yellowing and browning of tobacco leaves in different leaf positions

圖2 不同部位煙葉變黃變褐程度（A）及變黃變褐指數(shù)（B）Fig.2 Yellowing and browning degree（A）and yellowing and browning index（B）of tobacco leaves in different leaf positions

2.2 不同部位采后煙葉MDA含量和浸出液電導(dǎo)率的變化

由圖3 可知，不同部位采后煙葉的浸出液電導(dǎo)率和MDA含量均呈前期增長(zhǎng)緩慢、后期增長(zhǎng)迅速的趨勢(shì)。由圖3A 可以看出，下部葉的滲出液電導(dǎo)率始終處于較高水平，較中、上部葉分別平均高出20.88%和47.35%，同時(shí)下部葉浸出液電導(dǎo)率上升幅度較大。在采后2～10 d，下部葉的浸出液電導(dǎo)率均顯著高于中上部葉（P<0.05）。由圖3B可知，整體來(lái)看下部葉的MDA 含量較高，較中、上部葉分別平均高出17.78%和42.79%，且下部葉的MDA 含量隨時(shí)間增長(zhǎng)較快。在采后2～10 d，下部葉的MDA含量均顯著高于中、上部葉（P<0.05）。

圖3 不同部位煙葉浸出液電導(dǎo)率（A）和MDA含量（B）的變化Fig.3 Changes of conductivity（A）and MDA content（B）of tobacco leaf extract from different parts

2.3 不同部位采后煙葉總糖、還原糖和淀粉含量的變化

從圖4可以看出，隨著采后時(shí)間的延長(zhǎng)，各處理煙葉總糖和還原糖含量呈先上升后下降的趨勢(shì)；淀粉含量呈下降趨勢(shì)。由圖4A 可知，下部葉總糖含量上升較早下降較快，在采后4 d 達(dá)到了峰值；中、上部葉總糖含量高峰分別出現(xiàn)在采后6 d 和8 d。由圖4B 可知，下部葉還原糖含量上升較早，在采后4 d 達(dá)到高峰；中、上部葉還原糖含量的高峰則出現(xiàn)在采后6 d。由圖4C 可知，下部葉淀粉降解主要集中在采后0～4 d，淀粉含量下降9.42 個(gè)百分點(diǎn)，占總淀粉降解量的75.48%；中部葉淀粉降解主要集中在采后2～8 d，淀粉含量下降7.16 個(gè)百分點(diǎn)，占總淀粉降解量的65.99%；上部葉淀粉降解主要集中在采后4～8 d，淀粉含量下降了7.59 個(gè)百分點(diǎn)，占總淀粉降解量的87.34%。相較而言，下部葉淀粉降解更徹底。采后10 d，與剛采收時(shí)相比，下、中、上部葉淀粉含量分別下降12.48 個(gè)百分點(diǎn)、10.85 個(gè)百分點(diǎn)和8.69個(gè)百分點(diǎn)。

圖4 不同部位煙葉總糖（A）、還原糖（B）和淀粉（C）含量的變化Fig.4 Changes of total sugar（A），reducing sugar（B）and starch（C）content in different parts of tobacco leaves

2.4 不同部位采后煙葉ATP、ADP、AMP含量及EC的變化

由圖5A 可知，不同部位煙葉ATP 含量變化均呈先增加后減少的趨勢(shì)。在剛采收時(shí)，上部葉ATP含量顯著高于中、下部葉（P<0.05），隨后各處理煙葉ATP 含量均呈上升趨勢(shì)。上、中、下部葉的ATP含量分別在采后8 d、8 d 及6 d 達(dá)到峰值。隨后，各處理ATP 含量均呈下降趨勢(shì)。在整個(gè)試驗(yàn)期間，上部葉的ATP 含量均顯著高于中、下部葉（P<0.05）。由圖5B 可知，不同部位煙葉ADP 含量變化趨勢(shì)與ATP 相似。在剛采收時(shí)，上部葉的ADP 含量顯著高于中、下部葉（P<0.05）；隨后，各處理煙葉ADP 含量均呈小幅度上升；上、中部葉的ADP 含量在采后4 d達(dá)到高峰，而下部葉則在采后2 d 達(dá)到峰值；隨后各處理ADP 含量呈緩慢下降趨勢(shì)。不同部位煙葉AMP 含量的變化如圖5C 所示，可以看出，各部位煙葉AMP 含量均呈逐漸上升的趨勢(shì)。在整個(gè)試驗(yàn)期間，上部葉的AMP 含量顯著高于中、下部葉（P<0.05）。不同部位煙葉EC 的變化如圖5D 所示，可以看出，不同部位煙葉EC 均呈先上升后下降的趨勢(shì)。在剛采收時(shí)，各部位煙葉EC 的差異不顯著（P>0.05）；隨后各處理煙葉的EC呈上升趨勢(shì)，上、中、下部葉的EC分別在采后6 d、4 d和2 d達(dá)到峰值；之后各處理EC均呈下降趨勢(shì)。

圖5 不同部位煙葉ATP（A）、ADP（B）、AMP（C）含量及EC（D）的變化Fig.5 Changes of ATP（A），ADP（B），AMP（C）contents and EC（D）in different parts of tobacco leaves

2.5 不同部位采后煙葉CCO和SDH活性的變化

由圖6A 可知，不同部位采后煙葉CCO 活性均呈先增大后減小的趨勢(shì)。采收后，各處理煙葉CCO活性均出現(xiàn)明顯升高，上、中、下部煙葉的CCO 活性均在采后2 d達(dá)到高峰。之后各處理煙葉CCO 活性均呈下降趨勢(shì)?？傮w來(lái)看，上部葉CCO 活性較高，在整個(gè)試驗(yàn)期間分別比中、下部葉高出12.54%和14.11%。由圖6B 可以看出，不同部位采后煙葉SDH 活性同樣呈先增大后減小的趨勢(shì)。在剛采收時(shí)，各部位煙葉SDH活性差異不大。下部葉SDH活性高峰出現(xiàn)在采后2 d，而中、上部葉在采后4 d 達(dá)到活性高峰。隨后，各部位煙葉SDH 活性均呈下降的趨勢(shì)，但下部葉下降得更快。在采后4～10 d，中、上部葉CCO活性稍高于下部葉。

圖6 不同部位煙葉CCO（A）和SDH（B）活性的變化Fig.6 Changes of CCO（A）and SDH（B）activities in different parts of tobacco leaves

2.6 不同部位采后煙葉變黃變褐程度與糖含量及能量代謝的相關(guān)性分析

不同部位采后煙葉變黃變褐程度與糖含量及能量代謝的相關(guān)性分析見(jiàn)表1。從表1可以看出，煙葉的變黃程度與總糖、還原糖含量呈極顯著的正相關(guān)關(guān)系（P<0.01），與EC 呈顯著正相關(guān)關(guān)系；煙葉的變褐程度與還原糖、ADP 含量和EC 呈極顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系，與淀粉、ATP含量呈顯著的負(fù)相關(guān)關(guān)系。

表1 不同部位采后煙葉變黃變褐程度與糖含量及能量代謝的相關(guān)性Tab.1 Correlation between the degree of yellowing and browning of postharvest tobacco leaves in different parts and sugar content and energy metabolism

3 結(jié)論與討論

采后煙葉的變黃變褐過(guò)程是一個(gè)復(fù)雜的生理生化過(guò)程，已有研究將這一過(guò)程描述為離體環(huán)境下煙葉加速衰老的饑餓代謝過(guò)程[17]。近年來(lái)，果蔬保鮮方面的研究發(fā)現(xiàn)，多種果蔬衰老褐變的發(fā)生與能量供應(yīng)不足有關(guān)[18‐20]。在煙草領(lǐng)域也有文獻(xiàn)報(bào)道佐證了這一觀點(diǎn)，認(rèn)為采后煙葉黃化褐變并最終走向衰老死亡是能量代謝失衡的結(jié)果[21]。對(duì)煙草而言，糖類(lèi)是重要的能量來(lái)源[22]。淀粉是煙葉內(nèi)碳水化合物的主要貯藏形式[23]，總糖和還原糖則是煙葉進(jìn)行呼吸作用的直接能量來(lái)源[24]。本研究中，隨著煙葉變黃變褐程度的不斷加深，各處理煙葉的淀粉含量呈不斷下降的趨勢(shì)，總糖和還原糖則呈先上升后下降的趨勢(shì)，表明淀粉首先在淀粉酶的作用下大量分解，但產(chǎn)生糖的總量大于呼吸作用產(chǎn)生能量所消耗的量，造成了總糖和還原糖含量的暫時(shí)上升；而后隨著淀粉分解逐漸變緩，新產(chǎn)生的糖類(lèi)不能滿(mǎn)足產(chǎn)能活動(dòng)的消耗，總糖和還原糖含量開(kāi)始下降，這與馬力等[25]的研究結(jié)果相似。相較而言，下部葉淀粉含量相對(duì)較低且降解時(shí)間更靠前，總糖和還原糖含量在前期能夠保持較高水平但中后期相對(duì)較低，這表明下部葉的能源底物更早出現(xiàn)了短缺現(xiàn)象，導(dǎo)致煙葉細(xì)胞出現(xiàn)能量缺乏現(xiàn)象，進(jìn)而引發(fā)褐變；而中、上部葉的淀粉含量降解時(shí)間靠后，總糖和還原糖含量在中后期仍能夠保持較高的水平，為其產(chǎn)能活動(dòng)提供了充足保障，因此褐變發(fā)生較晚。相關(guān)性分析結(jié)果表明，煙葉的變黃程度與總糖、還原糖含量呈較強(qiáng)的正相關(guān)關(guān)系，變褐程度則與還原糖含量呈較強(qiáng)的負(fù)相關(guān)關(guān)系，表明采后煙葉的顏色變化與作為能量來(lái)源的糖分含量密切相關(guān)。

ATP、ADP、AMP 含量和EC 水平能夠較為直觀地反映煙葉細(xì)胞內(nèi)的能量代謝狀態(tài)[26]。本研究中，各處理煙葉ATP 含量、ADP 含量和EC 水平呈先上升后下降的趨勢(shì)，AMP 含量則逐漸上升，同時(shí)伴隨著MDA含量和浸出液電導(dǎo)率上升，膜脂過(guò)氧化程度加重導(dǎo)致變黃變褐程度逐漸加深。這表明采后煙葉能量代謝活動(dòng)與糖代謝活動(dòng)類(lèi)似，表現(xiàn)出先加強(qiáng)后減弱的趨勢(shì)，這與前人的研究結(jié)果有相似之處[27]。同時(shí)，ATP 含量和EC 水平的高峰幾乎與淀粉降解高峰及總糖、還原糖含量的高峰同時(shí)出現(xiàn)，提示能量代謝活動(dòng)與淀粉降解及其他糖代謝活動(dòng)可能存在較為密切的聯(lián)系。相較而言，高葉位處理煙葉的ATP 含量和EC 水平較高且高峰到來(lái)較晚，并能夠維持較長(zhǎng)時(shí)間的高EC 水平，這種現(xiàn)象可能是因?yàn)槠鋬?nèi)含物質(zhì)積累豐富，為應(yīng)對(duì)長(zhǎng)時(shí)間的逆境環(huán)境提供了充足能源保障，這與李春曦等[28]在桃軟化研究中得出的結(jié)果有相似之處。CCO 和SDH 是反映線粒體能量代謝的關(guān)鍵標(biāo)志酶，其活性大小直接影響煙葉細(xì)胞合成ATP 的能力。本研究中，各處理煙葉CCO 和SDH 活性均呈先增加后減少的趨勢(shì)，與ATP含量的變化趨勢(shì)相一致。相較而言，較高葉位煙葉CCO 和SDH 活性上升較為緩慢，活性高峰出現(xiàn)更晚，但整體水平較高，這也是其維持長(zhǎng)時(shí)間高EC 水平狀態(tài)的原因之一。相關(guān)性分析結(jié)果表明，EC與煙葉的變黃程度呈顯著正相關(guān)關(guān)系，與變褐程度呈極顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系，表明EC 水平的提升促進(jìn)了煙葉的變黃變褐過(guò)程，而在后期，EC 水平下降導(dǎo)致能量虧缺可能是煙葉褐變的原因。這一結(jié)果與果實(shí)儲(chǔ)藏研究中“呼吸躍變”導(dǎo)致果實(shí)軟化衰老的觀點(diǎn)有相似之處[29]。

總體上，上部葉膜脂過(guò)氧化發(fā)展過(guò)程相對(duì)平和，內(nèi)含物質(zhì)積累豐富，能量代謝高峰出現(xiàn)較晚且能夠維持較長(zhǎng)時(shí)間的高EC 狀態(tài)，表明上部葉對(duì)于離體逆境環(huán)境的耐受能力較強(qiáng)，在饑餓代謝的環(huán)境下能夠維持更長(zhǎng)時(shí)間生命活動(dòng)，因而變黃變褐發(fā)展較為緩慢；而下部葉膜脂過(guò)氧化發(fā)展過(guò)程較為劇烈，內(nèi)含物質(zhì)積累相對(duì)薄弱，能量代謝高峰出現(xiàn)較早且高EC 狀態(tài)維持時(shí)間較短，表明下部葉對(duì)離體的逆境環(huán)境耐受能力不佳，因而變黃變褐發(fā)展過(guò)程較快。在生產(chǎn)實(shí)踐中，針對(duì)物質(zhì)積累薄弱的下部葉，在烘烤時(shí)應(yīng)注重避免其因能量代謝過(guò)度發(fā)生褐變；而對(duì)于物質(zhì)豐富的上部葉，在烘烤時(shí)應(yīng)采取措施適當(dāng)提升前中期煙葉的能量代謝活動(dòng)以促進(jìn)煙葉順利變黃。需要注意的是，本研究是在暗箱條件下分析煙葉顏色變化與能量代謝的關(guān)系，而實(shí)際烘烤過(guò)程與暗箱環(huán)境存在一定的差異。因此，繼續(xù)研究烘烤工藝參數(shù)（如溫度、濕度、穩(wěn)溫時(shí)間等）對(duì)煙葉能量代謝活動(dòng)能夠產(chǎn)生怎樣的影響，是今后實(shí)踐應(yīng)用中應(yīng)首要解決的問(wèn)題。