楊董云，呂丙鈺，薛華麗，楊志敏

(1.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)理學(xué)院，甘肅 蘭州 730070;2.蘭州市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)研究院,甘肅 蘭州 730000)

當(dāng)歸為傘形科植物當(dāng)歸Angelicasinensis(Oliv.)Diels的根，在《神農(nóng)本草經(jīng)》中被列為中品，具有廣泛的藥用價(jià)值，素有“十方九歸”的美譽(yù)[1-2]?？扇敫?、心、脾經(jīng)，藥性甘、辛、溫，主要用于血虛萎黃、眩暈心悸、月經(jīng)不調(diào)、經(jīng)閉痛經(jīng)、腸燥便秘等癥狀[3]。當(dāng)歸主產(chǎn)于我國(guó)甘肅東南部，其中以岷縣當(dāng)歸產(chǎn)量多、品質(zhì)好。當(dāng)歸在甘肅岷縣的人工種植已有近2000年的歷史，是甘肅道地藥材之一，占全國(guó)產(chǎn)量、銷量的90%以上[4]。

近年來(lái)隨著當(dāng)歸種植規(guī)模的不斷擴(kuò)大，當(dāng)歸病害日益嚴(yán)重。目前當(dāng)歸病害研究主要集中在采前田間生長(zhǎng)階段，如當(dāng)歸腐爛莖線蟲病、根腐病、褐斑病、菌核病、炭疽病、銹病和白粉病等[5]，而采后貯藏期間病害研究鮮見(jiàn)報(bào)道，對(duì)于當(dāng)歸采后青霉病研究，陳娟從江西藥材市場(chǎng)的中草藥飲片中分離出皮落青霉(Penicilliumcrustosum)、鮮綠青霉(P.viridicatum)、橘灰青霉(P.aurantiogriseum)等青霉屬病原菌，但未對(duì)病原菌的生物學(xué)特性及其毒素積累報(bào)道[6]，同時(shí)，中藥飲片與新鮮藥材原材料上存在差異。當(dāng)歸采收時(shí)間正值深秋，低溫高濕，且采后主要放在田間或農(nóng)民家里自然晾干，在晾曬過(guò)程中由于溫濕度不當(dāng)，使當(dāng)歸極易發(fā)生腐爛、發(fā)霉，通常農(nóng)民對(duì)發(fā)生霉變的組織進(jìn)行簡(jiǎn)單的清洗。然而，眾所周知，有一部分病原真菌在適宜的溫濕度條件下會(huì)代謝產(chǎn)生真菌毒素，這不僅嚴(yán)重降低當(dāng)歸藥材的使用價(jià)值，還會(huì)給人類健康帶來(lái)巨大的安全隱患與威脅。所以，即使當(dāng)歸田間病害得到了有效的控制，而采后貯藏期間發(fā)病，仍然會(huì)前功盡棄。因此，對(duì)當(dāng)歸采后貯藏期間病害研究顯得尤為重要。

本試驗(yàn)擬從新鮮當(dāng)歸采后貯藏期間具有典型的青霉病病害癥狀組織進(jìn)行分離、平板劃線，分離純化得到引起當(dāng)歸青霉病的病原菌菌株，然后進(jìn)行回接驗(yàn)證，根據(jù)科赫氏法則證明其分離菌的致病性，通過(guò)形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)對(duì)采后當(dāng)歸青霉病的病原菌進(jìn)行鑒定，再?gòu)膫鹘y(tǒng)植物病理學(xué)角度對(duì)該病原菌進(jìn)行生物學(xué)特性分析，以期為有效控制該病害提供理論依據(jù)并通過(guò)HPLC法對(duì)青霉病原菌侵染當(dāng)歸過(guò)程中積累的真菌毒素進(jìn)行了分析。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

新鮮當(dāng)歸采購(gòu)于甘肅省岷縣藥材種植基地，主要選取具有典型的青霉病病癥和健康的新鮮當(dāng)歸，當(dāng)日運(yùn)抵甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)理學(xué)院化學(xué)與生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室。

1.2 培養(yǎng)基

供試培養(yǎng)基：PDA培養(yǎng)基(馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂17 g，水1 000 mL，自然pH)、查氏培養(yǎng)基(硝酸鈉2 g、磷酸二氫鉀1 g、氯化鉀0.5 g、硫酸鎂0.5 g、硫酸亞鐵0.01 g、蔗糖30 g、瓊脂15 g、水1 000 mL)。碳源培養(yǎng)基：以葡萄糖、麥芽糖、β-環(huán)糊精、甘露醇、果糖替代查氏培養(yǎng)基中蔗糖，其他相同；氮源培養(yǎng)基：以硫酸銨、酵母浸粉、蛋白胨、甘氨酸、尿素替代查氏培養(yǎng)基中硝酸鈉，其他相同。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 病原菌分離 選取具有典型青霉病病害癥狀的新鮮當(dāng)歸，用滅菌的不銹鋼刀片切取霉變當(dāng)歸病健交界處3 mm×3 mm大小的組織，置于75%酒精中清洗5 s，后用無(wú)菌水漂洗3次，晾干后置于PDA培養(yǎng)基上，于28 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3～5 d。根據(jù)菌落形態(tài)對(duì)產(chǎn)生的真菌菌落進(jìn)行分組，并隨機(jī)選擇特定組的代表性菌落在PDA平板上劃線，反復(fù)進(jìn)行傳代培養(yǎng)，直至得到純的分離株。

1.3.2 分離菌株回接試驗(yàn) 根據(jù)科赫氏法則，挑選無(wú)損傷、新鮮、健康的當(dāng)歸，用0.1%次氯酸鈉溶液浸泡15 min，蒸餾水洗滌2次，室溫下自然風(fēng)干。將濃度為1×106CFU/mL的分離菌株孢子懸浮液以噴霧接種的方式，接種于已消毒的當(dāng)歸組織，觀察并記錄發(fā)病情況，30 d后從霉變組織中重新分離純化菌種，并與第一次純化的霉菌進(jìn)行形態(tài)學(xué)對(duì)比是否一致，形態(tài)一致則確認(rèn)其為致病菌。

1.3.3 病原菌形態(tài)學(xué)鑒定 將分離純化后致病菌接種于PDA培養(yǎng)基上，25 ℃培養(yǎng)5 d，觀察致病菌形態(tài)，記錄菌落形態(tài)結(jié)構(gòu)、顏色變化并測(cè)定其菌落大小。通過(guò)光學(xué)顯微鏡(40倍物鏡下觀察)進(jìn)行觀察菌絲體有無(wú)橫隔膜，以及孢子囊的形態(tài)，以掃描電子顯微鏡觀察致病菌孢子形態(tài)，參考真菌鑒定手冊(cè)[7]，鑒定病原菌種類。

1.3.4 病原菌分子生物學(xué)鑒定 將致病菌的孢子(1×106CFU/mL)接種在PDB培養(yǎng)基中，并在25 ℃下培養(yǎng)5 d。將過(guò)濾液體培養(yǎng)物收集真菌的菌絲體用液氮研磨成細(xì)粉。使用UNlQ-10柱真菌基因組DNA提取試劑盒(Sangon公司，中國(guó)上海)提取其DNA。

以上述提取DNA為模板，以ITS1(TCCGTAG-GTGAACCTGCGG)和ITS4(TCCTCCGCT-TATTGATATGC)為引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物委托北京博邁德生物公司測(cè)序。將測(cè)序結(jié)果從GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行BLAST比對(duì)分析，選取合適的序列，利用MEGA-7軟件以鄰接法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)。結(jié)合分子生物學(xué)鑒定與形態(tài)學(xué)鑒定結(jié)果確定致病菌種屬。

1.3.5 溫度對(duì)致病菌生長(zhǎng)的影響 PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)7 d的致病菌，刮取其孢子制成懸浮液(1×106CFU/mL)，備用。

致死溫度測(cè)定：上述致病菌孢子懸浮液分別置于35、45、50、55、60、65 ℃條件下恒溫水浴15 min，取2 μL孢子懸浮液滴于PDA平板中心處，置于25 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7 d，觀察菌落形態(tài)，并采用十字交叉法測(cè)定菌落直徑[8]。

最適生長(zhǎng)溫度：取配制好的孢子懸浮液2 μL接種于PDA培養(yǎng)基中心處，分別置于15、20、25、30、35 ℃(每個(gè)溫度梯度設(shè)置3個(gè)重復(fù))，恒溫暗培養(yǎng)7 d，觀察菌落形態(tài)、測(cè)定菌落直徑，并以血球計(jì)數(shù)板測(cè)定產(chǎn)孢量。

1.3.6 pH對(duì)致病菌生長(zhǎng)的影響 用HCl與NaOH溶液調(diào)節(jié)PDA培養(yǎng)基pH值分別至5、6、7、8、9、11，分別將2 μL致病菌孢子懸浮液接種于6個(gè)pH梯度PDA平板中心處(每個(gè)pH梯度設(shè)置3個(gè)重復(fù))，25 ℃恒溫暗培養(yǎng)7 d，觀察菌落形態(tài)、測(cè)定菌落直徑和產(chǎn)孢量。

1.3.7 光照對(duì)致病菌生長(zhǎng)的影響 將2 μL致病菌孢子懸浮液接種于PDA平板中心處，分別置于12 h光照、12 h黑暗交替環(huán)境中(設(shè)置3個(gè)重復(fù))，25 ℃恒溫培養(yǎng)7 d，觀察菌落形態(tài)、測(cè)定菌落直徑和產(chǎn)孢量。

1.3.8 不同碳源對(duì)致病菌生長(zhǎng)的影響 分別以葡萄糖、麥芽糖、β-環(huán)糊精、甘露醇、果糖為不同碳源，查氏培養(yǎng)基為對(duì)照組，將2 μL致病菌孢子懸浮液接種于上述碳源培養(yǎng)基中(設(shè)置3個(gè)重復(fù))，25 ℃恒溫暗培養(yǎng)7 d，觀察菌落形態(tài)、測(cè)定菌落直徑和產(chǎn)孢量。

1.3.9 不同氮源對(duì)致病菌生長(zhǎng)的影響 分別以硫酸銨、酵母浸粉、蛋白胨、甘氨酸、尿素為不同氮源，查氏培養(yǎng)基為對(duì)照組，將2 μL致病菌孢子懸浮液接種于上述氮源培養(yǎng)基上(設(shè)置3個(gè)重復(fù))，25 ℃黑暗恒溫培養(yǎng)7 d，觀察菌落形態(tài)、測(cè)定菌落直徑和產(chǎn)孢量。

1.3.10 棒曲霉素含量的測(cè)定 根據(jù)《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中展青霉素的測(cè)定GB 5009.185-2016》測(cè)定棒曲霉素[9]，取回接當(dāng)歸青霉病致病菌30 d后的病部組織，液氮研磨，稱取當(dāng)歸研磨的粉末5.0 g，置于離心管中，加入20 mL乙酸乙酯于離心機(jī)中離心(5 000 r/min，4 ℃，5 min)，重復(fù)3次，合并提取液于燒瓶中，于40 ℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，氮?dú)獯蹈桑? mL pH為4的乙酸復(fù)溶，0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，樣液進(jìn)行高效液相色譜進(jìn)行檢測(cè)[10]。

2 結(jié)果與分析

2.1 病原菌的分離和致病性分析

通過(guò)組織分離法從霉變新鮮當(dāng)歸組織(圖1-A)中分離純化得到1株青霉菌，命名yang2。根據(jù)科赫氏法則進(jìn)行回接試驗(yàn)，結(jié)果表明yang2分離菌回接的當(dāng)歸均有不同程度的病變(圖1-B)，取霉變部位與正常部位交界處組織進(jìn)行分離純化菌株，結(jié)果表明，重新分離菌株與yang2菌株形態(tài)特征一致，因此yang2為當(dāng)歸采后青霉病的主要致病菌。

A：當(dāng)歸自然發(fā)病的癥狀；B：致病性檢測(cè)病害癥狀。

2.2 霉菌鑒定

2.2.1 形態(tài)學(xué)鑒定 根據(jù)形態(tài)學(xué)特征進(jìn)行鑒定，yang2在PDA培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)如圖2-A～B所示。并對(duì)其分生孢子梗(圖2-C)和孢子形態(tài)(圖2-D)進(jìn)行觀察。25 ℃ 培養(yǎng)5 d，平均菌落直徑26.6 mm，菌絲體邊緣為白色，放射狀皺紋，正面呈深綠色，反面呈黃褐色，分生孢子梗為掃帚狀，分生孢子呈念珠狀串生，單孢無(wú)色，近球形，初步鑒定yang2為波蘭青霉(Penicilliumpolonicum)。

A：菌落形態(tài)(正面；B：菌落形態(tài)(反面)；C：分生孢子梗形態(tài)；D：孢子形態(tài)。

2.2.2 分子生物學(xué)鑒定 形態(tài)學(xué)鑒定初步確定yang2為波蘭青霉，經(jīng)過(guò)ITS通用引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，所得電泳圖如圖3所示，分子量為589 bp，對(duì)所得擴(kuò)增序列進(jìn)行測(cè)序，所得結(jié)果在NCBI上進(jìn)行BLAST比對(duì)分析，選取合適序列，利用MEGA-7軟件以鄰接法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)(圖4)。結(jié)果表明，yang2與波蘭青霉同源性為95%，結(jié)合形態(tài)學(xué)鑒定結(jié)果，確定yang2為青霉屬的波蘭青霉(Penicilliumpolonicum)。

圖3 yang2 ITS序列擴(kuò)增結(jié)果

圖4 yang2 基于ITS序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)

2.3 病原菌生物學(xué)特性分析

2.3.1 波蘭青霉致死溫度影響 由圖5可知，波蘭青霉在35～55 ℃均能正常生長(zhǎng)，在60 ℃時(shí)，生長(zhǎng)受到抑制，而在65 ℃時(shí)不再生長(zhǎng)，故波蘭青霉的致死溫度為65 ℃。

圖5 波蘭青霉致死溫度

2.3.2 溫度對(duì)波蘭青霉生長(zhǎng)的影響 溫度對(duì)微生物的生長(zhǎng)發(fā)育以及代謝具有顯著的影響，結(jié)果表明，波蘭青霉在15～35 ℃均能生長(zhǎng)，其中在35 ℃時(shí)生長(zhǎng)緩慢，最適生長(zhǎng)的溫度范圍為20～25 ℃(圖6-A)，且25 ℃與20 ℃生長(zhǎng)差異不顯著；波蘭青霉在15～35 ℃均能產(chǎn)孢，而在25 ℃時(shí)產(chǎn)孢量最高，顯著高于其他溫度，而在15 ℃與35 ℃時(shí)產(chǎn)孢量遠(yuǎn)低于其他溫度條件下(圖6-B)。

圖6 溫度對(duì)波蘭青霉菌絲生長(zhǎng)和產(chǎn)孢的影響

2.3.3 pH對(duì)波蘭青霉生長(zhǎng)的影響 pH對(duì)波蘭青霉的生長(zhǎng)具有顯著影響，由圖7-A可知，波蘭青霉在pH為5～11均能生長(zhǎng)，但在過(guò)酸或過(guò)堿的條件下波蘭青霉的生長(zhǎng)明顯較慢，而在pH為7時(shí)的菌絲生長(zhǎng)顯著高于其他pH條件；pH對(duì)波蘭青霉產(chǎn)孢量的影響如圖7-B所示，波蘭青霉在pH 5～11均能產(chǎn)孢，而在pH為7時(shí)產(chǎn)孢量最高。綜上所述，當(dāng)pH為7時(shí)波蘭青霉最適生長(zhǎng)和產(chǎn)孢。

圖7 pH對(duì)波蘭青霉菌絲生長(zhǎng)和產(chǎn)孢的影響

2.3.4 光照對(duì)波蘭青霉生長(zhǎng)的影響 光照對(duì)波蘭青霉生長(zhǎng)具有顯著的影響(圖8-A)，在黑暗條件下，波蘭青霉生長(zhǎng)最好，12小時(shí)光暗交替次之，光照條件下生長(zhǎng)最為緩慢；對(duì)波蘭青霉產(chǎn)孢而言(圖8-B)，光照也是抑制其產(chǎn)孢，黑暗條件產(chǎn)孢量最高，而光照條件下產(chǎn)孢量最低，且光照對(duì)產(chǎn)孢量的抑制極為顯著，光暗交替條件下生長(zhǎng)速度與光照條件下差異不明顯，顯著低于黑暗條件生長(zhǎng)情況。綜上所述，光照會(huì)顯著抑制波蘭青霉的生長(zhǎng)和產(chǎn)孢。

圖8 光照條件對(duì)波蘭青霉菌絲生長(zhǎng)和產(chǎn)孢的影響

2.3.5 碳源對(duì)波蘭青霉生長(zhǎng)的影響 不同碳源對(duì)波蘭青霉的菌絲生長(zhǎng)的影響如圖9-A所示，在6種不同碳源的培養(yǎng)基中，波蘭青霉均能正常生長(zhǎng)，其中麥芽糖作為碳源時(shí)波蘭青霉菌絲生長(zhǎng)最好，其次為β-環(huán)糊精、甘露醇均顯著高于其他碳源，而蔗糖作為碳源時(shí)，菌絲生長(zhǎng)最慢；而不同碳源對(duì)波蘭青霉產(chǎn)孢量影響(圖9-A)所示，蔗糖作為碳源時(shí)產(chǎn)孢量最高，其次為麥芽糖、甘露醇，β-環(huán)糊精作為碳源時(shí)產(chǎn)孢量最低。綜上所述，麥芽糖是波蘭青霉生長(zhǎng)的最適碳源，蔗糖是波蘭青霉產(chǎn)孢的最適碳源。

圖9 碳源對(duì)波蘭青霉菌絲生長(zhǎng)和產(chǎn)孢的影響

2.3.6 氮源對(duì)波蘭青霉生長(zhǎng)的影響 不同氮源對(duì)波蘭青霉的影響顯著，由圖10-A可見(jiàn)，波蘭青霉以蛋白胨為氮源時(shí)波蘭青霉生長(zhǎng)最好，其次酵母浸粉，兩者顯著高于其他4種氮源條件下的生長(zhǎng)，其中尿素和硫酸銨作為氮源時(shí)生長(zhǎng)最緩慢；而不同氮源對(duì)波蘭青霉的產(chǎn)孢量影響(圖10-B)結(jié)果表明，酵母浸粉作為氮源時(shí)產(chǎn)孢量最好，顯著高于其他氮源的培養(yǎng)基，其中硫酸銨作為氮源時(shí)產(chǎn)孢量最低。綜上所述，波蘭青霉最適氮源為酵母浸粉。

圖10 氮源對(duì)波蘭青霉菌絲生長(zhǎng)和產(chǎn)孢的影響

A：標(biāo)品色譜圖；B：青霉病當(dāng)歸組織中棒曲霉素色譜圖。

2.4 青霉病當(dāng)歸組織中真菌毒素積累分析

據(jù)報(bào)道波蘭青霉為棒曲霉素(patulin，PAT)產(chǎn)毒菌株[11]，本研究對(duì)波蘭青霉侵染采后新鮮當(dāng)歸的青霉病組織中產(chǎn)毒情況進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)波蘭青霉侵染引起的青霉病當(dāng)歸組織中有棒曲霉素的積累，其含量為6.166 μg/g。

3 討論

有關(guān)中草藥的病害在國(guó)內(nèi)外常有報(bào)道，如由黃芪白粉菌(Erysipheastragali)引起的黃芪的白粉病[12]；由立枯絲核菌(Rhizoctoniasolani)、尖孢鐮刀菌(Fusariumoxysporum)和腐皮鐮刀菌(F.solani)引起的黃芪根腐病[13]；由茄病鐮刀菌(Fusariumsolani)和尖孢鐮刀菌(Fusariumoxysporum)引起的甘草根腐病[14]；由甘草尾孢、甘草單胞銹菌分別引起的甘草銹病、褐斑病等[15]；由燕麥鐮刀菌(F.avenaceum)和銳頂鐮刀菌(F.acuminatum)所造成的岷縣當(dāng)歸根腐病[16]；由束狀炭疽菌(Colletotrichumdematium)危害引起的當(dāng)歸炭疽病[17]等。然而，上述報(bào)道均屬于田間病害，而采后貯藏期間病害研究鮮見(jiàn)報(bào)道，雖然陳娟從采后儲(chǔ)藏期間的霉變的中藥材飲片當(dāng)歸組織中分離出了皮落青霉(Penicilliumcrustosum)、鮮綠青霉(P.viridicatum)、橘灰青霉(P.aurantiogriseum)等病原菌[6]，然而，藥材飲片與新鮮藥材在原料上存在差異，同時(shí)，該研究未對(duì)分離病原菌的生物學(xué)特性及毒素積累情況進(jìn)行系統(tǒng)報(bào)道。

本研究對(duì)甘肅岷縣新鮮當(dāng)歸采后貯藏期間青霉病病害的致病菌進(jìn)行分離純化、致病性檢測(cè)，并通過(guò)形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)進(jìn)行分析，確定引起新鮮當(dāng)歸采后青霉病的主要致病菌為波蘭青霉(Penicilliumpolonicum)。

波蘭青霉具有較廣的寄主范圍，如沙娜瓦爾·色買提從棗貯藏期的霉?fàn)€組織[18]、Duduk從洋蔥貯藏期的青霉病病害組織[19]、及閔曉芳從柑橘青霉病病害組織中[20]均分離出波蘭青霉(P.polonicum)。陳娟從霉變巴戟天、甘草的飲片上分離出P.polonicum等，但在當(dāng)歸霉變組織中并未分離出P.polonicum[6]。

波蘭青霉的孢子致死溫度較高，不易失活，在溫度20～25 ℃、pH 7、黑暗、以麥芽糖為碳源、蛋白胨為氮源條件下菌絲生長(zhǎng)最好：在溫度25 ℃、pH 7、蔗糖為碳源、酵母浸粉為氮源時(shí)產(chǎn)孢量最高。冉隆賢從霉?fàn)€竹材中分離出的指狀青霉在溫度25 ℃、pH 5～6、葡萄糖和淀粉為碳源時(shí)生長(zhǎng)最好[21]；丁仁惠從霉變采后柑橘中分離的指狀青霉在溫度28～30 ℃、pH 6～7、葡萄糖為碳源時(shí)生長(zhǎng)最好[22]，并且沒(méi)有差異性；郜海燕等發(fā)現(xiàn)，從藍(lán)莓采后病害中分離出的波蘭青霉在溫度30 ℃、pH 9、果糖為碳源、蛋白胨為氮源條件下生長(zhǎng)最好。由此表明，不同宿主青霉病病害組織中分離得到的病原菌種類不同，病原菌的生物學(xué)特性也存在顯著差異。甘肅岷縣地處甘肅省南部，青藏高原東麓與西秦嶺隴南山地接壤區(qū)，境內(nèi)海拔為2 200～3 872 m，10月底11月初正值該地區(qū)低溫高濕季節(jié)，極有利于青霉菌類病原菌的生長(zhǎng)與繁殖。

值得關(guān)注的是，本研究在波蘭青霉侵染的霉變當(dāng)歸組織中檢測(cè)到棒曲霉素的存在，含量為6.166 μg/g。棒曲霉素為曲霉屬和青霉屬等真菌產(chǎn)生的主要次生代謝產(chǎn)物[23-24]，具有致畸、致癌、影響生育和免疫抑制等毒理作用[25]。謝芳超從陽(yáng)信鴨梨腐敗果中分離鑒定出波蘭青霉，且伴有棒曲霉素的檢出[11]；蘇青峰從濃縮蘋果汁生產(chǎn)原料中也分離鑒定出波蘭青霉，且同時(shí)有棒曲霉素的檢出[26]。有關(guān)棒曲霉素的限量標(biāo)準(zhǔn)，不同國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)不一，中國(guó)、美國(guó)及歐盟等國(guó)家規(guī)定果汁中棒曲霉素最大限量為50 μg/kg[27-28]，其中歐盟對(duì)嬰幼兒食品中棒曲霉素的最大限量規(guī)定為10 μg/kg[29]，1995年聯(lián)合國(guó)糧食農(nóng)業(yè)組織(food and agriculture organization，F(xiàn)AO)規(guī)定每人每天棒曲霉素最大量攝入不超過(guò)0.4 μg/kg體質(zhì)量[30]。而對(duì)中草藥中棒曲霉素限量標(biāo)準(zhǔn)尚缺乏。

4 結(jié)論

新鮮當(dāng)歸采后青霉病的主要致病菌為波蘭青霉(Penicilliumpolonicum)，波蘭青霉的孢子致死溫度為65 ℃，在溫度20～25 ℃、pH 7、以麥芽糖為碳源、蛋白胨為氮源時(shí)菌絲生長(zhǎng)最好，而在溫度25 ℃、pH 7、蔗糖為碳源、酵母浸粉為氮源時(shí)產(chǎn)孢量最高。在波蘭青霉侵染鮮當(dāng)歸的過(guò)程中會(huì)積累棒曲霉素，其嚴(yán)重威脅人類的健康。本研究可為有效防治當(dāng)歸采后青霉病及當(dāng)歸中真菌毒素積累提供理論依據(jù)。