周芳 林源

糖尿病后期可能會并發(fā)多種并發(fā)癥，其中冠狀動脈粥樣硬化性心臟?。–HD）是2 型糖尿?。═2DM）最常見的心血管并發(fā)癥之一。有研究顯示，T2DM并發(fā)CHD的概率高達25%～35%，是非糖尿病患者的2～4倍[1]。

長鏈非編碼RNA（lncRNA）在細胞生長分化、生物發(fā)育及疾病發(fā)生發(fā)展過程中扮演著重要的角色。lncRNA 已被證明可參與心力衰竭、心肌梗死、心臟肥大等各種心血管疾病的發(fā)生發(fā)展[2-3]。lncRNA PANDA位于第6號染色體，在DNA損 傷的情況下可參與p53 依賴通路介導的抗凋亡作用。研究表明，lncRNA PANDA 可參與腫瘤的進展，影響腫瘤的大小及分期[4-5]。動脈粥樣硬化患者的外周血lncRNA PANDA 的表達顯著升高，其可通過促進內皮細胞增殖參與動脈粥樣硬化的病理過程[6]。本研究觀察T2DM 合并CHD 患者血清中l(wèi)ncRNA PANDA 的表達，評估其在診斷中的價值。

1 對象與方法

1.1 研究對象

本研究利用世界衛(wèi)生組織規(guī)定的“缺血性心臟病的命名及其診斷標準中”CHD 的診斷標準，以及《中國2 型糖尿病防治指南（2017）版》的診斷標準，選取2017 年8 月至2020 年8 月在西安醫(yī)學院第二附屬醫(yī)院收治的108 例T2DM 合并CHD患者作為T2DM＋CHD 組。其中男性66 例，女性42 例，年齡55～78 歲，平均（66.42±10.83）歲；同期收治的105 例單純CHD 患者作為CHD 組，其中男性61 例，女性44 例，年齡55～77 歲，平均（67.02±11.13）歲；以同期健康體檢者110 名作為對照組，其中男性68例，女性42例，年齡56～77歲，平均（66.83±11.47）歲。本研究經(jīng)倫理委員會批準同意，所有受試者均簽署知情同意書。

排除標準：（1）認知障礙及意識障礙；（2）甲狀腺疾病；（3）惡性腫瘤；（4）自身免疫性疾??；（5）急慢性感染性疾?。唬?）血液系統(tǒng)疾?。唬?）心、肝、腎、腦等重要器官損傷。

1.2 方法

受試者于清晨空腹采集靜脈血5 mL，利用離心機3 000 g/min離心15 min后分離血清進行相關指標檢查或置于－80 ℃冰箱中保存。

空腹血糖（FPG）、三酰甘油（TG）、膽固醇（TC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）及高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）等通過全自動生化分析儀檢測；糖化血紅蛋白（HbAlc）通過高效液相色譜法檢測。

通過TRIzol 試劑提取血清中的總RNA，用Nanodrop 2000（Thermo Fisher Science，USA）測定RNA 水平。用反轉錄試劑盒（Takara，日本）合成cDNA。用Takara SYBR Green PCR 試劑盒（Takara，日本）進行實時聚合酶鏈反應（RT-PCR），擴增引物見表1。反應條件為：95 ℃預變性10 min，95 ℃變性20 s、60 ℃退火40 s，共40 個循環(huán)。采用2-ΔΔCt法進行相對定量分析，內參為GAPDH。

表1 RT-PCR所需引物序列

CHD 組和T2DM＋CHD 組受試者行冠狀動脈造影，通過Gensini 評分評價冠狀動脈的病變程度。

1.3 統(tǒng)計學分析

通過SPSS 20.0 統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行分析。計量數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差表示，多組間比較采用單因素方差分析；計數(shù)資料用例、百分比表示，多組間比較采用卡方檢驗；采用工作受試者曲線（ROC）評價血清lncRNA PANDA 水平對T2DM 合并CHD的預測效能。以P＜0.05 為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 各組臨床資料比較

3 組在性別、年齡、體質量指數(shù)（BMI）、高血壓史、TC、LDL-C、HDL-C 等方面差異無統(tǒng)計學意義。與對照組和CHD 組相比，T2DM＋CHD組吸煙史比例，F(xiàn)PG、TG 及HbA1c 水平顯著升高（P均＜0.05）。與對照組相比，CHD 組吸煙史比例及HbA1c 水平顯著升高（P均＜0.05）。T2DM＋CHD 組Gensini 評分顯著高于CHD 組（P＜0.05），提示冠狀動脈的病變程度更高。見表2。

表2 各組臨床資料比較

2.2 各組血清lncRNA PANDA水平比較

對照組、CHD組和T2DM＋CHD組血清lncRNA PANDA的相對表達水平分別為1.02±0.11，2.08±0.17 和4.12±0.36。與對照組相比，CHD組和T2DM＋CHD組血清lncRNAPANDA水平均顯著升高；與CHD組相比，T2DM＋CHD組血清lncRNA PANDA水平顯著升高（P均＜0.05）。

2.3 lncRNA PANDA對T2DM合并CHD的臨床診斷價值

ROC 表明，血清lncRNA PANDA 水平能區(qū)分健康人群與CHD 患者，其曲線下面積（AUC）為0.963（95%CI：0.94～0.987），敏感度為97.7%，特異度為90%，其血清lncRNA PANDA 臨界值為1.405，見 圖1A）。將CHD 組 和T2DM＋CHD 組的血清lncRNA PANDA 水平再進行ROC 分析，發(fā)現(xiàn)AUC 為0.94（95%CI：0.909～0.97，P＜0.05），敏感度為71.7%，特異度為82.0%，其血清lncRNA PANDA 臨界值為3.285，見圖1B。

圖1 血清lncRNA PANDA診斷的ROC曲線

3 討論

LncRNA 是一類非編碼RNA 分子，廣泛存在于血漿、血清及各組器官組織中，可作為心血管疾病重要的診斷和預測標志物。lncRNA 可調節(jié)包括糖脂代謝及免疫反應在內的生物學過程，在轉錄和翻譯水平上發(fā)揮作用。葉青青等[7]研究發(fā)現(xiàn)，血漿lncRNA NEAT1 表達水平在對照組及CHD 組患者間差異顯著，有助于提高CHD 診斷水平。lncRNA TUG1 過表達已被證明可通過Wnt 信號通路刺激內皮細胞的增殖，從而促進糖尿病動脈粥樣硬化疾病的進程[8]。

lncRNA PANDA 是從細胞周期基因啟動子區(qū)域轉錄的lncRNA 之一，該區(qū)域可能受p53 調控[9]。p53是調節(jié)多種細胞生物學行為的關鍵分子，在調控細胞凋亡、修復DNA 損傷等方面發(fā)揮重要作用。已有證據(jù)顯示，p53 可調控血管平滑肌細胞及內皮細胞的增殖與凋亡，參與動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展[10]。陳曉英等[6]研究發(fā)現(xiàn)，急性心肌梗死患者外周血中l(wèi)ncRNA PANDA 的表達水平顯著高于健康對照組，且在內皮細胞模型中，沉默lncRNA PANDA 的表達可降低細胞增殖水平。因此，本研究推測lncRNA PANDA 可能是診斷CHD 的潛在生物標志。

本研究發(fā)現(xiàn)，與健康人群相比，CHD 患者血清中l(wèi)ncRNA PANDA 的表達顯著升高，而T2DM合并CHD 患者血清中l(wèi)ncRNA PANDA 的表達水平較單純CHD 患者更高。結合兩組患者的臨床資料發(fā)現(xiàn)，T2DM 合并CHD 患者冠狀動脈的病變程度更高，血清lncRNA PANDA 表達水平可能與CHD的進程有關。ROC 曲線分析結果發(fā)現(xiàn)，lncRNA PANDA 在健康人群與CHD 患者之間具有較高的診斷價值，其對單純CHD 與T2DM合并CHD 之間的鑒別診斷價值也較高。

血清lncRNA PANDA可能成為T2DM 合并CHD 的診斷的生物標志物，但本研究為單中心、小樣本研究，后續(xù)需擴大樣本量，并進一步探索lncRNA PANDA 的具體調控機制。