朱邢超，樂紅琴

鹽城市第三人民醫(yī)院消化內(nèi)科，江蘇鹽城 224000

結(jié)腸癌是臨床常見癌癥疾病之一，國內(nèi)較常見，好發(fā)于中老年人群，多數(shù)患者早期無明顯癥狀或僅有部分輕微癥狀，不易發(fā)現(xiàn)，容易發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移，會給患者身心健康和生活質(zhì)量帶來許多不利的影響，同時也會帶來一定的家庭經(jīng)濟負擔(dān)[1-2]。劉黎等[3]的研究指出，微小RNA-155（miR-155）的下調(diào)能夠增加細胞放射的敏感性，抑制結(jié)腸癌細胞的增殖、遷移和侵襲。microRNAs（miRNAs）是一類22～25 nt內(nèi)源性的非編碼的單鏈小分子RNA，參與動植物轉(zhuǎn)錄后基因表達調(diào)控，其與腫瘤疾病的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[4]。如在甲狀腺乳頭狀癌[5]中，其表達水平與腫瘤TNM分期、病理分級及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等密切相關(guān)；其在乳腺癌[6]疾病中，miR-155表達水平與雌激素受體、孕激素受體有相關(guān)性。miR-155與多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，并能對腫瘤細胞生物學(xué)形成產(chǎn)生影響，其能為臨床治療結(jié)腸癌提供新的治療策略。該次研究收集2020年6月—2021年6月鹽城市第三人民醫(yī)院內(nèi)鏡中心結(jié)腸鏡檢查病理標本提示為結(jié)腸癌，且符合入組條件的78例結(jié)腸癌活檢組織，分析結(jié)腸癌組織中miR-155表達，并明確其對細胞增殖與凋亡的影響，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集鹽城市第三人民醫(yī)院內(nèi)鏡中心結(jié)腸鏡檢查病理標本提示為結(jié)腸癌，且符合入組條件的78例結(jié)腸癌活檢組織納入結(jié)腸癌組織組，另外選取距離癌組織邊緣＞5 cm對應(yīng)的癌旁組織標本為對照組。78例患者男50例，女28例；年齡34～78歲，平均（49.36±2.74）歲；病程7個月～3年，平均（1.26±0.39）年；體質(zhì)指數(shù)23～30 kg/m2，平均（25.39±1.39）kg/m2；分期標準：Ⅰ期19例、Ⅱ期20例、Ⅲ期29例、Ⅳ期10例；組織分化程度：高分化40例、中分化17例、低分化21例。研究并獲院內(nèi)醫(yī)學(xué)倫理委員會批準。

納入標準：①研究所納入的研究對象符合世界衛(wèi)生組織（WHO）關(guān)于結(jié)腸癌的定義[7]；②經(jīng)手術(shù)病理證實；③手術(shù)前均未接受任何放化療及免疫治療；④病灶無明顯壞死區(qū)；⑤患者均在該院建檔立卡，個人信息建檔立卡齊全；⑥患者對該次研究內(nèi)容充分了解，并在知情同意書上簽字。排除標準：①合并存在嚴重電解質(zhì)紊亂者；②妊娠或哺乳期女性者；③具有明顯炎癥細胞浸潤癌旁組織者；④臨床資料不全者；⑤合并其他惡性腫瘤疾病患者。

1.2 方法

選取自患者的病灶組織標本，人結(jié)腸癌HCT116、SW480細胞購買于中國科學(xué)院細胞庫，細胞培養(yǎng)液購自美國GIBCO公司，miR-155抑制劑購自上海邦景實業(yè)有限公司。

使用qRT-PCR方法檢測結(jié)腸癌組織和癌旁組織標本miR-155表達水平，按照Trizol試劑盒說明書操作提取總RNA，后根據(jù)反轉(zhuǎn)錄試劑盒操作步驟進行實時逆轉(zhuǎn)錄聚合酶反應(yīng)，miR-155所用引物和內(nèi)源性對照均購自上海邦景實業(yè)有限公司。

結(jié)腸癌細胞增殖率檢測，將HCT116、SW480細胞培養(yǎng)至對數(shù)生長期后進行細胞傳代，并分為空白對照組，不進行干預(yù)；miR-155抑制劑作用組，每組再分為24、36、48、72 h觀察組，相應(yīng)作用時間完成后，加入CCK8溶液，并繼續(xù)培養(yǎng)3 h，后使用酶標儀（山東恒美電子科技有限公司，HM-SY96）讀取數(shù)值。使用流式細胞儀（貝克曼庫爾特國際貿(mào)易有限公司，CytoFLEX-LX）檢測空白對照組和miR-155抑制劑作用組結(jié)腸癌細胞凋亡率。

1.3 觀察指標

①對比癌旁組織與結(jié)腸癌組織miR-155表達水平差異。

②觀察miR-155抑制劑對人結(jié)腸癌HCT166、SW480細胞增殖的影響。

③觀察miR-155抑制劑對人結(jié)腸癌HCT116、SW480細胞凋亡的影響。

1.4 統(tǒng)計方法

采用SPSS 23.0統(tǒng)計學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)，符合正態(tài)分布的計量資料采用（±s）表示，進行t檢驗；采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 癌旁組織與結(jié)腸癌組織miR-155表達水平比較

經(jīng)檢查發(fā)現(xiàn)，結(jié)腸癌組織miR-155水平（2.41±0.12）、癌旁組織（1.01±0.09），結(jié)腸癌組織miR-155水平較高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 癌旁組織與結(jié)腸癌組織miR-155表達水平差異比較（±s）

表1 癌旁組織與結(jié)腸癌組織miR-155表達水平差異比較（±s）

組織miR-155表達水平結(jié)腸癌組織組（n=78）對照組（n=78）t值P值2.41±0.12 1.01±0.09 82.430<0.001

2.2 miR-155抑制劑對HCT116、SW480細胞增殖率的影響

miR-155抑制劑對人結(jié)腸癌HCT116、SW480細胞作用后發(fā)現(xiàn)，其能有效降低HCT116、SW480細胞增速度，見圖1、圖2。

圖1 miR155抑制劑對HCT116細胞增殖率的影響

圖2 miR-155抑制劑對SW480細胞增殖率的影響

2.3 miR-155抑制劑對人結(jié)腸癌HCT116、SW480細胞凋亡的影響

miR-155抑制劑對HCT116、SW480細胞作用后發(fā)現(xiàn)，與空白對照組相比，能明顯增加結(jié)腸癌細胞凋亡率，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2 miR-155抑制劑的使用對結(jié)腸癌HCT116細胞和SW480細胞凋亡的影響（±s）

表2 miR-155抑制劑的使用對結(jié)腸癌HCT116細胞和SW480細胞凋亡的影響（±s）

組別細胞凋亡率幅度 凋亡率空白對照組mi R-155抑制劑作用組HCT116（4.05±0.47）SW480（3.77±0.29）HCT116（4.09±0.46）SW480（3.75±0.27）t/P HCT-116值t/P SW480值2.84±0.94 3.64±1.13 21.43±3.29 17.24±2.59 47.983/<0.001 42.506/<0.001

3 討論

結(jié)腸癌是全球常見的惡性腫瘤，隨著生活方式、膳食習(xí)慣改變，人口老齡化加劇等因素的影響，其發(fā)病率逐漸呈上升趨勢。疾病與多種因素有關(guān)，涉及多方面，如生活環(huán)境、遺傳以及藥物不合理使用等，疾病的發(fā)生、發(fā)展與腫瘤細胞增殖、轉(zhuǎn)化密切相關(guān)，需要加強對疾病分子生物學(xué)深入研究。結(jié)腸癌具有很強的環(huán)境關(guān)聯(lián)性和遺傳風(fēng)險因素，手術(shù)治療雖能有效消除病灶，但術(shù)后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移會影響整體治療效果，患者的生存質(zhì)量仍舊受到威脅[8-9]。結(jié)腸癌發(fā)生發(fā)展機制，涉及原癌基因激活、抑癌基因突變、細胞異常增殖、染色體缺失等。miRNAs在惡性腫瘤發(fā)生過程中會發(fā)揮癌基因或抑癌基本功效，其很有可能會成為惡性腫瘤診斷與判斷患者預(yù)后的預(yù)期靶點[10]。miR-155位于人21號染色體，其能夠促使細胞周圍纖維母細胞轉(zhuǎn)化為腫瘤相關(guān)性纖維細胞，進而會促使惡性腫瘤疾病進展[11]。另外其還會抑制TP53INPI mRNA功能，降低其表達水平，可促進腫瘤細胞增殖[12]。

該次研究結(jié)果指出，相較于癌旁組織（1.01±0.09），結(jié)腸癌組織miR-155水平（2.41±0.12）較高（P＜0.05），表示其在一定程度上促進結(jié)腸癌的發(fā)生、發(fā)展。此外在常占國等[13]的研究中提到，miR-155在結(jié)腸癌組表達水平（3.09±0.23）高于正常組（1.02±0.15），與該次研究結(jié)果相似，且其表達水平還與與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、組織分化程度以及浸潤深度密切相關(guān)。另外其低表達時，無進展生存期、總體生存時間均較高，提示通過miR-155表達水平能夠判斷患者預(yù)后[14]。

關(guān)于miR-155在細胞增殖以及凋亡中的作用，研究結(jié)果表示，miR-155抑制劑能有效降低結(jié)腸癌HCT116細胞、SW480細胞增速度，增加結(jié)腸癌細胞凋亡率（P＜0.05），提示結(jié)腸癌細胞增殖與凋亡中，miR-155具有重要的調(diào)控作用。miR-155可能在結(jié)腸癌的遷移中發(fā)揮重要作用，可通過上調(diào)其表達，增強腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移能力，從而影響患者預(yù)后[15]。除卻細胞增殖外，關(guān)于腫瘤細胞凋亡臨床也需加強重視，其是細胞內(nèi)普遍存在的生物學(xué)過程，一定程度上能夠反映抗癌藥物使用的有效性[16-17]。線粒體凋亡信號通路是最為常見的腫瘤細胞通路，且線粒體凋亡信號也在腫瘤細胞凋亡中發(fā)揮著重要作用[18-19]。Bcl-2家族蛋白在線粒體凋亡信號通路中具有重要價值，Bcl-2家族蛋白，特別是Bax，能促進細胞凋亡發(fā)生。在李濤等[20]的研究中提到，miR-155抑制劑使用后，線粒體凋亡相關(guān)蛋白Bax呈高表達狀態(tài)，提示線粒體凋亡信號通路活化，誘導(dǎo)結(jié)腸癌細胞凋亡。

綜上所述，在結(jié)腸癌組織中，miR-155表達水平較高，對其進行抑制能夠降低HCT116細胞、SW480細胞增殖率，促使細胞凋亡，其有望能成為結(jié)腸癌患者治療靶點，以期能夠改善患者預(yù)后。