姜 輝 ， 陳曉英 ， 次旦央吉 ， 巴桑旺堆 ， 達(dá)娃央拉 ， 鮮莉莉 , 永 忠 ， 洛桑旦增 ， 曹涵文 ， 張 強(qiáng)

(1.省部共建青稞和牦牛種質(zhì)資源與遺傳改良國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 ， 西藏 拉薩 850002 ； 2.西藏自治區(qū)農(nóng)牧科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所 ， 西藏 拉薩 850009 ； 3.西藏聶榮縣農(nóng)牧業(yè)科學(xué)技術(shù)服務(wù)站 ， 西藏 聶榮 853500)

牦牛作為世界屋脊——青藏高原特有畜種，是當(dāng)?shù)刂匾?jīng)濟(jì)支柱產(chǎn)業(yè)資源。近幾十年，在我國(guó)改革開(kāi)放的浪潮推動(dòng)下，我國(guó)少數(shù)民族區(qū)域經(jīng)濟(jì)也出現(xiàn)了可喜的騰飛，尤其是青藏高原地區(qū)牧民的經(jīng)濟(jì)生活水平得到很大的提高。而原本被當(dāng)作役用的牦?，F(xiàn)在更多是作為當(dāng)?shù)厝嗣裰饕娜馐称泛腿橹破返鹊鞍资澄锏膩?lái)源。由于我國(guó)青藏高原幅員遼闊，豐富的生態(tài)地理?xiàng)l件造就了大量具有各自特色的牦牛資源群體。雖然目前已有近10余個(gè)牦牛品種被收錄入國(guó)家家養(yǎng)動(dòng)物遺傳資源名錄[1-2]，但由于種群數(shù)量規(guī)模及特定棲息地生態(tài)條件依賴性的原因，還遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足現(xiàn)有市場(chǎng)對(duì)牦牛產(chǎn)品的需求。故而大力開(kāi)展地方牦牛優(yōu)秀良種資源的挖掘及利用，是提高青藏高原牦牛良種覆蓋度，保證市場(chǎng)供應(yīng)充足的最佳途徑。唐古拉山查吾拉山口作為入藏的千年古道[3-4]，不僅是川藏線上重要的旅游風(fēng)景區(qū)，同時(shí)也是青藏高原重要的牧場(chǎng)之一，在西藏地區(qū)的牦牛養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)中占據(jù)舉足輕重的地位。迄今為止，當(dāng)?shù)啬撩褚延薪甑年笈ｐB(yǎng)殖歷史，而且由于自然選擇的作用，當(dāng)?shù)匾研纬杉骖櫢咴鷳B(tài)適應(yīng)性優(yōu)良和生產(chǎn)力高的牦牛地方資源群體——查吾拉牦牛。然而有關(guān)該類群的研究尚不充分，僅有少量關(guān)于其生長(zhǎng)及產(chǎn)肉性能的研究[5]。本試驗(yàn)從對(duì)查吾拉牦牛資源群體的泌乳性能及血液生化指標(biāo)的分析入手，對(duì)該群體遺傳資源特性進(jìn)行更深層次的挖掘，以期為今后該資源的品種鑒定申請(qǐng)及開(kāi)發(fā)利用提供基礎(chǔ)資料。

1 材料與方法

1.1 主要試劑 血清生化指標(biāo)測(cè)定所用全部試劑，均購(gòu)自寧波美康生物科技有限公司；血常規(guī)指標(biāo)測(cè)定全部試劑，均購(gòu)自日本SYSMEX(希森美康)株式會(huì)社。

1.2 主要儀器 BT3501-C2型電子秤，無(wú)錫大樹(shù)精工科技有限公司產(chǎn)品；UL40AC型乳成分分析儀，優(yōu)創(chuàng)科技產(chǎn)品；貝克曼庫(kù)爾特Audio800生化分析儀(美國(guó))；西斯美康XE2100全自動(dòng)血液細(xì)胞分析儀(日本)。

1.3 試驗(yàn)動(dòng)物 泌乳性能測(cè)定：15頭4～5歲的健康經(jīng)產(chǎn)雌性查吾拉牦牛；血清生化及血常規(guī)指標(biāo)測(cè)定：24頭4～5歲放牧牦牛。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 泌乳性能測(cè)定 隨機(jī)選擇健康的經(jīng)產(chǎn)成年雌性查吾拉牦牛15頭(4～5歲)為測(cè)試牛。采樣及動(dòng)物飼養(yǎng)地為那曲聶榮縣嘎確牧場(chǎng)查吾拉牦牛選育基地(平均海拔在4 700 m左右；東經(jīng)：92.295 74°；北緯：32.111 93°)，試驗(yàn)自2019年7月1日開(kāi)始，至同年9月28日結(jié)束。測(cè)試母牛均為日間放牧飼養(yǎng)及夜晚圈養(yǎng)模式，測(cè)定日當(dāng)晚將母牛與犢牛隔離，次日清晨7點(diǎn)前進(jìn)行人工擠奶，20 min擠乳后進(jìn)行稱乳，每隔2 d循環(huán)測(cè)定擠乳量。每次采集的乳樣混合后放入冰箱中冷藏保存，第2天早晨送檢，具體操作參考已有研究的試驗(yàn)設(shè)計(jì)[6-7]。試驗(yàn)測(cè)定指標(biāo)包括日產(chǎn)乳量、非脂乳固體、脂肪、蛋白質(zhì)、乳糖和酸堿度(pH)。擠乳量測(cè)定用電子秤稱量，乳品質(zhì)測(cè)定用乳成分分析儀進(jìn)行測(cè)定。

1.4.2 牛血清生化指標(biāo)測(cè)定 選取放牧牦牛24頭，年齡4～5歲。試驗(yàn)前1天晚8點(diǎn)后禁食禁水，試驗(yàn)當(dāng)天早上7點(diǎn)空腹用非抗凝真空管頸靜脈采血5 mL，靜置后3 500 r/min離心10 min分離血清，-80 ℃超低溫冰箱保存?zhèn)溆谩悠凡杉瘯r(shí)間為2020年5月份。使用貝克曼庫(kù)爾特Audio800生化分析儀(美國(guó))檢測(cè)血清中39項(xiàng)生化指標(biāo)：總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLO)、白球比(A/G)、總膽紅素(TBIL)、直接膽紅素(DBIL)、間接膽紅素(IBIL)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷草轉(zhuǎn)氨酶/谷丙轉(zhuǎn)氨酶(AST/ALT)、谷氨酰胺轉(zhuǎn)移酶(GCT)、堿性磷酸酶(ALP)、總膽汁酸(TBA)、前白蛋白(PA)、肌酸激酶(CK)、肌酸酶同工酶(CKMB)、 乳酸脫氫酶(LDH)、α-羥丁酸(HBDH)、C反應(yīng)蛋白 (全量程，CRP)、淀粉酶(AMY)、鉀(K)、鈉(Na)、氯(Cl)、鈣(Ca)、二氧化碳(CO2)、鎂(Mg)、磷(P)、尿素氨(BUN)、肌酐(Cr)、胱抑素C(CYS-C)、β2-微球蛋白(β2-MG)、葡萄糖(GLU)、尿酸(UA)、甘油三酯(TG)、總膽固醇(CHOL)、高密度脂蛋白(HDL)、陰離子間隙(AG)、滲透壓(OSM)和尿素氮/肌酐(BUN/Cr)。

1.4.3 牛血常規(guī)指標(biāo)測(cè)定 選取放牧牦牛24頭，年齡4～5歲。試驗(yàn)前1天晚8點(diǎn)后禁食禁水，試驗(yàn)當(dāng)天早上7點(diǎn)空腹用抗凝真空管頸靜脈采血5 mL，用于血常規(guī)的測(cè)定。使用全自動(dòng)血液細(xì)胞分析儀檢測(cè)血液中的16項(xiàng)血常規(guī)指標(biāo)：白細(xì)胞(WBC)、中性粒細(xì)胞百分比(NEUT)、淋巴細(xì)胞百分比(LYMPH)、單核細(xì)胞百分比(MONO)、嗜酸性粒細(xì)胞百分比(EO)、嗜堿性粒細(xì)胞百分比(BASO%)、嗜堿性粒細(xì)胞絕對(duì)值(BASO#)、紅細(xì)胞(RBC)、血紅蛋白(HGB)、紅細(xì)胞壓積(HCT)、平均紅細(xì)胞體積(MCV)、紅細(xì)胞體積分布寬度-CV(RDW-CV)、血小板體積分布寬度(PDW)、平均血小板體積(MPV)、血小板壓積(PCT)和大血小板比率(P-LCR)。

1.4.4 數(shù)據(jù)處理 利用SPSS 23.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。其中血清生化指標(biāo)的95%置信區(qū)間分析中，首先計(jì)算各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)的數(shù)值分布是否符合正態(tài)性檢驗(yàn)(P>0.05)，并計(jì)算平均值(Mean)和標(biāo)準(zhǔn)差(SD)。若不符合正態(tài)分布的指標(biāo)，則應(yīng)用百分位法(P5%～P95%)確定其參考區(qū)間。

2 結(jié)果

2.1 查吾拉牦牛產(chǎn)奶量測(cè)定 查吾拉牦牛日產(chǎn)奶量測(cè)定結(jié)果如表1所示，7月份日產(chǎn)奶量最高,為(3.47±0.33)kg，而8月份和9月份日產(chǎn)奶量分別為(3.32±0.26) kg和(2.25±0.49) kg，3個(gè)月份日產(chǎn)奶量平均為(3.14±0.38)kg。其中7月份與8月份日產(chǎn)奶量組間無(wú)差異(P>0.05)，但9月份與7、8月份的日產(chǎn)奶量間存在顯著差異(P<0.05)。

表1 查吾拉牦牛不同月份日產(chǎn)奶量測(cè)定

2.2 查吾拉牦牛乳品質(zhì)測(cè)定 查吾拉牦牛乳品質(zhì)指標(biāo)測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2，脂肪含量為(6.61±0.89)%，非脂乳固體含量為(9.30±0.29)%，乳糖含量為(5.95±2.32)%，固形物含量為(0.75±0.03)%，蛋白質(zhì)含量為(3.40±0.10)%，pH為6.53±0.08。

表2 查吾拉牦牛乳品質(zhì)測(cè)定結(jié)果

2.3 查吾拉牦牛生化指標(biāo)檢測(cè) 成年雌性查吾拉牦牛39項(xiàng)生化指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果如表3所示，數(shù)值最高的指標(biāo)主要包括α-羥丁酸為(829.26±111.72)U/L、乳酸脫氫酶為(808.70±93.10)U/L、肌酸激酶為(238.79±146.69)U/L、肌酸酶同工酶為(176.18±46.00)(U/L)，數(shù)值最低指標(biāo)主要包括尿素氮/肌酐為0.06±0.02、β-2微球蛋白為(0.10±0.06)mg/L、胱抑素C為(0.10±0.02)mg/L、甘油三酯為(0.18±0.10)mmol/L。經(jīng)過(guò)分析鑒定獲得查吾拉牦牛血清生化指標(biāo)可參考范圍，并以95%置信區(qū)間表示(表3)，其中A/G、TBIL、DBIL、IBIL、AST、AST/ALT、GCT、CHE、CK、AMY、K、B2-MG、GLU和BUN/Cr均不符合正態(tài)分布曲線，采用百分位法計(jì)算獲得參考值范圍。

表3 查吾拉牦牛生化指標(biāo)檢測(cè)

2.4 查吾拉牦牛血常規(guī)檢測(cè) 成年雌性查吾拉牦牛16項(xiàng)血常規(guī)指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果及各指標(biāo)的95%置信區(qū)間如表4所示，查吾拉牦牛的血紅蛋白含量為(130.60±4.43)g/L、紅細(xì)胞平均體積為(53.31±1.87)fl、紅細(xì)胞體積分布寬度-CV為(37.48±1.37)%，此3項(xiàng)指標(biāo)均較高。

表4 查吾拉牦牛血常規(guī)檢測(cè)

3 討論

產(chǎn)奶量作為草食動(dòng)物重要經(jīng)濟(jì)性狀一直備受關(guān)注，尤其是在中國(guó)水牛[8]和國(guó)外引入的商業(yè)奶牛品種[9-10]。而牦牛作為我國(guó)青藏高原牧區(qū)牧民的乳制品蛋白食物的主要來(lái)源，牦牛的產(chǎn)乳量和乳品質(zhì)也越來(lái)越受到重視[11-13]。目前，我國(guó)多個(gè)地方牦牛資源群體的泌乳特性及其品質(zhì)的理化特征得到鑒定[14-17]。

從本試驗(yàn)結(jié)果可知，同為青草期7月份的放牧水平下，查吾拉牦牛日產(chǎn)奶量(3.47±0.33)kg顯著(P<0.05)高于昌臺(tái)牦牛(2.69±0.18)kg[6]、天祝牦牛(0.85±0.251)～(1.40±0.26)kg及甘南牦牛(0.88±0.191)～(1.33±0.36)kg[18]、金川牦牛(1.75±0.11)kg[19]、果洛家牦牛(1.49±0.27)kg[20]，并與亞丁牦牛7月份產(chǎn)奶水平[月產(chǎn)奶量：(92.69±16.26)kg]相當(dāng)。另外查吾拉牦牛在8、9月份產(chǎn)奶量與昌臺(tái)牦牛及亞丁牦牛的產(chǎn)乳量基本相當(dāng)[6,21]，且無(wú)顯著差異(P>0.05)，然而卻顯著(P<0.05)高于金川牦牛[19]及果洛加牦牛[20]，表明查吾拉牦牛與昌臺(tái)牦牛、亞丁牦牛在產(chǎn)乳量水平上優(yōu)于甘南牦牛、天祝牦牛、金川牦牛、果洛家牦牛，而查吾拉牦牛與亞丁牦牛的產(chǎn)乳量在青草期更為突出。

本試驗(yàn)中查吾拉牦牛的7～9月份的產(chǎn)乳量也均高于西藏3個(gè)著名牦牛資源品種——嘉黎牦牛、帕里牦牛和斯布牦牛[22]。有趣的是，通過(guò)與2個(gè)涉及昌臺(tái)牦牛產(chǎn)乳量的研究[6，21]進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)2個(gè)研究關(guān)于昌臺(tái)牦牛6～10月份產(chǎn)乳量存在很大分歧，這可能是由于不同牧場(chǎng)間的植被結(jié)構(gòu)和牧草產(chǎn)量不同，對(duì)放牧牛只的產(chǎn)乳量產(chǎn)生間接影響[23]。另外，就查吾拉牦牛而言，本試驗(yàn)中該群體產(chǎn)乳量在7月份 為產(chǎn)乳量峰值，隨之逐月下降，這個(gè)規(guī)律與亞丁牦牛一致[21]，然而2個(gè)有關(guān)昌臺(tái)牦牛產(chǎn)乳量的研究都表明8月份為昌臺(tái)牦牛產(chǎn)乳量峰值月[6,21]。這說(shuō)明牧場(chǎng)的不同地理氣候等生態(tài)因子對(duì)牧場(chǎng)動(dòng)物的泌乳量存在影響，如不同季節(jié)光照、氣溫氣濕、植被生長(zhǎng)規(guī)律等[24-25]。

從查吾拉牦牛乳液品質(zhì)指標(biāo)來(lái)看，其乳脂率、非脂乳固體、乳糖均與亞丁牦牛[21]、昌臺(tái)牦牛[21]、嘉黎牦牛[22]、斯布牦牛[22]、帕里牦牛[22]無(wú)顯著差異。但其蛋白質(zhì)含量介于亞丁牦牛和昌臺(tái)牦牛之間[21]，略低于嘉黎牦牛、斯布牦牛和帕里牦牛。但由于此前的各項(xiàng)研究的樣本量均較少[22]，所以該結(jié)果是否能夠準(zhǔn)確作為參考用于比較牦牛品種的真實(shí)水平還需進(jìn)一步確認(rèn)。

眾所周知，鮮乳中的乳酸菌在將乳糖轉(zhuǎn)化為乳酸從而降低鮮奶酸度的同時(shí)，還會(huì)分解部分鮮乳的營(yíng)養(yǎng)成分。本試驗(yàn)中查吾拉牦牛的鮮乳pH為6.53±0.08，符合正常牛鮮乳酸堿范圍，且優(yōu)于亞丁牦牛和昌臺(tái)牦牛[21]，故而查吾拉牦牛鮮奶的酸堿環(huán)境更利于保持其營(yíng)養(yǎng)成分及牦牛鮮牛乳品質(zhì)[26-27]。

血清生化指標(biāo)和血常規(guī)指標(biāo)不僅被廣泛的應(yīng)用于機(jī)體各類疾病的輔助診斷，而且一定程度上能夠反映出動(dòng)物在適應(yīng)某種生存條件下的基本生命體征。所以建立一個(gè)物種乃至物種內(nèi)一個(gè)品種或類群的血清生化指標(biāo)和血常規(guī)指標(biāo)評(píng)價(jià)體系，是對(duì)其在特定生存生態(tài)環(huán)境下的最好理解，能夠幫助加深對(duì)特定遺傳資源類群的適應(yīng)性進(jìn)化和資源特質(zhì)的理解。

牦牛作為在廣袤的青藏高原廣泛分布的特有畜種，長(zhǎng)期特定棲息地的自然選擇造就了其獨(dú)有的生理生化特征，也塑造了其豐富而多變的遺傳多樣性特征，從而也導(dǎo)致了不同地理分布類群的生化指標(biāo)的不同。目前，我國(guó)已針對(duì)不同牦牛品種及地方類群的生化指標(biāo)開(kāi)展調(diào)查，包括麥洼牦牛[28]、青海大通牦牛[29]和甘南牦牛[30]等。本試驗(yàn)對(duì)查吾拉牦牛的血液指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)血清生化指標(biāo)中GLU、CHOL、HDL、TP等指標(biāo)以及血常規(guī)中WBC、EO、BASO等指標(biāo)與諸多其他牦牛品種血液內(nèi)含量無(wú)顯著差異[28-32]。然而，由于不同分布地區(qū)的特殊生態(tài)環(huán)境因子及品種特異性的原因，尚有大量指標(biāo)在相同年齡段的牦牛品種間存在顯著差異。

在血清生化指標(biāo)中，查吾拉牦牛DBIL、ALT和AST三項(xiàng)指標(biāo)與其他牦牛相比均存在顯著差異。DBIL是由間接膽紅素進(jìn)入肝后受肝內(nèi)葡萄糖醛酸基轉(zhuǎn)移酶的作用與葡萄糖醛酸結(jié)合生成的，其升高說(shuō)明經(jīng)肝細(xì)胞處理后膽紅素從膽道的排泄發(fā)生障礙[33]。Cr是肌肉在人體內(nèi)代謝的產(chǎn)物，主要由腎小球?yàn)V過(guò)排出體外，其在體內(nèi)的生成恒定，是反映動(dòng)物腎代謝功能的重要指標(biāo)[34-35]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，查吾拉牦牛的DBIL、UA顯著低于(P<0.05)麥洼牦牛，而其Cr也顯著低于(P<0.05)麥洼牦牛[31]、甘南牦牛[30]和海北牦牛[29]，表明查吾拉牦牛的肝膽代謝能力較好。

ALT和AST是診斷病毒性肝炎、中毒性肝炎的重要指標(biāo)。其活性增高與許多因素有關(guān)，如營(yíng)養(yǎng)不良、心肌病、腦血管病、骨骼肌疾病和胰腺炎等。此外，某些藥物和毒物，如氯丙嗪、奎寧、水楊酸制劑等，亦可導(dǎo)致血清ALT活性增高。在人類醫(yī)學(xué)診斷中界定谷草轉(zhuǎn)氨酶/谷丙轉(zhuǎn)氨酶(AST/ALT)大于1時(shí)，表明患者肝臟有實(shí)質(zhì)的廣泛損傷。本試驗(yàn)中，查吾拉牦牛的ALT和AST的指標(biāo)顯著低于(P<0.05)甘南牦牛，也同樣表明查吾拉牦牛的肝功能狀態(tài)較好。出現(xiàn)這種差異一方面可能由于品種的特異性，另一方面可能是其棲息地高海拔、環(huán)境污染及外界干擾少等原因?qū)е缕渌谏羁臻g更為健康。但值得注意的是，目前全部已公布的不同牦牛品種的AST/ALT均小于1[30-31,36-37]，表明我國(guó)牦牛資源整體在放牧條件下生理狀態(tài)良好。

在血常規(guī)檢測(cè)指標(biāo)中，HGB、MCV、RDW-CV三項(xiàng)指標(biāo)在全部被檢指標(biāo)中為最高。HGB 是血液中運(yùn)輸氧的主要成分，HGB 含量高說(shuō)明營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)良好，機(jī)體代謝旺盛。高海拔地區(qū)動(dòng)物為了適應(yīng)高原低氧，其機(jī)體內(nèi)HGB濃度增加，以供應(yīng)機(jī)體氧氣需求。藏羊具有高的HGB濃度[38]。有研究表明,生活在3 700 m處的藏豬為適應(yīng)高原低氧環(huán)境,主要表現(xiàn)為HGB濃度﹑紅細(xì)胞壓積增加[39]。以上報(bào)道中的結(jié)果均與本試驗(yàn)結(jié)果一致。表明高原動(dòng)物通常通過(guò)增加HGB含量來(lái)增強(qiáng)機(jī)體的運(yùn)氧能力,加強(qiáng)機(jī)體對(duì)高原低氧環(huán)境的適應(yīng)性[40]。RDW-CV是表示紅細(xì)胞大小是否均勻的指標(biāo)，偏高表示紅細(xì)胞大小不勻。MCV是紅細(xì)胞與正常紅細(xì)胞體積的比較，臨床上多根據(jù)紅細(xì)胞體積將其分為3個(gè)類型，即小細(xì)胞、正細(xì)胞和巨細(xì)胞[41]。MCV是機(jī)體營(yíng)養(yǎng)狀況的評(píng)價(jià)指標(biāo)之一，與RDW-CV一同作為判斷動(dòng)物是否貧血的指標(biāo)。MCV、RDW-CV高于正常水平表明查吾拉牦牛的血氧運(yùn)輸能力較好。

本試驗(yàn)利用統(tǒng)計(jì)學(xué)算法，分析得到查吾拉牦牛3～4歲成年健康母牛的39個(gè)血清生化指標(biāo)和16項(xiàng)血常規(guī)指標(biāo)的95%置信區(qū)間，為今后牦牛生化檢測(cè)輔助診斷提供科學(xué)的參考范圍。實(shí)際上大量關(guān)于家養(yǎng)動(dòng)物的血液學(xué)指標(biāo)的研究主要是參照人或其他模式生物的血液指標(biāo)正常范圍參考值，而針對(duì)家養(yǎng)動(dòng)物物種，尤其是品種內(nèi)參考值更加有助于輔助診斷及品種資源狀態(tài)評(píng)價(jià)。

綜上所述，本試驗(yàn)顯示查吾拉牦牛在泌乳量及營(yíng)養(yǎng)成分等諸多方面較眾多牦牛資源品種具有一定優(yōu)勢(shì)，并確認(rèn)7月份為該品種在產(chǎn)區(qū)棲息地的產(chǎn)奶量峰值月。其次，本試驗(yàn)明確了成年雌性查吾拉牦牛的39項(xiàng)血清生化指標(biāo)和16項(xiàng)血常規(guī)指標(biāo)的參考值范圍，為今后牦牛生化檢測(cè)輔助診斷提供科學(xué)的參考。