阮勝鋼 孫寒雪 曾 濤 李國勤 陶爭榮 許文武 盧立志* 曹鴻國

（1紹興咸亨紹鴨育種有限公司，浙江紹興 312000；2浙江農(nóng)藝師學(xué)院，浙江杭州 310021；3浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，浙江杭州 310021；4安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，安徽合肥 230000）

益生菌在人們?nèi)粘Ｉ钪薪?jīng)常出現(xiàn)，通過定殖在宿主體內(nèi)調(diào)節(jié)宿主黏膜與系統(tǒng)免疫功能，調(diào)節(jié)腸道內(nèi)菌群平衡，促進(jìn)營養(yǎng)吸收和保持腸道健康。科研人員對(duì)其進(jìn)行了廣泛研究，將其有效應(yīng)用于食品、醫(yī)藥和農(nóng)業(yè)生產(chǎn)，取得了巨大的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益[1]。在畜禽生產(chǎn)應(yīng)用中，益生菌制劑更是一種有潛力替代抗生素的飼料添加劑，可以影響動(dòng)物的生產(chǎn)性能、血清抗氧化能力等，進(jìn)而改善動(dòng)物的健康狀況和提升畜禽產(chǎn)品質(zhì)量[2]。與使用抗生素不同，動(dòng)物的非特異性免疫力在使用益生菌制劑后得到增強(qiáng)，飼料的利用率提高，動(dòng)物生長性能相應(yīng)改善，同時(shí)不會(huì)出現(xiàn)超級(jí)耐藥菌等現(xiàn)象，減少對(duì)環(huán)境的污染[3]。紹興鴨養(yǎng)殖歷史悠久，原產(chǎn)于浙江省紹興市和諸暨市，目前在國內(nèi)飼養(yǎng)范圍廣泛[4]。紹興鴨具有性成熟早、產(chǎn)蛋量高、耗料量少、抗病力強(qiáng)等優(yōu)勢，是世界三大鴨種之一[5-6]。紹興鴨雛鴨的健康養(yǎng)殖對(duì)畜禽業(yè)發(fā)展至關(guān)重要。本試驗(yàn)探究將益生菌應(yīng)用于雛鴨飼料中，評(píng)價(jià)其對(duì)前期生長階段的雛鴨血清抗氧化能力、免疫功能和肝功能的影響，以期為飼料禁抗后鴨群的健康提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試益生菌制劑由枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌組成，含有效功能菌數(shù)≥6.0×108CFU/g，由廣州恒益生物科技有限公司提供。試驗(yàn)雛鴨由紹興咸亨紹鴨育種有限公司提供。試驗(yàn)試劑盒均購自北京華英生物技術(shù)研究所。血液檢驗(yàn)儀器為華衛(wèi)德朗DR-200BS酶標(biāo)分析儀、山東博科生物產(chǎn)業(yè)有限公司生產(chǎn)的BK-1200全自動(dòng)生化分析儀。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)采用單因素完全隨機(jī)設(shè)計(jì)，選取1日齡體重相近、健康狀況良好的紹興鴨600只，將其隨機(jī)分成2組：對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗(yàn)組在對(duì)照組基礎(chǔ)上添加0.15%益生菌制劑。每組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)50只，試驗(yàn)期為28 d。

1.3 試驗(yàn)方法

飼糧配制及養(yǎng)分含量計(jì)算參照《紹興鴨飼養(yǎng)技術(shù)規(guī)程》（NY/T 827—2004），結(jié)合生長前期雛鴨生理營養(yǎng)要求配制飼糧（表1）。1 kg飼料提供12 mg Cu、84 mg Zn、110 mg Mn、10.4 mg I、0.3 mg Se、11 250 IU VA、3 000 IU VD3、37.5 mg VE、3 mg VK、4 mg VB1、7.2 mg VB2、60 mg 煙酸、14 mg 泛酸鈣、4 mg VB2、1.3 mg VB11、0.02 mg VB12、0.2 mg生物素和1 000 mg膽堿。營養(yǎng)水平為代謝能11.37%、粗蛋白質(zhì)19.0%、賴氨酸0.97%、蛋氨酸0.58%、蛋氨酸+胱氨酸0.73%、鈣0.84%、總磷0.45%。按試驗(yàn)設(shè)計(jì)進(jìn)行飼喂，試驗(yàn)在浙江省紹興市某鴨廠進(jìn)行，飼料為顆粒料，自由飲水。定期打掃鴨舍并記錄試驗(yàn)鴨死亡情況。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成（風(fēng)干） 單位：%

1.4 測定指標(biāo)與方法

1.4.1 生長性能測定。各組以重復(fù)為單位分別在試驗(yàn)期初和試驗(yàn)期末測量雛鴨體質(zhì)量，并計(jì)算各組雛鴨平均日增重（ADG）。

1.4.2 血清抗氧化指標(biāo)測定。試驗(yàn)期末，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)抽取6只雛鴨，翅靜脈采血，室溫下靜置。采血后，以轉(zhuǎn)速3 000 r/min離心15 min，取上清液用離心管分裝并放置于-20℃保存?zhèn)溆?。檢測雛鴨血清超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、過氧化氫酶（CAT）活性，丙二醛（MDA）的含量及總抗氧化能力（T-AOC）。測定方法均采用試劑盒法，操作時(shí)嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行，采用華衛(wèi)德朗DR-200BS酶標(biāo)分析儀測定。

1.4.3 血清免疫指標(biāo)測定。免疫球蛋白：取上述血清，采用試劑盒法檢測雛鴨血清免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白M（IgM）的含量。操作時(shí)嚴(yán)格按照ELISA檢測試劑盒說明書進(jìn)行，采用酶標(biāo)分析儀測定。細(xì)胞因子：均采用試劑盒法測定血清中干擾素-γ（IFN-γ）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-2（IL-2）、白細(xì)胞介素-4（IL-4）含量，采用華衛(wèi)德朗DR-200BS酶標(biāo)分析儀分析測定。

1.4.4 肝功能血清指標(biāo)測定。取上述血清，采用試劑盒法，按說明書操作，用BT-21生化分析儀測定血清中總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（GGT）含量及谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）和谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）活性。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)所得數(shù)據(jù)用Excel 2013軟件進(jìn)行整理，采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行單因素方差分析，采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)進(jìn)行比較，以P＜0.05作為差異顯著判斷標(biāo)準(zhǔn)。試驗(yàn)結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 益生菌制劑對(duì)雛鴨生長性能的影響

由表2可知，試驗(yàn)期初各組雛鴨體質(zhì)量差異不顯著（P＞0.05）。與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組雛鴨試驗(yàn)期末體質(zhì)量和ADG均顯著提高（P＜0.05）。

表2 益生菌制劑對(duì)雛鴨生長性能的影響 單位：g

2.2 益生菌制劑對(duì)雛鴨血清抗氧化的影響

由表3可知，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組雛鴨血清中T-AOC 顯著提高（P＜0.05），GSH-Px活性顯著提高（P＜0.05），MDA 含量顯著降低（P＜0.05），SOD 和 CAT活性均有提高但差異不顯著（P＞0.05）。

表3 益生菌制劑對(duì)雛鴨血清抗氧化的影響

2.3 益生菌制劑對(duì)雛鴨免疫功能的影響

由表4可知，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組雛鴨血清IgA含量顯著提高（P＜0.05），IgM含量也有所提高但差異不顯著（P＞0.05）。由表5可知，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組雛鴨血清TNF-α和IL-2含量顯著提高（P＜0.05），IFN-γ 含量也有提高但差異不顯著（P＞0.05）。

表4 益生菌制劑對(duì)雛鴨血清免疫球蛋白的影響單位：（g·L-1）

2.4 益生菌制劑對(duì)雛鴨肝功能的影響

由表6可知，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組雛鴨血清中白蛋白（ALB）含量顯著提高（P＜0.05），γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（GGT）含量及谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）活性差異不顯著（P＞0.05）。

表6 益生菌制劑對(duì)雛鴨肝功能的影響

3 結(jié)論與討論

3.1 結(jié)論

試驗(yàn)結(jié)果表明，在雛鴨飼料中添加益生菌制劑可以顯著提高雛鴨血清抗氧化能力，并對(duì)雛鴨的免疫功能和肝功能有積極作用。

3.2 討論

3.2.1 益生菌制劑對(duì)雛鴨生長性能的影響。生長性能可以直接反映動(dòng)物的營養(yǎng)狀態(tài)，往往也決定著動(dòng)物的健康狀況。外源菌群在腸道內(nèi)的繁殖有助于菌群改善營養(yǎng)物質(zhì)的利用能力[7]。益生菌能夠在腸道內(nèi)分泌各種利于消化的酶類，同時(shí)利用營養(yǎng)物質(zhì)合成短鏈的肽和脂肪酸，有助于對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收[8]。本試驗(yàn)中，在雛鴨飼糧中添加益生菌制劑，提高了雛鴨的免疫能力，進(jìn)而顯著提高了雛鴨28日齡體質(zhì)量和ADG。

3.2.2 益生菌制劑對(duì)雛鴨血清抗氧化的影響。新陳代謝產(chǎn)生的有害物質(zhì)，如脂質(zhì)氧化終產(chǎn)物MDA以及可以消除生物體有害物質(zhì)的活性物質(zhì)SOD，都存在于血清中?？偪寡趸芰Γ═-AOC）是反映生物體抗氧化能力的綜合指標(biāo)[9]。田 浪等[10]通過在黃羽肉雞飼糧中添加復(fù)合益生菌，發(fā)現(xiàn)肉雞血清中T-AOC及總超氧化物歧化酶（T-SOD）和CAT的活性顯著提高。饒?bào)w宇等[11]也發(fā)現(xiàn)了益生菌可以提高蛋鴨血清中SOD和CAT活性、降低MDA含量并顯著提高T-AOC。本試驗(yàn)中，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組雛鴨血清的GSH-Px活性、T-AOC均顯著提高，MDA含量顯著降低，說明枯草芽孢桿菌與地衣芽孢桿菌之間存在協(xié)同作用，且二者均可以發(fā)酵產(chǎn)生中性蛋白酶并提高機(jī)體的抗炎癥能力[12]。本試驗(yàn)通過降低雛鴨血清中MDA含量提高其抗氧化能力。

3.2.3 益生菌制劑對(duì)雛鴨免疫功能的影響。一般通過檢測機(jī)體免疫球蛋白的含量來檢驗(yàn)機(jī)體免疫能力，且免疫球蛋白含量越高則反映機(jī)體免疫能力越強(qiáng)[13]。IgA是黏膜免疫的主要抗體，在非特異性免疫防護(hù)機(jī)制協(xié)助下，其具有減少病原微生物的重要功能[14-16]。袁慧坤等[17]證實(shí)在飼糧中添加復(fù)合菌顯著提高了肉鴨血清中IgG、IgA和IgM含量。機(jī)體血清中IL-2、IL-4、TNF-α和IFN-γ含量的高低可作為機(jī)體免疫功能強(qiáng)弱的指標(biāo)[17]。本試驗(yàn)中，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組雛鴨血清中IgA含量顯著提高，芽孢桿菌產(chǎn)生有廣譜抗菌作用的抗菌肽，可以改善機(jī)體免疫能力[18]，而且IgA是黏膜免疫的主要抗體，說明枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌對(duì)于提高機(jī)體免疫力主要通過在黏膜免疫發(fā)揮作用。添加益生菌組與對(duì)照組相比，雛鴨血清TNF-α和IL-2含量顯著提高，說明益生菌可以增強(qiáng)體內(nèi)細(xì)胞因子的活性，進(jìn)而提高紹興鴨雛鴨機(jī)體免疫力。

3.2.4 益生菌制劑對(duì)雛鴨肝功能的影響。肝臟是動(dòng)物消化、代謝、排泄、血液循環(huán)和解毒的重要器官。谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）通常是衡量肝功能的有效指標(biāo)，當(dāng)毒物或藥物性肝損害時(shí)，轉(zhuǎn)氨酶活力往往顯著增高[19]。Sheng等[20]研究表明，在美洲家鴨飼糧中添加納豆芽孢桿菌可顯著提高血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶和堿性磷酸酶含量。本試驗(yàn)中，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組雛鴨血清中白蛋白（ALB）含量提高。ALB是維持機(jī)體滲透壓平衡的蛋白[21]，其含量升高說明枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌提高了雛鴨的肝功能。其具體機(jī)制有待進(jìn)一步探究。針對(duì)雛鴨其他轉(zhuǎn)氨酶的含量無顯著差異，可能是因?yàn)閷?duì)照組和試驗(yàn)組均飼喂常規(guī)飼料，雛鴨均未受到毒物以及藥物性肝損傷。