張薇薇 蔡明星 莫倩 楊丹

1.貴州中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院，貴州貴陽 550002；2.貴州中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院針灸科，貴州貴陽 550001

壓力性尿失禁是常見的尿失禁類型，好發(fā)于絕經(jīng)期前后的中老年婦女，呈年輕化趨勢，與膀胱尿道功能紊亂及盆底肌肉功能失調(diào)有關(guān)。主要表現(xiàn)為腹壓增加時，尿液會不自主漏出，而尿液是否流出由膀胱逼尿肌收縮和膀胱壁對尿液的張力壓控制[1-2]。研究顯示壓力性尿失禁的發(fā)病率高達(dá)30%[3-4]，對患者的生存質(zhì)量產(chǎn)生嚴(yán)重影響。電針對壓力性尿失禁療效確切[5]，結(jié)合古、今選穴規(guī)律[4-6]，發(fā)現(xiàn)次髎穴對膀胱調(diào)節(jié)效應(yīng)明顯，但目前尚缺乏次髎治療壓力性尿失禁具有穴位特異性的文獻(xiàn)支持。故本研究觀察電針不同類型穴位對壓力性尿失禁模型大鼠尿流動力學(xué)及盆底結(jié)締組織膠原水平表達(dá)的影響，分析不同神經(jīng)節(jié)段穴位對膀胱功能的調(diào)節(jié)效應(yīng)，從而探討次髎穴治療壓力性尿失禁的穴位特異性。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

8 周齡清潔級雌性SD 大鼠50 只，并準(zhǔn)備同一批次大鼠15 只備用，體重180～220 g，由湖南斯萊克景達(dá)實驗動物有限公司提供，許可證號：SCXK（湘）2019-0004，合格證號：No.4300470001583，適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d。本研究通過貴州中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物倫理委員會審查批準(zhǔn)。

1.2 主要儀器、試劑和藥品

BL-420 生物機能信號采集處理系統(tǒng)（成都泰盟科技有限公司）；壓力傳感器（埃德儀器國際貿(mào)易上海有限公司）；Ⅰ型膠原蛋白（type Ⅰcollagen，collagen Ⅰ）（AF7001，Affinity）；CTGF（23936-1-AP，Proteintech）；華佗牌電子針灸儀、0.25 mm×25 mm 無菌針灸針（蘇州醫(yī)療用品廠有限公司）；微量注射泵（保定蘭格恒流泵有限公司）。

1.3 動物分組

將大鼠按隨機數(shù)表法分為正常組、模型組、次髎組、非經(jīng)穴組、三陰交組、每組各10 只。

1.4 模型制備及術(shù)后護(hù)理

正常組以正常飲食喂養(yǎng)，不行任何手術(shù)。其余四組均行雙側(cè)卵巢摘除術(shù)+陰道擴張術(shù)模擬建立壓力性尿失禁大鼠模型[7-9]。術(shù)后72 h 內(nèi)每隔24 h 肌肉注射青霉素鈉20 萬單位抗炎處理。

1.5 干預(yù)措施

1.5.1 穴位定位 參照《實驗針灸學(xué)》[10]進(jìn)行穴位定位。①三陰交：于后肢內(nèi)踝尖直上10 mm 左右，直刺4～5 mm；②非經(jīng)穴：于次髎穴旁開10 mm 處，直刺15 mm；③次髎穴[11]：大鼠只有3 對骶后孔且以第2 骶神經(jīng)調(diào)控膀胱功能為主，故其第2 骶后孔相當(dāng)于人類的中髎和次髎穴。于第2、3 骶骨棘突間隙正中旁開約5 mm，直刺入第2 骶后孔約15 mm，觸及骶2 神經(jīng)根前支。

1.5.2 電針干預(yù) 正常組、模型組不進(jìn)行電針干預(yù)。造模后14 d 行第1 次指標(biāo)檢測，結(jié)束后采用疏密波和2/15 Hz 頻率對次髎組、非經(jīng)穴組、三陰交組相應(yīng)穴位進(jìn)行電針干預(yù)20 min，每日1 次，共2 周。干預(yù)結(jié)束后，行第2 次尿流動力學(xué)檢測，記錄各組相應(yīng)數(shù)據(jù)，以評價電針各穴位對壓力性尿失禁大鼠的影響及差異。

1.6 觀察指標(biāo)及方法

干預(yù)前后，分別對各組大鼠行尿流動力學(xué)檢測，并記錄最大膀胱容量（maximal bladder capacity，MBC）及腹壓漏尿點壓（abdominal leak point pressure，ALPP）；檢測結(jié)束后處死所有大鼠，取恥尾肌和尿道外括約肌行免疫組化檢測，觀察collagen Ⅰ、結(jié)締組織生長因子（connective tissue growth factor，CTGF）表達(dá)水平。

1.6.1 尿流動力學(xué)的測量 各組大鼠14 d 后均采用BL-420 生物機能系統(tǒng)行尿動力學(xué)檢測：20%烏拉坦600 mg/kg 腹腔麻醉后仰臥位固定，消毒后將硬膜外導(dǎo)管經(jīng)尿道插入膀胱內(nèi)，按速度0.1 ml/min 向膀胱內(nèi)灌注美蘭+生理鹽水溶液，第1 滴液體流出時的微量注射泵計數(shù)即為MBC。排空膀胱，灌注量到1/2 MBC時引發(fā)大鼠噴嚏，該膀胱壓為ALPP。

1.6.2 噴嚏實驗 檢測SD 大鼠是否成模與尿流動力學(xué)檢測同時進(jìn)行。灌注1/2 MBC 的美蘭+生理鹽水溶液，利用胡須刺激鼻孔引發(fā)大鼠噴嚏，觀察此時尿道口是否有藍(lán)色液體漏出。若有則為噴嚏試驗陽性，反之為陰性。目前噴嚏實驗被認(rèn)為是檢驗壓力性尿失禁是否成模的金標(biāo)準(zhǔn)[12-13]。

1.6.3 免疫組化檢測 腹腔注射過量麻醉處死大鼠，分別取恥尾肌、膀胱頸尿道括約肌做石蠟切片，使用collagen Ⅰ、CTGF 行免疫組化，所有步驟按說明書操作。實驗重復(fù)3 次。

1.7 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 20.0 軟件對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，比較采用t檢驗，多組之間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD-t 法。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般資料

噴嚏試驗陰性大鼠7 只，造模中因個體麻醉敏感死亡3 只，干預(yù)期間胃脹氣死亡3 只（分別為三陰交組2 只、非經(jīng)穴組1 只），均使用同一批次大鼠補充。

2.2 各組大鼠電針干預(yù)前后ALPP 值比較

干預(yù)前，與正常組比較，模型組ALPP 值降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；模型組、次髎組、三陰交組、非經(jīng)穴組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。干預(yù)后，次髎組、非經(jīng)穴組ALPP 值較干預(yù)前升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；干預(yù)后，與正常組比較，模型組ALPP 值降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；與模型組比較，次髎組、三陰交組、非經(jīng)穴組ALPP 值升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；與次髎組比較，三陰交、非經(jīng)穴組ALPP 值降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 各組大鼠電針干預(yù)前后ALPP 值比較（mmHg，）

表1 各組大鼠電針干預(yù)前后ALPP 值比較（mmHg，）

注 與正常組同期比較，aP＜0.05；與模型組同期比較，bP＜0.05；與次髎組同期比較，cP＜0.05。ALPP：腹壓漏尿點壓。1 mmHg=0.133 kPa

2.3 各組大鼠電針干預(yù)前后MBC 值比較

干預(yù)前，與正常組比較，模型組MBC 值降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；模型組、次髎組、三陰交組、非經(jīng)穴組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。干預(yù)后，正常組、次髎組、三陰交組、非經(jīng)穴組MBC 值均較干預(yù)前升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；干預(yù)后，與正常組比較，模型組MBC 值降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；與模型組比較，次髎組、三陰交組、非經(jīng)穴組MBC 值均升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；與次髎組比較，三陰交、非經(jīng)穴組MBC 值降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 各組大鼠電針干預(yù)前后MBC 值比較（ml，）

表2 各組大鼠電針干預(yù)前后MBC 值比較（ml，）

注 與正常組同期比較，aP＜0.05；與模型組同期比較，bP＜0.05；與次髎組同期比較，cP＜0.05。MBC：最大膀胱容量

2.4 各組大鼠恥尾肌和膀胱頸尿道括約肌中collagenⅠ、CTGF 表達(dá)水平的比較

與正常組比較，模型組collagen Ⅰ、CTGF 的表達(dá)水平顯著降低，差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；與模型組比較，次髎組、三陰交組、非經(jīng)穴組collagen Ⅰ、CTGF 的表達(dá)水平均顯著增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05 或P＜0.01）；與次髎組比較，三陰交組、非經(jīng)穴組collagen Ⅰ、CTGF 的表達(dá)水平降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見圖1～2。

圖1 各組大鼠恥尾肌及膀胱頸尿道括約肌組織中collagen Ⅰ的表達(dá)水平（LDP 法，400×）

圖2 各組大鼠恥尾肌及膀胱頸尿道括約肌組織中CTGF 的表達(dá)水平（LDP 法，400×）

3 討論

壓力性尿失禁在祖國醫(yī)學(xué)中屬于“膀胱咳”范疇，主要病機為膀胱氣化失司。西醫(yī)認(rèn)為壓力性尿失禁屬于盆底障礙性疾病，主要機制包括盆底肌肉損害與支配盆底肌的神經(jīng)發(fā)生失神經(jīng)損害[14-19]。實驗發(fā)現(xiàn)[15]，結(jié)締組織的筋膜和韌帶中，collagen Ⅰ對支持結(jié)構(gòu)提供了支撐效果和高抗張強度。CTGF 中富含半胱氨酸，對膠原分泌及成纖維細(xì)胞增殖起到刺激效果，也對機體創(chuàng)傷提供修復(fù)作用[20-21]。從神經(jīng)節(jié)段來看，三陰交屬于脛神經(jīng)節(jié)段效應(yīng)點，其運動神經(jīng)由L5～S1支配，中醫(yī)學(xué)上又歸屬足太陰脾經(jīng)，有通調(diào)水道之效，對泌尿系統(tǒng)疾病有調(diào)節(jié)效果；次髎穴的沖動傳入信號投射在S1～S3節(jié)段，深處有S2～S3神經(jīng)根前支，屬于骶神經(jīng)節(jié)段效應(yīng)點，歸屬足太陽膀胱經(jīng)，針刺次髎可促進(jìn)膀胱氣化，調(diào)節(jié)其開闔頻度；非經(jīng)穴與次髎屬同一神經(jīng)節(jié)段但不屬經(jīng)脈。S2～S4神經(jīng)對排尿功能有極關(guān)鍵的影響，陰部神經(jīng)由次髎深處的S2神經(jīng)根前支發(fā)出，受尿道外括約肌支配。刺激膀胱神經(jīng)節(jié)段的腧穴，則會影響支配膀胱的神經(jīng)纖維電活動，引出一系列的膀胱反射。近年研究[22-26]表明電針次髎穴，刺激陰部神經(jīng)，達(dá)到誘發(fā)盆底肌收縮，提高尿道外括約肌肌力的效果。

本研究結(jié)果顯示，電針刺激“次髎”“三陰交”“非經(jīng)穴”對壓力性尿失禁均有療效。但電針“次髎”對提升膀胱尿道壓力、修復(fù)盆底組織膠原纖維障礙方面效果更佳。干預(yù)后次髎組各項指標(biāo)與其他各組比較均明顯升高，顯示電針次髎穴優(yōu)于同神經(jīng)節(jié)段非經(jīng)穴和異神經(jīng)節(jié)段三陰交穴，提示次髎對壓力性尿失禁的改善效果具有相對特異性。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，電針次髎穴對調(diào)節(jié)膀胱過度活動療效確切[27]。本研究設(shè)置次髎組與其旁開10 mm 處的非經(jīng)穴組進(jìn)行對照，明確深刺次髎是針尖觸及骶神經(jīng)前支，證實這種特異效應(yīng)與次髎穴位相關(guān)，針刺次髎穴相同神經(jīng)節(jié)段分布區(qū)域內(nèi)非穴點難以產(chǎn)生膀胱抑制效應(yīng)，這與前期研究結(jié)論一致[28]。正常組MBC 也出現(xiàn)差異，原因或是隨著大鼠周齡增加，其膀胱容量亦逐漸增大。

綜上所述，電針次髎穴可通過刺激骶神經(jīng)，從而調(diào)節(jié)膀胱、尿道括約肌及盆底等骶神經(jīng)支配的效應(yīng)器官功能狀態(tài)，起到改善壓力性尿失禁癥狀、修復(fù)盆底組織損傷的效果，其效應(yīng)具有穴位特異性。