閆林霞，徐 芳，姚李香，闞雪梅，陳智勤

（1. 云南省德宏州人民醫(yī)院產(chǎn)科，云南 德宏 678400 ；2. 上海市第一婦嬰保健院生殖中心，上海 200125）

德宏傣族景頗族自治州（德宏州）位于我國(guó)云南省西南部，與緬甸接壤，為少數(shù)民族聚居區(qū)。該地區(qū)世居傣族、景頗族、德昂族、阿昌族等少數(shù)民族，經(jīng)濟(jì)發(fā)展相對(duì)滯后，新生兒異常的檢出率低于內(nèi)地地區(qū)。耳聾是一種常見(jiàn)的出生缺陷。世界衛(wèi)生組織（World Health Organization，WHO）最新的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，全世界的聽(tīng)力障礙者約有3.6 億例，約占世界人口總數(shù)的5%。先天性耳聾的發(fā)病率較高，全球每年新增的先天性耳聾兒約有3 萬(wàn)例。在這些先天性耳聾兒中，由基因缺陷造成耳聾的患兒約占60%。綜合征性耳聾是一類(lèi)復(fù)雜的先天性耳聾，其遺傳模式主要為常染色體顯性遺傳、常染色體隱性遺傳、性連鎖遺傳和線(xiàn)粒體遺傳[1-2]。為降低德宏地區(qū)先天性耳聾兒的出生率，本文選擇該地區(qū)的5485 例孕婦作為研究對(duì)象，采用耳聾基因芯片技術(shù)對(duì)其所攜帶的常見(jiàn)耳聾突變基因進(jìn)行檢測(cè)與篩查，并作出風(fēng)險(xiǎn)分析。

1 材料和方法

1.1 一般資料

本文的研究對(duì)象是2018 年1 月至2021 年4月在云南省德宏州人民醫(yī)院進(jìn)行常規(guī)產(chǎn)檢的5485例孕婦。其納入標(biāo)準(zhǔn)是：無(wú)耳聾家族史；處于妊娠早期；其本人及其家屬對(duì)耳聾相關(guān)基因檢測(cè)的知識(shí)均已了解，并簽署了知情同意書(shū)。這些孕婦的年齡為18 ～45 歲。

1.2 方法

采集5485 例孕婦的外周靜脈血5 mL，將血液標(biāo)本置于乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝管中，送檢至第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)“北京優(yōu)迅醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室有限公司”完成二代測(cè)序工作。檢測(cè)方法為高通量測(cè)序法，檢測(cè)儀器為基因測(cè)序儀BioelectronSeq 4000（由東莞博奧木華基因科技有限公司生產(chǎn)），共檢測(cè)18 個(gè)基因的95 個(gè)位點(diǎn)。18 個(gè)基因分別是GJB2 基因、SLC26A4 基因、GJB3 基因、MTRNR1 基因、MT-CO1 基因、MT-TL1 基因、MTTS1 基因、MT-TH 基因、DSPP 基因、ADGRV1基 因、DFNA5 基 因、TMC1 基 因、MYO7A 基因、TECTA 基 因、DIABLO 基 因、COCH 基 因、MYO15A 基因、PRPS1 基因。DNA 的提取方法是：采用MagPure Tissue/Blood DNA LQ kit（Cat.no.D6312-01,D6312-02，Magen） 系 統(tǒng) 對(duì)DNA進(jìn)行提取，用多重PCR 技術(shù)以引物和多重聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）緩沖試劑對(duì)18 個(gè)基因的95 個(gè)已知致病位點(diǎn)進(jìn)行擴(kuò)增，同時(shí)連接測(cè)序接頭，一次性完成文庫(kù)構(gòu)建。

1.3 檢測(cè)流程

受檢者咨詢(xún)→知情同意→樣本采集→樣本寄送→樣本接收與信息錄入→DNA 提取→實(shí)驗(yàn)檢測(cè)→數(shù)據(jù)分析→報(bào)告解讀→出具報(bào)告→遺傳咨詢(xún)

1.4 檢測(cè)意義

通過(guò)進(jìn)行耳聾基因檢測(cè)，可明確孕婦是否攜帶有耳聾基因。若孕婦攜帶有耳聾基因，需根據(jù)其耳聾基因的類(lèi)型決定是否對(duì)其配偶進(jìn)行耳聾基因篩查。若對(duì)其配偶進(jìn)行耳聾基因篩查的結(jié)果為（-），則不需要對(duì)其進(jìn)行干預(yù)；若對(duì)其配偶進(jìn)行耳聾基因篩查的結(jié)果為（+），則其新生兒有存在先天性耳聾的可能，需對(duì)其進(jìn)行相應(yīng)的處理（包括產(chǎn)前診斷、羊水穿刺、新生兒采血驗(yàn)證、遺傳咨詢(xún)等）。

1.5 觀(guān)察指標(biāo)

觀(guān)察對(duì)5485 例孕婦進(jìn)行耳聾基因檢測(cè)的結(jié)果。

2 結(jié)果

對(duì)本研究中5485 例孕婦進(jìn)行耳聾基因檢測(cè)的結(jié)果顯示，其中有232 例孕婦攜帶有耳聾突變基因，其耳聾突變基因的總攜帶率為4.23%。在232 例攜帶有耳聾突變基因的孕婦中，有183 例孕婦為單基因雜合突變攜帶者，有49 例孕婦為復(fù)合雜合或均質(zhì)突變基因攜帶者。在183 例單基因雜合突變攜帶者中，GJB2 基因攜帶者占1.422%、GJB3 基因攜帶者占0.018%、MT-CO1 基因攜帶者占0.492%、MT-RNR1 基因攜帶者占0.328%、MT-TL1 基因攜帶者占0.073%、SLC26A4 基因攜帶者占1.896%。在232 例攜帶有耳聾突變基因的孕婦中，存在c.235delC 位點(diǎn)突變的孕婦最多，有54 例（占0.985%），為攜帶最多的雜合突變；其次為存在m.7444G ＞A 位點(diǎn)突變的孕婦，有26例（占0.474%），均為均質(zhì)（純合）突變；SLC26A4基因中IVS16-6G ＞A（雜合）及c.2168A ＞G（雜合）位點(diǎn)突變的孕婦有48 例（占0.875%），為攜帶較多的雜合突變。本研究中孕婦攜帶耳聾突變基因的情況詳見(jiàn)表1，其先天性耳聾基因檢測(cè)位點(diǎn)詳見(jiàn)表2。

表1 孕婦攜帶耳聾突變基因的情況

3 討論

耳聾是人類(lèi)最常見(jiàn)的感覺(jué)神經(jīng)缺陷，也是導(dǎo)致語(yǔ)言交流障礙的致殘性疾病之一。先天性耳聾是我國(guó)的第二大出生缺陷。大部分先天性耳聾為重度、極重度感音神經(jīng)性耳聾[1-2]。對(duì)先天性耳聾患兒的病情進(jìn)行早期診斷、早期干預(yù)和早期治療至關(guān)重要。本研究的入組對(duì)象為妊娠早期的健康孕婦，其年齡為18 ～45 歲。本研究結(jié)果能夠反映德宏地區(qū)孕婦攜帶耳聾基因的流行病學(xué)現(xiàn)狀。GJB2 基因是我國(guó)最常見(jiàn)的非綜合征性耳聾致病基因。該基因突變可導(dǎo)致細(xì)胞外的K+回流受阻，影響耳蝸毛細(xì)胞的電生理活動(dòng)，進(jìn)而可引起感音神經(jīng)性耳聾[3-5]。其中235delC 位點(diǎn)突變是GJB2 基因常見(jiàn)的突變形式[2]。本研究的結(jié)果顯示，5485例孕婦GJB2 基因的攜帶率最高，達(dá)到1.422%（78/5485），其中c.235delC（雜合）位點(diǎn)突變?cè)袐D最多（有54 例，占0.985%）。這一結(jié)果符合相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道的235delC 位點(diǎn)是我國(guó)最常見(jiàn)耳聾突變基因的觀(guān)點(diǎn)[6-8]。GJB3 基因是我國(guó)科學(xué)家夏家輝院士在1998 年克隆的第一個(gè)本土基因[8]。GJB3 基因突變可引起常染色體顯性或隱性遺傳性綜合征型耳聾。c.423delATT（雜合）位點(diǎn)突變被認(rèn)為與顯性遺傳高頻聽(tīng)力下降有關(guān)。本研究的結(jié)果顯示，SLC26A4 基因中存在多個(gè)位點(diǎn)雜合突變的孕婦有104 例，占1.896%（104/5485）。SLC26A4基因又被稱(chēng)為PDS 基因，是我國(guó)第二大致聾基因[9]。SLC26A4 基因的IVS7.2 A ＞G 突變是引起國(guó)人大前庭水管綜合征的熱點(diǎn)突變。SLC26A4 基因突變表現(xiàn)為前庭導(dǎo)水管擴(kuò)大及感音神經(jīng)性耳聾，這一疾病被稱(chēng)為Pendred 綜合征。SLC26A4 基因是常染色體隱性遺傳耳聾4 型伴前庭導(dǎo)水管擴(kuò)大、Pendred 綜合征的致病基因，其遺傳方式為常染色體隱性遺傳。若受檢者為非耳聾患者，則其很可能是表型正常SLC26A4 基因的攜帶者；若受檢者為耳聾患者，建議其應(yīng)進(jìn)行SLC26A4 基因及相關(guān)基因的全外顯子基因檢測(cè)，同時(shí)建議受檢者的配偶及其新生兒進(jìn)行SLC26A4 基因的全外顯子基因檢測(cè)，通過(guò)遺傳咨詢(xún)及相應(yīng)的干預(yù)避免其子代發(fā)生先天性耳聾。

線(xiàn)粒體DNA12SrRNA 被認(rèn)為是與氨基糖苷類(lèi)抗生素致聾密切相關(guān)的基因，國(guó)內(nèi)常見(jiàn)的突變位點(diǎn)為1555A ＞G 位點(diǎn)。線(xiàn)粒體上的1555 A ＞G 位點(diǎn)突變與氨基糖苷類(lèi)抗生素所導(dǎo)致的聽(tīng)力下降密切相關(guān)。本研究的結(jié)果顯示，攜帶有線(xiàn)粒體12SrRNA 基因突變的孕婦有49 例，其中1494C ＞T 突 變 的 孕 婦 有1 例（ 為 異 質(zhì) 突變），1555A ＞G 突 變 的 孕 婦 有17 例（ 其 中有16 例孕婦為均質(zhì)突變，1 例孕婦為同質(zhì)突變），7444G ＞A 突變的孕婦有27 例（其中有26 例孕婦為均質(zhì)突變，1 例孕婦為異質(zhì)突變），3243A ＞G 異質(zhì)突變的孕婦有4 例。線(xiàn)粒體基因?qū)儆谀赶颠z傳基因，與感音神經(jīng)性聽(tīng)力損失有關(guān)，下一代的線(xiàn)粒體基因來(lái)自于母體。究其原因主要是，女性在受精時(shí)，精子的細(xì)胞核進(jìn)入卵子，與卵子的細(xì)胞核融合，精子中的線(xiàn)粒體會(huì)被卵子中的泛素水解酶水解。因此，下一代的線(xiàn)粒體全部來(lái)自卵子。臨床上在使用致耳毒性藥物時(shí)應(yīng)慎重，最好在用藥前對(duì)女性患者進(jìn)行線(xiàn)粒體12SrRNA 突變基因檢測(cè)[2]。建議12SrRNA 突變基因攜帶者及其所有母系家屬慎用或禁用致耳毒性藥物，并建議受檢者的母系家族成員進(jìn)行12SrRNA 突變基因檢測(cè)。但線(xiàn)粒體基因變異不應(yīng)作為遺傳性疾病產(chǎn)前診斷的指征。

先天性耳聾是典型的單基因病，遺傳異質(zhì)性強(qiáng)，由生殖細(xì)胞或受精卵的單個(gè)基因突變所致，其遺傳模式遵循孟德?tīng)栠z傳規(guī)律。目前已明確的致聾基因多達(dá)121 個(gè)（2019 年8 月22 日更新的數(shù)據(jù)）。2012 年我國(guó)原衛(wèi)生部發(fā)布的《中國(guó)出生缺陷防治報(bào)告》顯示，2008 年～2010 年我國(guó)先天性耳聾的發(fā)生率分別為1.99‰、2.15‰和2.19‰，其中50% ～60% 的先天性耳聾患兒是由遺傳因素導(dǎo)致的[10]。在目前的臨床檢測(cè)中，常規(guī)檢測(cè)的耳聾基因是GJB2 基因、SLC26A4 基因和線(xiàn)粒體12S rRNA 基因（主要是因?yàn)檫@三個(gè)耳聾基因的致病性變異在普通人群中的發(fā)生率最高）。若孕婦本人為耳聾患者或有明確的耳聾家族史，建議對(duì)其進(jìn)行全面的聽(tīng)力診斷及耳聾基因檢測(cè)[10]。在對(duì)孕婦進(jìn)行遺傳咨詢(xún)時(shí)，應(yīng)盡可能將其基因檢測(cè)結(jié)果、聽(tīng)力篩查結(jié)果、有無(wú)耳聾家族史等情況相結(jié)合進(jìn)行綜合分析，以獲得更多信息綜合指導(dǎo)遺傳咨詢(xún)。

綜上所述，德宏地區(qū)孕婦耳聾突變基因的攜帶率處于中等水平。采用耳聾基因高通量測(cè)序法能篩查出孕婦中的耳聾突變基因攜帶者。對(duì)孕婦進(jìn)行產(chǎn)前耳聾知識(shí)宣教、遺傳咨詢(xún)、生育指導(dǎo)及耳聾基因篩查，能降低其先天性耳聾兒的出生率。