連悅?cè)?，甘慧，孟志云，顧若蘭，朱曉霞，吳卓娜，楊雯婕，康明，竇桂芳*

（1.河北大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，河北 保定 071000；2.軍事醫(yī)學(xué)研究院輻射醫(yī)學(xué)研究所，北京 100850；3.浙江藍(lán)美科技股份有限公司，浙江 紹興 312000）

藍(lán)莓學(xué)名越橘，是一種經(jīng)濟(jì)價(jià)值較高且營(yíng)養(yǎng)豐富的水果。藍(lán)莓漿果含有碳水化合物、蛋白質(zhì)、多種維生素及花色苷，素有“漿果之王”的稱號(hào)[1]。藍(lán)莓花色苷具有改善慢性疾病[2-3]、抗氧化[4]、抗菌[5]、減輕炎癥[2]、保護(hù)視力[6]、抗癌[7]等生理活性，是藍(lán)莓的主要功效成分?；ㄉ者€可作為一種天然抗氧化劑，有效應(yīng)對(duì)機(jī)體的氧化損傷，從而改善機(jī)體微循環(huán)[1]?；ㄉ帐腔ㄇ嗨嘏c糖以糖苷鍵相連的化合物，也是動(dòng)植物體中花青素的主要存在形式?；ㄉ找曰ㄇ嗨貫檐赵?，其基本結(jié)構(gòu)單元為2-苯基苯并吡喃型陽(yáng)離子，它包含兩個(gè)苯環(huán)和一個(gè)含氧六元環(huán)[8]。普遍存在于動(dòng)植物中的6種花青素為矢車菊素、飛燕草素、芍藥素、矮牽牛素、錦葵素及芍藥素[9]。藍(lán)莓中主要包含以矢車菊素、飛燕草素、芍藥素、矮牽牛素及錦葵素為基礎(chǔ)的苷元及糖苷。葡萄糖、阿拉伯糖、半乳糖、木糖、蕓香糖、鼠李糖等糖配基的主要結(jié)合位點(diǎn)是苷元的3，5，7號(hào)位，連接形式有單糖、二糖、三糖[10]。

目前藍(lán)莓花色苷常用檢測(cè)方法有紫外光譜法、液相色譜法、液相質(zhì)譜聯(lián)用法、紅外光譜法等[11-12]。紫外光譜法是檢測(cè)藍(lán)莓中花青素和花色苷含量的常用方法，其定量方便，但無(wú)法鑒定花青素及花色苷的結(jié)構(gòu)種類，只能檢測(cè)總花色苷含量。近年來(lái)，液相色譜電噴霧離子源與三重四極桿質(zhì)譜的聯(lián)用，已成功應(yīng)用于多種水果化合物成分的分離定量[13-14]。本研究針對(duì)我國(guó)自主研發(fā)的國(guó)家級(jí)林木良種“藍(lán)美1號(hào)”提取的藍(lán)莓粉（blueberry No.1 powder，B1P），測(cè)定 B1P 的含量，并探討其抗氧化活性。本試驗(yàn)先采用紫外光譜法對(duì)B1P中的總花色苷含量進(jìn)行測(cè)定。再利用超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（ultra performance liquid chromatography-mass spectrum，UPLC-MS/MS）技術(shù)，建立一種同時(shí)檢測(cè)多種藍(lán)莓花色苷單體的定量方法，選取多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式準(zhǔn)確定量，從而為鑒定不同品種藍(lán)莓中花色苷的結(jié)構(gòu)差異，快速獲取藍(lán)莓提取物中花色苷種類及結(jié)構(gòu)的信息提供理論支持。最后利用在氧化還原反應(yīng)中能產(chǎn)生特殊吸收峰的物質(zhì)，如1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）、2，2’-氨基-二（3-乙基-苯并噻唑啉磺酸-6）銨鹽[2，2’-azinobis（3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid）diammonium salt，ABTS]、羥基自由基（·OH）、超氧陰離子及鐵離子，考察B1P中花色苷的抗氧化活性，研究“藍(lán)美1號(hào)”藍(lán)莓粉的生物活性。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

“藍(lán)美1號(hào)”藍(lán)莓粉（批號(hào)：SLMF1201）：浙江藍(lán)美科技股份有限公司；乙腈、甲醇、甲酸（均為色譜純）：美國(guó)Thermo Fisher公司；抗壞血酸、過硫酸鉀（均為分析純）：國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；2，4，6-三吡啶基三嗪[2，4，6-tri（2-pyridyl）-striazine，TPTZ]（純度＞99%）：上海阿拉丁生化科技股份有限公司；氯化硝基四唑蘭（nitroblue tetrazolium salt，NBT）（純度＞98%）、還原型輔酶-鈉（dihydro nicotine amidadenine dinucleotide，NADH-2Na）（純度＞98%）、鄰二氮菲（純度＞99%）、吩嗪硫酸甲酯（phenazine metho sulfate，PMS）（純度＞98%）：北京索萊寶科技有限公司；ABTS、DPPH：美國(guó)GLPBIO公司；標(biāo)準(zhǔn)品矢車菊素-3-O-葡萄糖苷、飛燕草素-3-O-葡萄糖苷、錦葵色素-3-O-葡糖苷、矮牽牛素-3-O-葡萄糖苷、芍藥素-3-O-葡萄糖苷：法國(guó)Extrasynthese公司；矮牽牛素-3-阿拉伯糖苷、飛燕草素-3-O-阿拉伯糖苷、錦葵色素-3-O-阿拉伯糖苷標(biāo)準(zhǔn)品：上海甄準(zhǔn)生物科技有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

ACQUITY UPLC I-Class超高效液相色譜儀、ACQUITY Xevo TQ-S三重四極桿質(zhì)譜儀、ACQUITY UPLC BEH C18色譜柱：美國(guó)waters公司；UV-2600紫外分光光度計(jì)：日本SHIMADZU公司；PB-10pH計(jì)：德國(guó)Sartorius公司；Spectra MAX190酶標(biāo)儀：美國(guó)Molecular Devices公司；3K15離心機(jī)：德國(guó)Sigma公司；ME235S電子分析天平：德國(guó)Sartorius公司；GHP-9080隔水式恒溫培養(yǎng)箱：昆山一恒儀器有限公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 pH示差法測(cè)定總花色苷含量

參照Wang等[15]的方法，稍作修改。首先將B1P用含有0.1%鹽酸的甲醇溶液溶解并配制成1 mg/mL的溶液，采用紫外分光光度計(jì)對(duì)B1P進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描（200 nm～1 200 nm），確定最大吸收波長(zhǎng)為518 nm。再將B1P溶液用pH 1.0和pH 4.5的緩沖液分別稀釋100倍，37℃平衡60min后，用紫外分光光度計(jì)在518nm處測(cè)定吸光度，利用700 nm處吸光度進(jìn)行校正。

總花色苷含量計(jì)算公式如下。

式中：ε為摩爾消光系數(shù)，26 900 L/（mol·cm）；L為光程，1 cm；MW為矢車菊素花色苷相對(duì)分子質(zhì)量，449.2 g/mol；DF 為稀釋倍數(shù)；V 為總?cè)∫后w積，L；Mt為樣品質(zhì)量，g。

1.3.2 基于UPLC-MS/MS測(cè)定B1P中8種花色苷含量

1.3.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

用含有0.1%鹽酸的甲醇溶液將8種藍(lán)莓花色苷標(biāo)準(zhǔn)品[芍藥素葡萄糖苷（peonidin-3-O-glucoside，Pn-3-G）、飛燕草素葡萄糖苷（delphindin-3-O-glucoside，Dp-3-G）、矮牽牛素葡萄糖苷（petunidin-3-O-glucoside，Pt-3-G）、矢車菊素葡萄糖苷（cyanidin-3-O-glucoside，Cy-3-G）、錦葵素葡萄糖苷（malvidin-3-O-glucoside，Mv-3-G）、錦葵素阿拉伯糖苷（malvidin-3-O-arabinoside，Mv-3-A）、矮牽牛阿拉伯糖苷（petunidin-3-O-arabinoside，Pt-3-A）和飛燕草阿拉伯糖苷（delphindin-3-o-arabinoside，Dp-3-A）]，配制成濃度為1 mg/mL的儲(chǔ)備液，再將8種花色苷的儲(chǔ)備液用0.1%鹽酸的甲醇溶液稀釋成濃度為 0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、50.0 ng/mL的工作溶液。在14 000 r/min，4℃條件下離心15 min，吸取200 μL上清液進(jìn)樣檢測(cè)。

1.3.2.2 色譜條件

色譜條件：色譜柱為ACQUITY UPLC BEH C18（4.6 mm×50 mm，1.7 μm）；流動(dòng)相A為0.1%甲酸水溶液，流動(dòng)相B為 0.1%甲酸乙腈；進(jìn)樣量1 μL；流速0.3 mL/min；柱溫45℃；線性洗脫梯度為0～0.5 min（5%B）、0.5 min～2.5 min（5%～90%B）、2.5 min～4 min（90%～5%B）。

質(zhì)譜條件：電噴霧離子源；掃描模式為多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（multiple reaction monitoring，MRM）；正離子檢測(cè)模式；錐孔電壓3.00 kV；去溶劑溫度350℃；去溶劑氣體650 L/h；噴霧氣壓力6.0 bar（1 bar=100kPa）；毛細(xì)管電壓3.00 kV；碰撞能量20 eV。

首先利用質(zhì)譜全波長(zhǎng)掃描（m/z100～2 000）B1P，確定幾種含量較高的化合物，與花色苷標(biāo)準(zhǔn)品以及文獻(xiàn)[12]結(jié)果進(jìn)行比對(duì)，得到含量較高的8種花色苷，8個(gè)化合物及碎片信息如表1所示。

表1 8種花色苷的典型質(zhì)譜參數(shù)Table 1 Specific mass spectrometric parameters of 8 anthocyanins

1.3.3 抗氧化活性的測(cè)定

1.3.3.1 樣品的配制

將B1P和抗壞血酸（vitamin C，VC）分別用無(wú)水乙醇配制成 10、20、40、50、60、80、100 μg/mL 的樣品溶液。VC作為陽(yáng)性對(duì)照。試驗(yàn)涉及的樣品及試劑均現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.3.3.2 ABTS+·清除率的測(cè)定

7 mmol/L ABTS溶液與4.95 mmol/L過硫酸鉀溶液等體積混合，避光反應(yīng)14 h，得ABTS+溶液備用[4]。用磷酸鹽緩沖液（phosphate buffer saline，PBS）稀釋 ABTS+溶液20倍，使其在734 nm處吸光度為0.70±0.02。20 μL樣品與200 μLABTS+溶液加至96微孔板。酶標(biāo)儀在734 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，記為A1。用20 μL無(wú)水乙醇代替樣品在734 nm處測(cè)吸光度，記為A0。用PBS代替ABTS+溶液測(cè)定吸光度，記為A2。ABTS+·清除率計(jì)算公式如下。

1.3.3.3 DPPH·清除率的測(cè)定

參照Z(yǔ)hou等[4]的方法并稍作修改，將100 μL樣品與100 μL 0.5 mmol/L DPPH溶液加至96微孔板。在37℃恒溫培養(yǎng)箱中，避光孵育30 min。酶標(biāo)儀在517 nm處測(cè)吸光度，記為A1。以無(wú)水乙醇作對(duì)照，測(cè)得吸光度記為A0；用無(wú)水乙醇代替DPPH溶液，測(cè)得吸光度記為A2。DPPH·清除率計(jì)算公式如下。

1.3.3.4 羥基自由基（·OH）清除率的測(cè)定

96微孔板中加入40μL樣品、40μL1.864mmol/L的鄰二氮菲溶液，80 μL PBS（pH 7.4），40 μL 1.864 mmol/L的FeSO4·7H2O 溶液、40 μL 0.03% H2O2，混勻后避光37℃孵育60 min，酶標(biāo)儀在536 nm處測(cè)定吸光度記為As，水作對(duì)照吸光度記為An，水代替樣品和H2O2的吸光度記為Ab[16]。羥基自由基清除率計(jì)算公式如下。

1.3.3.5 鐵離子還原能力（ferric ion reducing antioxidant power，F(xiàn)RAP）測(cè)定

FRAP工作液為10 mmol/L TPTZ（40 mmol/L鹽酸溶解）溶液：20 mmol/L FeCl3·6H2O∶0.3 mol/L的醋酸鹽緩沖溶液以體積比為1∶1∶10混勻[17]。將FeSO4·7H2O稀釋成 1.50、1.20、0.90、0.60、0.30、0.15 mmol/L 梯度溶液作為標(biāo)準(zhǔn)品[18]。20 μL FeSO4·7H2O和樣品溶液、180 μL FRAP工作液依次加至96微孔板。37℃放置10 min后，用酶標(biāo)儀在593 nm處測(cè)得吸光度為A。以FeSO4·7H2O為標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，樣品的總抗氧化能力以FRAP值表示。

1.3.3.6 超氧陰離子自由基清除率的測(cè)定

用0.1 mmol/L的磷酸鹽緩沖液分別將NBT、NADH-2Na、PMS溶解并配制成 120 μmol/L 的 PMS溶液、300 μmol/L 的 NBT 溶液、936 μmol/L 的 NADH-2Na溶液[4]。將樣品與上述溶液按照體積比1∶1∶2∶2加至96微孔板，混勻，25℃培養(yǎng)5 min，用酶標(biāo)儀在560 nm處測(cè)得吸光度為A1。用乙醇代替樣品測(cè)得吸光度為A0，用250 μL PBS緩沖液代替所加試劑測(cè)得吸光度為A2。超氧陰離子自由基清除率計(jì)算公式如下。

1.4 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析

所有試驗(yàn)測(cè)定均重復(fù)3次，96微孔板平行設(shè)置3個(gè)孔，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。采用Excel進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)計(jì)算，采用GraphPad Prism 8作圖，采用UNIFI Ver.1.6.1軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)分析，顯著性差異水平定為p＜0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 B1P中總花色苷含量的測(cè)定

花色苷在pH1.0緩沖溶液中呈紫紅色，而在pH4.5的緩沖液中穩(wěn)定后為無(wú)色液體。這與文獻(xiàn)[19]報(bào)道相符，即不同pH值條件下花色苷的結(jié)構(gòu)不同，從而導(dǎo)致紫外吸收波長(zhǎng)改變。pH1.0時(shí)，花色苷為穩(wěn)定的黃鹽陽(yáng)離子，紫外吸收較強(qiáng)。pH4.5時(shí)，花色苷轉(zhuǎn)化為甲醇假堿，顏色消失[19]。pH示差法利用紫外光吸收性質(zhì)對(duì)花色苷進(jìn)行定量檢測(cè)，得到3批B1P總花色苷含量平均為（443.08±16.40）mg/g。此種B1P的總花色苷含量達(dá)到了40%以上，提取純度高，質(zhì)量穩(wěn)定，為其后的結(jié)構(gòu)分析和體外抗氧化活性試驗(yàn)提供了物質(zhì)基礎(chǔ)。

2.2 基于UPLC-MS/MS測(cè)定B1P中8種花色苷含量

本課題組前期分析了B1P中主要成分，根據(jù)目前國(guó)內(nèi)外已知花色苷的種類及離子對(duì)，并將分析結(jié)果與花色苷標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行比對(duì)，確認(rèn)了B1P中含量較高的8種花色苷?；赨PLC-MS/MS建立了B1P中8種花色苷的檢測(cè)方法，此方法得到的線性范圍為0.5 ng/mL～50.0ng/mL，采用最小二乘法進(jìn)行回歸分析，得到的R2均大于0.990 0，線性良好，各花色苷的回歸方程及含量見表2。相對(duì)含量按照8種花色苷之和為100%進(jìn)行計(jì)算。

表2 8種花色苷的標(biāo)準(zhǔn)曲線與含量Table 2 Standard curves and contents of 8 anthocyanins

由表2可知，Dp-3-G 含量為（80.90±0.30）mg/g，占8種花色苷之和的23.13%。其次是Mv-3-G，含量為（73.13±0.05）mg/g，相對(duì)含量為20.91%。以花色苷苷元?jiǎng)澐?，花色苷?biāo)準(zhǔn)品含量總和由高到低為Mv（36.25%）＞Dp（34.11%）＞Pt（23.2%）＞Cy（4.71%）＞Pn（1.73%）。該液質(zhì)聯(lián)用方法不僅能夠在短時(shí)間內(nèi)同步定量8種花色苷，且僅需1 μL進(jìn)樣體積降低定量下限至0.5 ng/mL，很大程度上提高了檢測(cè)效率。8種花色苷的總含量（349.77±0.94）mg/g與總花色苷檢測(cè)結(jié)果（443.08±16.40）mg/g相比偏低，表明此種B1P中的花色苷種類不止這8種。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，在所含花色苷種類方面，黑醋栗、美國(guó)蔓越莓等其他漿果主要含以矢車菊素為苷元的糖苷，與之相比，B1P 中含有以 Mv、Dp、Pt、Cy、Pn為苷元的糖苷，種類更加豐富，并與歐洲越橘、高叢藍(lán)莓成分相似。B1P中以矮牽牛素為苷元的糖苷占總含量的23.2%，與歐洲越橘（3.3%）和高叢藍(lán)莓（7.9%）相比，相對(duì)含量更高[20]。

2.3 B1P的體外抗氧化活性分析

2.3.1 ABTS+·清除率的測(cè)定

B1P與陽(yáng)性對(duì)照VC的ABTS+·清除率如圖1所示。

圖1 不同濃度樣品對(duì)ABTS+·清除率的影響Fig.1 Effects of different concentrations of ABTS free radical scavenging

根據(jù)自由基被清除一半時(shí)所需樣品濃度計(jì)算得到兩者半數(shù)抑制濃度（IC50），并作比較，VC的IC50為（52.69±2.46）μg/mL，高于B1P的IC50（37.81±4.30）μg/mL，即B1P的ABTS+·清除率優(yōu)于VC。由圖1可知，樣品濃度在10μg/mL～60 μg/mL，B1P 的 ABTS+·清除率優(yōu)于 VC且差異高度顯著（p＜0.001）；當(dāng)樣品濃度高于 60 μg/mL時(shí)，清除率趨于飽和，此時(shí)二者的ABTS+·清除率均較強(qiáng)。

2.3.2 DPPH自由基清除率的測(cè)定

DPPH自由基清除率見圖2。

圖2 不同濃度樣品對(duì)DPPH自由基清除率的影響Fig.2 Effects of different concentrations of DPPH free radical scavenging

由圖2可知，VC和B1P二者清除率與樣品濃度呈明顯的劑量依賴關(guān)系。經(jīng)計(jì)算得到B1P對(duì)0.5 mmol/L DPPH 自由基的IC50為（45.51±1.13）μg/mL，VC的IC50為（21.21±0.26）μg/mL。經(jīng)分析得兩者濃度在10 μg/mL～80 μg/mL時(shí)，VC的DPPH自由基清除率顯著優(yōu)于B1P；當(dāng)兩者濃度為100 μg/mL時(shí)，B1P和VC對(duì)DPPH自由基清除率差異不顯著，清除能力均達(dá)到飽和狀態(tài)。樣品濃度在 10 μg/mL～80 μg/mL，B1P 的 DPPH 自由基清除率呈濃度依賴性，但較VC稍弱。B1P對(duì)ABTS+·清除率更高可能是因?yàn)榭寡趸瘎┰贒PPH體系反應(yīng)中將溶解氧轉(zhuǎn)化為氧氣，而在ABTS反應(yīng)體系中直接與氧氣作用，且ABTS法適用于考察親水性抗氧化劑，而DPPH法更適用于考察疏水抗氧化劑[21]。

2.3.3 羥基自由基清除率的測(cè)定

根據(jù)董晨陽(yáng)等[22]的方法，利用芬頓體系產(chǎn)生·OH，當(dāng)·OH被清除后隨著體系中Fe2+的濃度升高，吸光度也隨之上升。羥基自由基清除率的測(cè)定見圖3。

圖3 不同濃度樣品對(duì)·OH清除率的影響Fig.3 Effects of different concentrations of OH free radical scavenging

由圖3可知，B1P和VC在濃度小于50 μg/mL時(shí)，對(duì)·OH清除率均較低且差異不顯著；但在濃度為50 μg/mL時(shí)，B1P對(duì)·OH的清除率極顯著高于VC（p＜0.01），樣品濃度高于 50 μg/mL時(shí)，B1P對(duì)·OH 的清除效率顯著高于 VC（p＜0.05）。B1P對(duì)·OH 的 IC50為（51.33±8.03）μg/mL。結(jié)果表明，VC對(duì)·OH 清除率較低且不呈劑量依賴性，而B1P的·OH清除率較低高且呈劑量依賴性。

2.3.4 FRAP的測(cè)定

FRAP是花色苷總抗氧化能力的一種檢測(cè)方法，TPTZ和FeCl3在酸性條件下還原，溶液呈微棕色，在還原反應(yīng)完成后形成藍(lán)色的亞鐵配合物[23]，樣品的還原能力與待測(cè)物的抗氧化能力相關(guān)。以不同濃度的硫酸亞鐵溶液結(jié)果繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（如圖4），線性方程為y=1.080x+0.058，x表示硫酸亞鐵溶液的濃度，y表示吸光度。相關(guān)系數(shù)R2=0.9996，表明其濃度在0.15mmol/L～1.50 mmol/L時(shí)線性良好。

圖4 FeSO4·7H2O標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.4 The standard curve of FeSO4·7H2O

樣品的鐵離子還原能力見圖5。

圖5 不同濃度樣品的鐵離子還原能力Fig.5 Ferric ion reducing antioxidant power of different concentrations of sample solution

由圖5可知，B1P的FRAP值呈明顯的劑量依賴性。以上結(jié)果表明，B1P雖具有還原鐵離子的能力，但是比VC弱。

2.3.5 超氧陰離子自由基清除率的測(cè)定

超氧陰離子是單線態(tài)氧分子和·OH的前體之一，會(huì)間接產(chǎn)生脂質(zhì)過氧化物，因此超氧陰離子自由基的清除效率對(duì)鑒定抗氧化能力具有重要意義[10]。超氧陰離子自由基是通過PMS-NADH系統(tǒng)產(chǎn)生，本研究通過減少NBT來(lái)測(cè)定樣品對(duì)超氧陰離子自由基的清除能力。超氧陰離子自由基清除率的測(cè)定結(jié)果見圖6。

圖6 B1P超氧陰離子自由基清除能力Fig.6 Clearance of B1P sample solution by superoxide anion assay

由圖6可知，B1P和VC對(duì)超氧陰離子自由基的清除能力均具有一定的濃度依賴性，將二者IC50值作比較，VC的 IC50值為（29.76±10.31）μg/mL，高于 B1P 的IC50值（19.88±2.88）μg/mL。以上結(jié)果說(shuō)明，B1P 具有較強(qiáng)的超氧陰離子自由基清除效果，且超氧陰離子自由基活性顯著優(yōu)于VC。

B1P具有較好的抗氧化活性，試驗(yàn)樣品濃度在10 μg/mL～100 μg/mL 內(nèi)，B1P 對(duì) ABTS+·、·OH、超氧陰離子自由基清除率的IC50值分別為37.81±4.30、51.33±8.03、（19.88±2.88）μg/mL，抗氧化能力達(dá)到了微克級(jí)。FRAISSE等[24]認(rèn)為花色苷的自由基清除活性可能不受花色苷糖基部分的影響，且隨著B環(huán)上羥基數(shù)量增加而增加。也有研究表明苷元結(jié)構(gòu)對(duì)DPPH活性強(qiáng)度依次為飛燕草素＞矮牽牛素＞矢車菊素＞芍藥素＞錦葵素；對(duì)超氧陰離子自由基的活性強(qiáng)度依次為飛燕草素＞矮牽牛素＞錦葵素、矢車菊素＞芍藥素[25]。結(jié)合UPLC-MS/MS測(cè)得B1P花色苷含量結(jié)果中，苷元含量高低依次為飛燕草素＞錦葵素＞矮牽牛素＞矢車菊素＞芍藥素。綜合考量，對(duì)B1P抗氧化能力貢獻(xiàn)較大的可能是飛燕草素糖苷和矮牽牛素糖苷。

3 結(jié)論

“藍(lán)美1號(hào)”藍(lán)莓粉（B1P）是從新型藍(lán)莓中提取出來(lái)的富含花色苷的提取物，本文主要圍繞B1P從定量分析和抗氧化活性方面展開研究。利用pH示差法測(cè)得B1P提取總花色苷濃度在40%以上，高于標(biāo)準(zhǔn)化花色苷提取物（含量為36%）。在此基礎(chǔ)上建立了一種快速、靈敏的UPLC-MS/MS分析方法，并測(cè)定了B1P中主要花色苷（Pn-3-G、Dp-3-G、Pt-3-G、Cy-3-G、Mv-3-G、Mv-3-A、Pt-3-A 和 Dp-3-A）的含量。通過 ABTS、DPPH、·OH、FRAP、超氧陰離子自由基方法，考察了B1P中花色苷的抗氧化活性，結(jié)果顯示B1P抗氧化能力較好，甚至部分優(yōu)于VC，抗氧化能力能達(dá)到微克級(jí)。